專利名稱：聚明膠肽注射液的制備方法
技術領域：
本發明涉及聚明膠肽注射液制備方法，具體涉及一種以牛骨或豬骨明膠生產聚明 膠肽注射液的處方及制備工藝。
背景技術：
聚明膠肽注射液在臨床上廣泛用于各種原因引起的失血性休克、失體液性休克等 癥，具有迅速補充血容量、維持血壓的作用，已替代血漿。目前，該產品存在不同的制備方 法，如公開號為CN1387912A的“聚明膠肽注射液的制備工藝”發明專利申請，該申請公開 了以下技術方法1、溶膠用注射用熱水溶解牛骨、豬骨或其他明膠；2、熱降解調牛骨、豬 骨或其他明膠水溶液PH值在5. (Γ6. 0之間，升溫至11(T125°C，維持這一溫度，測量相對粘 度，至相對粘度達到2. (Γ2. 5時，停止加熱，快速冷卻至3(T37°C ； 3、交聯降解液調pH至
6.5 7. 5，維持溫度25 35°C，加入明膠蛋白含量為0. 7 1. 2%的交聯劑，攪拌交聯廣3小時；
4、加入電解質調pH值7.Γ7. 6，加入氯化鈉、氯化鈣和氯化鉀電解質，使電解質完全溶解；
5、吸附澄清加入活化后的0.廣1%硅藻土，邊加入邊攪拌，升溫至115°C并保溫，密封反應 釜，降溫冷卻至35°C，靜置；6、將上述靜置后的液體用無菌虹吸轉到無菌容器中，加入活化 后的0. 19Tl%硅藻土與活性炭，檢測并調節ρΗ7. (Γ7. 6，攪拌吸附，然后經4級過濾，分裝；
7、滅菌；8、燈檢包裝。該制備方法存在工藝參數不確切，可控性差，產品質量不穩定，存在一 定的安全隱患，主要缺點在于1、熱降解程度差。當降解程度以相對密度控制為2. (Γ2. 5， 降解產物的重均分子量超過20000道爾頓，不適合環己烷二異氰酸酯交聯劑的反應要求。 2、交聯工序可操作性差。三種交聯劑(琥珀酸酐、乙二醛或環己烷二異氰酸酯)性質各異，反 應條件各不相同。環己烷二異氰酸酯不溶于水，必須以適當的溶劑溶解后方能加入，故上述 交聯工序不能適用以環己烷二異氰酸酯為交聯劑的交聯反應。3、交聯度低。由于降解產物 的分子量在20000以上時肽鏈上氨基或酰胺的活性低，增加了交聯難度，導致交聯度低，且 交聯產物為鏈狀分子，重均分子量大于40000道爾頓(見圖1)。4、由于產品主要為鏈狀分 子，臨床補充血容量、維持血壓的作用較差，難以保證療效和安全性。

發明內容
本發明的目的在于提供一種以牛骨或豬骨明膠生產聚明膠肽注射液及其制備方 法。本發明聚明膠肽注射液制備工藝技術方案為 一種聚明膠肽注射液制備方法，該方法包括以下步驟 一種聚明膠肽注射液制備方法，該方法包括以下步驟
a、明膠的熱降解將牛骨或豬骨明膠用4(T9(TC注射用水溶解，調節明膠溶液的pH值 為4. 5 6. 0，升溫至116 131°C，至相對粘度達到1. 30 1· 85 (優選相對粘度1. 5 1. 7)時， 停止加熱，并冷卻至2(T40°C得到降解液；
b、交聯調節降解液的pH值為8.(Γ9. 0，在25、0°C溫度條件下加入交聯劑濃度為Γ15% (ν/ν)的環己烷二異氰酸酯的丙酮溶液或6-亞己基二異氰酸酯的丙酮溶液，不斷攪 拌，交聯1.5 2. 5小時；
c、蒸餾將步驟b的交聯產物加熱升溫至45飛5°C，減壓蒸餾45 180分鐘，將丙酮蒸
出；
d、電解質的調節向步驟c蒸餾后剩下的溶液中加注射用水，加入氯化鉀、氯化鈉和氯 化鈣，溶解后，加鹽酸溶液調PH值至6. 5^7. 5 ；
e、吸附、過濾；
f、灌封、滅菌、燈檢、包裝；
