專利名稱：：一種液態中藥制劑的中間體及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種含水蛭單味藥材制劑的中間體及其制備方法，屬中藥領域。
背景技術：
：一、水蛭研究進展水蛭功效為破血、逐瘀、消癥。可用于癥瘕痞塊，血瘀經閉，跌打損傷，血小板增多癥，及腦出血。水蛭始載于《神農本草經》"主逐惡血，瘀血，月閉，破血瘕積聚，無子，利水道。"《本草綱目》"咸走血，苦勝血。水蛭之咸苦，以除蓄血，乃肝經血分藥，故能通肝經聚血。"水蛭屬高度特化的環節動物，目前已知全世界共有300多種，我國分布有62種[2]。水蛭主含蛋白質，此外含有17種氨基酸，包括人體必需的8種氨基酸，還含有Zn、Mn、Fe、Co、Cr、Se、Mo、Ni等14種元素。不同種吸血習性不同。日本醫蛭、菲牛蛭、歐洲醫蛭屬吸血蛭類；而寬體金線蛭、尖細金線蛭為非吸血蛭類。不同種水蛭中活性成分不同，大致可分為兩類一類直接作用于凝血系統成分，包括凝血酶抑制劑以及其它抑制血液凝固的物質，是水蛭活血化瘀的物質基礎；二是其它蛋白酶抑制劑等活性成分，如胰蛋白酶抑制劑、糜蛋白酶抑制劑、粒細胞彈性蛋白酶和組織蛋白酶G抑制劑。水蛭中的主要有效成分為蛋白、多肽類成分。由于蛋白多肽進入體內后可以被酶迅速代謝降解，生物半衰期短，一般具有較強的親水性，不易透過生理屏障，表觀分布容積小，加上胃腸道和肝臟的首過效應等原因，其生物利用度通常較低，特別是口服給藥，其生物利用度更低，一般只有10%左右[5]。水蛭水煎液的醇溶部分可直接阻斷凝血反應的最后步驟——纖維蛋白原(Fbg)與凝血酶的相互作用；非醇溶部分可直接水解纖維蛋白(Fb)，并且對Fbg和Fb的水解有相對的選擇性。這表現在一方面，它們對Fbg和Fb的水解作用明顯強于對牛血清白蛋白(BSA)的作用；另一方面，它們對Fbg和Fb的a鏈的水解作用強于對e鏈和Y鏈的作用。10%水蛭粉混懸液口服給予病理"血瘀"小鼠，能使其全血、血漿及全血還原粘度明顯降低。水蛭的乙酸乙酯提取物能使大鼠的凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)和活化的部分凝血酶時間(APTT)顯著延長；正己垸部分和水溶液部分能使大鼠的PT顯著延長；而正丁醇部分能使大鼠的ATPP顯著延長。由于水蛭的有效部位分布較廣，以單獨的提取溶劑提取，不能保證提取出所有的有效成分，而且提取后有效成分的提取率較低，大量的有效成分被水解、破壞，生物利用度低。故水蛭藥材較適宜直接粉碎入制劑，既可保證有效成分不損失，又不會使某些成分水解、破壞，而且成品率高，中間過程無損失。二、超微粉碎研究進展1、超微粉碎原理及意義超微粉碎技術是使物料微細及超細化的機械加工方法，是提供超微粉體的重要手段之一。近20年來，該項技術獲得迅速發展，國外已廣泛應用于冶金、陶瓷、紡織及航空航天等工業領域。中藥行業引入微粉概念始于20世紀90年代末，雖然起步較晚，但由于粉碎是中藥生產及應用中的基本加工技術，因此超微粉碎也愈來愈引起人們的關注，超微粉碎技術已顯露出特有的優勢和廣闊的應用前景。在中藥材的粉碎過程中，藥材受到強烈的正向擠壓力和切向剪切力的作用，運用高速、高能量進行粉碎，細胞被擠壓、剪切，細胞壁被撕裂、斷開，細胞被破碎成碎片或被壓破，所得到的粉末粒徑一般達300目以上、中心粒徑達1025um，細胞破壁率達95%以上，"破壁"的藥粉其所含化學成分直接暴露出來，與傳統的中藥藥粉(化學成分存在于完整的細胞壁內)相比，產生了"質"的變化，初步的藥理實驗已證實細胞級超細微粉能明顯提高藥效，在中藥現代化方面有廣泛應用。其原理目前初步認為細胞破壁后的超微粉末可以全部保留其中的各種成分，細胞級超細微粉易被小腸吸著、停留時間長，利于吸收，同時直接暴露的化學成分易于透膜吸收，大大提高了其生物利用度。中藥超微粉碎給中藥劑型改革和中藥現代化帶來了一場革命，提高了細胞破壁率、比表面積、有效成分溶出度、生物利用度，能增強藥理作用、減少用藥量、節省藥材和保護藥材資源，同時還可改善氣味、口感，提高藥品質量，相對目前常規粉碎、水煎煮或有機溶劑提取等方法具有無可比擬的優勢。尤其對于樹脂類藥材、動物藥及貴重藥材如血竭、水蛭、麝香、牛黃等，由于這些藥材中成分不明確，不宜提取，大多經常規粉碎后入丸散應用，而引入超微粉碎技術后，使原有物料處于一種超微細粉末的"新的狀態"，充分發揮超微細粉獨特的理化性質，中藥的有效成分不但不會丟失或減少，而且還會被人體充分吸收利用，中醫藥的特色將得到更大的發揮。超微粉碎技術可使藥材中的有效成分直接暴露出來，而不是使有效成分從細胞壁(膜)釋放，從而使藥物起效更加迅速、充分，其粒度細膩、均勻，表面積增加，孔隙率增大，吸附性和溶解性增強，藥物能較好地分散、溶解于胃液中，增大與胃黏膜的接觸面積，從而更易被胃腸道吸收，大大提高了生物利用度。