專利名稱：：石斛堿的新應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：據(jù)已有的文獻(xiàn)資料檢索顯示，石斛堿的藥理作用有以下幾個(gè)方面1、能抑制離體兔腸活動(dòng)，而對(duì)離體豚鼠子宮有收縮作用；2、大劑量石斛堿可降低兔、豚鼠的心肌收縮力，降低血壓并抑制呼吸；3、有微弱的止痛退熱作用(ChengKe-hui,etal.JPharmacolExperTherap,1936,55(3):310;HenryML,etal.JPharmacolExperTherap,1936,56(4):466)。對(duì)該成分的其它藥理作用研究未見(jiàn)有任何報(bào)道。金釵石斛(DendrobiumnobileLindl.)是自然界中石斛堿的主要來(lái)源。本發(fā)明人曾研究發(fā)現(xiàn)金釵石斛藥材提取物具有預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病，及保護(hù)消化道粘膜損傷的功效(公開(kāi)號(hào)為CN1533801的專利申請(qǐng))。但由于上述金釵石斛提取物中的成分復(fù)雜，其中含有多種生物堿及其它化學(xué)成分，故并不明確其藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，即未明確藥理作用的有效成分。對(duì)月贈(zèng)本發(fā)明人為進(jìn)一步篩選金釵石斛提取物中的有效部位，經(jīng)過(guò)大量研究工作和藥理試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，式I化合物石斛堿也具有預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病，以及保護(hù)消化道粘膜損傷的作用，且較上述專利文獻(xiàn)中公開(kāi)的金釵石斛提取物的有關(guān)療效更佳。因此，本發(fā)明的目的是提供式I化合物石斛堿在上述兩方面的新應(yīng)用。本發(fā)明試驗(yàn)表明，式I化合物石斛堿具有抑制大鼠角叉菜膠所致急性炎癥及大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的作用，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。因此，石斛堿可用于預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病。同時(shí)實(shí)驗(yàn)也表明，式I化合物石斛堿同時(shí)具有抑制大鼠無(wú)水乙醇所致的急性消化道潰瘍和醋酸所致慢性胃潰瘍的作用。因此，石斛堿可用于保護(hù)消化道粘膜急性或慢性損傷，特別是用于防治急性和慢性消化道潰瘍。綜上所述，石斛堿2-40mg/kg即可產(chǎn)生上述兩方面的防治作用，在類似試驗(yàn)條件下，較金釵石斛提取物需4-5g生藥/kg的有效劑量明顯降低。另外，目前治療關(guān)節(jié)炎常用的非甾體類抗炎藥物，如布洛芬、二氯芬酸鈉等均能引起消化道損傷，故通常需與雷尼替丁等胃粘膜保護(hù)劑一起服用；石斛堿同時(shí)具有抗炎和保護(hù)胃粘膜損傷的作用，具有可競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。實(shí)施例l式I化合物石斛堿的提取分離根據(jù)上述文獻(xiàn)(T.Okamoto,etal.Thestructureofdendrobine.Chem.Pharm.Bull.,1964，12(4):506-512;YInubushi，etal.IsolationandCharacterizationofAlkaloidsoftheChineseDrug"Chin-Shih-Hu".Chem.Pharm.Bull.,1964，12(10):1175-1180)中的方法進(jìn)行提取分離，具體步驟如下將市售的1.0kg金釵石斛藥材切碎用甲醇8L浸漬兩天，過(guò)濾，殘?jiān)约状蓟亓魈崛?次(每次5L)，合并提取液，減壓濃縮得稠浸膏，浸膏以5%鹽酸水溶液溶解提取多次，過(guò)濾，合并酸性水提液，在冰浴中加氨水調(diào)pH至11.0左右，該堿性水溶液，以乙醚萃取多次，合并乙醚層溶液，過(guò)濾，回收溶劑至干，得石斛堿粗提物，上氧化鋁柱層析，以苯洗脫，分步收集洗脫液，合并部分洗脫液，回收溶液至干，得一純品化合物，測(cè)定熔點(diǎn)為134-136°C，并對(duì)該化合物的MS、H-NMR、C-NMR等光譜進(jìn)行解析，確證其結(jié)構(gòu)與文獻(xiàn)公布的石斛堿(即式I化合物)結(jié)構(gòu)完全一致。效果實(shí)施例1不同劑量石斛堿對(duì)足跖角叉菜膠所致急性炎癥的抑制作用實(shí)驗(yàn)方法大鼠隨機(jī)分組，每組10只動(dòng)物，于致炎前l(fā)小時(shí)灌胃給藥，無(wú)菌操作，給大鼠右后足跖腱膜下注射1%角叉菜膠O.lml致炎，用排水法測(cè)定致炎前及致炎后不同時(shí)間的右后足跖容積，以致炎前后的足容積差值為腫脹值，根據(jù)腫脹值計(jì)算腫脹率及抑制率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表l，與對(duì)照組比，氺為p〈0.05，襯為p〈0.01。腫脹率。/fEn-E。