專利名稱：藥用化合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明是關于某些N-羥基-N-〔3-〔2-(鹵代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲類化合物、含有這些化合物的組合物以及它們的應用方法。
5-脂氧合酶(5-LO)催化花生四烯酸轉變?yōu)榘兹┥铣傻牡谝徊健０兹┡c許多非常重要的生物活性有關。許多疾病如氣喘、關節(jié)炎、牛皮癬、局部缺血、變態(tài)反應疾病、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)和炎性腸病(IBD)都與作為重要介質(zhì)的白三烯有關。
人們盡了相當大的努力，其目的在于控制白三烯生物合成。一般來講，以控制白三烯生物合成為目標的研究工作其目的在于發(fā)現(xiàn)5-LO途徑的抑制劑，尤其是5-LO特效抑制劑。
在英國專利申請GB2，196，629中公開了作為抗白三烯劑的某些環(huán)取代-N-羥基-N-取代苯甲酰胺和肉桂酰胺類化合物。環(huán)取代基可以是式(Ra)(Rb)C＝CH-基團，其中(Ra)(Rb)C＝是含有3～19個碳原子的不飽和脂肪烴烯基;式R3-C≡C-基團，其中R3是氫原子、含有1～18個碳原子的飽和或不飽和的脂肪烴基;或式R4-S-基團，其中R4是含有1～20個碳原子的脂肪烴基。N-取代基可以是C1～6烷基、C3～7環(huán)烷基、或取代或未取代的芳基。
在歐洲專利申請0196184中公開了某些芳基化合物，其中包括某些肉桂異羥肟酸類似物。在實施例81～91中還包括某些N-羥基脲類化合物。在EPO 0292699、EPO 0279281和EPO 0279263中公開了據(jù)說具有抑制脂氧合酶的某些以脲為基礎的化合物或含脲化合物。這些文獻沒有認識到在脲骨架上3-〔2-(鹵代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基取代基的重要性。
在WO 90/12008中公開了作為5-和12-脂氧合酶抑制劑的某些未取代和取代的苯基、萘基和噻吩基N-羥基脲。許多上述衍生物的制備方法及生物活性已經(jīng)公開。本發(fā)明涉及這樣一種發(fā)現(xiàn)，即一組選擇的N-羥基-N-〔3-〔2-(4-鹵代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲是極其有效的5-LO抑制劑，本文定義的本發(fā)明化合物是十分有效的5-LO抑制劑，并具有有用的預防和治療作用。本發(fā)明化合物及它們的藥學上適用的鹽具有出人意料高的效力。
因此，本發(fā)明的主要目的是提供具有出人意料高效力的選擇性5-LO抑制劑，可用于治療氣喘和變態(tài)反應疾病、炎性腸病、牛皮癬、休克、局部缺血、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)和關節(jié)炎。
本發(fā)明的另一目的是提供治療上述病患的治療組合物。
本發(fā)明的又一目的是提供治療上述病患的方法。
熟悉本技術領域的專業(yè)人員可以從下面的敘述和權利要求書中明白本發(fā)明的其他目的、特點和優(yōu)點。
本發(fā)明提供了下式的N-羥基-N-〔3-〔2-(鹵代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲及其藥學上適用的鹽，

式中R1為氫或鹵素;
X為氟或氯。
除了式Ⅰ化合物外，本發(fā)明還提供了含有式Ⅰ化合物及其藥學上適用的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明也提供了治療哺乳類動物氣喘、變態(tài)反應疾病、炎性腸病、牛皮癬、休克、ARDS和關節(jié)炎的方法，該方法包括給上述需要治療的哺乳類動物服用抑制5-LO劑量的式Ⅰ化合物。
本發(fā)明還提供了制備用于制備式Ⅰ化合物的2-〔2-(4-鹵代苯硫基)苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉中間體的方法。
下述化合物舉例說明包含在式Ⅰ范圍內(nèi)的化合物N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-5-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲本發(fā)明的化合物或其前體可以按照下述方法制備。
合成路線1

式中Y為溴或氯;THP為四氫吡喃基;TMS為三甲基甲硅烷基;R1和X如上對式Ⅰ所定義。
在合成路線1中，使2-鹵代苯硫基肉桂基鹵與O-四氫吡喃基羥胺在惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中反應，可將反應產(chǎn)物分離或進一步與酸反應，得到相應的N-肉桂基-N-羥胺。可將所得的N-(2-鹵代苯硫基肉桂基)-N-羥胺分離出來或進一步與三甲基甲硅烷基異氰酸酯在惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中反應，得到所需的式Ⅰ化合物。
用于上述方法的第一步反應的合適溶劑為非質(zhì)子傳遞溶劑，優(yōu)選二甲基甲酰胺。
該反應在大約0℃至大約50℃的溫度范圍內(nèi)進行。優(yōu)選地，該反應在大約室溫下進行。
用于第二步反應的合適的酸為無機酸，優(yōu)選濃鹽酸。