藥材經過超微粉碎，沒有新的物質生成，傳統中藥固有的藥效學基礎物質沒有發生質的變化，從而保持了傳統中藥的性味和功能主治。因此，超微粉碎技術較好地處理了中藥研發過程中繼承與創新的關系問題，既發揮了現代科學技術的優勢，又秉承了傳統中藥治病保健的固有特性。在中醫藥發展中，限制中藥臨床應用的一個重要因素就是中藥的味覺和口感較差，吞咽困難。中藥超微細粉的平均粒度一般在20wm以下，其顆粒度已低于口腔顆粒感覺閾值，直接服用或煎煮后全服基本上沒有口服顆粒感，無論是成人還是兒童均能適應。通過水蛭入藥方式的比較研究，表明生水蛭經超微粉碎，90%的粒度為普通散的1/4，50%的粒度為普通散的1/15，且顏色變淺，腥味降低，質地細膩，利于吞服。2、中藥超微粉碎存在的問題由于受傳統常規粉碎方法的影響，目前所有超微粉碎方法都是將所需藥材直接進行粉碎，得到粉碎物后再進行其他處理。在實踐中，水蛭藥材經普通的超微粉碎方法粉碎后，能提高粉碎度，粒度大大減小，比表面積較普通粉大大增大。但在制備、貯存過程中，由于微粉的表面能大，粒間存在范德華力、液橋力、靜電力等，表面電荷數增多，微粉顆粒具有強烈的相互吸附、團聚傾向，使粒度增大，影響了超微粉碎的效果；同時，由于微粉與空氣中水分的結合面積增大，因而極易吸潮，流動性變差，對環境的要求也相應提高，極不方便直接制劑。
發明內容本發明的目的在于提供一種新的超微粉碎方法，以提高水蛭的粉碎效率，并簡化制劑過程。本發明目的是這樣實現的取水蛭藥材，常規粉碎過2080目篩，粉碎物加35倍量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐溫中任意一種或幾種的組合物，一起超微粉碎2060分鐘，即得。在以上技術方案中，粉碎物與液體分散介質的重量比優選為1:3.54;聚乙二醇一丙二醇一甘油一吐溫的重量比優選為48:0.2h00.5:00.5。最優方案為取水蛭，常規粉碎過50目篩，加3.52倍的聚乙二醇一400和0.28倍的丙二醇，混勻，置振動式微粉機中，超微粉碎混合50分鐘，出料，即得。在上述方案中，振動式微粉機的工作溫度可以為室溫或通冷卻水、液氮等低溫下操作。其研究過程如下(1)分散劑的種類濕法超微粉碎常用到的分散劑為水、乙醇及聚乙二醇400，本品分別以此三種溶劑分散，優選最好的分散劑。試驗方法取水蛭藥材粗粉(50目)250g，各取三份，分別加入水、乙醇、聚乙二醇400900g，各置振動式微粉機中，分別超微粉碎混合30分鐘，觀察各微粉的狀態，測定粒度(D50)、多肽的含量，考察穩定性。粒度(D50)及穩定性的考察方法同前。結果見下表。表分散劑種類考察試驗結果分散劑藥液狀況粒度(D50)穩定性水粉碎效果較差12.34分層明顯60%乙醇較為細膩12.28分層明顯聚乙二醇粉碎效果好，細膩9.44不分層注采用Winner幾9200便攜式高分辨激光粒度分析儀測定微粉粒度。以上試驗結果表明，水、乙醇、聚乙二醇400為分散劑超微粉碎的粒度D50均能達到IOim左右，達到細胞級破壁粉碎。但以水、60%乙醇作分散劑超微粉碎后，放置易分層沉降；而且水和60%乙醇均不能直接制成制劑，需要蒸去水、乙醇等溶劑，在蒸干過程中，微粉的顆粒易引起積聚，不便制劑。以聚乙二醇400為分散劑超微粉碎，聚乙二醇400的稠度適中，有表面活性劑作用，使得粉碎順利，而且可直接制劑成型，省去了工藝操作。聚乙二醇400與藥材在微粉機中高度混合，形成高度均質化的液態分散體系，能夠明顯改善微粉的表面性質，減少表面電荷數，增加微粉潤濕性、制劑的穩定性；對多肽、蛋白質類成分具有物理的和化學的修飾作用，能夠增加其溶解度和穩定性，消除機體的免疫破壞作用，明顯提高藥物的生物利用度。故本品選擇以聚乙二醇400作為分散劑。因聚乙二醇400吸水性較強，一般在以聚乙二醇400為基質的軟膠囊制劑中通常加入聚乙二醇400量8%的丙二醇以保持內外水分平衡，試驗對加入丙二醇的分散劑進行了考察。試驗方法取水蛭藥材粗粉(50目)250g，加入聚乙二醇400880g，丙二醇70g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合30分鐘，觀察微粉的狀態，測定粒度(D50)，考察穩定性。粒度(D50)及穩定性的考察方法同前。結果見下表。表聚乙二醇400中加入丙二醇試驗考察結果分散劑藥液狀況粒度(D50)穩定性聚乙二醇400中粉碎效果好，黏度適中，流動性好，細膩9.50不分層加入8%的丙二醇經過試驗篩選，以聚乙二醇400中加入8%的丙二醇為分散劑，和單獨以聚乙二醇400為分散劑的效果基本相當，故本品選擇以聚乙二醇400中加入8%的丙二醇的作為濕法超微粉碎的分散劑。