專利名稱：抑制肝癌轉移的中藥制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種抑制肝癌轉移的中藥制劑，特別是抑制肝癌轉移的中藥制劑及其制備方法。
背景技術：
肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界第6大腫瘤，近年來HCC發病率在歐洲和美國呈上升趨勢，我國為高發區。中醫藥防治HCC是我國治療HCC的特色和優勢，近年來復方中藥制劑對HCC細胞的直接抑制，對細胞凋亡的影響，以及在提高機體免疫力等方面的分子機制研究進展迅速；復方中藥制劑預防和治療HCC的臨床療效觀察研究也取得了一定的進展，現將近5年中藥復方制劑防治HCC的研究進展做一綜述，為提高中醫藥治療早中期肝癌提供參考。原發性肝癌是世界上第六位最常見的癌癥和第三位最常見的癌癥死因。發展中國 家的原發性肝癌發病率和死亡率更高，我國發生的原發性肝癌就占了世界上肝癌總病例的一半以上。目前認為，乙型肝炎病毒、食物污染黃曲霉毒素BI、污染的飲用水和大量飲酒等與原發性肝癌的發生密切相關。在工業文明發達的今天，人們時刻面對各種環境壓力、環境污染，水、空氣以及化肥、農藥、汽車尾氣，食品添加劑、飲食不潔和經常食用腌制熏烤的食品、吸煙、飲酒、噪音干擾及大氣放射物質等因素影響。這些各種外源性毒素通過不同途徑進入人的機體、危害健康，而機體新陳代謝功能的紊亂，極其容易把代謝中產生的各種廢物堆積停滯在代謝管道中，堵塞正常排泄通道，構成內源性毒素，誘發人體產生各種病狀。最終會造成機體的各種功能紊亂，如內分泌失調，脂肪代謝失調、免疫系統功能下降等，導致腫瘤的發生。由于肝癌是嚴重威脅人類健康的一類疾病，幾乎極少能夠治愈。因此，肝癌學一直是醫學研究的重點，尋找有效的抗腫瘤藥物與方法，徹底攻克肝癌是世界醫學界的重要研究課題。研究表明許多中藥具有抗肝癌作用，尤其是復方，具有多種作用成分和通過多種作用途徑產生抗腫瘤作用。近年來一些醫學機構和醫務工作者發表了較多利用中草藥治療肝病或肝癌的公開文獻報道，例如
I、中國專利，名稱一種抗癌消瘤排毒湯申請(專利)號CN200410038090. X申請日2004. 05. 19，公開(公告)號CN1698684公開(公告)日2005.11.23申請(專利權)人鐘偉地址廣東省廣州市林和西路89號廣州市友誼醫院門診部發明(設計)人鐘偉摘要一種抗癌消瘤排毒湯，采用具有清熱解毒、活血化瘀、抗癌消瘤功效的中藥，其中以蟾蜍、土鱉、水蛭、斑蝥、壁虎等動物藥為主藥，輔以黃芪、人參、靈芝、三七、白術、三棱、莪術、桃仁、紅花、蛇舌草等中草藥煎制而成。本發明既可直接殺滅腫瘤細胞，破壞病灶結合，又可抗病毒、消炎、破壞腫瘤血管防止細胞轉移，抗細胞突變、改善細胞信息傳遞途徑，逆轉腫瘤細胞的耐藥性，同時提高機體免疫功能，從而有效治療各種良惡性腫瘤，尤其治療肝癌、肺癌、乳腺癌效果最佳。主權項I. 一種抗癌消瘤排毒湯，采用具有清熱解毒、活血化瘀、抗癌消瘤功效的中藥煎成，其特征在于它以動物藥為主藥，輔以其它中草藥煎成，各藥物的具體用量為蟾蜍5g、土鱉10g、水蛭2g、斑蝥O. 04g、壁虎6g、黃芪30g、人參10g、靈芝15g、三七10g、白術20g、三棱8g、莪術8g、桃仁10g、紅花6g、蛇舌草30g。
2、中國專利，名稱一種抗癌中藥散劑及其制備方法申請(專利)號CN02116298.0申請日2002. 04. 01，公開(公告)號CN1448164，公開(公告)日2003.10.15申請(專利權)人楊文秀，地址黑龍江省齊齊哈爾市鐵鋒區鐵路北局宅北紡織路18 — 2樓3 —12號發明(設計)人楊文秀摘要一種抗癌中藥散劑及其制備方法，其中藥散劑是由飯前服用的組方I和飯后服用的組方II組成，其組方I的組分有乳香、沒藥、當歸、陳皮、大黃、芒硝、赤芍、皂角、土蟲、甲珠等21味純中藥。其組方II的組分有人參、白術、茯苓、甘草、當歸、獨活、羌活、黃芪、附子等13味純中藥。其制備方法是將組方I所需純中藥按配方分別進行精選(不含芒硝)用清水漂洗后，在100°C的條件下進行烘干，通過紫外線滅菌30分鐘，冷卻后按配方比例混合粉碎成120目細粉，再將芒硝組份研制成120目細粉，與上述組方I藥物粉碎好的細粉混合攪拌均勻后，裝入膠囊(0.5g/粒)，再裝入瓶中密封。組方II無芒硝，其制備方法與組方I類似。本藥物具有提高機體免疫力、促進代謝，抑制或溶解癌細胞功能，對肝癌等多種癌癥有較好療效，服用方便，無毒副作用。主權項I. 一·種抗癌中藥散劑，其特征是它是由飯前服用的組方I和飯后服用的組方II組成，其組分配比(重量份)如下組方I (飯前服用)乳香2. 5-3%，沒藥2. 5-3%，當歸I. 8_2%陳皮
