一種促瘺管修復材料及其制備方法
【專利摘要】本發明提供了一種促瘺管修復材料及其制備方法，該促瘺管修復材料包括內芯和包裹在內芯表面的外膜；促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形；所述內芯包括絲蛋白；內芯具有海綿結構；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。該修復材料為圓柱形或圓臺形，與瘺管形狀相似，利于置于瘺管中，一次性植入瘺管中，外膜包括絲蛋白和丙三醇，具有良好的生物相容性和生物降解性，能被人體細胞吸收降解，無需二次手術取出；外膜具有引流作用；內芯包括絲蛋白，具有海綿結構，作為生物支架，具有修復作用，因此修復材料具有修復作用且使用方便。該修復材料能夠誘導組織再生和重塑，促進肛瘺愈合；具有優良的力學性能和較高孔隙率；采用該修復材料具有復發率低、炎癥感染率低。
【專利說明】一種促瘺管修復材料及其制備方法

【技術領域】
[0001]本發明屬于瘺管修復材料【技術領域】，尤其涉及一種促瘺管修復材料及其制備方法。

【背景技術】
[0002]肛瘺又稱“肛管直腸瘺”，一般由原發性內口、瘺道和繼發性外口三部分組成，是肛腸外科領域中常見的多發疾病之一。多數學者認為絕大多數肛瘺是繼發于肛腺一般化膿性感染所引起的肛門直腸周圍膿腫，膿腫破潰后不愈而形成瘺道；少數由特異性感染所致，如結核、克羅恩病、潰瘍性結腸炎的腸外表現等。臨床上肛瘺常見的癥狀是肛門部腫脹、疼痛和排出膿液。由于其內口和原發病灶的影響，加之多次重復感染使瘺道內炎性肉芽組織增生，迂曲狹窄，引流不暢，導致肛瘺常反復發作，而經久不愈的肛瘺有發生癌變的可能。肛瘺的特點是不能自愈，治療主要依靠外科手術，包括肛瘺切除術、掛線療法、瘺道曠置引流術等手術方式。治療肛瘺的原則是將瘺道切開，形成敞開的創面，促使愈合。
[0003]目前，治療肛瘺時常用的引流材料有橡膠條、紗布條和橡膠管等，這些引流材料表面粗糙或材質偏硬，需要不斷反復放入病人體內，置入后常給患者增加痛苦和不便，而且應用這些引流材料需要二次手術取出；然后再注入纖維蛋白膠，以腸線縫合關閉兩端瘺口，使得治療過程較為復雜。