(2)微粉的方式對超微粉碎的方式進行了考察。試驗方法①樣品1:取水蛭藥材粗粉(50目)250g，置振動式微粉機中超微粉碎30分鐘，即得；②樣品2:取水蛭藥材粗粉(50目)250g，置振動式微粉機中超微粉碎30分鐘，取出，再加聚乙二醇400880g，丙二醇70g，混勻，膠體磨研磨5分鐘，即得；③樣品3:取水蛭藥材粗粉(50目)250g，加聚乙二醇400880g，丙二醇70g,混勻，置振動式微粉機中超微粉碎混合30分鐘，即得。對各份樣品分別測定其粒度(D50)，濕法微粉觀察沉降情況，以此考察其穩定性。粒度(D50)測定方法同上。結果見下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>以上試驗結果表明，樣品1——干法超微粉碎，在放置過程中，由于表面能較高，帶的電荷多，易團聚，粒度變大；樣品2——先干法超微粉碎再與分散劑膠體磨研磨，其粒度較小，在放置一天后發現沉降分層現象，其穩定性較差；樣品3——藥材與分散劑一起超微粉碎混合，穩定性較好，放置過程中一直為均一的混懸液，未出現沉降情況，而且粒度較小，變化不大，故本品選擇將水蛭藥材和基質一起超微粉碎。(3)分散劑的比例對所優選的水蛭藥粉與分散劑的比例進行了考察。試驗方法①取水蛭200g，以l:2的比例加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)400g，置振動式微粉機中超微粉碎混合30分鐘，出料，即得；②取水蛭200g，以l:3的比例加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)600g，置振動式微粉機中超微粉碎混合30分鐘，出料，即得；③取水蛭200g，以l:3.8的比例加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)760g，置振動式微粉機中超微粉碎混合30分鐘，出料，即得；④取水蛭200g，以l:4.6的比例加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)920g，置振動式微粉機中超微粉碎混合30分鐘，出料，即得。通過以不同的藥粉和分散劑的比例進行濕法超微粉碎，考察藥液的性狀和粒度(|)50)。結果見下表。表基質比例的選擇試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>以上試驗結果表明，當藥粉和基質的比例為l:3.8時，藥液均勻、細膩，流動性好，放置24小時不分層；粒度較小；而藥粉和基質比例為(1:3)時藥液較為粘稠，流動性差；比例為(1:4.6)時藥液較稀，用基質量大，浪費輔料，增加成本。故本品選擇以藥粉一基質(1:3.8)的比例進行超微濕法粉碎，所得的液體分散體流動性好，穩定，能滿足制劑成型的要求。(4)超微粉碎的時間本品對濕法超微粉碎時間進行了考察。試驗方法取水蛭藥材粗粉(50目)250g，加入聚乙二醇400880g，丙二醇70g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合，分別在第20分鐘、第30分鐘、第40分鐘、第50分鐘取樣，觀察不同時間微粉的狀態，測定其粒度(D50)及多肽的含量。粒度(D50)的測定方法同上。結果見下表。表超微粉碎時間的考察試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注多肽的含量測定方法照紫外一可見分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VA)測定。對照品溶液的制備取牛血清白蛋白對照品適量，精密稱定，加水制成每lml含0.3mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取待測樣品2.0g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水80ml，超聲處理30分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻，以微孔濾膜(0.45m)濾過，即得。