用于第二步反應的合適的溶劑包括質(zhì)子性溶劑，優(yōu)選甲醇。
第二步反應可以在大約0℃至大約30℃的溫度范圍內(nèi)進行。優(yōu)選地，該反應在大約室溫下進行。
用于異氰酸酯縮合反應的合適的溶劑包括醚類，優(yōu)選二噁烷。該反應可以在大約0℃至大約50℃的溫度范圍內(nèi)進行，優(yōu)選在室溫下進行。H2NOTHP反應物按照Angew.Chem.Int.Ed.，5，511(1966)中所述方法制備。
如果不能從市場上買到合成路線1中的2-鹵代苯硫基肉桂基鹵，它們可以用本技術領域中專業(yè)人員熟知的方法通過下述合成路線2和3中所示的幾條途徑中的任何一條得到。
合成路線2

合成路線2所示的是用取代的苯甲醛開始的路線。在途徑B中，將2-鹵代苯硫基苯甲醛與乙烯基格利雅試劑在惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中反應，得到相應的1-羥基-1-(2-鹵代苯硫基苯基)丙-2-烯，后者可被分離或如下所述進一步反應。該反應在本技術領域中專業(yè)人員已知的進行格利雅反應的一般條件下進行。相似地，在途徑A中，使2-溴苯甲醛與乙烯基格利雅試劑在惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中反應，得到相應的1-(2-溴苯基)丙-2-烯-醇，可以將其分離或在催化劑，最好是POCl3存在下進一步與合適的醇保護基，最好是二氫吡喃反應，得到相應的1-四氫吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯。可將1-四氫吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯分離或在惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中在2位進行取代反應，得到相應的1-四氫吡喃氧基-1-(2-鹵代苯硫基苯基)丙-2-烯，可以將其分離或在惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中用酸水解，得到2-鹵代苯硫基肉桂基鹵。
乙烯基格利雅試劑的縮合反應在本技術領域中專業(yè)人員已知的進行格利雅反應的一般條件下進行。雖然在合成路線2中的途徑A中所示的是四氫吡喃基，但是可以使用許多對堿穩(wěn)定的醇保護基中的任何一種如四氫吡喃氧基、甲氧乙氧基甲基、甲氧甲基、甲硅烷基及其它。該反應在合適的酸或堿催化劑存在下在惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中進行，選擇酸還是堿，取決于醇保護基，這對本技術領域內(nèi)的專業(yè)人員來說是熟知的。取代反應是通過依次用(C1-C4)烷基鋰試劑和適當?shù)谋交蚧锾幚?-四氫吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯進行的。進行取代反應的合適溶劑為對質(zhì)子惰性的醚類如乙醚，優(yōu)選四氫呋喃。該反應在大約-100℃至大約-40℃的溫度之間進行，優(yōu)選溫度范圍為大約-55℃至大約-85℃。
在合成路線2中的途徑A和B中的每一條中，使中間體化合物與濃酸，最好是無機酸如HCl或HBr反應，得到2-鹵代苯硫基肉桂基鹵中間體。
如果不能從市場上買到途徑A和B的起始化合物，它們可以通過明顯的和本技術領域專業(yè)人員熟知的方法制得。或者，并且是優(yōu)選地，途徑B的起始化合物如下述合成路線3所示那樣制備。
合成路線3

在合成路線3中，使4-鹵代硫酚在非質(zhì)子傳遞溶劑，包括醚類如四氫呋喃和乙醚，最好是四氫呋喃中，在大約-40℃至大約-100℃，最好是大約-55℃至大約-85℃的溫度下與(C1-C4)烷基鋰試劑如甲基鋰、正丁基鋰、仲丁基鋰和叔丁基鋰反應，得到相應的硫酚鋰。使該硫酚鋰在非質(zhì)子傳遞溶劑，包括醚類如THF和乙醚，最好是THF中，在大約0℃至大約100℃，最好是大約20℃至大約70℃的溫度下與2-(2-氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉反應，得到苯環(huán)上鄰位的4-鹵代苯硫基取代基。
然后用4.5N HCl水解2-噁唑啉(其中2-噁唑啉的濃度大約為0.05M)并回流，得到相應的2-(4-鹵代苯硫基)苯甲酸，后者在惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中用氫化鋁鋰或其它合適的氫化物還原劑還原，得到相應的醇。可將所述醇分離或使其在合適的惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中進一步與重鉻酸吡啶鎓反應，得到2-(4-鹵代苯硫基)苯甲醛。
或者，可以通過與甲基碘反應使2-噁唑啉季銨化，然后在合適的惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合物中用硼氫化鈉或其它合適的氫化物還原劑還原，然后用3N HCl水解，得到2-(鹵代苯硫基)苯甲醛。本發(fā)明還包括制備下式的2-〔2-(4-鹵代苯硫基)苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉的方法，