上述明膠、交聯劑、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和注射用水的用量比為3. 2 k g 0. 25-0. 50L 3. 6-3. 8kg 0. 09 — 0. 12kg 0. 05 — 0. 06kg 490 — 500L (其中的用量單位
kg和L僅為明確其比例關系而不限制其具體用量，也就是說同比例放大或縮小都應該在本 發明范圍內);其中明膠以含N量計，交聯劑以環己烷二異氰酸酯或6-亞己基二異氰酸酯的量計。上述步驟a中注射用水用量為注射用水總體積量的359Γ45%。上述步驟c中，減壓蒸餾的真空度為-0. 08Mpa。上述步驟d中，加入的注射用水量為注射用水總體積量的359Γ45% ；步驟e中，吸 附是指加入經活化處理的0. Γ0. 5%硅藻土，邊加入邊攪拌，升溫至115 125°C，保溫45 90分鐘；迅速冷卻至6(T80°C，放置至少8小時，棄去沉淀泥漿，將溶液轉移至另一容器中， 加入經活化處理的0. Γ0. 5%硅藻土和0. Γ0. 5%活性炭，加入剩余量的注射用水，調PH值 至6. 5 7. 5，攪拌吸附1. 5 2. 5小時；過濾是指依次用10 μ m、0. 45 μ m和0. 22 μ m的濾 膜過濾。上述步驟f中，滅菌工序為采用115°C滅菌30分鐘。上述方法生產包裝的聚明膠肽注射液的規格可以是250ml:1.6g (以含氮量計)、 500ml: 3. 2g (以含氮量計)。本發明有如下特點
1、熱降解條件易于控制。分子量越大，溶液的相對粘度越大，熱降解程度可用相對粘度 來控制。如果溶液的相對粘度大于2. 0，降解產物的重均分子量超過20000道爾頓，這不僅 將增加交聯難度，而且交聯產物的重均分子量超過40000道爾頓，將導致產品不合格。申請 人發現，溶液的相對粘度在1. 3(Tl. 85范圍內時，降解產物的重均分子量在500(Γ18500道 爾頓之間，符合環己烷二異氰酸酯(或6-亞己基二異氰酸酯)交聯劑的最佳反應要求，有利 于下一步的交聯反應，以確保所得交聯反應產物為球狀分子且分子量符合要求。2、交聯反應條件能準確控制，交聯度高。將交聯劑配制成59Γ15%環己烷二異氰酸 酯(或6-亞己基二異氰酸酯)丙酮溶液，有利于提高交聯劑的穩定性、有利于交聯劑的分散 和交聯反應完全。交聯劑環己烷二異氰酸酯和6-亞己基二異氰酸酯均不溶于水，且性質均 不穩定，容易與包含有活潑氫原子的化合物如醇、酸、胺、水、堿等發生反應。申請人發現在 環己烷二異氰酸酯或6-亞己基二異氰酸酯加入丙酮，可起到封閉作用以提高其穩定性；且 降低粘度，增加分散性，同時充當油性基和水性基的媒介，有利于交聯劑的分散和交聯反 應完全，交聯度高。申請人:還發現本發明在弱堿性溶液中有利于交聯反應的發生，在酸性溶液卻很慢。反應中當堿性氨基轉化為弱堿性脲基，且羧基形成鹽時，溶液的PH值將變小。本發 明交聯反應的PH值控制在8. (Γ9. 0時交聯效果較佳。3、蒸餾條件能準確控制，溶劑回收完全。丙酮的沸點低、易于回收，采用加熱減壓 蒸餾，可保證產品中無有機溶劑殘留。4、能準確控制產品的鉀、鈉、鈣離子濃度，使之與血電解質相等。5、產品質量易于控制，合格率高，穩定性好，無毒副作用，用藥安全。能夠延長在血 液中存留時間，增加交替滲透壓，從而起到補充血容量、維持血壓的治療作用。


圖1為現有技術制得的聚明膠肽分子形狀照片； 圖2、為本發明制得的聚明膠肽分子形狀照片。圖中聚明膠肽分子形狀系采用專利技術“一種物體外輪廓非線性多級放大光學成 像技術原理、裝置和攝像方法”(申請號/專利號200910060951)拍攝。
具體實施例方式一、聚明膠肽注射液的處方