2.5-3 %，大黃 6. 4-6. 8 %，芒硝 4. 5-5 %赤芍 4. 5-5%，皂角 4. 5-5%，土蟲 5. 4-5. 8%甲珠8-10%，白芷O. 8-1%，花粉2. 5-3%藏紅花4. 5-5%，雙花8-10%，木香8-10%防風 1.8-2%，白芨 8-10%，柴胡 I. 3-1. 5%萎仁 4. 5-5%，萎皮 4. 5-5%，三七 4. 5-5% ；組方II (飯后服用)人參8-9%，白術11-12%，茯苓8-9%甘草3-4%，當歸3_4%，獨活 4-4.5%，羌活 3-4%，黃芪 17-18%，白芍 11-12%，附子 2. 5-3%，桂枝 11-12%，巴戟 5-6%，苡仁 8-9%。3、中國專利，名稱一種治療肝硬化病證的中藥組合物及其制備方法，申請(專利)號CN200910309349. 2 申請日2009. 1L05 公開(公告)號CN101869686A，公開(公告)日2010.10.27申請(專利權)人泰一和浦(北京)中醫藥研究院有限公司，地址北京市豐臺區豐管路16號9號樓2027B發明(設計)人王峰摘要一種治療肝硬化病證的中藥組合物及其制備方法，中藥組合物主要由以下原料藥組成血竭、穿山甲、川芎、赤芍、白芍、茯苓、白術、桃仁、紅花、靈芝、血竭、元胡、當歸、三棱、莪術、陳皮、枳實、大黃、人參、生黃芪、熟地黃、葛根、龜板膠、鹿角霜、鱉甲膠、生地黃、玄參、山茱萸、烏藥、枳殼、香附、陳皮、木香、沉香、厚樸、吳茱萸、薤白、九香蟲。本發明中藥組合物可按照常規的中藥制劑方法制備成任何一種常用口服制劑。本發明可顯著改善疲倦乏力、食欲減退及消化不良為主，可有惡心、厭油、腹部脹氣、上腹不適、隱痛及腹瀉、一般情況與營養狀況較差，消瘦乏力，精神不振，重癥者衰弱而臥床不起，并伴隨皮膚干枯粗糙，面色灰暗黝黑，貧血、舌炎、口角炎、夜盲、多發性神經炎及浮腫以及水及電解質紊亂、門脈高壓等癥狀，臨床療效確切，療效顯著,見效迅速。4、中國專利，申請號201110039130. 2申請日2011. 02. 17名稱抑制肝癌的中藥制劑及其制備方法申請(專利權)人鄧鑫，地址廣西壯族自治區南寧市華東路10號瑞康醫院發明(設計)人鄧鑫；梁健；吳發勝；張亞萍摘要本發明涉及一種抑制肝癌的中藥制劑及其制備方法，其原料包括人參、黃芪、白術、龜板、白花蛇舌草、鱉甲、白芍、附子、杜仲和炙甘草等，制備方法是取人參、炙甘分別碾成粉末，再將各組分用水或乙醇提取，濃縮，合并，加入填充劑，制成固體制劑或液體制劑產品，本中藥制劑攻補兼施，標本兼顧，消痛散結，共奏滋陰養血、益氣復脈和調節人體免疫系統功能，對抵抗腫瘤、保持排毒管道暢通，抑制癌細胞的生長均有作用。由于本發明中藥組合物基本采用了國家藥典規定的藥食同源藥物進行組合，所以具有費用低廉、基本無毒副作用等優點
發明內容
為達到此目的，本發明人對傳統中醫理論進行研究，在祖傳秘方和原專利201110039130. 2的基礎上，加以補充和整理，挖掘并開發出一種調節內臟功能失調，費用低廉、基本無毒副作用的抑制肝癌轉移的的中藥制劑及其制備方法。本發明抑制肝癌轉移的的中藥制劑有效成分是由以下重量份數的中藥原料制成的
黃芪10 — 30 ;
黨參10 — 20 ;
白術5 — 15 ;
白花蛇舌草20 — 40 ;
丹參5 — 15 ;
枸杞10 — 20 ;
白芍5 — 15 ;
麥冬5 — 15 ;
龜板10 — 25 ;
鱉甲10 — 25;
陳皮5 — 15 ;
炎甘草5 — 15。
據中藥文獻記載，以上所述的中藥各成份的分析如下
黃苗，拉丁名Leguminosae補氣固表,利尿托毒,益氣補中。黃苗是豆科植物,它是一味常用的中藥。它的主要藥理作用是“益氣固表”，可以“利水”，也可以“托毒生肌”。黨參，別名上黨人參、防風黨參、黃參、防黨參、上黨參、獅頭參、中靈草、黃黨，黨參屬植物，桔梗科，英文名Root of Pilose Asiabell, Pilose Asiabell Root ModerateAsiabell Root Szechwon Tangshen Root,拉丁學名Root of Pilose Asiabell,性味歸經性平，味甘、微酸。歸脾、肺經。具有補中益氣，健脾益肺的功效。主治脾胃虛弱，食少便溏，倦怠乏力，肺虛喘咳，氣短懶言，自汗，血虛萎黃，口渴。用于脾肺虛弱，氣短心悸，食少便溏，虛喘咳嗽，內熱消渴等。《本草從新》記載“補中益氣、和脾胃、除煩渴。中氣微弱，用以調補，甚為平妥。”
