專利名稱：芍藥苷的醫藥新用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及芍藥苷在制備用于促進手術后腸功能恢復藥物及預防腸粘連藥物中的應用。
背景技術：
腹部手術是外科最常見的手術，一般手術后病人的腸功能比較虛弱，手術后腸功能的恢復對病人的康復，包括疾病的痊愈，減少腸粘連等并發癥，均具有重要意義。
恢復手術后的腸功能，主要是恢復一定強度的腸蠕動，但由于手術后不能進食，因此胃的過早蠕動，可能會因胃內無食物而引起上腹不適。文獻報道，腹部手術后發生不同程度腸粘連的比例高達80-90％[Menies D，Ellis H.Intestinal obstruction from adhesion how bigis the problem.Ann R Coll Surg Engl，1990，7260]，手術后滲出的纖維蛋白，10小時起開始形成纖維粘連，而腸粘連的發生，與手術后的腹腔滲出及腸蠕動過弱有關，減少滲出或改善蠕動，將可減少粘連的發生。
目前，胃腸動力藥物，對胃腸特別是胃的作用過強，不適于手術后胃腸功能的恢復。
可防治粘連藥物有非甾體類抗炎藥和甾體類抗炎藥，甾體類抗炎藥如地塞米松能減輕炎性反應，減少炎性物質及纖維蛋白滲出，但同時地塞米松也容易引起消化系統并發癥和傷口愈合遲緩等副作用；甾體類抗炎藥物在減少滲出，抑制腸粘連發生的同時，嚴重影響腹腔內手術部位及腹壁切口的愈合；非甾體抗炎藥可減少滲出，但現在臨床使用劑量常常引起胃腸道不良反應；促進纖維蛋白溶解吸收的藥物有東菱克栓酶等，應用時有出血傾向副作用。促進腸蠕動藥物能促進腸蠕動，減少粘連發生，但不能減輕炎性反應，減少炎性物質及纖維蛋白滲出。
因此尋找一種既有利于術后腸功能的恢復、防止腸粘連又能克服現有藥物的治療缺陷成為當下醫學研究的重要課題之一。
芍藥苷是從赤芍、白芍、牡丹皮中提取得到的，成無定形粉末，具吸濕性，有鎮靜、解痙、抗炎、抗應激性潰瘍病、擴張冠脈血管、對抗急性心肌缺血以及抑制血小板聚集等多方面的作用，但關于芍藥苷具有預防和治療術后恢復腸功能及預防腸粘連的作用未見報道；鑒于此，本發明人通過大量的實驗研究，提供了芍藥苷在制備預防或治療術后腸功能恢復及預防腸粘連的藥物中的應用。