標準曲線的制備精密量取對照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、l.Oml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再分別加堿性銅試液l.Oml，搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林試液(取儲備液(1—16))4.0ml，搖勻，于55'C水浴中保溫5分鐘，取出，冷至室溫。以0管為空白，照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VA)，在650nm波長處測定吸收度。以牛血清白蛋白的濃度與對應的吸收度計算回歸方程。測定法精密取供試品溶液lml，照標準曲線制備項下自"分別加堿性銅試液l.Oml"起依法操作，測得樣品的吸收度，從回歸方程中計算多肽的含量。以上試驗結果表明，超微粉碎20分鐘、30分鐘的粒度D50偏大，多肽的含量稍低；粉碎40分鐘、50分鐘的粒度均較小，二者粒度測定結果及多肽的含量均相當，優選為50分鐘。上述方法制備的超微粉比水蛭常規粉可減量1/32/3的水蛭原料應用，而且療效相當。上述的水蛭的超微粉碎中間體可用于制備治療癥瘕痞塊，血瘀閉經，跌打損傷，高脂血癥或心腦血管疾病的藥物。上述超微粉碎方法可用于制備軟膠囊劑、液體硬膠囊劑。有益效果水蛭藥材中含有大量的酶類、蛋白質、多肽類成分，提取過程中易水解，或遇熱破壞，不適合提取，不耐熱，而且有報道顯示水、乙醇、乙酸乙酯等提取的部位均為有效部位，以單獨的提取溶劑提取均不能保證提取出所有的有效成分，故水蛭藥材較適宜直接粉碎入制劑，既可保證有效成分不損失，又不會使某些成分水解、破壞，而且成品率高，中間過程無損失。聚乙二醇是一種高吸水性大分子物質，蛋白質、多肽經聚乙二醇處理后，可攜載大量的水分子，從而使其體積增大510倍，原來不溶于水的蛋白質、多肽類藥物經聚乙二醇處理，不僅能提高溶解性，還可提高流動性，可保護蛋白質、多肽免遭體內免疫系統的破壞，大大延長了藥物的作用時間，還可減少藥物的毒副作用。如抗腫瘤藥物喜樹堿經聚乙二醇處理后，可大大降低毒性，并提高治療效果；再如紫杉醇經聚乙二醇處理，可延長其在體內的作用時間。藥物經聚乙二醇處理，可減少用藥量、延長藥效及降低用藥成本。故本品擬在超微粉碎的基礎上，藥材中另加入聚乙二醇400，一起在振動式微粉機中超微粉碎，高度混合，通過聚乙二醇400的溶解和助表面活性作用，使藥物粉碎的粒度更小，比表面積更大，大大改善微粉的表面性質——使表面電荷減少、氣膜消失、藥材微粉被充分的潤濕，更利于藥品的吸收利用，增加有效成分的生物利用度，更大限度的發揮療效，以便使處方藥量降低，節約藥材，降低成本。濕法超微粉碎特別適合樹脂類藥物、難溶性藥物、動物類藥物、貴細藥物、礦物類藥物等不宜提取藥物的小處方制劑。通過濕法超微粉碎，使藥物中的水溶性、脂溶性的成分與聚乙二醇400等基質一起高度混合，聚乙二醇400能幫助藥物潤濕，有助表面活性的作用，使藥物表面改性，促進水溶性成分的溶解吸收，增加脂溶性成分的溶解性，使藥物自乳化，高度混合成均一的混懸液或乳液，易于吸收利用，達到減量應用，降低成本，提高生物利用度的目的。超微濕法粉碎有以下特點(1)粉碎后形成高度均質化的液態分散體系(即廣義的乳劑)，保證了親脂性與親水性藥物的同步吸收，藥物有效成分的利用度大大增加。(2)加液濕法超微粉碎比正常干法粉碎的效率高，微粉的粒度更小，比表面積更大，微粉的表面性質大大改善(電荷減少，氣膜消失，被聚乙二醇400充分潤濕)，對腸壁的吸附作用增強，在胃腸內的停留時間延長，能進一步提高藥物的生物利用度，利于節約藥材，降低生產成本。(3)經過超微粉碎機的高頻振蕩，與藥物達到了高度混合的狀態，藥材微粒高度分散在聚乙二醇400等基質中，形成均一的混懸液或乳液，避免了顆粒間的吸附、聚集，增加了制劑的穩定性。(4)所選用的基質聚乙二醇400，為水溶性，具有助表面活性的作用，經與藥物高度混合，可以起到包覆、修飾藥物的作用，對于半衰期短，體內易流失的肽類、蛋白類藥物能起到緩釋、控釋的作用。(5)以聚乙二醇400等為基質采用超微濕法粉碎工藝制備的樣品，工藝操作簡單，無繁瑣的后續處理工作，可直接壓制成軟膠囊劑或液體硬膠囊劑。(6)以植物油、聚乙二醇400等為基質制成的一般的軟膠囊，其生物利用度均較低，粒度大(有砂粒感)，放置易析出沉淀。而采用藥物與聚乙二醇400等基質一起在振動式微粉機中高度混合，即采用濕法超微粉碎，能大大減小顆粒的粒度，能夠使藥物成分和基質處于高度混合均一的乳化狀態，達到表面改性的作用，能高度混合成均一的混懸液或乳液。由此可見，本發明取得了突出的技術效果，達到了發明目的。