黃芪和黨參均屬補氣良藥，但黨參偏重于大補元氣，回陽救逆，常用于虛脫、休克等急癥，效果較好。而黃芪則以補虛為主，常用于體衰日久、言語低弱、脈細無力者。黃芪具而補而不膩的特點，若與黨參，人參等補藥配伍則效果更好。黃芪可單味使用，也可與其它藥物配伍應用。白術，拉丁名RhizomaAtractylodis Macrocephalae,功能主治健脾益氣，燥濕利水，止汗，安胎。用于脾虛食少，腹脹泄瀉，痰飲眩悸，水腫，自汗，胎動不安。據報道，小鼠灌胃白術水煎液可防治四氯化碳所致的肝損傷，減輕肝糖原減少以及肝細胞變性壞死，促進肝細胞增長，使升高的ALT下降。白花蛇舌草(學名Hedyotis diffusa)是菌草科耳草屬的植物。其中成藥味苦、淡，性寒。主要功效是清熱解毒、消痛散結、利尿除濕。尤善治療各種類型炎癥，在體外(相當生藥6g/ml)對急性淋巴細胞型、粒細胞型、單核細胞型以及慢性粒細胞型的腫瘤細胞有較強抑制作用。丹參，別名血生根、赤參、血參、紅根英文名Dan — ShenRoot拉丁文RadixSalviae Miltiorrhizae ;為雙子葉植物唇形科,干燥根及根莖,功能主治祛瘀止痛,活血通經，清心除煩。用于月經不調、經閉痛經、癥瘕積聚、胸腹刺痛、熱痹疼痛、瘡瘍腫痛、肝脾腫大、心絞痛。
枸杞，別名枸杞菜、紅珠仔刺、牛右力、狗牙子，是茄科枸杞屬的多分枝灌木植物，英文名Barbary Wolfberry Fruit ,拉丁文Lycium chinense,具有補腎益精，養肝明目，補血安神，生津止渴，潤肺止咳。治肝腎陰虧，腰膝酸軟，頭暈，目眩，目昏多淚，虛勞咳嗽，消渴，遺精。白茍，白茍藥(學名Paeoniasterniana Fletcher in Journ.)也稱白花茍藥，是毛茛科芍藥屬植物，藥理作用1、對心血管系統的作用白芍具有擴張冠狀動脈，降低血壓作用(d-兒茶精和沒食子酸乙酯有抗血栓和抗血小板聚集作用)，2、護肝作用白芍對四氯化碳、黃曲霉毒素BI、D-半乳糖胺所致肝損傷有明顯保護作用，3、解痙作用白芍對腸管和在位胃運動有抑制作用，能顯著對抗催產素引起的子宮收縮，4、鎮痛作用白芍能抑制小鼠扭體、撕叫、熱板反應，對嗎啡抑制扭體反應有協同作用，并能對抗戊四唑所致驚厥，5、抗菌作用。白芍對肝臟有保護作用，白芍提取物對D-半乳糖胺所致肝損傷和SGPT升高有明顯的對抗作用，能使SGPT降低，并使肝細胞的病變和壞死恢復正常.白芍的乙醇提取物能使黃曲霉素B I引起的大鼠急性肝損傷所表現出來的乳酸脫氫酶及同功酶的總活性升高得以降低.白芍總甙可抑制四氯化碳所致小鼠血漿GPT和乳酸脫氫酶升高，并對肝臟組織噬酸性變性、壞死有一定的對抗作用.有人認為，四氯化碳所致的肝損傷是因細胞膜結構發生過氧化作用而破壞，使血中谷丙轉氨酶和乳酸脫氫酶升高，白芍總甙可能對肝細胞損傷具有保護作用，因此可使轉氨酶降低。麥冬，又名麥門冬、沿階草、書帶草；百合科沿階草屬多年生常綠草本植物；拉丁學名O. japonicus (L. f. ) Ker-Gawl.,性味歸經甘,微苦,微寒。歸心、肺、胃經。功效
I.養陰清熱治療陰虛內熱或熱病病傷津、心煩口渴。2.潤肺止咳治療燥熱傷肺所致的咳嗽、痰稠、氣逆。功能主治養陰生津，潤肺清心。用于肺燥干咳。虛癆咳嗽，津傷口渴，心煩失眠，內熱消渴，腸燥便秘；咽白喉。治肺燥干咳，吐血，咯血，肺痿，肺癰，虛勞煩熱，消渴，熱病津傷，咽干口燥，便秘。龜板為龜科動物chinemys reevesii的腹甲及背甲。功用為滋腎潛陽，益腎健骨，養血補心。主治1.陰虛陽亢，陰虛內熱，虛風內動。2.腎虛骨痿，囟門不合。3.陰血虧虛，驚悸，失眠，健忘。功效對免疫功能的作用，實驗證明龜鹿補腎口服液及丸劑給小鼠口服，可提高其網狀內皮系統的吞噬功能，顯著增加吞噬指數和吞噬系數；亦有使正常及免疫抑制狀態下小鼠的脾臟、胸腺增重的作用，對環磷酰胺引起的末梢白細胞減少有一定的保護作用.文獻報道，龜板有抗腫瘤作用能提高機體抗腫瘤的免疫能力，其提取物對肉瘤S180、艾氏腹水瘤和腹水型肝癌有抑制作用.
