專利名稱：一種蔓荊子提取物及其超臨界制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及天然中草藥蔓荊子的提取工藝，特別是一種超臨界流體萃取分離中藥 蔓荊子提取物有效成分的工藝方法，屬中草藥制備化學化工技術領域。
背景技術：
蔓荊子為馬鞭草科植物單葉蔓荊Vitex uifolia L. Var. simplicifolia Cham.或 蔓荊Vitextrifolia L.的干燥成熟果實，為辛涼解表藥，具有疏散風熱，清利頭目之功效， 常用于風熱感冒頭痛、齒齦腫痛、目赤多淚、目暗不明、頭暈目眩等癥。現代藥理研究表明， 蔓荊子有鎮痛作用、蔓荊子有抗菌、抗病毒作用、降壓作用、鎮靜、平喘作用、祛痰作用、抑制 黑色素形成的作用，還有抗炎、抗癌、抗緩激肽、抗脂氧合酶的作用。有效成分為莰烯、菔烯 等揮發油與蔓荊子黃素等黃酮類成分。中藥標準提取物的化學成分是多種藥理活性物質按特定比例組成的集合，繼承了 中藥多成分的特點，體現著原中藥材特定的中醫功效，且有效活性物質富集程度高(如銀 杏標準提取物中有效成分含量是原藥材原料中的50倍)，因此無論作為單味藥還是組成復 方，均可替代原生藥作為中藥制劑的科學化原料藥。傳統中藥提取常用的方法為浸漬法，滲流法，水煎煮法，回流提取法及連續回流提 取法等，所用溶劑為水或有機溶劑。但這些方法對中草藥的提取物一般需進一步除去雜質， 分離并進行精制，而且存在有機溶劑殘留，工藝步驟復雜，耗費時間長等不足之處。近年來， 超臨界流體萃取技術獲得了發展，由于具有適合提取天然熱敏性物質、產品無溶劑殘留、產 品質量穩定、操作方便、萃取效率高且能耗少等優良特性，為中藥現代化研究提供了一種高 效的提取與分離的全新手段，在中草藥有效成分的分離提取領域中具有廣闊的應用前景。 但目前關于中藥蔓荊子提取物超臨界流體萃取的研究尚未有人報道。文獻(胡居吾，熊 偉，李雄輝響應面法優化超臨界CO2萃取蔓荊子油工藝研究江西食品工業，2008年第3期 20-21，24頁)僅報道了采用超臨界CO2萃取蔓荊子油，未見極性成分特別是蔓荊子黃素等 黃酮類有效成分的報道，所以其制備的蔓荊子油與本發明蔓荊子提取物不是相同的物質。

發明內容
發明內容本發明的目的是提供一種超臨界流體萃取中藥蔓荊子提取物的制備工 藝。本發明的另一目的是通過采用該工藝方法，能最大程度富集蔓荊子中有效成分，制得具 有較高蔓荊子黃素等黃酮類與揮發性成分的提取物。本發明的超臨界流體萃取中藥蔓荊子的有效成分制備蔓荊子提取物的工藝，以中 藥蔓荊子為原料按照下述方法分離提取制備提取物采用超臨界流體萃取法，以二氧化碳 為溶劑，加入適量的夾帶劑，萃取壓力為20 30Mpa，溫度為35 55°C，萃取時間為1 2 小時，CO2流量為40 80L/h，對萃取釜和2個解析釜進行加熱，貯罐進行冷卻，當溫度達到 預定的溫度時，打開CO2氣瓶送氣，并打開高壓泵升壓，壓力達到預定壓力時，循環萃取，調 節流量，恒溫恒壓萃取出料，得到含有夾帶劑的蔓荊子萃取物，所得萃取物為黃褐色液體。蔓荊子提取物超臨界萃取工藝，經試驗優化為萃取壓力為20Mpa，溫度為35°C，萃取時間 為1小時。所用的夾帶劑為乙醇或乙酸乙酯，用量為原料的1 2倍(體積重量比)，最好 為1.5倍。