專利名稱：一種丹參的提取方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取的方法，具體涉及一種丹參的提取方法。
背景技術：
丹參，《雷公炮制藥性解》,I曰“其味苦，性微寒，無毒，入心經。養神定志，破結除俊，清癰散腫，排膿止痛，生肌長肉，治風邪留熱，眼赤狂悶，四肢不遂，破宿血，補新血，安生胎，落死胎，理婦人經脈不調，血崩帶下，諸般血證。”焦樹德《用藥心得十進》，2謂活瘀血，生新血，涼血，安神。有“一味丹參飲，功同四物湯”之說。現將其臨床應用報告如下。
丹參是傳統中藥，主要用于胸肋脅痛，風濕痹痛，癥瘕結塊，瘡瘍腫痛，跌仆傷痛，月經不調，經閉痛經，產后瘀痛等。治療胸肋疼痛、癥瘕結塊，以及月經不調、經閉經痛具有良效，常與川芎配伍應用。在治療胸腹疼痛屬于氣滯血瘀方面，往往配合砂仁、檀香等藥同用。丹參成分很多，水溶性成份有丹參素、丹酚酸等，脂溶性成份有丹參酮2A、隱丹參酮、次甲基丹參酮、丹參酮等，根據自己的目標成分不同，方法不同，常規的是乙醇提取，柱層析分離。

發明內容
為了確保丹參提取時有效成分的流失，本發明的目的在于一種丹參的提取方法，本發明提取方法簡單，提取得到的有效成分丹酚酸B由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，是目前研究較多的丹酚酸之一，對心、腦、肝、腎等器官均具有重要藥理作用。為了實現上述目的本發明采用如下技術方案
丹參的提取方法，其特征在于包括以下步驟
(1)丹參藥材粉碎，置提取罐中，第一次加4.5-5. 5倍量乙醇，確保乙醇濃度> 92%，先浸泡2. 8-3. 2小時，測罐內含醇度彡90%，加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓0. 03-0. 05Mpa,溫度 70-80°C ；
(2)第二次加4.5-5. 5倍量濃度45-55%的乙醇加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓
0.03-0. 05Mpa，溫度75-85°C，藥渣再加4-5倍量的水煎煮I. 8-2. 2小時，放液，濾液濃縮，收膏相對密度I. 20-1. 24 ；
(3)第一次醇液濃縮時，每2小時以內出一次藥液，濃縮結束后進行總混；第二次醇液濃縮時，每2小時以內出一次藥液，濃縮比重I. 22-1. 26，濃縮結束后進行總混；
(4)一遍液、二遍液和水提膏按23-25:30-35:5比例混合，進行噴霧干燥，控制噴霧干燥參數進口溫度180-210°C，出口溫度90-110°C，粉碎整粒，混合即得。本發明提取物的功效
I、抗氧化作用
丹酚酸B具有很強的抗氧化作用，體內外實驗證明，丹酚酸B能清除氧自由基、抑制脂質過氧化反應，其作用強度高于維生素C、維生素E、甘露醇，是目前已知的抗氧化作用最強的天然產物之一.藥理學研究表明，注射用丹參酚酸具有明顯的抗氧化作用，抑制血小板聚集，及抑制血栓形成的作用，并能延長缺氧條件下動物的存活時間。試驗表明，注射用丹參酚酸(60 15mg/kg)能明顯改善腦缺血再灌損傷大鼠的神經功能缺陷，表現為改善行為障礙，明顯縮小腦梗死面積，高、中劑量(60、30mg/kg)有統計學差異；注射用丹參酚酸在藥后I、 2、24hr明顯改善FeC13所致的大鼠腦缺血造成的動物神經功能損傷，表現為行為障礙的改善，并能縮小腦梗死面積；注射用丹參酚酸40mg/kg明顯抑制ADP、花生四烯酸、膠原誘導的家兔血小板的聚集反應，抑制率分別為81. 5%,76. 7%,68. 9%。注射用丹參酚酸60、30mg/kg明顯抑制大鼠血栓的形成；注射用丹參酹酸60、30mg/kg明顯延長小鼠在缺氧條件下的存活時間。2、對心臟的保護作用
2.I對心肌缺血再灌注損傷的保護作用
急性心肌缺血后正常血液的再灌注可導致缺血心肌的進一步損害，其表現為再灌注后的早期可出現嚴重的細胞損害、頑固性心律失常和明顯的心功能減退，成為急性心肌缺血再灌注損傷。心肌缺血再灌注時，大量自由基產生，細胞膜脂質過氧化反應增強，膜流動性和通透性發生變化，導致電生理活動異常，誘發和促進心律失常的產生；心肌細胞脂質過氧化反應增強，致使心肌缺血區的過氧化產物丙二醛(MDA)含量增多、冠脈流出液中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK)升高、心肌組織中超氧化物岐化酶(SOD)減少。動物實驗研究顯示丹酚酸B能減輕缺血再灌注損傷模型動物的心肌缺血程度，減小心肌梗死范圍，減少LDH、CPK從胞體的溢出、降低缺血心肌組織中MDA的含量，提高SOD的活力，對抗氧自由基對心肌細胞的毒害作用，保護心肌細胞.
