專(zhuān)利名稱(chēng)：胡蘿卜苷在制備促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域的藥物/保健品的應(yīng)用，具體地說(shuō)是涉及胡蘿卜苷在制備促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖藥物/保健品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
I.胡蘿卜苷的來(lái)源及理化性質(zhì)胡蘿卜苷別名西托糖苷、谷留醇-3-0-葡萄糖苷；英文名稱(chēng)Daucosterolo分子量576. 85。胡蘿卜苷是重要的植物留醇衍生物，廣泛分布于自然界，存在于植物的根、莖、葉、果實(shí)和種子中。可用乙醇加熱回流提取，經(jīng)硅膠柱層析或大孔樹(shù)脂柱層析分離獲得。本品為白色粉末，在避光干燥低溫處保存，可溶于吡啶、DMS0、熱的甲醇、乙醇等，不溶于石油 醚、氯仿、水等溶劑，可用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定含量[1] ([I]聞雪生，徐新剛，黃敏。HPLC-ELSD測(cè)定柏子仁箱中的胡蘿卜苷.全國(guó)中藥創(chuàng)新與研究論壇 論文集)。胡蘿卜苷的藥理學(xué)研究進(jìn)展
關(guān)于胡蘿卜苷藥理學(xué)研究的報(bào)道并不多，其在生物、醫(yī)學(xué)方面的價(jià)值有待進(jìn)一步挖掘。有文獻(xiàn)報(bào)道胡蘿卜苷對(duì)成骨樣細(xì)胞的增殖具有顯著的促進(jìn)作用[2] ([2]孟彥彬1，孫盛2，高巍。牛膝中對(duì)成骨樣細(xì)胞UMR106有促進(jìn)增殖作用的活性成分研究。時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18 (12) :2947-2948。)濃度為I. 2 X 1(T 6 mg /m I時(shí)，其促進(jìn)成骨樣細(xì)胞增殖的作用最強(qiáng)，3次實(shí)驗(yàn)的最高增殖率平均為45%。另有研究表明胡蘿卜苷可預(yù)防和治療氧化低密度脂蛋白對(duì)人微血管內(nèi)皮細(xì)胞造成的損傷胡蘿卜苷劑量0. 39 12. 5iig/mL時(shí)，有保護(hù)作用；劑量6. 25 12. 5 yg/mL時(shí)時(shí)，具有很強(qiáng)的修復(fù)作用[3] ([3]何秋艷，翁新楚。山楂活性成分對(duì)氧化低密度脂蛋白損傷人微血管內(nèi)皮細(xì)胞的防治作用。上海大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2007，13 (6):751-756。)。此外，胡蘿卜苷亦是食用仙人掌中降糖活性的成分之一 [4] ([4]谷江霞，竇德強(qiáng)。食用仙人掌降糖活性成分研究。中國(guó)現(xiàn)代中藥，2007，19 (111) :15-16)。.與胡蘿卜苷相關(guān)的發(fā)明專(zhuān)利
3. I —種胡蘿卜苷植物殺螨劑及其用途(申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)CN201110140348. 7):發(fā)明提供了一種以胡蘿卜苷為主要原料，再加入溶劑、增溶劑和乳化劑等輔料制成的殺螨水乳劑，是一種對(duì)人畜安全、環(huán)境友好型的和諧農(nóng)藥，對(duì)生態(tài)環(huán)境長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展、人類(lèi)的健康和病害的綜合治理都具有深遠(yuǎn)的意義。3. 2 —種從柏子仁中提取柏子仁油及胡蘿卜苷的方法(申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)CN201010004245. 3):發(fā)明涉及一種從柏子仁中提取柏子仁油及胡蘿卜苷的方法，采用以下步驟取柏子仁，粉碎，用石油醚提取2次，得柏子仁油；提取柏子油后的柏子仁，揮盡石油醚，用乙醇提取2次，合并濾液；合并后的濾液回收乙醇至