本發明的蔓荊子提取物，以中藥蔓荊子為原料，干燥至含水量為5 15%后(最好 干燥至含水量為8 10% )，按照上述超臨界萃取工藝制備，將制備得到液體經濃縮、干燥 后即得蔓荊子提取物。本發明方法工藝簡單，操作方便，產品中無溶劑殘留，對人體安全無毒，適合作為 保健食品或藥物使用。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步的描述。實施例1蔓荊子超臨界C02萃取物GC/MS分析1.1儀器與試藥超臨界流體萃取設備，江蘇南通華安超臨界萃取有限公司(HA221-40-11型，萃 取釜容積1L)，CO2氣體為食品級，純度> 99% ；美國安捷倫公司6890GC-5975MS型氣相色 譜-質譜聯用儀，NIST05質譜檢索庫；R206旋轉蒸發器，上海申生科技有限公司；乙醇、無 水硫酸鈉和乙醚均為分析純。蔓荊子購自福州回春堂中藥飲片廠，并經福建省醫學科學研究所藥物室鑒定為單 葉蔓荊子 Vitex trifolia L. var. Simplicifolia Cham.。1. 2蔓荊子提取物萃取方法超臨界CO2萃取流程CO2鋼瓶一冷凍系統一高壓泵一萃取釜一解析釜I-解析釜II-冷凍系統 (循環)。稱取200g蔓荊子(已干燥至含水量為10%左右)粉末樣品裝入萃取釜中，在萃 取釜壓力20MPa，萃取溫度35°C，解析釜壓力4. 4MPa，解析溫度35°C，CO2流量控制60L/h， 樣品夾帶劑用量為300mL的條件下，對萃取釜和2個解析釜進行加熱，貯罐進行冷卻，當溫 度達到預定的溫度時，打開CO2氣瓶送氣，并打開高壓泵升壓，壓力達到預定壓力時，循環萃 取lh，調節流量，恒溫恒壓萃取出料，得到含有夾帶劑的蔓荊子萃取物，所得萃取物為黃褐 色液體，進行預處理后用于GC-MS分析。1. 3GC/MS分離與鑒定1. 3. 1樣品處理取蔓荊子超臨界CO2萃取物，采用旋轉蒸發儀回收乙醇至為稠浸 膏，得蔓荊子提取物約18. 72g，計算萃取物得率。稱取6. 24g用50ml乙醚溶解，振搖5min， 加無水硫酸鈉適量，干燥，過濾，揮去乙醚至50ml，即可進樣。1. 3. 2GC/MS 分離條件1.3. 2. IGC條件色譜柱HP-5MS 5% 苯基甲基硅氧烷 (30. OmX 250 μ mXO. 25 μ m)毛細管柱；載氣為氦氣(99. 999% )，體積流量為lml/min恒流 模式；程序升溫50°C (保持3min)，以6°C /min升至200°C，以2°C /min升至250°C (保持 2min)；進樣室溫度280°C ；不分流進樣，進樣量為1 μ 1。1.3. 2. IMS條件離子源溫度230°C，接口溫度280°C，電離方式為電子轟擊(EI)源，70eV電子轟擊能量，掃描范圍40 450amu，溶劑延遲時間為3min.2 結果在上述實驗條件下，蔓荊子萃取物得率為9. 36%。對蔓荊子揮發油進行了測定，將 其總離子流采用面積歸一化法計算各峰的相對百分舍量。通過NIST05質譜數據庫檢索、人 工譜圖解析，確認該揮發油中部分化學成分，共鑒定出30種成分。由表1可見，主要成分為 9. 17-十八烷二烯酸、7-異丙基-1. 1. 4a-三甲基-1. 2. 3. 4. 4a. 9. 10. IOa-八氫菲、6-十八 烷酸、η-棕櫚酸、十八烷酸等。表1蔓荊子SPF-CO2萃取物化學成分分析結果 實施例2正交試驗優化蔓荊子超臨界提取物制備工藝