為進一步說明本發明所取得的有益效果，發明人從粉碎效果、超微混合物穩定性和藥理試驗三方面進行說明一、粉碎效果試驗方法①取水蛭250g，按常規方法粉碎，過80目篩，即得；②取水蛭粗粉碎，過50目篩，稱取250g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合30分鐘，出料，即得。③取水蛭粗粉碎，過50目篩，稱取250g,加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)950g，混勻，置振動式微粉機(BFM-6型貝利微粉機)中，超微粉碎混合30分鐘，出料，即得。以所得的樣品的性狀、顯微結構、粒度(D50)、溶出度、穩定性進行考察。試驗結果常規粉碎的中心粒徑為150180um(可過篩檢查)，色澤不均一，有砂粒感；普通超微粉碎的粉末細膩均一，粒度D50為11.45咖，但易結塊；加液濕法超微粉碎中心粒徑為8.70um,細膩均勻，流動性好，而且穩定性較好。結果見下表。表比較三種粉碎方法的考察結果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>二、制劑穩定性試驗目的考察加液濕法超微粉碎所得成品的穩定性試驗方法將加液濕法超微粉碎所得的樣品壓制成軟膠囊，采用室溫留樣觀察法測定樣品2個月內的穩定性，觀察沉降情況及測定粒度。試驗結果加液濕法超微粉碎所得混合物，穩定性好，無分層現象，粒度基本沒有增大，可初歩確定以該方法解決留粉藥材制備軟膠囊易分層、沉淀等長期困擾的難題，結果見下表。表加液超微粉碎軟膠囊穩定性考察<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>三、藥理試驗驗證為進一步驗證本發明在為了證明本發明藥物制劑在提高生物利用度，節約藥材、提高藥效方面的貢獻，發明人依據其功能主治，進行了動物對比藥效學實驗。1、試驗準備(1)藥物依本發明最優方案得到的水蛭微粉混合物(以下稱濕法水蛭微粉)；活血通脈膠囊(經常規粉碎后的水蛭)。息隱(米非司酮)片，由上海華聯制藥有限公司提供，批號050314。總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)測定試劑盒，批號分別為011M042、010M050、012L028,均由上海名典生物工程有限公司提供。ADP，批號11003，TBO生物公司。前列腺素F2a測定試劑盒(PGF2a)，美國Sigma公司。羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，由北京化學試劑公司提供，批號20060628。戊巴比妥鈉，北京化學試劑公司，批號20061019。肝素鈉注射液，天津市生物化學制藥廠，批號20060506，規格1.25萬單位/2ml。己烯雌酚，批號0512071，天津金耀氨基酸有限公司，規格0.5mg/mL。(2)儀器QX-200全血血小板聚集儀，上海醫大儀器廠產品。Spctrumlab53power紫外分光光度計，上海棱光技術有限公司產品。WX-753B型多部位微循環顯微鏡。G)動物Wistar大鼠和昆明種小鼠，均為SPF級，均由華中科技大學同濟醫學院實驗動物學部提供，許可證號均為SCXK(鄂)2004-0007。2、濕法水蛭微粉抗大鼠靜脈血栓形成的作用(1)方法取Wistar大鼠50只，雄性，200300g，按體重隨機分為5組，每組10只。①濕法水蛭微粉低劑量組，0.10g水蛭/kg;②濕法水蛭微粉中劑量組，0.13g水蛭/kg;③濕法水蛭微粉高劑量組，0.17g水蛭/kg;對照組，活血通脈膠囊0.2g水蛭/kg;⑤空白對照組，灌服等體積的0.5%CMC-Na溶液。灌胃每天1次，連續7天。末次給藥后lh，各組動物腹腔注射3.5%戊巴比妥鈉麻醉，剖腹分離下腔靜脈，于左腎靜脈下穿一絲線結扎下腔靜脈管，造成淤血，關閉腹腔。6h后，用內徑為lmm的玻璃毛細管插入鼠內眥靜脈叢取血，至毛細管血柱達5mm，每隔30s折斷毛細管一段，檢查有無出現凝血絲，計算毛細管采血到出現血凝絲時間，即為凝血時間。再次打開腹腔，于結扎下方2cm處夾閉血管，縱行剖開，取出血栓，記錄血栓有無并稱重。(2)結果結果表明，微粉各劑量組均可明顯延長凝血時間，降低血栓濕重，與空白對照組比較具有顯著性差異；微粉的低劑量組與活血通脈膠囊組的效果相當，二者無顯著性差異。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強于活血通脈膠囊。結果見下表。