發明內容
本發明提供了芍藥苷在制備治療或預防術后腸功能恢復的藥物中的應用。
本發明提供了芍藥苷在預防術后腸粘連的藥物中的應用。
本發明提供了由芍藥苷和藥學上可接受的的載體或輔料組成的用于預防或治療術后腸功能恢復及預防腸粘連的藥物組合物。
本發明提供的芍藥苷在用于術后腸功能恢復及預防腸粘連時，其給藥方式為為靜脈給藥(包括靜脈注射和靜脈滴注)。
本發明提供的芍藥苷在用于術后腸功能恢復及預防腸粘連時，其給藥劑量范圍為50-5000mg，優選為100-2500mg。
我們藥理研究發現，芍藥苷靜脈給藥對急性炎癥滲出具有明顯的抑制作用，對胃排空無明顯影響，可明顯加快腸蠕動減慢模型動物的腸蠕動。手術后前期(手術后1-3天)靜脈給予芍藥苷，可明顯縮短手術后腸鳴音恢復時間，排氣和排便時間提前，表明芍藥苷能減輕炎性反應，減少炎性滲出，促進腸蠕動恢復。本發明芍藥苷具有療效好，副作用低等優點。
本發明通過下列試驗來證實芍藥苷具有預防或治療術后腸功能恢復及預防腸粘連的作用。
具體實施例方式
制備例1制備芍藥苷取赤芍10kg，70％乙醇分別回流提取3次，每次1.5h，每次30L，合并提取液，過濾，減壓回收至干，殘渣以適量水加熱溶解，抽濾，濾液加入一預先裝填好的大孔吸附樹脂柱上(干膏和樹脂的比例為15∶20)，慢慢滴加完后，先用水洗脫至還原糖的反應呈陰性(Molish反應檢測)，改用20％濃度的乙醇洗脫，合并洗脫液，減壓回收至干，得赤芍總苷530g，加入一預先裝填好的硅膠柱，用氯仿-甲醇(1∶10)洗脫，合并洗脫液，減壓回收至干，其中芍藥苷含量為91.4％。
制備例2制備芍藥苷取丹皮藥材(產地銅陵)20kg，粉碎成粗粉，放入提取罐中；加200L的水沸提2次，每次2h，過濾后，減壓濃縮至約30L；上大孔吸附樹脂柱，用水充分洗脫至流出液為澄清且無還原糖反應后，再用40％乙醇洗脫；收集洗脫液，減壓濃縮，氯仿萃取2次，回收氯仿，水溶液加入95％乙醇，使醇濃度為80％。放冷靜置0.5h，濾去沉淀物，將濾液減壓回收至干，即得丹皮總苷原料1kg。有效部位丹皮總苷中總苷含量為66％，主要成分芍藥苷含量為42％。將丹皮總苷原料溶于無水乙醇，上氧化鋁柱層析，用無水乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇、干燥，得精制丹皮總苷，再加入一預先裝填好的硅膠柱，用氯仿-甲醇(1∶10)洗脫，合并洗脫液，減壓回收至干，芍藥苷含量為95.5％。
制備例 制備芍藥苷凍干粉針在潔凈條件下，取制備例所得芍藥苷，溶于注射用水，加入低分子右旋糖苷，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，每只，按凍干粉針工藝凍干，制成每支含的凍干粉針。
制備例 制備芍藥苷注射液在潔凈條件下，取制備例所得芍藥苷，溶于注射用水，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按注射液制備工藝，制成一支，含芍藥苷的注射液。
試驗例1 芍藥苷對正常小鼠小腸推動的影響1.1實驗材料芍藥苷按照制備例2制備；嗎丁啉(10mg/粒，西安楊森制藥有限公司，批號030214002)；清潔級昆明種小鼠，體重18g～22g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
1.2實驗方法與結果取小鼠80只，雌雄各半，禁食12小時，隨機8組，分別為芍藥苷5mg/kg組，芍藥苷10mg/kg組，芍藥苷20mg/kg組，芍藥苷250mg/kg組，芍藥苷500mg/kg組，芍藥苷1000mg/kg組，嗎丁啉組，空白對照組。芍藥苷各靜脈組給藥后30分鐘，分別灌服含5％活性炭混懸液，嗎丁啉組灌服含1mg/ml嗎丁啉的5％活性炭的混懸液，空白對照組同時灌服含5％活性炭混懸液。20分鐘處死小鼠，剖腹取出腸管，測量幽門至活性炭前沿的距離作為“活性炭腸內推進距離”，測量幽門至盲腸的距離作為全腸長度，按下式計算活性炭推進率＝活性炭腸內推進距離(cm)/全腸長度(cm)·100％，各組活性炭推進率采用組間t檢驗，進行統計學處理。
表1結果表明，芍藥苷10mg/kg靜脈注射給藥組明顯加強正常小鼠小腸的活性炭推進率(與空白對照組比較，P＜0.05)，芍藥苷20mg/kg、芍藥苷250mg/kg、芍藥苷500mg/kg、芍藥苷1000mg/kg靜脈注射給藥，明顯加強正常小鼠小腸的活性炭推進率(與空白對照組比較，P＜0.01)。
表1 芍藥苷對正常小鼠小腸推進的影響