2.2對心臟微血管內皮細胞的延遲保護作用
心肌預先反復缺血后，可增強對后續較長時間缺血的耐受性，稱為缺血預處理，是一種內源性保護機制，其心肌保護作用在預處理后即刻出現，持續2 4小時消失，24小時后重現，持續數日，后者稱為延遲保護作用。心肌缺血預處理的發生機制主要是機體內源性物質激活中間環節，引發終末效應物質的活化進而產生保護作用。內皮細胞除在血管內外物質交換、維持凝血和抗凝血的平衡中起著重要作用外，并可產生和分泌多種生物活性物質，在調節血管舒縮運動及維持血細胞的正常功能方面具有無可替代的生物學效應，冠狀動脈內皮細胞還有調節心肌收縮力的作用.
腫瘤壞死因子a(TNF_a)是由激活的巨噬細胞分泌的一類具有多種生物學效應的細胞因子。病理狀態下TNF-a可損傷心功能，誘導心肌細胞凋亡，而且TNF-a血清水平的變化與多種心臟疾病有關。心臟缺血缺氧時，心臟微血管內皮細胞首先和最易損傷。實驗研究表明丹酚酸B預處理可抑制大鼠心肌缺血再灌注損傷過程中的鈣離子超載、減少內皮素(ET)及腫瘤壞死因子a(TNF-a)的釋放、改善血栓素/前列環素(TXA2 / PGI2)系統的平衡狀態、降低缺氧/復氧損傷后內皮細胞細胞間粘附分子的表達，起到保護內皮細胞的作用. 預處理保護心肌的過程涉及多種因素的參與，蛋白激酶C(PKC)作為一種細胞內信息傳遞的主要物質和媒介，在心臟預處理保護心肌過程中起著關鍵作用。PKC的激活可引發底物蛋白質磷酸化、細胞內鈣穩態、離子通道、腺苷、緩激肽、受體的信息傳遞等一系列變化，調控著預處理過程。通過對大鼠缺氧/復氧的心臟微血管內皮細胞損傷模型，采用分子生物學方法，觀察到丹酚酸B預處理能增強蛋白激酶CmRNA、熱休克蛋白70 mRNA的表達，具有與缺氧預適應相類似的細胞保護效應，可增強細胞對隨后較長時間缺氧/復氧損傷的耐受性，這可能是丹酚酸B預處理的細胞保護機制。2. 3對動脈粥樣硬化的防治作用
低密度脂蛋白(LDL)氧化修飾是動脈粥樣硬化發生的一個重要原因，氧化修飾的LDL(OX-LDL)具有細胞毒性作用，易于被巨噬細胞識別并大量攝取形成泡沫細胞，影響單核細胞的遷移，從而促使動脈粥樣硬化的發生發展。實驗研究發現丹酚酸B能有效抑制Cu抖誘導的LDL氧化修飾，對防治動脈粥樣硬化有重要意義，其作用機制可能與清除自由基、整合Cu有關。泡沫細胞是動脈粥樣硬化斑塊內出現的特征性病理細胞。血管內皮生長因子(VEGF)也稱血管通透性因子(VPF)，是一種高度特異的、強烈的血管內皮促分裂因子和血管生成因子。體內的動脈粥樣硬化斑塊中VEGF表達顯著升高，以斑塊中泡沫細胞的表達最為明顯。在體外培養的U937泡沫細胞模型中，丹酚酸B和銀杏葉提取物一樣可呈劑量依賴性的抑制泡沫細胞VEGF的表達，對動脈粥樣硬化有預防和治療作用.