表濕法水蛭微粉對大鼠靜脈血栓形成的影響(x士s，n=10)組別劑量(g水蛭/kg)凝血時間(s)血栓濕重(mg)微粉低劑量組0.1096.00±29.39*17.80±5.02***微粉中劑量組0.13108.00±37.95**14.34±3.23***微粉高劑量組0.17123.00±35.92***13.16±3.15***活血通脈膠囊組0.2099.00士40.12^14.96±3.71***空白對照組—66.00±30.9825.31±4.31與空白對照組比較(t檢驗)，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。3、濕法水蛭微粉對大鼠創傷性瘀斑的治療作用(1)方法取Wistar大鼠50只，雌雄各半，200士20g，背部脫毛5cmx4cm，24h后用老虎鉗夾大鼠脫毛區皮膚，以造成大鼠皮下出血為度，面積4cmx3cm。12h后隨機分為5組，每組10只①濕法水蛭微粉低劑量組，0.10g7jC蛭/kg;②濕法水蛭微粉中劑量組，0.13g水蛭/kg;③濕法水蛭微粉高劑量組，0.17g水蛭/kg;④對照組，活血通脈膠囊0.2g水蛭/kg;空白對照組，灌服等體積的0.5n/。CMC-Na溶液。灌胃每天1次，連續5天。每天給藥時用觸摸和肉眼觀察腫脹和瘀斑消退情況，并測量剩余面積，按下表進行記分。表創傷性瘀斑的評分標準<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>與空白對照組比較(t檢驗)，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。4、濕法水蛭微粉對小鼠急性高脂血癥的影響(l)方法取雄性小鼠120只，20±2g，按體重性別隨機分為6組，每組20只①濕法水蛭微粉低劑量組，0.20g水蛭/kg;②濕法水蛭微粉中劑量組，0.27g水蛭/kg;③濕法水蛭微粉高劑量組，0.33g水蛭/kg;④對照組，活血通脈膠囊0.40g水蛭/kg;⑤空白對照組，灌服等體積的0.5n/。CMC-Na溶液。正常組，同體積的生理鹽水。灌胃每天1次，連續7天。末次給藥后2h，除正常組外，其它各組動物腹腔注射75X新鮮蛋黃乳劑20ml/kg，禁食過夜。10h后各組給相應藥物1次，再2h后每組取其中的IO只動物檢測血小板聚集功能，摘眼球取血，50ul肝素鈉溶液抗凝，在全血血小板聚集儀上，測定給誘導劑ADP5ul，lmin和5min的血小板聚集率；另10只摘眼球取血，3000r/min離心10min，分離血清，檢測總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平。(2)結果結果表明，微粉各劑量組均可明顯降低總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白水平，與空白對照組比較具有顯著性差異；微粉各劑量組能夠明顯抑制急性高脂血癥小鼠血小板聚集功能，降低血小板聚集率，從而起到防治血栓形成的作用。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強于活血通脈膠囊。結果見下表。表濕法水蛭微粉對小鼠急性高脂血癥的影響(X±s，n=i0)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與空白對照組比較(t檢驗)，*P<0.05,***P<0.001。表濕法水蛭微粉對急性高脂血癥小鼠血小板聚集功能的影響(X±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與空白對照組比較(t檢驗)，***P<0.001。5、濕法水蛭微粉對大鼠子宮微循環障礙的影響(1)方法取Wistar大鼠50只，雌性，200±20g，按體重隨機分為5組，每組10只①濕法水蛭微粉低劑量組(含水蛭1.00%);濕法水蛭微粉中劑量組(含水蛭1.33%);③濕法水蛭微粉高劑量組(含水蛭1.67%);對照組，活血通脈膠囊(含水蛭2.00%);⑤空白對照組，灌服等體積的0.5。/。CMC-Na溶液。各組動物腹腔注射3.5%戊巴比妥鈉麻醉，仰臥固定于解剖臺上，沿腹中線下腹壁切開2cm，拉出一側子宮及其韌帶，固定于盛有10ml生理鹽水的微循環恒溫浴槽中，制備完畢后穩定20min，然后用多部位微循環顯微鏡在內45度角反射光源照射下，選擇并固定視野，用標尺測量一、二級微動脈(A)及微靜脈(V)口徑，按七級標準觀察血液流態及毛細血管網交點數目，隨即向浴槽內滴加0.25%的PGF2a，觀察記錄子宮韌帶動脈及微靜脈口徑、血流速度及毛細血管網交點數目，然后分別向浴槽內滴入相應濃度的藥品0.21111，觀察給藥后的各項指標變化并記錄。(2)結果結果表明，微粉各劑量組均能明顯增加微動脈及微靜脈口徑、血流速度及毛細血管網交點數目，與給藥前比較有顯著性差異。