專利名稱：一種含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物及其制備方法
技術領域：
本發明屬于醫學制藥工程技術領域，涉及一種含NO供體的組合藥物及其制備方法，尤其是一種含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物及其制備方法。
背景技術：
—氧化氮(nitric oxide,NO)是一種具有多種生物活性的氣體小分子物質。在體內由NO前體物質L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的催化下與氧分子作用產生NO和L-胍氨酸。NO普遍存在于脊椎動物的各種細胞，如內皮細 胞、巨噬細胞、神經細胞中，是細胞間和細胞內信息傳遞的重要調節因子，同時還是宿主免疫反應中一種細胞毒性因子。它被證實具有多種生物學活性，這包括調節血管擴張和血流、神經信號傳遞、信號轉導、免疫調制、細胞的氧化還原狀態、肝細胞的凋亡及防御微生物等。一氧化氮供體(NO donor)是指一類能在體內經酶促反應或非酶促反應引入并釋放外源性NO的一類前體藥物。NO在病理生理過程中具有廣泛且重要的作用，隨著對NO認識的不斷深入，人們對NO供體的研究興趣也越來越高。在近十幾年，許多具有不同生物學特性和治療潛力的NO供體都已被合成，按其結構類型，常用的大致包括有機硝酸酯類如硝酸甘油(NG)、斯德酮亞胺類如嗎多明、亞硝基硫醇類如S-亞硝基卡托普利、NO-供體復合類如NO-阿司匹林(NCX-4061)以及金屬-NO配合物類如硝普鈉等。但這些傳統的NO供體在使用時，一方面，它只在溶液中釋放NO，因NO的生物半衰期極短，只有IOs左右，一旦生成就會被迅速氧化，導致細胞內的NO很難達到有效濃度；另一方面，NO釋放缺乏特異性使其在攻擊目的細胞的同時，也可殺傷正常細胞，如促進肝細胞纖維化等。因此，NO供體的組織特異性在NO控釋中越來越受到重視。有文獻報道，設計并合成了一個新型的糖基化NO供體化合物β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇，其利用半乳糖連接偶氮烯翁二醇末端氧來保護在水溶液中易自發分解產生NO的偶氮烯翁二醇，此外，更主要的是，由于分子中引入了半乳糖，使其對高表達β-半乳糖苷酶的病菌及腫瘤細胞具有了特異性[李松，陳暢，史艷秋，等.新型NO供體β-Gal-NONOate對C6細胞的抗腫瘤作用.中國生化藥物雜志，2007，28 (4) :217-220]。然而，β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇對環境溫度和濕度敏感，僅可于4°C保存IOd左右，H+也會加速其的降解。若采用單一藥物的形式，β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇在外環境存放或在體內的轉運時易提前釋放出NO，影響所有的器官，有時會產生嚴重的副作用和并發癥，而在NO缺乏的器官卻沒有達到有效的藥物劑量。現于以上缺陷，合成選擇性高、穩定性好的靶向釋放NO的供體藥物或通過添加其它輔料制成能達到同樣目的的NO供體組合藥物已經成為當今制藥工程領域的熱點。

發明內容
基于上述現有技術，本發明提供了一種選擇性高、穩定性好的含β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物及其制備方法。該組合藥物中的β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇由于分子中引入了半乳糖，不僅阻滯了偶氮烯翁二醇遇水溶液易自發分解產生NO，而且使其對高表達β_半乳糖苷酶的病菌及腫瘤細胞具有了較好的組織特異性。滑爪蟾素是含21-27個氨基酸殘基的堿性陽離子肽，除了自身具有抗菌及抗腫瘤作用之外，還可以作為酸堿緩沖對，減少H+對NO供體的影響。蒙脫石是由顆粒極細的含水鋁硅酸鹽構成的層狀礦物，具有很強的吸附力及陽離子交換性能，因此，對呈陽性的β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇及滑爪蟾素有一定吸附能力，從而能夠延緩β_半乳糖基化偶氮烯翁二醇的釋放。