/ENX100E^致炎后不同時(shí)間的腫脹值E^致炎前的腫脹值抑制率c/。OT/CX100C:對(duì)照組的腫脹率T^治療組的腫脹率表1不同劑量石斛堿對(duì)大鼠角叉菜膠所致急性炎癥的抑制作用組別<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示石斛堿確有抑制大鼠角叉菜膠所致急性炎癥的作用，并隨著劑量的增加而逐漸增強(qiáng)。效果實(shí)施例2不同劑量石斛堿對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防和治療作用實(shí)驗(yàn)方法體重180-200g雄性SD大鼠，每鼠右后足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑O.lml致炎，次日開(kāi)始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)20天，用排水法測(cè)定致炎前及致炎后不同天數(shù)的足跖腫脹體積，并計(jì)算腫脹率及抑制率，并以檢驗(yàn)法用藥組與模型對(duì)照組比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表2，與對(duì)照組比，*為p〈0.05,^為p〈0.01。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示石斛堿2mg/kg的給藥劑量時(shí)即對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生一定的抑制作用，并隨著劑量的增加，抑制作用加強(qiáng)。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>效果實(shí)施例3不同劑量石斛堿對(duì)大鼠無(wú)水乙醇所致的急性胃粘膜損傷的影響實(shí)驗(yàn)方法SD大鼠隨機(jī)分組，禁食48小時(shí)，自由飲水。實(shí)驗(yàn)時(shí)灌服無(wú)水乙醇lml/只，在灌服無(wú)水乙醇前一小時(shí)灌胃給藥，服無(wú)水乙醇后3小時(shí)處死動(dòng)物，解剖取胃，以1%甲醛溶液固定，損傷程度以潰瘍指數(shù)表示，條索狀損傷的長(zhǎng)度大于lmm者測(cè)量其長(zhǎng)度，每mm記1分，若其長(zhǎng)度寬度大于lmm者將其記分加倍，記分總數(shù)為該動(dòng)物的潰瘍指數(shù)，各項(xiàng)間進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表3，與對(duì)照組比，f為p〈0.05，**為？<0.01。表3不同劑量石斛堿對(duì)大鼠無(wú)水乙醇所致急性胃粘膜損傷的抑制作用組別齊糧mg/kgn潰瘍指數(shù)(；士SD)抑制率(％)21064.8±5.2*38.581058.6±7.9**44.46石斛堿10108.7±2.2**91.7820102.0±0.8**98.0940101.7±0.8**98.36雷尼替丁50mg/kg101.4±0.6**98.64對(duì)照組10105.5±12.6以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示石斛堿具有抑制大鼠無(wú)水乙醇所致的急性消化道潰瘍的作用，其40mg/kg的給藥劑量時(shí)與雷尼替丁(50mg/kg)的幾乎等同。效果實(shí)施例4不同劑量石斛堿對(duì)大鼠醋酸燒灼型慢性胃潰瘍的影響實(shí)驗(yàn)方法SD大鼠空腹24小時(shí)，自由飲水，在3%戊巴比妥鈉麻醉下打開(kāi)腹腔，在胃漿膜下注入30n/。冰醋酸0.1ml，隨即縫合，次日起灌胃給藥，每天1次，連續(xù)10天。解剖取胃，用甲醛固定，測(cè)量潰瘍面積，進(jìn)行各組間比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表4，與對(duì)照組比，輯為p〈0.01。表4不同劑量石斛堿對(duì)大鼠醋酸燒灼型慢性胃潰瘍的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示石斛堿具有抑制大鼠慢性胃潰瘍的作用。權(quán)利要求1、式I化合物石斛堿在制備保護(hù)消化道粘膜損傷的藥物中的應(yīng)用。2、如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于該藥物為防治急性或慢性消化道潰瘍的藥物。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了石斛堿的兩個(gè)新用途，即在制備預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病，以及保護(hù)消化道粘膜損傷的藥物中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61P1/04GK101543492SQ200910140559公開(kāi)日2009年9月30日申請(qǐng)日期2006年7月14日優(yōu)先權(quán)日2006年7月14日發(fā)明者劉全海,劉珉宇,華茉莉,盧艷萍,莊賢韓,戴靜芝,李定祥,李晶晶,沈龍海,王小晨申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;上海先導(dǎo)藥業(yè)有限公司