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強于活血通脈膠囊。結果見下表。表濕法水蛭微粉對大鼠子宮血管口徑的影響(X±s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表濕法水蛭微粉對大鼠子宮血流速度和毛細血管網交點數的影響(X±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>加藥后與加PGF2a后比較(配對t檢驗)，*P<0.05。6、濕法水蛭微粉對大鼠子宮肌瘤的抑制作用(1)方法取Wistar大鼠240只，雌性，200-250g，按體重隨機分為6組，每組40只①濕法水蛭微粉低劑量組，0.10g水蛭/kg;②濕法水蛭微粉中劑量組，0.13g水蛭/kg;③濕法水蛭微粉高劑量組，0.17g水蛭/kg;對照組，活血通脈膠囊0.2g水蛭/kg;⑤陽性藥組，息隱片0.07g/kg;⑥空白對照組，灌服等體積的0.5。/。CMC-Na溶液。灌胃每天1次，連續7天。各組肌肉注射雌激素，次日在給激素的同時分5d、10d、15d、20d各組處死10只，用游標卡尺測量子宮長度和直徑。(2)結果結果表明，微粉各劑量組均可明顯減少子宮肌瘤模型大鼠的子宮長度及直徑，與空白對照組比較具有顯著性差異。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強于活血通脈膠囊。結果見下表。表濕法水蛭微粉對大鼠子宮長度的影響(X±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表濕法水蛭微粉對大鼠子宮直徑的影響(X±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>與空白對照組比較(t檢驗)，*P<0.05，***P<0.001。結論在劑量較低的情況下，濕法水蛭微粉依然可有效延長凝血時間、抗血栓形成、減輕創傷性瘀斑的嚴重程度，能降低高脂血癥動物模型的膽固醇和甘油三酯的水平，抑制急性高脂血癥小鼠血小板聚集功能，降低血小板聚集率；可增加子宮微動脈靜脈口徑、血流速度及毛細血管網交點數目，改善子宮微循環，并能抑制子宮肌瘤，表明濕法水蛭微粉具有活血化瘀、通脈止痛、降血脂、防治血栓形成的作用；可用于治療跌打損傷、治療癥瘕痞塊及血瘀經閉。濕法水蛭微粉低劑量(大鼠0.10g水蛭/kg、小鼠0.20g水蛭/kg)與活血通脈膠囊(大鼠0,20g水蛭/kg、小鼠0.40g水蛭/kg)比較作用相當，劑量是活血通脈膠囊的1/2，兩組比較無顯著性差異。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強于活血通脈膠囊。具體實施例方式下面列舉實施例，進一步說明本發明，各實施例僅用于說明本發明，并不限制本發明實施例1取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過50目篩；取聚乙二醇400440g，丙二醇35g，混勻，制成基質，加入水蛭粉125g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合50分鐘，出料，制得中心粒徑小于25um的超微混合物，將其直接用于壓制軟膠囊。實施例2取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過50目篩；取聚乙二醇400345g，丙二醇30g，吐溫70g,混勻，制成基質，加入水蛭粉125g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合60分鐘，出料，制得中心粒徑小于25Pm的超微混合物，可直接用于灌制液體硬膠囊。實施例3取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過20目篩；取聚乙二醇400400g，丙二醇100g，混勻，制成基質，加入水蛭粉125g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合40分鐘，出料，制得中心粒徑小于25pm的超微混合物，即得。實施例4取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過80目篩；取聚乙二醇400400g，丙二醇25g，甘油25g,吐溫25g混勻，制成基質，加入水蛭粉125g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合30分鐘，出料，制得中心粒徑小于25um的超微混合物，即得。