1儀器與試藥1. 1儀器P/ACE MDQ高效毛細管電泳分析儀(美國Beckman Coulter公 司)，二極管陣列(DAD)檢測器、32KaratTM Software ver 7. 0分析軟件、非涂層毛細管 (47. 5cmX50 μ m)(河北銳灃色譜器件有限公司)，艾科浦超純水機(重慶頤洋企業發展有 限公司)。1.2.試劑蔓荊子黃素對照品(購于中國藥品生物制品檢定所)，硼砂、硼酸、甲醇 等均為國產分析純。2試驗方法2. ICO2超臨界萃取正交實驗設計影響超臨界CO2萃取的因素很多，因此本試驗在 預實驗的基礎上固定其它因素，選取對萃取效率影響較為顯著的3個因素，即萃取溫度、萃 取壓力、萃取次數，按L9 (34)正交表設計安排實驗，以得膏率和超臨界萃取物中蔓荊子黃素 的含量為考察對象，優選確定最佳萃取工藝條件，并按正交實驗結果得出的最優萃取工藝 條件，重復實驗3次，以考察萃取工藝的重現性。正交實驗因素水平，結果見表2。表2正交實驗因素水平表 2. 2超臨界CO2萃取工藝C02鋼瓶一冷凍系統一高壓泵一萃取釜一解析釜 I--解析釜II-冷凍系統(循環)。稱取200g蔓荊子粉末樣品裝入萃取釜中，設置解析釜 壓力4. 4MPa, CO2流量控制60L/h，樣品夾帶劑用量為300ml，在上述正交表的萃取釜壓力， 萃取溫度，解析溫度的條件下，對萃取釜和2個解析釜進行加熱，貯罐進行冷卻，當溫度達 到預定的溫度時，打開CO2氣瓶送氣，并打開高壓泵升壓，壓力達到預定壓力時，循環萃取， 調節流量，恒溫恒壓萃取出料，得到含有夾帶劑的蔓荊子萃取物，所得萃取物為黃褐色液 體。將該液體置旋轉蒸發儀濃縮至浸膏，至真空干燥箱中干燥至恒重。2. 3超臨界萃取物中蔓荊子黃素含量的測定2.3. 1對照品溶液的制備取蔓荊子黃素對照品10mg，精密稱定，加超純水IOml超
聲溶解，定容至刻度，搖勻即得。2. 3. 2樣品溶液的制備分別取不同工藝條件下的蔓荊子超臨界CO2萃取物約 50mg,精密稱定，置IOmL量瓶中，加甲醇超聲溶解，定容至刻度，混勻，靜置，用0. 45 μ m針頭 式微孔過濾器濾過，棄去初濾液，取續濾液備用，作為蔓荊子超臨界萃取物供試品溶液。2. 3. 3電泳分離條件毛細管長55cm，內徑50 μ m,緩沖液為100mmol/L硼 酸100mmol/L硼砂甲醇=5 1 1，壓力進樣0. 5psi X lOsec，分離電壓30kV，溫度 25°C，分析時間20min，掃描波長190 600nm，檢測波長260nm。2. 3. 4標準曲線及線性將1. 0mg/ml的蔓荊子黃素對照品母液分別稀釋成0. 1、0.2,0. 4,0. 6,1. Omg/ml 5種濃度，于上述條件下進行分析，以蔓荊子黃素濃度(Y)和蔓荊 子黃素峰面積(X)作標準曲線，得出其回歸方程為Y = 420752X+15449，線性范圍為0. 1