式中R1為氫或鹵素，X為氟或氯，所述方法包括a)在非質(zhì)子傳遞溶劑中在大約-40℃至大約-100℃的溫度下使4-氟苯硫酚或4-氯苯硫酚與C1-C4烷基鋰試劑反應，得到相應的硫酚鋰;b)在非質(zhì)子傳遞溶劑中在大約0℃至大約100℃的溫度下使從a)得到的硫酚鋰與下式的2-(2-氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉反應，得到所述的2-〔2-(4-鹵代苯硫基)苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉，

式中R1為氫或鹵素。
慣用語“惰性或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑的混合物”指反應在其中能夠發(fā)生然而在別的方面卻對該反應沒有實質(zhì)影響的作為媒質(zhì)的物質(zhì)。
為了適應具體取代基的反應性，改良上述方法可能是必需的。這樣的改良對熟悉本技術領域的專業(yè)人員是明顯的和熟知的。
如以上所述，本發(fā)明包括式Ⅰ所定義化合物的藥學上適用的鹽。雖然本發(fā)明化合物通常為中性的，但本發(fā)明特定的化合物具有能足以與許多無毒的無機堿、無毒的無機或有機酸反應形成藥學上適用鹽的酸性或堿性官能團。通常應用形成酸加成鹽的無機酸有例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸等，有機酸有例如對甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、對溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸等。因此，所述藥學上適用的鹽其實例有硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、羥乙酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、扁桃酸鹽等。優(yōu)選的藥學上適用的酸加成鹽是與無機酸如鹽酸和氫溴酸形成的鹽，以及與有機酸如馬來酸和甲磺酸形成的鹽。
堿加成鹽包括由堿金屬或堿土金屬的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等得到的加成鹽。因此，用于制備本發(fā)明鹽的上述堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈣、碳酸鈣等。鉀鹽和鈉鹽形式是特別好的。
應該認識到，式Ⅰ化合物存在不同的異構體形式。本發(fā)明不限制于任何具體的異構體，而是包括所有可能的各個異構體及其混合物。
式Ⅰ化合物及其藥學上適用的鹽也能以各種溶劑化物存在，例如與水、甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺等形成溶劑化物。還可以制備上述溶劑化物的混合物。所述溶劑化物的溶劑可以來自結晶的溶劑(為制備或結晶用的溶劑所固有)，或是外來的。這些溶劑化物也屬于本發(fā)明的范圍。
使等摩爾或過量的酸或堿與式Ⅰ化合物于合適的相互呈惰性的或實質(zhì)上惰性的溶劑或溶劑混合液中反應，制得本發(fā)明式Ⅰ所包括的藥學上適用的鹽。溶劑的具體選擇取決于起始物質(zhì)和生成的鹽的相關溶解度，可以用某些試劑的漿狀物而不是溶液來制備鹽。形成鹽的反應在大約-10℃～大約100℃，最好在約室溫下進行，溶劑用一般的方法除去。
下面的實施例進一步詳細敘述本發(fā)明，但無論如何下面的實施例無意限制本發(fā)明。
實施例1N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制備A.2-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉在-78℃下，向4-氟苯硫酚(3.64g，28.4mmol)在50ml無水THF中的溶液中加入正丁基鋰(17.8ml的1.6M己烷溶液)。30分鐘后，滴加2-(2，6-二氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉(5.0g，23.7mmol)在10ml無水THF中的溶液。將反應混合物溫熱至室溫，然后加熱至60℃維持5.5小時。冷卻后，將反應混合物倒入水中，然后用乙醚提取。提取液依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，得到粗產(chǎn)物，在硅膠上用10∶1己烷/乙酸乙酯洗脫層析，得到本小標題化合物。
元素分析 C H N S F計算值 63.93 4.73 4.39 10.04 11.90實測值 63.69 4.75 4.39 10.41 11.61m.p.118-20℃B.2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯甲酸將2-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉(5.0g，15.66mmol)加到310ml4.5N HCl水溶液中，回流過夜。用乙酸乙酯提取冷卻后的反應混合物兩次。提取液依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，得到本小標題化合物。