明膠(以含N量計)3. 2kg環己烷二異氰酸酯0. 34L氫氧化鈉0. 36kg氯化鈉3. 71kg氯化鉀0. Ilkg氯化鈣55. 5g鹽酸適量注射用水適量500L(pH 值 6· 5 7· 5)
二、按處方組成和技術方案要求生產聚明膠肽注射液
1、溶膠取牛骨或豬骨明膠按處方量投入注射用水的溫度為42°c。2、明膠的熱降解用鹽酸或氫氧化鈉溶液調節明膠溶液的PH值在4. 5 6. 0范圍 內(pH值優選5. 5 5. 8)，升溫至116 131 °C (優選12(Tl25°C )，保持溫度2 3小時，至溶 液的相對粘度達到1. 30 1. 85 (25°C測定)范圍內時(優選相對粘度1. 5 1. 7)，立即停止 加熱，迅速使溶液冷卻至25、0°C。3、肽鏈的交聯用NaOH溶液調節降解液的pH值至8. 0 9. 0 (優選pH值8. 5)，維 持溶液溫度25、0°C，緩慢加入4% 15% (ν/ν)環己烷二異氰酸酯丙酮(或6-亞己基二異氰 酸酯)溶液3. 4L (優選10%環己烷二異氰酸酯丙酮溶液)，并不斷攪拌1. 5^2. 5小時。4、蒸餾加熱升溫至45飛5°C，減壓蒸餾45 180分鐘，將丙酮蒸出。5、電解質的調節向蒸餾后剩下的溶液中加注射用水至總量的709Γ90%，混勻，按 處方量加入氯化鉀、氯化鈉和氯化鈣，攪拌使溶解后，加鹽酸溶液調PH值至6. 5^7. 5。6、吸附、過濾加入經活化處理過的0.廣0.5%硅藻土，邊加入邊攪拌，升溫至 115 125°C，保溫45 90分鐘，測定溶液的相對粘度應在1. 85 2. 20(25°C測定)范圍內。 迅速冷卻，放置至少8小時，棄去沉淀泥漿，將上清液轉移至另一容器中，加入經活化處理 過的0. Γ0. 5%硅藻土和0. Γ0. 5%活性炭，加入注射用水至處方總量，調pH值至6. 5 7. 5，攪拌吸附1. 5 2. 5小時，依次用10 μπι,Ο. 45 μ m和0. 22 μ m的濾膜過濾，灌封。7、滅菌115 °C滅菌30分鐘。8、燈檢、包裝。依上述工藝生產包裝的聚明膠肽注射液的規格有250ml:1.6g (以含氮量計)、 500ml: 3. 2 g (以含氮量計)。依上述工藝生產的聚明膠肽注射液，按聚明膠肽注射液國家藥品標準檢驗，結果 均符合國家標準。且制得的聚明膠肽分子呈球狀分子(見圖2)。實施例1
1、取豬骨明膠200g，加溫度為40°C的注射用水1750ml，攪拌使溶解。用鹽酸或氫氧化 鈉溶液調節明膠溶液的PH值至4. 5，升溫至116°C，保持溫度3小時，至溶液的相對粘度達 到1.85，使水解所得肽鏈的重均分子量為16000-18500，立即停止加熱，迅速(如采用常規 的冷循環冷卻)使溶液冷卻至25 °C。2、用NaOH溶液調節上述降解液的pH值至8. 0，維持溶液溫度25°C，緩慢(以28ml/ 小時的速度)加入環己烷二異氰酸酯丙酮溶液(由3. 4ml環己烷二異氰酸酯溶于68ml丙酮 中得到環己烷二異氰酸酯丙酮溶液)，不斷攪拌2. 5小時，每隔20分鐘，測量溶液的pH值， 并用NaOH溶液調節以保持溶液的pH值為8. 0。3、將上述溶液在真空度-0.08Mpa、溫度50°C條件下，減壓蒸餾180分鐘，至不再有 丙酮被蒸出。4、向蒸餾后剩下的溶液中加注射用水2250ml，混勻，加入氯化鉀1. lg、氯化鈉 37. Ig和氯化鈣555mg，攪拌使溶解后，加鹽酸溶液調pH值至6. 5。6、加入經活化處理過的0. 1%硅藻土，邊加入邊攪拌，升溫至115°C，保溫90分鐘， 測定溶液的相對粘度為1.85，所得聚明膠肽的重均分子量為29006，其形狀為球狀分子，見 圖2。迅速冷卻，放置8小時，棄去沉淀泥漿，將上清液轉移至另一容器中，加入經活化處理 過的0. 5%硅藻土和0. 1%活性炭，加入注射用水1000ml，調pH值至6. 8左右，攪拌吸附1. 5 小時，依次用10 μ m、0. 45 μ m和0. 22 μ m的濾膜過濾，灌封。7、滅菌115 °C滅菌30分鐘。8、燈檢、包裝。分裝規格為500ml 3. 2g (以含氮量計)。實施例2