1.Omg/ml，其相關系數r2 = 0. 9919，表明線性關系良好。2. 3. 5方法學考察按照常規的方法考察精密度、穩定性、回收率等，均符合含量 測定要求。3 結果將各蔓荊子超臨界萃取物供試品溶液及蔓荊子藥材供試品溶液注入毛細管電泳 儀，按毛細管“電泳分離條件”項下的色譜條件進行測定，記錄色譜圖，采用外標法計算蔓荊 子素含量，結果見表3、表4。表3蔓荊子超臨界萃取工藝正交實驗出膏率結果 表4蔓荊子超臨界萃取工藝正交實驗蔓荊子黃素含量測定結果 由表3、表4中數據可以看出，對蔓荊子黃素超臨界萃取影響最大的因素是萃取溫 度，其次為萃取壓力，萃取時間因素影響最小，取各因素最好的水平組合，可得到蔓荊子黃 素超臨界萃取的最佳工藝條件為在萃取溫度為35°C、壓力為20Mpa、萃取2小時時蔓荊子提 取物的出膏率和萃取物中蔓荊子黃素的含量最高，考慮到萃取時間對萃取效率影響不大， 但萃取時間對工業生產影響較大，所以萃取1小時為佳，故實際生產的最佳工藝條件為佳 工藝條件為在萃取溫度為35°C、壓力為20Mpa、萃取2小時。按照此工藝條件，重復萃取3 次，以驗證工藝的穩定性，結果，3次重復實驗所得蔓荊子黃素的出膏率與萃取物中蔓荊子 黃素的含量比較穩定，均值分別為12. 35和405. 48，RSD分別為1. 80%和2. 36%，表明該工 藝的重復性良好。
權利要求
一種蔓荊子提取物超臨界萃取工藝，其特征在于，以中藥蔓荊子為原料按照下述方法分離提取制備提取物采用超臨界流體萃取法，以二氧化碳為溶劑，加入適量的夾帶劑，萃取壓力為20～30Mpa，溫度為35～55℃，萃取時間為1～2小時，CO2流量為40～80L/h，對萃取釜和2個解析釜進行加熱，貯罐進行冷卻，當溫度達到預定的溫度時，打開CO2氣瓶送氣，并打開高壓泵升壓，壓力達到預定壓力時，循環萃取，調節流量，恒溫恒壓萃取出料，得到含有夾帶劑的蔓荊子萃取物，所得萃取物為黃褐色液體。
2.根據權利要求1所述的蔓荊子提取物超臨界萃取工藝，其特征在于，萃取壓力為 20Mpa，溫度為35°C，萃取時間為1小時。
3.根據權利要求1所述的蔓荊子提取物超臨界萃取工藝，其特征在于，所用的夾帶劑 為乙醇或乙酸乙酯，用量為原料的1 2倍(體積重量比)，優選為1. 5倍。
4.一種蔓荊子提取物，其特征在于，以中藥蔓荊子為原料，干燥至含水量為5 15% 后，按照權利要求1所述的超臨界萃取工藝制備，將制備得到液體經濃縮、干燥后即得蔓荊 子提取物。
5.根據權利要求4所述的蔓荊子提取物，其特征在于，以中藥蔓荊子為原料，干燥至含 水量為8 10%后，按照權利要求1所述的超臨界萃取工藝制備，將制備得到液體經濃縮、 干燥后即得蔓荊子提取物。
全文摘要
本發明涉及一種蔓荊子提取物及制備工藝，特別是一種采用超臨界流體萃取技術制備的蔓荊子提取物及其制備工藝，屬中藥制備化學化工技術領域。本發明的特征在于，采用純CO2超臨界萃取中藥蔓荊子中的揮發油等脂溶性成分，同時以有機溶劑乙醇作為夾帶劑，萃取中藥蔓荊子黃酮類等有效成分，超臨界流體萃取流出物有兩級解析過程，最終萃取釜中收集到了含有蔓荊子揮發油與黃酮類有效成分的提取物；本發明方法所制備的中藥蔓荊子提取物同時具備揮發油與黃酮類等有效成分。本發明方法工藝簡單，操作方便，產品中無溶劑殘留，對人體安全無毒，適合作為藥物使用。
文檔編號A61P27/02GK101904947SQ20091011192
公開日2010年12月8日 申請日期2009年6月8日 優先權日2009年6月8日
發明者張亞敏, 徐榕青, 林文津 申請人:福建省醫學科學研究所