鳘甲Carapax Amydae,為鳘科動物鳘Trionyx sinensis Wiegmann的背甲。性味歸經咸，微寒。歸肝、腎經。功能主治滋陰潛陽，軟堅散結，退熱除蒸。用于陰虛發熱，勞熱骨蒸，虛風內動，經閉，癥瘕，久瘧瘧母。有報告指出，鱉原粉末及鱉甲粉末對移植實質性癌有抑制作用，能使癌腫瘤直徑顯著減小，腫瘤重量顯著減輕；但對腹水癌則無顯著作用.亦有報告指出，用以鱉甲為主的復方中藥鱉甲散丸藥的水溶液上清液，給癌細胞定量接種后，觀察其對癌細胞生長的作用情況，結果表明鱉甲散上清液對小鼠淋巴細胞白血病(L1210)、HL-60、和胃癌803細胞生長均有抑制作用。陳皮，為蕓香科植物，異名橘皮《神農本草經》，黃橘皮《雞峰普濟方》，紅皮《湯液本草》，橘子皮《滇南本草》，廣橘皮《得宜本草》。拼音:Chenpi英文Dried TangerinePeel拉丁文Pericarpium Citri Reticulatae性味、歸經辛、苦,溫。歸牌、肺經。陳皮的功效I.用于胸腹脹滿等癥。橘皮辛散通溫，氣味芳香，長于理氣，能入脾肺，故既·能行散肺氣壅遏，又能行氣寬中，用于肺氣擁滯、胸膈痞滿及脾胃氣滯、脘腹脹滿等癥。常與木香、枳殼等配伍應用。2.用于濕阻中焦、脘腹痞脹、便溏泄瀉，以及痰多咳嗽等癥。橘皮苦溫燥濕而能健脾行氣，故常用于濕阻中焦、脘腹脹悶、便溏苔膩等癥，可配伍蒼朮、厚樸同用。又善于燥濕化痰，為治濕痰壅肺、痰多咳嗽的常用要藥，每與半夏、茯苓同用。3.用于脾虛飲食減少、消化不良，以及惡心嘔吐等癥。本品燥濕而能健脾開胃，適用于脾胃虛弱、飲食減少、消化不良、大便泄瀉等癥，常與人參、白朮、茯苓等配合應用。因其既能健脾，又能理氣，故往往用作補氣藥之佐使，可使補而不滯，有防止壅遏作脹作用。此外，橘皮又能和中，可治胃失和降、惡心嘔吐，若胃寒嘔吐，可與生姜同用；胃熱嘔吐，又可配伍竹茹、黃連等藥同用。陳皮的作用具理氣降逆、調中開胃、燥濕化痰之功。主治脾胃氣滯濕阻、胸膈滿悶、脘腹脹痛、不思飲食、嘔吐穢逆、二便不利、肺氣阻滯、咳嗽痰多，亦治乳癰初起。經多年研究，現已知陳皮具有許多藥理作用。炙甘草(RADIX GLYCYRRHIZAE PREPARATA)系豆科植物，炙甘草是用蜜烘制的甘草。功能與主治補脾和胃，益氣復脈。用于脾胃虛弱，倦怠乏力，心動悸，脈結代，可解附子毒。主要功效補陰、補血、陰陽并調。以上諸藥合用，攻補兼施，消痛散結，標本兼顧，共奏滋陰養血、益氣復脈、活血止痛和調節消化系統和人體免疫系統功能，對抵抗腫瘤、保持排毒管道暢通，抑制癌細胞的生長均有作用。中草藥治療惡性腫瘤，足整體治療相辨證施治，也就是整體與局部相結合、既看到機體對病邪的抵御能力，又看到局部病變對機體的影響，在辨病與辨證的基礎上，通過一些針對性強的特殊藥物的配伍組方，恰到好處地進入機體，調節氣血、陰陽、津液的平衡。藥物分子經過物理反應和化學反應進入全身，有的吸附在細胞的表面、腐蝕圍殺癌細胞，這可稱作“包圍戰”;有的藥物組方，通過不同的作用，分割癌細胞，再各個擊破，這可稱作“殲擊戰”；有的通過藥物本身的作用，附以協同作用的藥物，可破壞癌細胞的血液循環，解除和改變戀體局部的血運，控制癌細胞的增殖，這可稱作“策反戰”;有的結合機體狀況，通過藥物來調動、增強、提高機體免疫細胞的功能去吞噬癌細胞，這可稱作“免疫戰”;有的通過藥物的性味，加用局部用藥，用溫度去破壞崩細胞的結構和生成，這可稱作“干擾戰”;有的藥物能調節氣血，能使氣血運行正常，隔離癌細胞，使之排出體外，這可稱作”驅逐戰”;有的能影響癌細胞內酶使其成為“端脂”，使癌細胞染色體、基因壞死，這可稱作“破襲戰”;有的能幫助免疫細胞染色體、基因復原，這可稱作“拉攏戰”;有的能使氣血能量平均分配.饑餓癌細胞，使之恢復為正常細胞，這可稱作“平衡戰”。所以，本發明的中藥制劑遵循了祖國醫學整體現念和辨證施治原則，從分子水平研究探討惡性腫瘤發生發展的規律.并采用活血化瘀、軟堅散結、清熱解毒、扶正培本等具有中醫藥特色的“作戰”手段，做到“用藥如用兵”，才能“知己知彼，百戰百勝”，在征戰癌癥的攻堅戰中，得心應手，建立奇功，使中醫藥顯示出不可低估的巨大作用。本發明的中藥制劑與本申請人的中國專利201110039130. 2申請日2011. 02. 17名稱抑制肝癌的中藥制劑及其制備方法的技術內容相比，藥物增加了幾種黨參、枸杞、麥冬、丹參和陳皮。使得整個中藥具有補中益氣，健脾益肺，養陰生津，潤肺清心，祛瘀止痛， 活血通經，益肝利脾、辛散通溫，氣味芳香，長于理氣，能入脾肺等作用，控制住了肝癌繼續生長，就可以抑制癌細胞向其它器官轉移蔓延。本發明抑制肝癌轉移的的中藥制劑可以加入符合醫藥標準的填充劑或溶液，制成醫學上的固體制劑或液體制劑，例如片劑、膠囊、顆粒、丸劑、口服液或糖漿劑等，以下分別介紹幾種劑型的制備方法