溶血磷脂酰膽堿(LPC)是由OX-LDL或質膜的磷脂酰膽堿(PC)經磷脂酶A2(PLA2)水解或脂質氧化而來，是OX-LDL的主要活性成分，能模擬OXLDL的主要作用，因此LPC與動脈粥樣硬化的發生密切相關。丹酚酸B能抑制LPC刺激內皮細胞產生基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)、抑制內皮細胞表達血管內皮生長因子，防治動脈粥樣硬化。另有研究顯示丹酚酸B能減少動脈粥樣硬化家兔血漿血栓素(TXB2)、ET濃度，增加前列腺素Fla(6-keto-PGFD濃度，具有明確的內皮細胞保護效應.
2.4對細胞凋亡的影響
在血管成形術的兔子模型中，丹酚酸B能誘導新血管內膜細胞凋亡，而凋亡在再狹窄中對細胞的數量起到穩定作用。為考察抗氧化劑能否影響血管細胞的凋亡，Hung HH等測定了動脈粥樣硬化和膽固醇喂養的兔子再狹窄損害模型中凋亡細胞死亡的頻率。結果發現用丹酚酸B處理的一組兔子的凋亡細胞的百分率顯著高于其他組，同時丹酚酸B能顯降低新血管內膜的厚度，這與凋亡細胞的數量一致，這些結果表明，丹酚酸B能誘導新血管內膜細胞的凋亡，從而可以防止新血管內皮的增厚。2. 5預適應的心臟細胞保護作用。3、對腦的保護作用
3.I對腦缺血損傷的保護作用 血管內皮生長因子(VEGF)是內皮細胞特異性的有絲分裂原，具有促進內皮細胞增殖，提高血管通透性等生物學特性。腦缺血后，低氧可激活VEGF及其受體(VEGFR)系統，促使半影區VEGF表達，VEGF誘導大量新生血管形成，促進血管增生，增加受累組織的血流灌注和供氧量，減少神經元的凋亡和死亡，減輕腦損傷程度。實驗研究顯示丹酚酸B與冰片、三七等配伍可顯著提高VEGFmRNA表達，促進新生血管形成，并能較好地抑制VEGF誘導血管通透性增加的作用，這些作用對缺血性中風的治療具有非常重要的積極意義。丹酚酸可通過血腦屏障，具有改善腦血流量而無竊血，抗血小板聚集，抗血栓，抑制細胞內鈣含量增高，清除自由基，促進腦血管生成等作用，可以認為丹參總酚酸是一個比較理想的有抗腦缺血作用的藥物，3.2對學習記憶功能的影響
采用大鼠、小鼠等動物腦缺血實驗模型研究證明，丹酚酸B靜脈注射對大鼠、小鼠腦缺血和缺血再灌注引起的腦損傷具有保護作用，可縮小缺血區面積，減少腦組織中MDA〃含量，緩解由于腦缺血引起的行為學障礙，對由此引起的記憶功能障礙有明顯的改善作用。作用機制可能與丹酚酸B的抗氧化作用有關。4、抗肝臟纖維化作用
肝星狀細胞(HSC)的激恬是肝纖維化形成的核心環節，轉化生長因子-131 (TGF-131)是最重要的促HSC活化與肝纖維化形成的細胞因子。肝貯脂細胞(FSC)是一種肝臟實質細胞，在病理條件下被激活后大量增殖，同時產生細胞外基質的能力增長數十倍，因此，FSC在肝纖維化形成過程中也起到了重要作用。丹酚酸B能抑制TGF-I的HSC胞內信號轉導及其受體蛋白的表達，從而拮抗TGF-Bl的促HSC活化，并能抑制活化FSC增殖，抑制FSC生成細胞外基質而減少膠原纖維在肝內的沉積。另有研究表明，丹酚酸B鎂鹽具有抗脂質過氧化抗肝損害的作用，有減輕肝組織纖維化程度的功能，臨床用于治療慢性乙型肝炎肝纖維化取得滿意效果.