C.2-(4-氟苯硫基)-6-氟芐醇在冰浴冷卻下，將LiAlH4(0.77g，20.4mmol)懸浮在30ml無水乙醚中。然后加入在6ml乙醚中的2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯甲酸(4.53g，17.0mmol)和6mlTHF，并將反應混合物在室溫下攪拌過夜。按順序向反應混合物中加入0.8ml水、0.8ml 15%NaOH水溶液和2.4ml水，使反應混合物驟冷。濾出產(chǎn)生的白色沉淀，用乙醚充分洗滌。合并濾液和洗滌液，濃縮后，得到本小標題化合物。
D.2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯甲醛將重鉻酸吡啶鎓(8.34g，22.2mmol)懸浮在30ml二氯甲烷中。然后向懸浮液中滴加2-(4-氟苯硫基)-6-氟芐醇(3.73g，14.8mmol)在10ml二氯甲烷中的溶液。將反應混合物攪拌過夜。通過硅藻土(Celite )過濾反應混合物，然后通過硅膠過濾，得到本小標題化合物，m.p.94-97℃。
E.1-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯-1-醇將2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯甲醛(2.06g，8.23mmol)溶于21ml無水THF中，冷卻至-78℃。然后滴加溴化乙烯基鎂溶液(12.4ml 1.0M四氫呋喃溶液)，將反應混合物溫熱至室溫。然后將反應混合物倒入飽和NH4Cl中，用乙醚提取兩次。提取液依次用水和鹽水洗滌，用K2CO3干燥，得到本小標題化合物。
F.1-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕-3-溴丙-1-烯將1-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基)丙-2-烯-1-醇(2.29g，8.23mmol)溶于10ml己烷和10ml乙醚中，在冰浴中冷卻。然后滴加濃HBr(4.6ml，41.2mmol)，并在室溫下將反應混合物劇烈攪拌5小時。將反應混合物倒入水中，用乙醚提取兩次。提取液依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，得到本小標題化合物。
G.N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕-O-四氫吡喃基羥胺將O-四氫吡喃基羥胺(2.88g，24.6mmol)溶于15ml無水DMF中。加入1-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕-3-溴丙-1-烯(2.80g，8.2mmol)在6mlDMF中的溶液，并將反應混合物在室溫下攪拌4小時。將反應混合物倒入200ml水中，用乙醚提取兩次。提取液用水洗滌三次，然后用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，得到粗產(chǎn)物。在硅膠上用5∶1己烷/乙酸乙酯洗脫層析，得到本小標題化合物。
H.N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕羥胺將N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕-O-四氫吡喃基羥胺(1.26g，3.34mmol)溶于17ml甲醇中，在冰浴中冷卻。然后滴加濃HCl(1.7ml)，并將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將反應混合物蒸發(fā)至干，然后在飽和NaHCO3溶液中漿化，用乙醚提取兩次。提取液依次用水和鹽水洗滌，用K2CO3干燥，得到本小標題化合物。
I.N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲將N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕羥胺(0.91g，3.1mmol)溶于16ml無水二噁烷中。然后滴加三甲基甲硅烷基異氰酸酯(0.36g，3.1mmol)，并將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將反應混合物倒入1N HCl溶液中，然后用乙醚提取兩次。提取液依次用水和鹽水洗滌，用K2CO3干燥，得到粗產(chǎn)物。用乙酸乙酯重結晶，得到本小標題化合物。
元素分析 C H N S F計算值 57.13 4.19 8.33 9.53 11.29實測值 57.42 4.32 8.18 9.27 11.11mp.138-139.5實施例2N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲A.1-(2-溴苯基)丙-2-烯-1-醇將2-溴苯甲醛(27g，0.146mmol)在無水THF中的溶液在干冰/異丙醇浴中冷卻至-78℃，向其中滴加175ml 1.0M的乙烯基格利雅試劑的四氫呋喃溶液，使反應緩慢溫熱過夜至室溫。用飽和NH4Cl驟冷反應混合物，濃縮掉四氫呋喃。將反應混合物倒入水中，用乙醚提取兩次，依次用水和鹽水洗滌，用K2CO3干燥，得到本小標題化合物。
B.1-四氫吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯向在150ml無水THF中的1-(2-溴苯基)丙-2-烯-1-醇(31.0g，0.145mol)中先加入20ml3，4-二氫-2H-吡喃，然后加入1ml POCl3，在室溫下將混合物攪拌兩天左右(一個周末)。用飽和NaHCO3溶液中和后，濃縮。所得物在水和乙醚之間分配，水層用乙醚再次提取。合并有機相，依次用水和鹽水洗滌，用K2CO3干燥，濃縮。用純己烷→5%乙酸乙酯己烷溶液為梯度洗脫劑對本小標題產(chǎn)物粗品進行HPLC層析，得到本小標題化合物。