防潮劑的加入，則使得蒙脫石多吸附了一隔水層，避免了 NO供體及滑爪蟾素等藥物層及直接與水接觸，增加組合藥物的穩定性。本發明所述的含半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物由NO供體藥物、滑爪蟾素、蒙脫石、防潮劑組成。本發明所述的含β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物中各組份含量為5-40質量份的NO供體藥物、4-9質量份的滑爪蟾素、35-70質量份的蒙脫石、5_30質量份的防潮劑。所述的蒙脫石為鈉蒙脫石或/和鈣蒙脫石；所述的防潮劑為硬脂酰聚甘油酯、乙基纖維素及聚二甲基硅氧烷中的一種或幾種。所述的NO供體藥物為β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇，或者質量比為(O. 1-0. 3):1的化合物A與β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇。 所述化合物A結構式如下
權利要求
1.一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的組合藥物由NO供體藥物、滑爪蟾素、蒙脫石、防潮劑組成，所述的NO供體藥物為P -半乳糖基化偶氮烯翁二醇。
2.如權利要求1所述的一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的組合藥物中各組份含量為5-40質量份的NO供體藥物、4-9質量份的滑爪蟾素、35-70質量份的蒙脫石、5-30質量份的防潮劑。
3.如權利要求2所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的蒙脫石為鈉蒙脫石或/和鈣蒙脫石；所述的防潮劑為硬脂酰聚甘油酯、乙基纖維素及聚二甲基硅氧烷中的一種或幾種。
4.如權利要求3所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的NO供體藥物為P -半乳糖基化偶氮烯翁二醇和化合物A ;化合物A與P -半乳糖基化偶氮烯翁二醇的質量比為(0. 1-0. 3) :1 ;化合物A結構式如下
5.如權利要求4所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述化合物A的制備方法為 (1)在反應瓶中加入30mL氯仿和240mmolN-鄰羥基芐基-氨乙酸，攪拌下用2wt%的氫氧化鈉水溶液調pH為9，加入0. 6g Bu4NBr,加熱至42 °C，滴加30mL含240mmol四乙酰基-P -D-溴代半乳糖的氯仿溶液并反應4. 5h，其間以2wt %的氫氧化鈉溶液維持體系pH=9,反應完畢后，分出有機層,用5wt%的氫氧化鈉溶液和水洗漆,干燥有機層后除去溶齊U，然后加入丙酮，濾去不溶物，將濾液濃縮過柱，用乙酸乙酯洗脫，收集最先流出的色帶，得N-鄰羥基芐基-氨乙酸四乙酰基-P -D-半乳糖酯； (2)將240mgBu2SnO和190mmol N-鄰羥基芐基-氨乙酸四乙酰基-P-D-半乳糖酯加A 50ml無水甲醇中，900C回流2h，得N-鄰羥基芐基-氨乙酸-P -D-半乳糖酯； (3)取IlOmmolN-鄰羥基芐基-氨乙酸鄰-D-半乳糖酯，懸浮于含有3. 6g甲醇鈉的IOOml甲醇溶液中，置于高壓反應釜中，先通氮氣后抽真空，除去體系中的氧氣，再通入NO氣體，維持壓力0. 6Mpa，室溫反應5天，反應完成后通氮氣吹去未反應的NO，過濾，用無水甲醇和乙醚洗滌3次，在真空烘箱中室溫真空干燥24小時，得N-鄰羥基芐基-N-(二氮烯-1-鐵氧-2-醇鈉)-氨乙酸P -D-半乳糖酯； (4)取90mmolN-鄰羥基芐基-N-( 二氮烯-1-鎗氧-2-醇鈉)_氨乙酸P -D-半乳糖酯，懸浮于50ml DMF的密閉玻璃瓶中，冰水浴攪拌并用針通氮氣2小時，以除去反應體系中的氧氣，在氮氣的保護氛圍中，用注射器加入6ml三(2-氯乙基)胺，反應3小時；撤除冰水浴及氮氣，升至室溫，繼續密封攪拌48小時，過濾，用乙醚洗3次，在真空烘箱中室溫真空干燥24小時，即得化合物A。