所述的固體制劑制備方法如下
取黨參碾成粉末，備用；將龜板、鱉甲置于銅鍋中，加水淹沒過面，用文火加熱，保持微沸5 — 12小時，傾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出膠汁為度，然后過濾澄清，合并各次所煎膠液，過濾除去沉淀雜質，濃縮收膠，將過濾后的膠汁置銅鍋中用文火加熱濃縮，不斷攪拌，以防焦化，待濃縮至“掛旗”后收膠，將膠傾入凝膠盤內，使之自然冷凝，為加快膠汁凝固，也可加入5%-10%阿膠，取出凝固好的膠塊，用切膠刀切成小片，備用。黃芪、白術、白花蛇舌草、丹參、枸杞、白芍、麥冬、陳皮和炙甘草用體積濃度為50 — 90%的乙醇提取兩次，合并提取液，備用；過濾后濃縮，然后回收乙醇，加入龜板、鱉甲膠汁、并濃縮，得干浸膏，再與上述的黨參粉末合并，混合均勻，加入填充劑，制成膠囊或顆粒劑、片劑，得到產品；或者加入蔗糖或蜂蜜，混合均勻，做成丸劑。以上所述的口服液的制備方法是取黨參、炙甘草，分別加水煮2-4小時，備用；將龜板、鱉甲置于銅鍋中，加水淹沒過面，用文火加熱，保持微沸5 — 12小時，傾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出膠汁為度，然后過濾澄清，合并各次所煎膠液，過濾除去沉淀雜質，再濃縮收膠，將過濾后的膠汁置銅鍋中用文火加熱濃縮，不斷攪拌，以防焦化，待濃縮至“掛旗”后收膠，將膠傾入凝膠盤內，使之自然冷凝，為加快膠汁凝固，也可加入5 %-10 %阿膠，取出凝固好的膠塊，用切膠刀切成小片，備用。黃芪、白術、白花蛇舌草、丹參、枸杞、白芍、麥冬和陳皮用體積濃度為50 - 90%的乙醇提取兩次，合并提取液，備用；過濾后回收乙醇，濃縮，然后，加入龜板、鱉甲膠汁、并濃縮，得干浸膏，再與上述的黨參、炙甘草溶液合并，加入適量食用防腐劑，和加入干浸膏總藥物重量3 — 5倍的純凈水，制成口服液，得到產品。本發明的有益效果是
本發明治療早中期肝癌的中藥制劑攻補兼施，標本兼顧，消痛散結，共奏滋陰養血、益氣復脈和調節人體免疫系統功能，抑制癌細胞的生長均有作用。
具體實施例方式以下
具體實施例方式 實施例一
取黨參10千克碾成粉末，備用；將10千克龜板、10千克鱉甲置于銅鍋中，加水淹沒過面，用文火加熱，保持微沸5 - 12小時，傾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出膠汁為度，然后過濾澄清，合并各次所煎膠液，過濾除去沉淀雜質，濃縮收膠，將過濾后的膠汁置銅鍋中用文火加熱濃縮，不斷攪拌，以防焦化，待濃縮至“掛旗”后收膠，將膠傾入凝膠盤內，使之自然冷凝，為加快膠汁凝固，也可加入5% -10%阿膠，取出凝固好的膠塊，用切膠刀切成小片，備用。黃苗10千克、白術5千克、白花蛇舌草20千克、丹參5千克、枸杞10千克、白芍5千克、麥冬5千克、陳皮5千克和炙甘草5千克用體積濃度為50 - 90%的乙醇提取兩次，合并提取液，備用；過濾后濃縮，然后回收乙醇，加入龜板、鱉甲膠汁、并濃縮，得干浸膏，再與上述的黨參粉末合并，混合均勻，加入填充劑，制成膠囊。 實施例二
取黨參12千克碾成粉末，備用；將13千克龜板、13千克鱉甲置于銅鍋中，加水淹沒過面，用文火加熱，保持微沸5 - 12小時，傾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出膠汁為度，然后過濾澄清，合并各次所煎膠液，過濾除去沉淀雜質，濃縮收膠，將過濾后的膠汁置銅鍋中用文火加熱濃縮，不斷攪拌，以防焦化，待濃縮至“掛旗”后收膠，將膠傾入凝膠盤內，使之自然冷凝，為加快膠汁凝固，也可加入5% -10%阿膠，取出凝固好的膠塊，用切膠刀切成小片，備用。黃芪14千克、白術7千克、白花蛇舌草25千克、丹參7千克、枸杞13千克、白芍7千克、麥冬7千克、陳皮7千克和炙甘草7千克用體積濃度為50 - 90%的乙醇提取兩次，合并提取液，備用；過濾后濃縮，然后回收乙醇，加入龜板、鱉甲膠汁、并濃縮，得干浸膏，再與上述的黨參粉末合并，混合均勻，加入填充劑，制成片劑。實施例三
取黨參15千克碾成粉末，備用；將15千克龜板、15千克鱉甲置于銅鍋中，加水淹沒過面，用文火加熱，保持微沸5 - 12小時，傾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出膠汁為度，然后過濾澄清，合并各次所煎膠液，過濾除去沉淀雜質，濃縮收膠，將過濾后的膠汁置銅鍋中用文火加熱濃縮，不斷攪拌，以防焦化，待濃縮至“掛旗”后收膠，將膠傾入凝膠盤內，使之自然冷凝，為加快膠汁凝固，也可加入5% -10%阿膠，取出凝固好的膠塊，用切膠刀切成小片，備用。黃芪18千克、白術10千克、白花蛇舌草28千克、丹參10千克、枸杞15千克、白芍10千克、麥冬10千克、陳皮10千克和炙甘草10千克用體積濃度為50 - 90%的乙醇提取兩次，合并提取液，備用；過濾后濃縮，然后回收乙醇，加入龜板、鱉甲膠汁、并濃縮，得干浸膏，再與上述的黨參粉末合并，混合均勻，加入填充劑，制成顆粒劑。實施例四