ΔΔP＜0.01；ΔP＜0.05，與空白對照組比較試驗例2 芍藥苷對蠕動減慢小鼠的小腸推動的影響2.1實驗材料芍藥苷按照制備例2制備嗎丁啉(10mg/粒，西安楊森制藥有限公司，批號030214002)消旋山莨菪堿片(青島黃海制藥廠，規格10mg/粒，批號030210)清潔級昆明種小鼠，體重18g～22g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
2.2實驗方法與結果取小鼠80只，雌雄各半，連續灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪堿2天，體積0.4ml/天，禁食16小時，灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪堿，體積0.4ml/只，隨機分為8組，分別為芍藥苷5mg/kg組，芍藥苷10mg/kg組，芍藥苷20mg/kg組，芍藥苷250mg/kg，芍藥苷500mg/kg組，芍藥苷1000mg/kg組，嗎丁啉組，空白對照組。芍藥苷各靜脈組給藥后30分鐘，分別灌服含5％活性炭混懸液，嗎丁啉組灌服含1mg/ml嗎丁啉的5％活性炭混懸液，空白對照組同時灌服含5％活性炭混懸液。30分鐘處死小鼠，剖腹取出腸管，測量幽門至活性炭前沿的距離作為“活性炭腸內推進距離”，測量幽門至盲腸的距離作為全腸長度，按下式計算活性炭推進率＝活性炭腸內推進距離(cm)/全腸長度(cm)·100％，各組活性炭推進率采用組間t檢驗，進行統計學處理。
表2結果表明，芍藥苷10mg/kg靜脈注射給藥，明顯加強蠕動減慢小鼠的小腸活性炭推進率(與空白對照組比較，P＜0.05)，芍藥苷20mg/kg、芍藥苷250mg/kg、芍藥苷500mg/kg、芍藥苷1000mg/kg靜脈注射給藥，明顯加強蠕動減慢小鼠的小腸活性炭推進率(與空白對照組比較，P＜0.01)。
表2 芍藥苷對蠕動減慢小鼠小腸推進的影響

ΔΔP＜0.01；ΔP＜0.05，與空白對照組比較試驗例3 芍藥苷對小鼠毛細血管通透性的影響3.1實驗材料芍藥苷按照制備例2制備伊文思藍(進口分裝)雙氯芬酸鈉凍干粉針(山東綠葉天然藥物有限公司提供，批號030501)清潔級昆明種小鼠，體重18g～22g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
3.2實驗方法與結果取小鼠60只，雄性，體重19～21g，隨機分為6組，每組10只，芍藥苷5mg/kg組，10mg/kg組，50mg/kg組，500mg/kg組，雙氯芬酸鈉5mg/kg組，NS組，給藥體積0.20ml/20g，給藥后立即給小鼠靜脈注射0.5％伊文思藍溶液，給藥體積0.20ml/20g。隨即腹腔注射1.0％的醋酸0.20ml，20分鐘后處死小鼠，吸取6.0ml生理鹽水，注入腹腔，輕揉腹部，吸取腹腔液，離心(3000rpm，10min)，于590nm波長處測定吸收值，進行組間t檢驗。
表3試驗結果表明芍藥苷10mg/kg靜脈注射給藥明顯降低小鼠毛細血管通透性(與NS組比較，P＜0.05)，芍藥苷50mg/kg，芍藥苷500mg/kg靜脈注射給藥明顯降低小鼠毛細血管通透性(與NS組比較，P＜0.01)。
表3 芍藥苷對小鼠毛細血管通透性的影響

Δp＜0.05；ΔΔp＜0.01，與NS組比較試驗例4 芍藥苷對棉球致大鼠肉芽腫形成的影響4.1實驗材料芍藥苷按照制備例2制備地塞米松磷酸鈉注射液(規格5mg/支，天津藥業漣水有限公司，批號0105305)SD大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，動物合格證魯動質字200106005號4.2實驗方法與結果大鼠隨機分為5組，即NS組，地塞米松組，芍藥苷10mg/kg組、芍藥苷50mg/kg組、芍藥苷500mg/kg組，每組10只，乙醚麻醉，肩胛部皮膚碘酊消毒，酒精脫碘，肩胛間切一1cm的切口，止血鉗鈍性分離兩側皮膚與皮下組織，切口兩側皮下各植入消毒棉球一個(重19.8～20.2mg)，縫合切口。手術當日開始給藥。地塞米松組隔日im注射給藥一次，給藥劑量10mg/kg，給藥體積0.4ml/100g；NS組及芍藥苷給藥組，每次給藥體積0.4ml/100g，每日給藥1次，iv。一周后脫臼處死，取出棉球，剔除脂肪組織，70℃烘24小時，稱重，減去棉球原重，即為肉芽腫重量，進行組間t檢驗。
表4結果表明芍藥苷10mg/kg、芍藥苷50mg/kg、芍藥苷500mg/kg靜脈注射給藥明顯抑制大鼠棉球肉芽腫形成(與NS組比較，P＜0.01)。
表4 芍藥苷對大鼠棉球肉芽腫形成的影響