肝纖維化是肝臟對各種慢性損傷的修復應答過程，HSC獲得增殖能力并活化為肌成纖維細胞樣細胞，被認為是肝纖維化形成的關鍵，丹酚酸的抗肝纖維化效果與Y干擾素的結果相似，體外研究發現它可抑制傳一代培養的HSC的增殖，抑制轉化生長因子I(TGF-^ I)在HSC中的信號轉導。5、抗腫瘤作用
研究證明丹酚酸B不僅可以通過抗氧化作用保護神經細胞，而且可以通過減少NO的釋放，改善J3-淀粉樣蛋白對神經元的毒性作用，并能增強老化紅細胞提高T淋巴細胞分泌IL-238，具有抗衰老、抗腫瘤作用。體內、體外實驗表明丹酚酸B鎂鹽對多種腫瘤細胞株的生長具有較好的抑制作用。體外MTT實驗中，丹酚酸B鎂鹽對人腎癌(786-0)、小鼠乳腺癌(C127)、人乳腺癌(MCF-7)、人肝癌(Ifep G2)、小鼠黑色素瘤(B16)、人胃癌(SGC-7901，AGS)、人食管癌(Eca-109)等細胞株的最大抑制率皆達到40%以上，其中對肝癌細胞株H印G2的最大抑制率可達到90%以上。中空纖維實驗進一步證實丹酚酸B鎂鹽對于裸鼠體內生長的H印G2細胞也具有較好的抑制率，其最大抑制率可達到30. 11%。丹酚酸B(500ii g/ml)具有抗前列腺腫瘤的作用，其作用從6h左右變得非常明顯，臺盼藍拒染實驗和MTT結果均顯示細胞活力大大減少，P〈0. 01;流式細胞儀檢測到丹酚酸B作用12、24h的BPH1-C5細胞的凋亡率分別高到46. 23%和57. 87%，在流式細胞圖中形成明顯的凋亡峰。據此推測，丹酚酸B可能通過誘導前列腺腫瘤細胞的凋亡起到抗腫瘤的作用。6、其他作用
骨髓基質細胞是一類具有多向分化潛能的組織干細胞，體外培養的骨髓基質細胞已被廣泛應用于組織損傷疾病的治療。取大鼠股骨及脛骨骨干骨髓基質細胞培養，保留貼壁細胞進行傳代純化，一組加入誘導劑(5-氮胞苷)，一組在加入誘導劑基礎上加入丹酚酸B，誘導骨髓基質細胞向心肌樣細胞轉化。結果顯示加入丹酚酸B組與未誘導組及加入5-氮胞苷誘導組比較，長方形及多角形細胞增多，細胞凋亡數量減少，證明丹酚酸B能促進體外誘導骨髓基質細胞向心肌樣細胞轉化，可作為細胞外科的一種良好細胞來源，為細胞性心肌成形術探索一條新的途徑。 影響鈉鉀ATP酶、H+、K+-ATP酶活性
此外，丹酚酸B鎂鹽還可用于預防或治療腎炎、腎衰竭、脈管炎、靜脈栓塞、老年性癡呆疾病、抗衰老、影響鈉鉀ATP酶、H+、K+-ATP酶活性等。本發明具有活血化瘀，通經活絡之功效，主治因瘀血阻滯經絡所致缺血性中風，癥見半身肢體麻木，虛弱無力，拘攣疼痛，或運動不遂，口眼歪斜等。
I、血證
臨床對治療血證，尤其是冠心病、心肌缺血，其滴丸、注射液、草藥均有明顯改善其臨床心悸、胸悶、氣短諸癥的作用。2、老年性癡呆
因動脈硬化致心、腦、腎諸臟器供血不足，尤其是腦動脈硬化與老年性癡呆癥的發生有著密切的關系。經臨床辨證，配以“丹參”療效顯著。3、乙肝治療
丹參與黃芪配伍能起到較快持續的療效。知肝之病必先實脾，方中黃芪、黨參、白術、茯苓、山藥、焦三仙補中益氣，溫土健脾。久病必瘀，丹參養血、涼血、祛瘀。4、討論
現代研究證明，丹參內含有丹參酮、異丹參酮等呋喃并菲醌類和丹參新酮，丹參新醌、鼠尾草酚等菲醌、菲酚類以及維生素E等。丹參注射液能降低血壓，增加冠脈血流量，減慢心率，縮短實驗性心肌缺血的持續時間，還有抑制血小板聚集及抗凝作用。對中樞神經系統具有鎮靜、安定作用。對小鼠實驗性結核病有治療效果，能降低兔血糖。對晚期肝炎及血吸蟲病的肝、脾腫大，有促進肝臟生理機能好轉，并使腫大的肝、脾縮小變軟的作用。丹參含有碘的成分，故對缺碘引起的甲狀腺腫大有一定療效。丹參，其味苦，其性微寒，具有養神定志，祛瘀血，生新血，涼血之功，配伍得當，內、夕卜、術后，一切血證均可隨證施用。本發明的有益效果