浸膏狀，加入占浸膏1-4重量倍的柱層析硅膠，攪拌均勻，置干燥箱中，干燥，放冷，得柱 層硅膠拌和物；
取占浸膏4-8重量倍的柱層析硅膠，用石油醚濕法裝柱，將柱層硅膠拌和物加入層析柱中，用體積比為I : I的石油醚-醋酸乙酯洗脫，洗脫至流出液近無(wú)色，改用醋酸乙酯洗脫，合并醋酸乙酯洗脫液，回收醋酸乙酯，得胡蘿卜苷粗分離物。該發(fā)明胡蘿卜苷制備工藝方法簡(jiǎn)便，所用提取、洗脫溶劑毒性低，得到的胡蘿卜苷純度高，雜質(zhì)少，易于精制，適于規(guī)模化制備或生產(chǎn)。3. 3蒲葵的抗腫瘤提取物及其制備方法及應(yīng)用(申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)CN200510036625. 4):發(fā)明涉及一種蒲葵的體外抗腫瘤提取物，其化學(xué)成分為薯蕷皂苷元；^ 一谷留醇；豆留酮；P —胡蘿卜苷；正二十六醇等，其提取方法是將新鮮采集的蒲葵植物的根、籽、葉粉碎，用乙醇浸提過(guò)濾分離出固相和液相，液相蒸餾回收乙醇，得到黑色的浸提膏A，過(guò)濾分離出的固相，水提，濃縮，合并醇提浸提膏和水提濃縮液，分別用乙酸乙酯和石油醚提取再用硅膠柱重結(jié)晶得出單體化合物，經(jīng)藥理學(xué)驗(yàn)證，蒲葵提取物對(duì)7類(lèi)腫瘤細(xì)胞株的生長(zhǎng)有抑制作用。3. 4棉葉寥乙醇提取物及其制備方法和用途(申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)CN200610011169. 2):發(fā)明公開(kāi)了一種寥科植物棉毛酸膜葉寥(棉葉寥)的乙醇提取物及其制備方法。該制備方法包括如下步驟取棉葉寥2. 5 — 5. 0kg，粉碎后用60 - 80%乙醇回 流提取2 — 3次，合并濾液，減壓濃縮得2200 - 4400ml濾液，離心，上清液用乙酸乙酯萃取
2- 3次，合并萃取液，減壓濃縮成干粉，行硅膠柱層析，用TLC展開(kāi)劑洗脫制得粗品棉葉寥乙醇提取物。本發(fā)明棉葉寥乙醇提取物含有黃酮類(lèi)成分包括槲皮素、金絲桃苷、棉葉寥黃酮A ;酚酸類(lèi)成分包括香豆酸、沒(méi)食子酸、原兒茶酸；甾醇類(lèi)成分包括P —谷甾醇、胡蘿卜苷。本發(fā)明的棉葉寥乙醇提取物在抗癌、治療菌痢、腸炎、治療濕疹、治療蛇咬傷等疾病時(shí)療效顯著。3. 5煙株根際堿性土壤有機(jī)調(diào)節(jié)劑(申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)CN200710180577. 5):—種煙株根際堿性土壤有機(jī)調(diào)節(jié)劑，其特征是由紫葉酢漿草、優(yōu)質(zhì)腐熟芝麻餅、草炭等多種有機(jī)成分組成，成分配比為低溫烘干的紫葉酢漿草10% 55%，優(yōu)質(zhì)腐熟芝麻餅20% 55%，草炭10% 40%。粉碎后充分混勻混合制成。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于通過(guò)調(diào)節(jié)煙株根際堿性土壤質(zhì)量，達(dá)到降低堿性植煙土壤PH值的作用，在一定程度上較易實(shí)現(xiàn)；該產(chǎn)品安全、生態(tài)；其中酢漿草顯示較強(qiáng)酸性，能有效降低堿性植煙土壤的PH值，其化學(xué)成分含P —谷淄醇、胡蘿卜苷、草酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸等，許多小分子有機(jī)酸對(duì)于改善植煙土壤的有效鉀及煙葉香氣，對(duì)煙葉品質(zhì)的提升較為有利；腐熟芝麻餅對(duì)增加煙葉香氣較為有利；草炭對(duì)改善土壤有機(jī)質(zhì)及土壤物理性狀有明顯作用。3.6 一種分離芫花條化學(xué)成分的方法(申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)CN200910015861.6):發(fā)明提供一種分離芫花條化學(xué)成分的方法，其用硅膠柱色譜法對(duì)瑞香科植物芫花枝條的乙醇提取物經(jīng)石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇深度萃取，進(jìn)行化學(xué)成分的分離。室溫萃取，節(jié)約能源并可避免萃取過(guò)程中有效成分的破壞；分離得比較徹底，共獲得15種化合物；采用理化及波譜分析方法，分別鑒定為(I)十八碳酸單甘油酯、(2)鄰苯二甲酸二丁酯、(3)棕櫚酸、(4) ￠-谷甾醇、(5)咖啡酸十八烷酯、(6)咖啡酸正二十烷酯、(7)山奈酚、(8)西瑞香素、(9)芹菜素、(10)紫丁香樹(shù)脂醇、(11)木犀草素、(12) ￠-胡蘿卜苷、(13)刺五加苷