ΔΔP＜0.01，與NS組比較。
試驗例5 芍藥苷對蠕動減慢小鼠的胃排空的影響5.1實驗材料芍藥苷按照制備例2制備嗎丁啉(10mg/粒，西安楊森制藥有限公司，批號030214002)消旋山莨菪堿片(青島黃海制藥廠，規格10mg/粒，批號030210)清潔級昆明種小鼠，體重18g～22g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
5.2方法與結果取小鼠50，雌雄各半，連續灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪堿2天，體積0.4ml/天，禁食16小時，灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪堿，隨機分為5組，每組10只，陰性對照組灌服蒸餾水，陽性對照組灌服1mg/ml嗎丁啉混懸液，芍藥苷高、中、低劑量組靜脈給予芍藥苷。給藥后20分鐘，灌服0.2ml0.1％甲基橙溶液，給甲基橙后20分鐘處死小鼠，剖腹，取胃，將胃置于10ml西林瓶中，加入8ml 0.1％的碳酸氫鈉溶液用小剪刀剪開胃，將胃內容物充分洗于碳酸氫鈉溶液中，搖勻，取上清液，置入試管中，2000rpm離心10分鐘，取上清液于420nm處測定吸收值，0.1％的碳酸氫鈉溶液調零點，并以0.1％甲基橙溶液0.2ml加入8ml 0.1％的碳酸氫鈉溶液搖勻后測吸收度作為基數甲基橙光密度，按下式計算甲基橙胃殘留率甲基橙胃殘留率(％)＝胃內甲基橙光密度/基數甲基橙光密度*100％。各組甲基橙胃殘留率采用組間t檢驗，進行統計學處理。
結果顯示，嗎丁啉組可顯著促進小鼠胃排空(P＜0.01)，芍藥苷各劑量組對蠕動減慢小鼠胃排空均無明顯影響(P＞0.05)，即芍藥苷對蠕動減慢小鼠胃排空無促進或抑制作用。
表5 芍藥苷對蠕動減慢小鼠胃排空的影響

注與空白對照組比較，**P＜0.01
試驗例6 芍藥苷對大鼠腸粘連的影響6.1實驗材料芍藥苷按照制備例2制備地塞米松磷酸鈉注射液(規格5mg/支，天津藥業漣水有限公司，批號0105305)SD大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，動物合格證魯動質字200106005號6.2實驗方法與結果大鼠40只，禁食16h，以10％水合氯醛腹腔內麻醉。麻醉體積0.35ml/100g，麻醉后將大鼠仰臥固定于手術板上，腹部脫毛，消毒皮膚，鋪無菌巾，取下腹部正中長約2cm切口，提出盲腸，置于干紗布上約5分鐘，使漿膜干燥，以解剖刀片輕刮整個盲腸漿膜10遍，造成輕度滲血，以止血鉗用同樣力度夾小腸兩下，再滴入無水酒精于創面上。分兩層以1號絲線關腹，隨機分組即NS組，地塞米松組，芍藥苷10mg/kg組，芍藥苷50mg/kg組，隨后立即給藥，分籠飼養。每天給藥一次，給藥體積0.4ml/100g，模型組給予同體積的NS，陽性對照組給予地塞米松，隔天給藥，劑量10mg/kg，給藥體積同給藥組。術后第7d處死，腹部取“n”形切口開腹，分別進行粘連程度分級評分。觀察指標粘連程度分級判斷標準參考Nair制定的5級分類法，確定分級標準，見表6，試驗結果進行組間秩和檢驗。
表7結果表明芍藥苷10mg/kg靜脈注射給藥，明顯抑制大鼠腸粘連(與NS組比較，P＜0.05)，芍藥苷50mg/kg靜脈注射給藥明顯抑制大鼠腸粘連(與NS組比較，P＜0.01)。
表6 腸粘連程度分級評定標準

表7 芍藥苷對大鼠腸粘連的影響

Δp＜0.05；ΔΔp＜0.01，與NS組比較
權利要求
1.芍藥苷在制備用于促進手術后腸功能恢復的藥物中的應用。
2.芍藥苷在制備預防術后腸功能恢復的藥物中的應用。
3.由芍藥苷和藥學上可接受載體組成的藥物組合物。
全文摘要
本發明提供了芍藥苷在制備用于促進手術后腸功能恢復藥物及預防腸粘連藥物中的應用。
文檔編號A61P1/00GK1810254SQ200510042410
公開日2006年8月2日 申請日期2005年1月26日 優先權日2005年1月26日
發明者蔣王林, 高玉白, 田京偉, 傅風華 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司