取黨參18千克碾成粉末，備用；將20千克龜板、20千克鱉甲置于銅鍋中，加水淹沒過面，用文火加熱，保持微沸5 - 12小時，傾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出膠汁為度，然后過濾澄清，合并各次所煎膠液，過濾除去沉淀雜質，濃縮收膠，將過濾后的膠汁置銅鍋中用文火加熱濃縮，不斷攪拌，以防焦化，待濃縮至“掛旗”后收膠，將膠傾入凝膠盤內，使之自然冷凝，為加快膠汁凝固，也可加入5% -10%阿膠，取出凝固好的膠塊，用切膠刀切成小片，備用。黃芪25千克、白術12千克、白花蛇舌草30千克、丹參12千克、枸杞18千克、白芍12千克、麥冬12千克、陳皮12千克和炙甘草12千克用體積濃度為50 — 90%的乙醇提取兩次，合并提取液，備用；過濾后濃縮，然后回收乙醇，加入龜板、鱉甲膠汁、并濃縮，得干浸膏，再與上述的黨參粉末合并，混合均勻，加入填充劑，制成丸劑。實施例五
取黨參20千克碾成粉末，備用；將25千克龜板、25千克鱉甲置于銅鍋中，加水淹沒過面，用文火加熱，保持微沸5 - 12小時，傾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出膠汁為度，然后過濾澄清，合并各次所煎膠液，過濾除去沉淀雜質，濃縮收膠，將過濾后的膠汁置銅鍋中用文火加熱濃縮，不斷攪拌，以防焦化，待濃縮至“掛旗”后收膠，將膠傾入凝膠盤內，使之自然冷凝，為加快膠汁凝固，也可加入5% -10%阿膠，取出凝固好的膠塊，用切膠刀切成小片，備用。黃芪30千克、白術15千克、白花蛇舌草40千克、丹參15千克、枸杞20千克、白芍15千克、麥冬15千克、陳皮15千克和炙甘草15千克用體積濃度為50 — 90%的乙醇提取兩次，合并提取液，備用；過濾后濃縮，然后回收乙醇，加入龜板、鱉甲膠汁、并濃縮，得 干浸膏，混合均勻，加入適量食用防腐劑，和加入干浸膏總藥物重量5倍的純凈水，制成口服液，得到產品。本發明中藥制劑抑制肝癌試驗
以下是本發明中藥制劑的應用實例
一、本發明實施例做出的本發明藥物進行的體外抗腫瘤實驗
摘要目的用體外細胞培養法研究本發明藥物提取物對人肝癌細胞株Hele7404生長的抑制情況。結果本發明藥物提取物對人肝癌細胞株Hele7404的生長有抑制作用。藥物濃度低于(O. 5Pg/ml)，對腫瘤細胞的作用不明顯。隨著藥物濃度升高至5. OPg/ml，腫瘤細胞株的生長受到明顯抑制。結論本發明藥物提取物在體外具有抑制腫瘤作用。
材料與方法 I材料
1.I本發明藥物提取物濃縮部分，藥液臨用前用DMSO溶解后無菌過濾備用。I. 2腫瘤細胞株人肝癌細胞株Hele7404由廣西醫科大學藥理教研室提供。I. 3試劑MTT (四甲基噻唑藍)為德國Sigma公司產品，批號:020609 ；FBS (胚胎牛血清)為美國Hyclone公司產品，批號0405 ；RPMI1640和DMEM培養基為美國GIBCO公司產品，批號1120708和0311 ；Trypsin (胰蛋白酶)由天津市灝洋生物制品有限責任公司提供，批號200503 ；DMS0 (二甲基亞砜)由天津匯英化學試劑有限公司提供，批號20030526。I. 4實驗儀器CO2培養箱(ThermO Forma),美國產。倒置顯微鏡(Olympus),日本產。酶標儀(Biocell)，澳地利產。2實驗方法
2.I MTT法參考文獻報道，在96孔培養板(NUNC)中每孔加入200 μ I (含有5000個/ml腫瘤細胞)含10% FBS的RPMI1640培養基的細胞懸液(除NG108-15細胞用含10% FBS的DMEM培養基外)，置37°C 10%C02培養箱中培養24h后，實驗組分別加入最終濃度O. 5 Ug/ml、I. Oug/ ml、5. Oug/ ml的蒲葵提取物的培養液,對照組則加入等濃度等體積溶劑的培養液，每組4孔，重復4次。置37°C，10%C02培養箱培養5天后，棄去上清液，加入200 μ I/孔新鮮配制的含O. 2mg/ml MTT的無血清培養液，37°C繼續培養4h.棄上清液，加入200 μ IDMSO,振蕩混勻后，在酶標儀上以波長為550nm，參比波長為450 nm測定OD值.計算結果·
按下式計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率.