B、(14)松脂醇二葡萄糖苷、(15) 二氫刺五加苷B。其中，化合物⑴、⑵、(3)、(6)、(10)、
(13)、(14)和(15)為首次分離得到。3.7預(yù)防或治療帕金森病的藥物組合物及其制備方法(申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)CN200910135572.X):發(fā)明公開(kāi)了一種預(yù)防或治療帕金森病的藥物組合物及其制備方法。該藥物組合物由刺五加苷B，刺五加苷D，丁香樹(shù)脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿卜苷組成。本發(fā)明確定了上述4種組分的最佳劑量水平范圍，在此基礎(chǔ)上采用了正交試驗(yàn)篩選出了上述4種活性成分之間的最佳配伍比例。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，將刺五加苷B，刺五加苷D，丁香樹(shù)脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿卜苷按照I : 2 : 8 : 8的重量配伍而成的藥物組合物能顯著提高PC12細(xì)胞存活率，對(duì)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞損傷具有顯著的保護(hù)作用。本發(fā)明所提供的刺五加有效成分化學(xué)成分簡(jiǎn)單明確，在生產(chǎn)中易進(jìn)行于質(zhì)量控制。本發(fā)明藥物組合物可以用來(lái)制備療效好，安全可靠的預(yù)防和治療帕金森病的藥物。3. 8從亞麻根中制備腦苷脂類(lèi)化合物的方法(申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)CN200510068282.X):發(fā)明公開(kāi)了一種新的制備腦苷脂類(lèi)化合物的方法，具體說(shuō)，即從亞麻通過(guò)提取、分離和重結(jié)晶，制備腦苷脂類(lèi)化合物P —胡蘿卜苷、化合物I和化合物2。神經(jīng)干細(xì)胞的研究概況
神經(jīng)干細(xì)胞是一類(lèi)具有分裂潛能和自更新能力的母細(xì)胞，它可以通過(guò)不對(duì)等的分裂方式產(chǎn)生神經(jīng)組織的各類(lèi)細(xì)胞。Mckay于1997年在《Science》雜志上將神經(jīng)干細(xì)胞的概念總 結(jié)為具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞及少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力，能自我更新并足以提供大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞。各種成年哺乳動(dòng)物腦內(nèi)都存有神經(jīng)干細(xì)胞，其具有長(zhǎng)期自我更新能力。包括人類(lèi)在內(nèi)的各種成年哺乳動(dòng)物腦組織終生都有新神經(jīng)元生成，新神經(jīng)元主要誕生于海馬齒狀回和室管膜下區(qū)，然后遷移至目的。這些新生神經(jīng)元在遷移過(guò)程中逐漸成熟，行使生理功能。神經(jīng)干細(xì)胞具有以下特點(diǎn)①自我更新具有對(duì)稱(chēng)分裂及不對(duì)稱(chēng)分裂兩種分裂方式，從而保持干細(xì)胞庫(kù)穩(wěn)定。②多向分化潛能可以向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞分化。