1、取牛骨明膠200g，加溫度為65°C的注射用水1900ml，攪拌使溶解。用鹽酸或氫氧化 鈉溶液調節明膠溶液的PH值至5. 5，升溫至121°C，保持溫度2. 5小時，至溶液的相對粘度 達到1.60，使水解所得肽鏈的重均分子量為10000-15500，立即停止加熱，迅速使溶液冷卻 至 35 0C ο2、用NaOH溶液調節上述降解液的pH值至8. 5，維持溶液溫度35°C，緩慢加入環己 烷二異氰酸酯丙酮溶液(由3. 4ml環己烷二異氰酸酯溶于34ml丙酮中得到)，不斷攪拌2小 時，每隔20分鐘，測量溶液的pH值，并用NaOH溶液調節以保持溶液的pH值為8. 5。3、將上述溶液在真空度-0. 08Mpa、溫度65°C條件下，減壓蒸餾45分鐘，至不再有 丙酮被蒸出。4、向蒸餾后剩下的溶液中加注射用水2750ml，混勻，加入氯化鉀1. lg、氯化鈉 37. Ig和氯化鈣555mg，攪拌使溶解后，加鹽酸溶液調pH值至7. 0。
6、加入經活化處理過的0. 3 %硅藻土，邊加入邊攪拌，升溫至115°C，保溫70分鐘， 測定溶液的相對粘度為2. 20，所得聚明膠肽的重均分子量為33924，其形狀為球狀分子，見 圖3。迅速冷卻，放置12小時，棄去沉淀泥漿，將上清液轉移至另一容器中，加入經活化處 理過的0. 1%硅藻土和0. 3 %活性炭，加入注射用水350ml，調pH值至7. 0左右，攪拌吸附2 小時，依次用10 μ m、0. 45 μ m和0. 22 μ m的濾膜過濾，灌封。7、滅菌115 °C滅菌30分鐘。8、燈檢、包裝。分裝規格為250ml: 1.6 g (以含氮量計)。實施例3
1、取豬骨明膠200g，加溫度為90°C的注射用水2000ml，攪拌使溶解。用鹽酸或氫氧 化鈉溶液調節明膠溶液的PH值至6. 0，升溫至131°C，保持溫度2小時，至溶液的相對粘度 達到1. 3，使水解所得肽鏈的重均分子量為5500-9000，立即停止加熱，迅速使溶液冷卻至
40 "C。2、用NaOH溶液調節上述降解液的pH值至9. 0，維持溶液溫度40°C，緩慢加入環己 烷二異氰酸酯丙酮溶液(由3. 4ml環己烷二異氰酸酯溶于24ml丙酮中得到)，不斷攪拌1. 5 小時，每隔20分鐘，測量溶液的pH值，并用NaOH溶液調節以保持溶液的pH值為9. 0。3、將上述溶液在真空度-0. 08Mpa、溫度45°C條件下，減壓蒸餾100分鐘，至不再有 丙酮被蒸出。4、向蒸餾后剩下的溶液中加注射用水2500ml，混勻，加入氯化鉀1. lg、氯化鈉 37. Ig和氯化鈣555mg，攪拌使溶解后，加鹽酸溶液調pH值至6. 5。6、吸附、過濾加入經活化處理過的0. 5 %硅藻土，邊加入邊攪拌，升溫至125°C， 保溫45分鐘，測定溶液的相對粘度應為2. 0，所得聚明膠肽的重均分子量為31783，其形狀 為球狀分子，見圖4。迅速冷卻，放置16小時，棄去沉淀泥漿，將上清液轉移至另一容器中， 加入經活化處理過的0. 3%硅藻土和0. 3%活性炭，加入注射用水500ml，調pH值至7. 3左 右，攪拌吸附2. 5小時，依次用10 ym.O. 45 μ m和0. 22 μ m的濾膜過濾，灌封。7、滅菌115 °C滅菌30分鐘。8、燈檢、包裝。分裝規格為500ml 3. 2g (以含氮量計)。表1.本發明聚明膠肽注射液的檢驗結果