腫瘤細胞生長抑制率％ = (I-實驗組平均OD值/對照平均OD值)X 100%
2.2集落形成法取對數生長期的貼壁細胞(Hela、SGC790UB16)用10%FBS的RPMI1640培養液和NG108 - 15用10%FBS的DMEM培養液配成500個/ml細胞懸液，接種于35mm培養皿(NUNC)中，4個為一組，每個2ml;實驗組加入終濃度為O. 5 ug /ml、I. Oug/ ml >5. Oug/ ml的蒲葵提取物的細胞懸液200ul。對照組加入等濃度等體積溶劑的細胞懸液200ul.置5%0)2的37°〇培養箱中靜置7d;棄去培養液，用瑞氏_姬姆薩染色后計數含50個細胞以上的細胞集落。對懸浮細胞(L1210和P388DJ用10%FBS的RPMI1640 培養液配成1000個/ml細胞懸液，置37°C預溫；取35mm培養皿(NUNC)，4個為一組，實驗組分別加入濃度為O. 5 ug /ml、1.0ug/ ml >5. Oug/ ml的蒲葵提取物,對照組則加入等體積的溶劑；取已融化的5%瓊脂液I份，加入到9份37°C含15%FBS的新鮮RPMI1640培養液中，搖勻加入平皿中，每個1ml，置室溫使其凝固；取預溫的細胞懸液按每9. 4ml加5%瓊脂0.6ml的比例混勻，加到已鋪底層瓊脂的平皿中，每個lml，置37°C、5%C02培養箱中培養7d;在顯微鏡下計數含50個細胞以上的細胞集落。按下列公式計算藥物對細胞集落形成抑制百分率
腫瘤細胞集落形成抑制百分率％ = (I-實驗組細胞集落數/對照組細胞集落數)X100%
2.3生長曲線法將Hele7404細胞接種于含10% FBS的RPMI1640培養基，NG108-15貝U用含10%FBS的DMEM培養基，分別配成IOX IO3個/ml的細胞懸液，然后加入96孔培養板中，每孔200μ1,實驗組加入最終濃度為O. 5 ug /ml、1.0ug/ ml >5. Oug/ ml的提取物，對照組加入等濃度等體積溶劑.每種細胞每濃度設三孔，重復4次，置10%C0237°C溫箱中培養，然后按0d、ld、2d、3d、4d、5d、6d、7d各取樣40μ 1，加入0. 4%臺盼藍液10μ 1，計數活細胞數。每孔計數4次，取均值，再累計3孔均值，根據細胞濃度值的對數值與時間作用繪成圖，即為細胞生長曲線.