C.1-四氫吡喃氧基-1-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯將1-四氫吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯(5.39g，18.1mmol)溶于60ml無水THF中，冷卻至-78℃，加入正丁基鋰(12.5ml 1.6M己烷溶液)，并將混合物攪拌5分鐘。向該反應混合物中加入在15ml無水THF中的4-氟苯基二硫化物(5.54g，18mmol)。撤去冷浴，將反應混合物溫熱至室溫。用飽和NH4Cl驟冷混合物，用乙醚提取兩次。有機液用水洗滌兩次，然后用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，濃縮。先用己烷，然后用20∶1己烷/乙醚為流動相將本小標題化合物粗品進行HPLC純化，得到本小標題化合物。
D.1-〔(2-(4-氟苯硫基)苯基〕-3-溴丙-1-烯在氮氣氛下和冰浴冷卻下，向在20ml乙醚中的1-四氫吡喃氧基-1-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯(2.71g，7.87mmol)中加入濃HBr，并將混合物在0℃下攪拌1小時。撤去冰浴，將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將反應混合物倒入水中，用己烷提取兩次。合并有機液，依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，濃縮，得到本小標題化合物。
E.N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕-O-四氫吡喃基羥胺向在10ml無水二甲基甲酰胺中的O-四氫吡喃基羥胺(2.77g，23.6mmol)中滴加在10ml二甲基甲酰胺中的1-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕-3-溴丙-1-烯(2.54g，7.87mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物倒入200ml水中，用乙醚提取兩次。合并有機液，用水洗滌兩次，然后用鹽水洗滌，用K2CO3干燥后濃縮。本小標題化合物粗品用HPLC層析，先用3∶1己烷/乙酸乙酯洗脫，再用2∶1己烷/乙酸乙酯洗脫，得到本小標題化合物。
F.N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕羥胺向在25ml甲醇中并在冰浴中冷卻的N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕-O-四氫吡喃基羥胺(1.76g，4.9mmol)中滴加2.5ml濃HCl。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然后濃縮至干。將混合物在乙醚和飽和NaHCO3之間分配，水層再用乙醚提取一次。合并有機層，用水和鹽水洗滌，用K2CO3干燥，得到本小標題化合物。
G.N-羥基-N-〔3-(2-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲向在24ml無水二噁烷中的N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕羥胺(1.30g，4.7mmol)中滴加三甲基甲硅烷基異氰酸酯，將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物倒入飽和NH4Cl中，用乙醚提取兩次。合并有機液，用1N HCl洗滌，再用水洗滌兩次，然后用鹽水洗滌，用MgSO4干燥。固體物用乙酸乙酯重結晶，用冷乙醚洗滌，得到0.76g本小標題化合物，m.p.124-125℃。
元素分析 C H N S計算值 60.36 4.75 8.80 10.07實測值 60.54 4.75 8.66 9.85實施例3N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制備A.2-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉向處在氮氣氛下和冷卻至-78℃的在無水THF中的4-氟苯硫酚(9.26g，72.2mmol)中滴加正丁基鋰(45.2ml，1.6M)，得到白色漿狀物。向該混合物中滴加在20ml無水THF中的2-(2，4-二氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉(7.63g，36.1mmol)。將混合物溫熱至室溫過夜。加入另外50ml THF得到一種溶液，并將反應物攪拌大約兩天(一個周末)。將混合物倒入水中，用1N HCl酸化至pH5。將混合物用乙醚提取兩次，合并有機液，先用水洗滌，然后用0.2N NaOH洗滌。有機層再次用水洗滌，然后用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，濃縮后，得到13.2g粗產(chǎn)物，用己烷重結晶后，得到8.82g本小標題化合物。