本發明提取方法簡單，水提、醇結合，可以提取丹參中水溶性與酯溶性成分，提取率提高，提取得到的有效成分丹酚酸B由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，是目前研究較多的丹酚酸之一，對心、腦、肝、腎等器官均具有重要藥理作用。
具體實施例方式實施例I :丹參的提取方法，包括以下步驟
(1)丹參藥材粉碎，置提取罐中，第一次加4.5-5. 5倍量乙醇，確保乙醇濃度> 92%，先浸泡2. 8-3. 2小時，測罐內含醇度彡90%，加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓0. 03-0. 05Mpa,溫度 70-80°C ；
(2)第二次加4.5-5. 5倍量濃度45-55%的乙醇加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓
0.03-0. 05Mpa，溫度75-85°C，藥渣再加4-5倍量的水煎煮I. 8-2. 2小時，放液，濾液濃縮，收膏相對密度I. 20-1. 24 ；
(3)第一次醇液濃縮時，每2小時以內出一次藥液，濃縮結束后進行總混；第二次醇液濃縮時，每2小時以內出一次藥液，濃縮比重I. 22-1. 26，濃縮結束后進行總混；
(4)一遍液、二遍液和水提膏按23-25:30-35:5比例混合，進行噴霧干燥，控制噴霧干 燥參數進口溫度180-210°C，出口溫度90-110°C，粉碎整粒，混合即得。
權利要求
1.一種丹參的提取方法，其特征在于包括以下步驟 (1)丹參藥材粉碎，置提取罐中，第一次加4.5-5. 5倍量乙醇，確保乙醇濃度> 92%，先浸泡2. 8-3. 2小時，測罐內含醇度彡90%，加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓0. 03-0. 05Mpa,溫度 70-80°C ； (2)第二次加4.5-5. 5倍量濃度45-55%的乙醇加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓0. 03-0. 05Mpa，溫度75-85°C，藥渣再加4-5倍量的水煎煮I. 8-2. 2小時，放液，濾液濃縮，收膏相對密度I. 20-1. 24 ； (3)第一次醇液濃縮時，每2小時以內出一次藥液，濃縮結束后進行總混；第二次醇液濃縮時，每2小時以內出一次藥液，濃縮比重I. 22-1. 26，濃縮結束后進行總混； (4)一遍液、二遍液和水提膏按23-25:30-35:5比例混合，進行噴霧干燥，控制噴霧干燥參數進口溫度180-210°C，出口溫度90-110°C，粉碎整粒，混合即得。
全文摘要
本發明公開了一種丹參的提取方法，包括以下步驟取丹參藥材粉碎，進行兩次醇取，制成水提膏，然后和兩次的遍液進行混合，進行噴霧干燥，最后粉碎整粒，混合即得。本發明提取方法簡單，提取得到的有效成分丹酚酸B由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，是目前研究較多的丹酚酸之一，對心、腦、肝、腎等器官均具有重要藥理作用。
文檔編號A61P1/16GK102614254SQ20121008403
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月27日 優先權日2012年3月27日
發明者宋杏花, 李宏良, 王守旭 申請人:安徽華佗國藥股份有限公司