6.如權利要求5所述的一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的N-鄰羥基芐基-氨乙酸的制備方法為在IOOOmL單口瓶中，加入300mmol乙氨酸，450mL無水乙醇,攪拌使其溶解，然后加入300mmol氫氧化鈉,攪拌IOmin后，分批加入300mmol水楊醛，攪拌2h，TLC跟蹤反應，原料消失為反應終點；反應結束后，用冰水浴冷卻至6°C,用稀鹽酸調pH=6,然后分批加入300mmol四氫硼鈉，TLC跟蹤反應；反應完全后,用稀鹽酸調PH為4，使白色沉淀充分析出，靜置，過濾，濾餅分別用水、乙醚洗滌得粗產品，粗產品用IOOml乙醇溶解，后加500ml水調極性，進行重結晶，抽濾得N-鄰羥基芐基-氨乙酸。
7.如權利要求5所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的四乙酰基-P-D-溴代半乳糖的制備方法為在裝有120mL乙酸酐的三口瓶中，滴加0.4mL高氯酸，35°C并在攪拌下，0. 5h內加入300mmol ^ -D-半乳糖，繼續攪拌2h，改為冰水浴冷至5°C后加入5g紅磷，然后在20°C并攪拌下滴加9ml溴，反應0. 5h后加入8mL冰水，繼續反應2h后加入50mL氯仿，然后將此混合物倒入160mL冰水中，抽濾，除去紅磷，分出有機層，用飽和碳酸鈉溶液洗至PH為6，有機層用無水氯化鈣干燥及活性炭脫色，除去溶劑后得白色固體，即為四乙酰基-P -D-溴代半乳糖。
8.如權利要求1-7任一所述的一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物的制備方法，其特征在于，其具體操作步驟如下 1)取4-20g滑爪蟾素溶于20-40ml醇水混合溶液中，醇與水的體積比為(1:20)-(1:3)，然后加入35-70g蒙脫石，攪拌，使滑爪蟾素充分吸附于蒙脫石中，過濾，取蒙脫石，揮干醇后，放入烘箱中烘干； 2)取5-80g的NO供體藥物溶于20-80ml醇中，然后加入步驟I)得到的吸附有滑爪蟾素的蒙脫石，攪拌，使NO供體藥物充分吸附于蒙脫石中，過濾，取蒙脫石，揮干醇； 3)將步驟2)得到的吸附有滑爪蟾素和NO供體藥物的蒙脫石加入5-30g防潮劑，充分拌勻，即制得含P-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物。
9.如權利要求8所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物的制備方法，其特征在于，步驟I)和步驟2)中所述的醇為甲醇或乙醇。
10.如權利要求1-7任一所述的一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物在抗菌、抗病毒藥物制備中的應用。
全文摘要
本發明屬于醫學制藥工程技術領域，涉及一種含NO供體的組合藥物及其制備方法，尤其是一種含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物及其制備方法。本發明所述的組合藥物由含有β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的NO供體藥物、滑爪蟾素、蒙脫石、防潮劑組成，其制備方法具體如下取滑爪蟾素，溶于醇溶液中，加入蒙脫石，充分攪拌，濾取蒙脫石，烘干；取含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的NO供體藥物溶于醇中，然后加入蒙脫石，充分攪拌，濾取蒙脫石，揮干醇后加入防潮劑，拌勻，即制得含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物。本發明所述的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物防水、抗酸，而且能延長NO供體的釋放時間，達到穩定、可控。
文檔編號A61P31/04GK103007253SQ20121053721
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月12日 優先權日2012年12月12日
發明者陳暢, 鄧玲玲, 張會萍, 田婕 申請人:北京化工大學