權利要求
一種聚明膠肽注射液制備方法，該方法包括以下步驟a、明膠的熱降解將牛骨或豬骨明膠用40～90℃注射用水溶解，調節明膠溶液的pH值為4.5～6.0，升溫至116～131℃，至相對粘度達到1.30～1.85時，停止加熱，并冷卻至20～40℃得到降解液；b、交聯調節降解液的pH值為8.0～9.0，在25～40℃溫度條件下加入交聯劑體積濃度為4～15%的環己烷二異氰酸酯的丙酮溶液或體積濃度為4～15%的6 亞己基二異氰酸酯的丙酮溶液，不斷攪拌，交聯1.5～2.5小時；c、蒸餾將步驟b的交聯產物加熱升溫至45～65℃，減壓蒸餾45～180分鐘，將丙酮蒸出；d、電解質的調節向步驟c蒸餾后剩下的溶液中加注射用水，加入氯化鉀、氯化鈉和氯化鈣，溶解后，加鹽酸溶液調pH值至6.5～7.5；e、吸附、過濾；f、灌封、滅菌、燈檢、包裝；上述明膠、交聯劑、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和注射用水的用量比為3.2kg0.25 0.50L3.6－3.8kg0.09－0.12kg0.05－0.06kg490－500L；其中明膠以含N量計，交聯劑以環己烷二異氰酸酯或6 亞己基二異氰酸酯的量計。
2.如權利要求1所述的聚明膠肽注射液制備方法，其特征在于，步驟a中注射用水用量 為注射用水總體積量的35% 45%。
3.如權利要求1或2所述的聚明膠肽注射液制備方法，其特征在于，步驟c中，減壓蒸 餾的真空度為-0. OSMpa0
4.如權利要求1或2所述的聚明膠肽注射液制備方法，其特征在于，步驟d中，加入 的注射用水量為注射用水總體積量的35% 45% ；步驟e中，吸附是指加入經活化處理的 0. 1 0. 5%硅藻土，邊加入邊攪拌，升溫至115 125°C，保溫45 90分鐘；迅速冷卻至 60 80°C，放置至少8小時，棄去沉淀泥漿，將溶液轉移至另一容器中，加入經活化處理的 0. 1 0. 5%硅藻土和0. 1 0. 5%活性炭，加入剩余量的注射用水，調PH值至6. 5 7. 5， 攪拌吸附1. 5 2. 5小時；過濾是指依次用10 μ m、0. 45 μ m和0. 22 μ m的濾膜過濾。
5.如權利要求1或2所述的聚明膠肽注射液制備方法，其特征在于，步驟f中，滅菌工 序為采用115°C滅菌30分鐘。
全文摘要
本發明涉及一種聚明膠肽注射液的處方及其制備方法，包括a.將明膠用注射用水溶解，調節明膠溶液的pH值為4.5～6.0，升溫至116~131℃，保持溫度2~3小時，停止加熱，冷卻至25~40℃。b.調節降解液的pH值至8.0~9.0，加入環己烷二異氰酸酯丙酮溶液，攪拌交聯1.5~2.5小時。c.減壓蒸餾將丙酮蒸出。d.向蒸餾后剩下的溶液中加注射用水、加入氯化鉀、氯化鈉和氯化鈣，調pH值至6.5~7.5。d.吸附與過濾；e.滅菌、燈檢、包裝。該方法降解條件可控性好，水解所得的多肽重均分子量為5000-18500，滿足交聯反應最佳條件要求；交聯度高，交聯產物多肽為球狀分子。制備的聚明膠肽注射液符合國家藥品標準，經臨床使用結果表明，該產品安全，有效。
文檔編號A61K9/08GK101934067SQ20101027141
公開日2011年1月5日 申請日期2010年9月3日 優先權日2010年9月3日
發明者魏學惠 申請人:武漢東方紅醫藥科技有限公司