實施例5取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過20目篩；取聚乙二醇400440g，丙二醇20g，吐溫15g，混勻，制成基質，加入水蛭粉125g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合50分鐘，出料，制得中心粒徑小于25ym的超微混合物，即得。實施例6取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過60目篩；取聚乙二醇400430g，丙二醇25g，甘油10g，吐溫10g，混勻，制成基質，加入水蛭粉125g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合60分鐘，出料，制得中心粒徑小于25um的超微混合物，即得。實施例7取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過30目篩；取聚乙二醇400440g，丙二醇25g，甘油10g,混勻，制成基質，加入水蛭粉125g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合40分鐘，出料，制得中心粒徑小于25um的超微混合物，即得。實施例8取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過80目篩；取聚乙二醇400440g，甘油25g，吐溫10g，混勻，制成基質，加入水蛭粉125g，置振動式微粉機中，超微粉碎混合50分鐘，出料，制得中心粒徑小于25txm的超微混合物，即得。權利要求1、一種新的液態中藥制劑的中間體，其特征在于該中間體是按如下方法制得的取水蛭藥材，常規粉碎過20～80目篩，粉碎物加3～5倍量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐溫中任意一種或幾種的組合物，一起超微粉碎20～60分鐘，即得。2、根據權利要求1所述的制劑中間體，其特征在于粉碎物與液體分散介質的重量比為1:3.54。3、根據權利要求l所述的制劑中間體，其特征在于聚乙二醇一丙二醇一甘油一吐溫的重量比為48:0.21:00.5:00.5。4、根據權利要求l、2或3所述的制劑中間體，其特征在于是按如下方法制得的取水蛭，常規粉碎過50目篩，加3.52倍的聚乙二醇一400和0.28倍的丙二醇，混勻，置振動式微粉機中，超微粉碎混合50分鐘，出料，即得。5、一種制備如權利要求l所述液態中藥制劑中間體的方法，其特征在于該方法為取水蛭藥材，常規粉碎過2080目篩，粉碎物加35倍量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐溫中任意一種或幾種的組合物，一起超微粉碎2060分鐘，即得。6、根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于粉碎物與液體分散介質的重量比為1:3.54。7、根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于聚乙二醇一丙二醇一甘油一吐溫的重量比為4~8:0.21:00.5:00.5。8、根據權利要求5、6或7所述的制備方法，其特征在于該方法為取水蛭，常規粉碎過50目篩，加3.52倍的聚乙二醇一400和0.28倍的丙二醇，混勻，置振動式微粉機中，超微粉碎混合4050分鐘，出料，即得。9、權利要求1至4中任一項在制備用于治療癥瘕痞塊、血瘀閉經、跌打損傷、高脂血癥或心腦血管疾病的藥物中的應用。10、權利要求5至8中任一項方法在制備軟膠囊劑、液體硬膠囊劑、口服乳劑及相關原料藥中的應用。全文摘要本發明公開了一種液態中藥制劑的中間體及其制備方法和用途，包括一種單味水蛭超微粉制劑的粉碎方法，特別是一種濕法超微粉碎技術制備水蛭超微粉制劑的粉碎方法。該方法是將水蛭藥材常規粉碎后再加適量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐溫中任意一種或幾種的組合物，一起超微粉碎后得到所需的制劑中間產物，再將此中間產物制成所需劑型。應用該方法可以提高粉碎效率，降低產品中的原料用量。文檔編號A61K35/62GK101185658SQ20071017550公開日2008年5月28日申請日期2007年9月30日優先權日2007年9月30日發明者劉國飛,周小明申請人:北京凱瑞創新醫藥科技有限公司