③低免疫源性是未分化的原始細(xì)胞，不表達(dá)成熟的細(xì)胞抗原，不被免疫系統(tǒng)識(shí)別。④組織融合性好可以與宿主的神經(jīng)組織良好融合，并在宿主體內(nèi)長(zhǎng)期存活。⑤分裂的慢周期性絕大多數(shù)干細(xì)胞處于GO期，細(xì)胞增殖緩慢。神經(jīng)干細(xì)胞在神經(jīng)發(fā)育和修復(fù)受損神經(jīng)組織中發(fā)揮重要作用，是修復(fù)和代替受損腦組織的有效方法，能重建部分環(huán)路和功能。另一方面，隨著機(jī)體衰老，神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量都呈下降趨勢(shì)，其增殖能力和活性隨著年齡的增長(zhǎng)而降低，大腦細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)更新受到破壞，新生的細(xì)胞無(wú)法及時(shí)替代衰老的細(xì)胞，神經(jīng)功能下降而步向衰老。神經(jīng)干細(xì)胞的活性和增殖能力與神經(jīng)再生的需求兩者之間的矛盾決定了大腦的衰老進(jìn)程。由于絕大多數(shù)神經(jīng)干細(xì)胞處于GO期，細(xì)胞增殖緩慢，從而限制其修復(fù)功能的發(fā)揮。如果藥物分子能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖，則能增強(qiáng)其修復(fù)功能，乃至延緩大腦衰老。能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的物質(zhì)有堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)等細(xì)胞因子；有睪酮、脫氫表雄酮、胰島素樣生長(zhǎng)因子、紅細(xì)胞生成素、甲狀腺激素等激素類(lèi)物質(zhì)；亦有人參皂苷Rgl、黃芪甲苷、淫羊藿苷、知母皂苷等小分子藥物。上述能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的物質(zhì)，其應(yīng)用具有局限性大分子物質(zhì)難以透過(guò)血腦屏障，攝入過(guò)多外源性激素易導(dǎo)致內(nèi)源性激素釋放紊亂，而小分子藥物來(lái)源有限，價(jià)格昂貴，長(zhǎng)期服用可能有一定的不良反應(yīng)。因而，價(jià)廉易得、低毒高效的“神經(jīng)干細(xì)胞促生長(zhǎng)劑”蘊(yùn)藏著巨大的醫(yī)療和保健價(jià)值。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)胡蘿卜苷能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖，作用顯著，安全性好。鑒于胡蘿卜苷來(lái)源廣泛、提取方便，價(jià)廉易得的特點(diǎn)，使其開(kāi)發(fā)成為“神經(jīng)干細(xì)胞促生長(zhǎng)劑”將帶來(lái)顯著的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供胡蘿卜苷在醫(yī)療和保健品中的新用途，即胡蘿卜苷在制備促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，及其在制備促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)離體和整體實(shí)驗(yàn)，證實(shí)胡蘿卜苷具有促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的作用。具體實(shí)驗(yàn)如下
I.離體實(shí)驗(yàn) I. I實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
懷孕14-16天的SD孕大鼠10只，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK (浙)2008-0033.