2.4統計學處理以SPSS 10. O統計軟件分析，兩組間的均數比較采用t檢驗。3.實驗結果
結果顯示，提取物對人肝癌細胞株Hele7404有抑制作用。
集落形成法觀察不同濃度蒲葵提取物對腫瘤細胞抑制作用。結果見表2。表I不同濃度提取物對腫瘤細胞抑制的影響(％)
提取物濃度(Mg/ ml)
組別---
0.51.05.0
Hele 4040,85±2J334J2±7.04A 64.3
注:與對照組比較Ap〈0. 05，AAP<0. 01,AAAP<0. 005，AAAAP<0. 001
由圖可知，蒲葵提取物作用于腫瘤細胞株P388D1后，通過藥物組與對照組比較發現，濃度為I. OPg/ ml時己能看出藥物對腫瘤細胞有著較明顯的抑制殺傷作用。當藥物濃度為5. 0μδ/ ml時，細胞培養到第3天己表現出對細胞有較強的抑制殺傷作用，到第4天以后細胞大量死亡。4、討論
本實驗通過采用實驗方法，研究提取物在體外抗腫瘤作用，其抑制率隨著藥物濃度增加而相應增高。細胞生長曲線法結果所顯示結果與MTT法和集落形成法的結果相吻合。提示提取物在體外具有抗腫瘤細胞作用。MTT法、集落形成法、生長曲線法和Hoechst 33258熒光染色法是觀察體外抗腫瘤活性的常用方法，尤其MTT法快速簡便，常作為抗腫瘤藥的體外初篩試驗，本發明采用幾種實驗方法的聯合應用增加了實驗結果的可靠性。對惡性腫瘤目前尚無十分理想的治療藥物。近年來，從天然植物中尋找新的抗腫·瘤藥物己成為新藥研究的主要發展
二、探討本發明中藥制劑對肝癌的抑制作用。本發明人實驗發現，用黃芪、黨參、白術、白花蛇舌草、丹參、枸杞、白芍、麥冬、龜板、鱉甲、陳皮和炙甘草制成的制劑可對小鼠活體腹水H22肝癌細胞有較強的抑制作用。I材料與方法
I. I昆明種小鼠，6周齡，21只，雄性BALB / C小鼠，隨機分為3組，每組7只，體重18 22 g,購于廣西醫科大學實驗動物中心。I. 2細胞培養
腹水型H22肝癌細胞株，由廣西中醫學院提供，培養于含10%胎牛血清的RPMI1640 (GIBC0公司)培養液中，置于CO2濃度為5%、相對濕度為95%、溫度為37°C的細胞培養箱中培養。細胞傳代后培養48、96 h的貼壁細胞為對數生長期細胞，取傳代后48 h細胞。I. 3藥物，(A組)上述實施例5的藥物。(B組)用黃芪黨參水提取液，黃芪黨參各100克加水1000克煮2小時；(C組)I %乙醇，
I. 4試驗方法，記錄接種前每只小鼠體重。接種對數生長期H22細胞于小鼠右側腹股溝皮下，接種量約6. 0X106 /只。自接種第6日起，(C組)對照組5%葡萄糖生理鹽水溶液O. 2 O. 5 mL瘤內注射D6，8，10，12。實施例5的藥物(A組)I g / mL O. 2 O. 5 mL瘤內注射D6，8，10，12 ;，(B組)用黃芪黨參水提取液I g / mL O. 2 O. 5 mL瘤內注射D6，8，10，12 ;自接種第4日起每目測量小鼠右側腹股溝皮下移植瘤大小。瘤體體積V/4XaXb2 (a為長徑，b為短徑)。接種第12日，小鼠稱重后脫頸髓處死荷瘤小鼠，剝離瘤體后稱取瘤重。抑瘤率=(對照組瘤重一給藥組瘤重)/對照組瘤重X 100% :協同系數=對照組瘤重X聯合用藥組瘤重/ (單藥組①瘤重X單藥組②瘤重)；當抑瘤率>40%，P〈0. 05判定有抗腫瘤作用；當協同系數〈I時為有協同性。I. 5統計學方法
所有數據均用(Xb)表示，采用Microsoft excel軟件對數據做統計學處理,采用方差分析。2結果(見表I)
表I本發明中藥制劑對H22移植瘤的影響(C組，空白)
權利要求
1.一種抑制肝癌轉移的的中藥制劑，其特征在于其主要有效成分是由以下重量份數的中藥原料制成的 黃芪10 — 30 ; 黨參10 — 20 ; 白術5 — 15 ; 白花蛇舌草20 — 40 ; 丹參5 — 15 ; 枸杞10 — 20 ; 白芍5 — 15 ; 麥冬5—15; 龜板10 — 25 ; 鱉甲10 — 25 ; 陳皮5 — 15 ; 炎甘草5 — 15。
2.如權利要求I所述的抑制肝癌轉移的中藥制劑的制備方法，其特征在于取黨參碾成粉末，備用；將龜板、鱉甲置于銅鍋中，加水淹沒過面，用文火加熱，保持微沸5 — 12小時，傾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出膠汁為度，然后過濾澄清，合并各次所煎膠液，過濾除去沉淀雜質，濃縮收膠，將過濾后的膠汁置銅鍋中用文火加熱濃縮，不斷攪拌，以防焦化，待濃縮至“掛旗”后收膠，將膠傾入凝膠盤內，使之自然冷凝，為加快膠汁凝固，也可加入5%-10%阿膠，取出凝固好的膠塊，用切膠刀切成小片，備用；黃苗、白術、白花蛇舌草、丹參、枸杞、白芍、麥冬、陳皮和炙甘草用體積濃度為50 - 90%的乙醇提取兩次，合并提取液，備用；過濾后濃縮，然后回收乙醇，加入龜板、鱉甲膠汁、并濃縮，得干浸膏，再與上述的黨參粉末合并，混合均勻，加入填充劑，制成膠囊或顆粒劑、片劑，得到產品；或者加入蔗糖或蜂蜜，混合均勻，做成丸劑。
3.權利要求I所述的抑制肝癌轉移的中藥制劑在制備治療肝癌的藥物方面的應用。
全文摘要
本發明公開了一種抑制肝癌轉移的中藥制劑及其制備方法，其主要原料包括黃芪、黨參、白術、白花蛇舌草、丹參、枸杞、白芍、麥冬、龜板、鱉甲、陳皮和炙甘草 等，制備方法是取黨參碾成粉末，再將各組分用水或乙醇提取，濃縮，合并，加入填充劑，制成固體制劑或液體制劑產品，本中藥制劑攻補兼施，標本兼顧，消痛散結，共奏滋陰養血、益氣復脈和調節人體免疫系統功能，抑制癌細胞的生長均有作用。
文檔編號A61K35/56GK102940773SQ20121051113
公開日2013年2月27日 申請日期2012年12月4日 優先權日2012年12月4日
發明者鄧鑫, 梁健 申請人:鄧鑫