B.N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲基本上按照上述實施例1步驟B-I中所述方法，得到本小標題化合物。用乙酸乙酯重結晶后，得到0.94g所需的本小標題化合物;m.p.151-153℃。
元素分析 C H N S F計算值 57.13 4.20 8.33 9.53 11.30實測值 57.11 4.39 8.52 9.36 11.60實施例4N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-5-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制備基本上按照上述實施例3所述的方法，從適當取代的2-(2，5-二氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉開始制備，經(jīng)乙酸乙酯重結晶，得到0.31g本標題化合物。
元素分析 C H N S F計算值 57.13 4.20 8.33 9.53 11.30實測值 57.32 4.16 8.10 9.57 11.50實施例5N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲的制備基本上按照上述實施例1步驟E-I所述的方法，從市售的2-〔(4-氯苯基)硫基〕苯甲醛制得了本標題化合物，m.p.126-128℃。
元素分析 C H N計算值 57.40 4.52 8.37實測值 57.54 4.41 8.37實施例6N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制備基本上按照上述實施例1所述的方法，制得本標題化合物，m.p.127-128℃。
元素分析 C H N S F計算值 57.13 4.19 8.33 9.53 11.39實測值 57.12 4.15 8.27 9.69 11.85實施例7N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制備基本上按照上述實施例3所述的方法，制得本標題化合物，m.p.125-127℃。
元素分析 C H N S Cl F計算值 54.47 4.00 7.94 9.09 10.05 5.38實測值 54.39 4.00 7.65 8.83 10.00 5.69
實施例8N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制備基本上按照上述實施例3所述的方法，制得本標題化合物，m.p.137-139。
元素分析 C H N S Cl F計算值 54.47 4.00 7.94 9.09 10.05 5.38實測值 54.67 4.00 7.78 9.24 10.03 5.66如上所述，本發(fā)明化合物可用于抑制5-脂氧合酶催化花生四烯酸轉變成5-氫過氧-6，8，11，14-二十碳四烯酸(5-HPETE)。因此，本發(fā)明的另一具體方案是提供抑制花生四烯酸轉變成白三烯的方法，該方法包括給需要抑制5-脂氧合酶的哺乳動物服用有效量的式Ⅰ化合物或其藥學上適用的鹽。
這里所用的術語“有效量”意指可以抑制5-脂氧合酶催化的由花生四烯酸轉變成白三烯的生化合成途徑的第一步，特別是抑制5-脂氧合酶的本發(fā)明化合物的量。本發(fā)明方法設想的抑制5-脂氧合酶的方法包括治療和/或預防處理。當然，服用本發(fā)明化合物的具體劑量要由病例的具體情況決定，這包括例如服用的具體化合物、給藥途徑、需要治療的疾病情況。一般日劑量含約0.01mg/kg～約20mg/kg本發(fā)明的活性化合物。通常，優(yōu)選日劑量為約0.05～約10mg/kg，以約0.1～約5mg/kg為最理想。
本發(fā)明化合物可通過各種途徑給藥，包括口服、直腸給藥、經(jīng)皮給藥、皮下注射、靜脈注射、肌內(nèi)注射和鼻內(nèi)給藥。本發(fā)明化合物特有的優(yōu)點是具有高效力，因此較低的劑量能夠有效地抑制5-LO催化反應。
許多生理作用與白三烯有關。因此，確信本發(fā)明化合物能夠治療哺乳動物的許多與白三烯有關的病患，如氣喘、變態(tài)反應疾病(包括過敏性鼻炎)、炎性腸病、牛皮癬、局部缺血、休克、成人呼吸窘迫綜合征和關節(jié)炎。因此，本發(fā)明還提供了以上述給出的抑制由5-脂氧合酶催化的花生四烯酸轉變?yōu)榘兹┑膭┝浚ㄟ^使需要抑制5-脂氧合酶的哺乳動物服用治療氣喘、變態(tài)反應疾病、炎性腸病、牛皮癬、休克、局部缺血、成人呼吸窘迫綜合征或關節(jié)炎有效量的本發(fā)明化合物治療上述疾病的方法。
在服用本發(fā)明化合物之前，最好將本發(fā)明化合物配制成制劑。因此，本發(fā)明另一具體實施方案是藥物組合物，該組合物含有有效量的式Ⅰ化合物或其藥學上適用的鹽以及藥學上適用的載體、稀釋劑或賦形劑。
上述組合物中的有效成分占該組合物0.1%～99.9%重量。“藥學上適用的”意指載體、稀釋劑或賦形劑與組合物中的其他成分必須是可配伍的并且對接受者無毒害的。
可以按已知的方法，應用熟知的容易得到的成分制備本發(fā)明的上述藥物組合物。在制備本發(fā)明組合物中，通常將有效成分與載體混合，或者將有效成分用載體稀釋，或者將有效成分封裝在可以是膠囊、小藥囊、紙或其他包裝材料的載體內(nèi)。如果載體用作為稀釋劑，那么該載體可以是固體、半固體或液體物質(zhì)，它們作為有效成分的載體、賦形劑或介質(zhì)。因此，組合物可以為片劑、小丸劑、粉劑、錠劑、小藥囊劑、扁囊劑、

劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑(作為固體或在液體介質(zhì)中)、含有例如最高達10%重量有效化合物的軟膏劑、軟明膠膠囊劑和硬明膠膠囊劑、栓劑、無菌注射液、無菌封裝的粉劑等。
合適的載體、賦形劑和稀釋劑的實例有乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂及礦物油。該組合物另外還可以包括潤滑劑、濕潤劑、甜味劑、調(diào)味劑等。可以將本發(fā)明組合物用本技術領域熟知的方法進行配制，以便在給患者服用后提供迅速釋放、緩釋或延釋有效成分。
最好將組合物以單位劑量形式進行配制，每個單位劑量一般含有約0.1～約500mg，最好為約1～約250mg的有效成分。術語“單位劑量形式”是指適用于人或其他哺乳動物作為單次劑量的實際上獨立的單位，每個單位劑量形式含有經(jīng)計算能產(chǎn)生所需治療效果的、預先確定數(shù)量的有效成分以及合適的藥用載體。
下面詳細介紹組合物配方實施例，無論如何無意限制本發(fā)明的范圍。當然，“有效成分”是指式Ⅰ化合物或其藥學上適用的鹽。
配方1用以下成分制備硬明膠膠囊數(shù)量(mg/膠囊)有效成分 2.50干淀粉 200硬脂酸鎂 10總量 460mg將上述成分混合并裝入460mg容量的硬明膠膠囊。
配方2用以下成分制備片劑數(shù)量(mg/片)有效成分 250微晶纖維素 400霧狀二氧化硅 10硬脂酸 5總量 665mg將各成分混合并壓制成每片為665mg重的片劑。
配方3用以下成分制備氣霧劑溶液
重量%有效成分 0.25乙醇 29.75拋射劑22(氯二氟甲烷) 70.00總量 100.00有效化合物和乙醇一起混合，將該混合物加到部分拋射劑22中，冷至-30℃并轉入灌注裝置。然后向不銹鋼容器中裝入所需要的量，并用剩余的拋射劑稀釋。再將閥門裝到容器上。
配方4每片含60mg有效成分的片劑按以下方法制備有效成分 60mg淀粉 45mg微晶纖維素 35mg聚乙烯吡咯烷酮(為10%水溶液) 4mg羧甲基淀粉鈉 4.5mg硬脂酸鎂 0.5mg滑石 1mg總量 150mg有效成分、淀粉和纖維素過美國篩號45目篩并充分混合。將含聚乙烯吡咯烷酮的水溶液與制得的粉末一起混合，然后混合物過美國篩號14目篩。這樣制成的顆粒于50℃干燥，并過美國篩號18目篩。將羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石預先過美國篩號60目篩，然后將其加到顆粒中，混合后將其在壓片機上壓片，得到每片重150mg的片劑。
配方5每粒含80mg有效成分的膠囊劑按以下方法制備有效成分 80mg淀粉 59mg微晶纖維素 59mg硬脂酸鎂 2mg總量 200mg將有效成分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂混合并過美國篩號45目篩，裝入200mg容量的硬明膠膠囊中。
配方6每粒含225mg有效成分的栓劑按以下方法制備有效成分 225mg飽和脂肪酸甘油酯 2，000mg總量 2，225mg有效成分過美國篩號60目篩，將其懸浮在預先用必需的最低熱量熔化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合物倒入標量為2g容量的栓劑模中，并使其冷卻。
配方7每5ml劑量含50mg有效成分的混懸劑按以下方法制備有效成分 50mg羧甲基纖維素鈉 50mg糖漿 1.25ml苯甲酸溶液 0.10ml食用香料 適量色素 適量純水加至總量為 5ml將有效成分過美國篩號45目篩，并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合，形成調(diào)勻的糊狀物。在攪拌下用部分水稀釋苯甲酸溶液、食用香料和色素，并將其加到上述糊狀物中。然后加入足量的水至所需要的體積。
配方8靜脈內(nèi)注射的制劑可按以下方法制備。
有效成分 100mg藻酸鈉 500mg等滲鹽水 1，000ml通常將上述成分的溶液以1ml/分鐘的速度給患者靜脈內(nèi)注射。
用以下實驗來說明本發(fā)明化合物抑制5-脂氧合酶的能力。
致敏方法給雄性Hartley豚鼠(200～250g)注射3次卵白蛋白(OA，10mg/kg)，使其主動致敏。OA給予方法第1天和第3天各腹膜內(nèi)注射1針，第5天皮下注射1針。21～25天后作體外實驗。
體外實驗方法實驗當天，給(致敏)豚鼠吸入CO2，使其窒息死亡。取出氣管，剔除周圍結締組織，并切成螺旋狀條，并進一步將每個螺旋狀條對半切開，供成對實驗用。將組織置于37℃恒溫的具套管的體積為10ml的組織浴槽中，并用棉線將其與Grass力位移轉換器(FT03C型)連接。在Grass多種波動描記器(Model 7D)上顯示等長張力的變化。氣管條在改良的Kreb′s液中進行溫育。改良的Kreb′s液的組成(毫摩爾)如下NaCl，118.2;KCl，4.6;CaCl2·2H2O，2.5;MgSO4·7H2O，1.2;NaHCO3，24.8;KH2PO4，1.0;葡萄糖，10.0。該緩沖液中含5μM消炎痛，其作用是通過去除環(huán)氧合酶產(chǎn)物的影響，增強半胱氨酰白三烯(LT)的收縮作用。各組織浴槽通入95%O2∶5%CO2。將氣管條置于2g的靜止張力下，并在進行實驗前，給其60分鐘的最小穩(wěn)定期。在穩(wěn)定期期間，每隔15分鐘更換一次浴槽液。