I. 2主要試劑及試劑配制Neuralbasal培養(yǎng)基(GIBC0公司產(chǎn)品，Lot 1094141)、B 27培養(yǎng)基添加劑(GIBC0公司產(chǎn)品，Lot 1159693);大鼠 b-FGF 及 EGF (Pepro TECH 公司產(chǎn)品，EGF :Lot 0906390-1H2911 ；b-FGF Lot 1305CY12)小鼠抗大鼠nestin單克隆抗體、TRITC (羅丹明)標(biāo)記的羊抗小鼠IgG抗體、Brdu及其抗體(武漢博士德生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品);CCK-8試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所)；胡蘿卜苷，由南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省方劑研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，純度彡98% ；
解剖液:D-hank’s, (pH7. 2-7. 4) NaC18. Og, Na2HPO4 12H200. 132g, KH2P 0 40 . 06g,KC10. 4g，NaHCO 30. 35g,用去離子水配成1000ml溶液；
0.125% 胰酶0. 125g 胰酶溶解于 100ml D-hank’s 中；
種植培養(yǎng)基由90%DMEM培養(yǎng)基和10%胎牛血清(杭州四季青生物工程公司產(chǎn)品)配
制；
無(wú)血清培養(yǎng)基由97%neuralbasal培養(yǎng)基、2% B 27培養(yǎng)基添加劑以及終濃度為20 u g/L的b-FGF和EGF配制而成解剖液、胰酶、培養(yǎng)液皆過(guò)濾除菌，4°C保存?zhèn)溆谩Ｖ饕獌x器及器材
SW-CJ-2FD型超凈工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)C02細(xì)胞培養(yǎng)箱(SANYO，日本)；熒光倒置顯微鏡(OLYMPUS，日本)；低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(LDZ5-2型，北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；酶標(biāo)儀(BIO-RAD，USA) 6孔和96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Corning, USA) ； 200目尼龍篩網(wǎng)(罩在IOOml的小燒杯上，用膠布粘牢)，彎頭無(wú)齒鑷，直徑為12mm的彎頭滴管；50ml鹽水瓶；直徑為IOcm的表面皿，皆經(jīng)15磅30min高溫高壓滅菌。實(shí)驗(yàn)方法
1.4. I神經(jīng)干細(xì)胞的分散、種植和培養(yǎng)
具體操作過(guò)程如下1.孕鼠用10%水合氯醛麻醉，全身用碘伏消毒，無(wú)菌條件下剖腹，取出胎鼠；2.用彎頭鑷撕開(kāi)胎鼠頭皮和顱骨，暴露兩側(cè)大腦半球，用彎頭無(wú)齒鑷小心分開(kāi)顳葉皮層，暴露并取出海馬回，置解剖液中；3.將海馬組織塊用解剖液清洗，轉(zhuǎn)入裝有約海馬組織體重20倍體積的胰酶的鹽水瓶中，用光滑的彎頭滴管反復(fù)吹打至組織塊完全消失，液體呈渾濁狀；4.將液體用等體積的種植培養(yǎng)基終止消化，過(guò)200目尼龍篩網(wǎng)；5. 1500g /r離心12min，傾去上清液，用種植培養(yǎng)基使細(xì)胞重懸，以IX IO6個(gè)/ ml的密度將細(xì)胞種植在6孔培養(yǎng)板中，每孔加2mL ；7.置37°C，5%飽和濕度CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。第2天將培養(yǎng)液全部換成無(wú)血清培養(yǎng)液，以后用無(wú)血清培養(yǎng)液每隔2 d換液I次。每天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。待出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的大量成簇生長(zhǎng)的細(xì)胞球時(shí)，用ImL槍頭吸取細(xì)胞球，移至新的6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)，如此過(guò)程重復(fù)三遍，以純化神經(jīng)干細(xì)胞，此時(shí)可傳代。用3飛代的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定(陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記物為nestin)
方法和步驟依次為①用于鑒定的神經(jīng)干細(xì)胞用PBS輕洗2次，繼而滴加4%多聚甲醛固定30min，再用蒸餾水洗兩遍②滴加0. 25%Triton，浸泡15 min，PBS洗3次③滴加5%BSA封閉液，室溫浸泡20 min,甩去多余液體，不洗④滴加小鼠抗大鼠nestin單克隆抗體(I :400) 4°C過(guò)夜，PBS洗3次⑤滴加TRITC (羅丹明)標(biāo)記的羊抗小鼠IgG抗體(I :50)，室溫浸泡20 min，PBS洗3次⑥在熒光顯微鏡下觀察并拍照。陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)橙紅色熒光。陽(yáng)性細(xì)胞的純度> 90%。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
I.4. 3. I CCK-8 實(shí)驗(yàn)