濃度-反應曲線通過在先前的濃度仍然與組織接觸時，按半對數(shù)增量，增大器官浴槽中激動劑的濃度，獲得氣管條的累積濃度-反應曲線(Van Rossum，Arch.Int.Pharmacodyn.Ther.，143，299～330(1963)。在前面的濃度引發(fā)的收縮達到平穩(wěn)時期后，增加激動劑濃度。從每個組織獲得一條濃度-反應曲線。為了將組織之間的波動減到最小，收縮反應是以在濃度-反應曲線結束時加到浴槽中的10μM氯化氨甲酰膽堿后所獲得的最大反應的百分比表示。在60分鐘穩(wěn)定期后，先用10μM氯化氨甲酰膽堿激發(fā)組織，以保證組織活著。在記錄氯化氨甲酰膽堿初次激發(fā)的最大收縮反應后，沖洗組織，并在實驗方案開始實施前，重新平衡60分鐘。EC50和抑制百分率的測定為了評價新的5-脂氧合酶抑制劑在Schultz-Dale反應中的作用，在開始制作濃度-反應曲線前，將各個化合物與組織一起溫育30分鐘。載體(DMSO)給配對的對照組織。此時向所有浴槽中加入10μM新安替根，以阻斷釋放的組織胺的作用。在藥物存在和不存在的條件下，記錄抗原濃度為30ng/ml時所得到的反應，并計算出每對組織的抑制百分比。用線性回歸求出IC50值。
LT或氯化氨甲酰膽堿濃度-反應曲線用于測定該藥物作為5-脂氧合酶抑制劑的特異性。在上述實驗中，試驗化合物按上述方法溫育。用線性回歸法求出EC50值，它表示引發(fā)50%最大反應所需要的激動劑的摩爾濃度。用“學生”t檢驗分析試驗化合物存在和不存在時EC50值的差別，以P＜0.05視為差別顯著。
體內(nèi)研究試驗前2天腹膜內(nèi)注射0.3ml抗OA抗血清，使雄性Hartley豚鼠(350～500g)被動致敏。超免疫血清制備方法如下給主動致敏的雄性豚鼠在第1天和第5天各腹膜內(nèi)注射1次含2mgOA的50%福氏完全佐劑。第21天，動物放血，收集血清，于-20℃貯存。試驗當天，將被動致敏的豚鼠用劑量為35～40mg/kg的戊巴比妥鈉腹膜內(nèi)注射麻醉，用Tygon小口徑管(o.d.＝03)作右側頸靜脈插管，并與針筒相連，用于注入選擇的藥物。用與置于左側頸動脈的Tygon插管相連的Statham壓力傳感器測量血壓。作氣管插管術，用Harvard嚙齒動物呼吸器給每只動物吸入室內(nèi)空氣，一次呼吸進出肺部的空氣體積設定為1ml/100g體重，呼吸頻率為60次/分鐘。靜注琥珀酰膽堿(5mg/kg)以抑制自發(fā)呼吸。用與氣管插管上的T形管相連的Statham壓力傳感器測定作為總肺阻力指標的氣管內(nèi)壓力。壓力傳感器的輸出信號在Grass多種波動描記器上顯示出來。采用Deltaphase等溫器，使動物體溫維持在正常范圍內(nèi)。在作手術前，用管飼法給每只豚鼠灌入試驗化合物或載體(PEG 400)。接著在選定的時間進行OA激發(fā)。OA激發(fā)前5分鐘，給動物靜脈注射新安替根(5mg/kg)、心得安(1mg/kg)和消炎痛(10mg/kg)。OA引起的氣管壓力的增加以采用止血器夾住氣管所得到的最大壓力的百分比表示。為了測定各個藥物的作用，從每個試驗濃度下載體和藥物處理的動物計算出%抑制率。
表Ⅰ抑制5-脂氧合酶的作用體外IC50在30mg/kg，PO，實施例號 uM 2小時條件下體內(nèi)抑制%1 0.05 972 0.10 963 0.19 43a4 0.23 525 0.14 956 0.13 817 0.09 77a8 0.13 46注a＝劑量為10mg/kg應該理解，本說明書和實施例是為了進行說明，而不是限制本發(fā)明。可以對本發(fā)明進行變動和改進，但不脫離后附的權利要求書中所定義的本發(fā)明的精神和范圍。
權利要求
1.制備下式的N-羥基-N-[3-[2-(鹵代苯硫基)苯基]丙-2-烯基]脲的方法，
式中R1為氫或鹵素；X為氟或氯，該方法包括，使N-肉桂基-N-羥胺與三甲基甲硅烷基異氰酸酯在醚性溶劑中反應，得到所需的式Ⅰ化合物。
2.根據(jù)權利要求1的方法，其中所制備的化合物選自下述化合物及其可藥用的鹽N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-5-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲。
3.根據(jù)權利要求1的方法，其中制備的是N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲。
4.根據(jù)權利要求1的方法，其中制備的是N-羥基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲。
5.制備藥物組合物的方法，其中包括將式Ⅰ的N-羥基-N-〔3-〔2-(鹵代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲或其藥學上適用的鹽與其一種或多種藥學上適用的載體、稀釋劑或賦形劑混合，
式中R1為氫或鹵素，X為氟或氯。
全文摘要
本發(fā)明是關于N-羥基-N-[3-[2-(4-鹵代苯硫基)苯基]丙-2-烯基]脲類化合物、含有上述化合物的組合物以及應用上述化合物作為5-脂氧合酶抑制劑的方法。
文檔編號A61P37/08GK1066062SQ9210289
公開日1992年11月11日 申請日期1992年4月22日 優(yōu)先權日1991年4月23日
發(fā)明者G·A·海特, E·D·米海利希, D·W·施奈德, T·蘇亞雷斯 申請人:伊萊利利公司