原理CCK-8法是用于測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無(wú)放射性的比色檢測(cè)法。實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它四唑鹽如MTT，XTT, MTS或WST -I高。由于CCK-8溶液相當(dāng)穩(wěn)定，并且對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，可直接加入到細(xì)胞樣品中長(zhǎng)時(shí)間孵育。原理是WST-8 (2- (2-甲氧基-4-硝苯基)-3- (4-硝苯基)-5- (2，4- 二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)在電子稱(chēng)合試劑I-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成橙黃色水溶性的formazan,后者與活細(xì)胞數(shù)量成正比。方法神經(jīng)干細(xì)胞以I X IO4個(gè)/ ml的密度種植在96孔培養(yǎng)板中，每孔加0. 2mL。細(xì)胞分成9組，分別為對(duì)照組、胡蘿卜苷IOOii M組、胡蘿卜苷80 ii M組、胡蘿卜苷40 ii M組、胡蘿卜苷20 ii M組、胡蘿卜苷IOii M組、胡蘿卜苷5 ii M組、胡蘿卜苷2.5 ii M組，胡蘿卜苷
I.25 PM組、每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。對(duì)照組正常培養(yǎng)，不作處理；其余各組給予胡蘿卜苷，其終濃度分別為 100 u mol/L、80 u mol/L、40 u mol/L、20 u mol/L、10 u mol/L、5 u mol/L、2. 5 u mol/L、1.25iimol/L。另設(shè)空白對(duì)照孔在無(wú)細(xì)胞的孔中加等量無(wú)血清培養(yǎng)基以及CCK-8。然后置37°C，5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)60h，之后向各孔中加入20 的CCK-8溶液，37°C下孵育2h，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(0D值)。測(cè)試孔的實(shí)際OD值=各測(cè)試孔的OD值-空白對(duì)照孔OD值。細(xì)胞增殖率％ =(處理組平均OD值-對(duì)照組平均OD值)/對(duì)照組平均OD值X 100%。I二S統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用SPSS16. 0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊用單因素方差分析(One-Way AN0VA)中提供的Bonferroni檢驗(yàn)；不齊則用在Equal VarianceNot Assumed選項(xiàng)中提供的Tamhane，s T2進(jìn)行分析。所得數(shù)據(jù)均用表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表I.
表I各組神經(jīng)干細(xì)胞OD值及細(xì)胞增殖率 X±s(, n=6)
組別OD值細(xì)胞增殖率％
對(duì)照組0.47 ±.079——
權(quán)利要求
1.胡蘿卜苷在制備促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
2.胡蘿卜苷在制備促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖保健品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及胡蘿卜苷在制藥及保健品中的新用途，具體地說(shuō)是胡蘿卜苷在制備促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖藥物及保健品中的應(yīng)用。胡蘿卜苷是植物甾醇衍生物，為谷甾醇-3-O-葡萄糖苷，廣泛存在于植物中，其提取、分離和含量檢測(cè)過(guò)程都很簡(jiǎn)便。有研究稱(chēng)本品可促進(jìn)成骨樣細(xì)胞增殖，保護(hù)人微血管內(nèi)皮細(xì)胞，還具降糖活性。本發(fā)明以原代培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞和老年小鼠為材料，觀察胡蘿卜苷對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的作用。通過(guò)離體和整體實(shí)驗(yàn)，證實(shí)胡蘿卜苷具有促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的作用離體實(shí)驗(yàn)中，胡蘿卜苷劑量10μmol/L~100μmol/L均能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖；整體實(shí)驗(yàn)中，10mg/kg的劑量能促進(jìn)老年小鼠神經(jīng)干細(xì)胞的增殖。
文檔編號(hào)A61P25/28GK102755343SQ20121027977
公開(kāi)日2012年10月31日 申請(qǐng)日期2012年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月8日
發(fā)明者楊念云, 段金厫, 江勵(lì)華, 王明艷, 郭盛, 陸大祥 申請(qǐng)人:南京中醫(yī)藥大學(xué), 暨南大學(xué)