【發明內容】

[0004]有鑒于此，本發明的目的在于提供一種促瘺管修復材料及其制備方法，本發明提供的促瘺管修復材料具有修復作用，且使用方便。
[0005]本發明提供了一種促瘺管修復材料，包括內芯和包裹在所述內芯表面的外膜；
[0006]所述促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形；
[0007]所述內芯包括絲蛋白；所述內芯具有海綿結構；
[0008]所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。
[0009]優選地，所述促瘺管修復材料的縱軸長度為5cm?15cm ；
[0010]所述促瘺管修復材料的頂面直徑為0.5cm?Icm ；
[0011]所述促瘺管修復材料的底面直徑為0.1cm?0.4cm ；
[0012]所述外膜的厚度為0.03mm?0.1mm。
[0013]本發明提供了一種促瘺管修復材料的制備方法，包括以下步驟:
[0014]將絲蛋白溶液第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液；
[0015]將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜；
[0016]將絲蛋白溶液第二濃縮后稀釋，得到絲蛋白內芯溶液；
[0017]將所述絲蛋白內芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內芯；所述內芯具有海綿結構；
[0018]將所述內芯和外膜復合，得到促瘺管修復材料；
[0019]所述促瘺管修復材料包括內芯和包裹在所述內芯表面的外膜；
[0020]所述促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形。
[0021]優選地，所述促瘺管修復材料的縱軸長度為5cm?15cm ;
[0022]所述促瘺管修復材料的頂面直徑為0.5cm?Icm ；
[0023]所述促瘺管修復材料的底面直徑為0.1cm?0.4cm ；
[0024]所述外膜的厚度為0.03mm?0.1mm。
[0025]優選地，所述絲蛋白溶液的質量分數為6%?10%。
[0026]優選地，所述絲蛋白溶液第一濃縮至質量分數為15%?40% ；
[0027]所述絲蛋白溶液第二濃縮至質量分數為10%?40%。
[0028]優選地，所述丙三醇和蠶絲的質量比為20?80:100。
[0029]優選地，所述絲蛋白溶液第一濃縮的溫度為40°C?90°C ;
[0030]所述絲蛋白溶液第一濃縮的時間為2天?5天。
[0031]優選地，所述絲蛋白溶液第二濃縮的溫度為55°C?65°C ;
[0032]所述絲蛋白溶液第二濃縮的時間為2.5天?3.5天。
[0033]優選地，所述絲蛋白內芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后還包括:將干燥得到的內芯半成品進行醇處理或水處理，得到內芯。
[0034]本發明提供了一種促瘺管修復材料，包括內芯和包裹在內芯表面的外膜；所述促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形；所述內芯包括絲蛋白；所述內芯具有海綿結構；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。本發明提供的促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形，與瘺管形狀相似，有利于置于瘺管中，其一次性植入瘺管中，外膜包括絲蛋白和丙三醇，具有良好的生物相容性和生物降解性，可以被人體細胞吸收降解，無需二次手術取出；所述外膜具有引流作用；所述內芯包括絲蛋白，具有海綿結構，內芯作為生物支架，具有修復作用，因此，本發明提供的促瘺管修復材料具有修復作用，且使用方便。另外，本發明提供的促瘺管修復材料能夠誘導組織再生和重塑，有效地促進肛瘺的愈合；該促瘺修復材料具有優良的力學性能和較高的孔隙率，使其適用于臨床；采用本發明提供的促瘺管修復材料具有復發率低、炎癥感染率低。實驗結果表明:本發明提供的促瘺管修復材料的抗縫線拉力> 3N/針；所述促瘺管修復材料的孔隙率大于90%。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0035]圖1為本發明實施例1制備的海綿材料的原子力顯微鏡圖；
[0036]圖2為本發明實施例1制備的內芯的掃描電鏡圖；
[0037]圖3為本發明實施例1的HE染色7天時的結果；
[0038]圖4為本發明實施例1的HE染色14天時的結果；
[0039]圖5為本發明實施例1的HE染色30天時的結果；
[0040]圖6為本發明實施例1的免疫組化切片14天時的結果；
[0041]圖7為本發明實施例1的免疫組化切片30天時的結果。

【具體實施方式】
[0042]本發明提供了一種促瘺管修復材料，包括內芯和包裹在內芯表面的外膜；
[0043]所述促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形；
[0044]所述內芯包括絲蛋白；所述內芯具有海綿結構；
[0045]所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。
[0046]本發明提供了一種促瘺管修復材料，包括外膜。在本發明中，所述外膜的厚度優選為0.03mm?0.1mm，優選為0.05mm?0.09mm。在本發明中，所述外膜的制備方法優選包括以下步驟:
[0047]將絲蛋白溶液進行第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液；
[0048]將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜。
[0049]本發明將絲蛋白溶液進行第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液。在本發明中，所述絲蛋白溶液優選將蠶絲依次進行脫膠、溶解和透析，得到絲蛋白溶液。本發明對所述蠶絲的來源沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的蠶絲即可。在本發明中，所述蠶絲選自江浙地區的家蠶成繭。本發明對所述脫膠的方法沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的脫膠技術方案即可。在本發明中，所述脫膠即脫盡蠶絲外圍的絲膠。本發明優選采用Na2CO3溶液進行脫膠；所述Na 2C03溶液的質量濃度為0.04%?0.06% ;所述Na2CO3溶液中碳酸鈉溶液的體積和蠶絲的質量比優選為(5.5?6.5)L?150g。本發明優選將Na2CO3溶液煮沸進行脫膠；優選煮沸25min?35min，更優選為30min。本發明優選將脫膠過程重復3次。本發明優選將脫膠產物進行洗滌5?7次。本發明優選將洗滌產物烘干，得到脫膠絲蛋白。
[0050]完成烘干后，本發明將得到的脫膠絲蛋白進行溶解和透析，得到絲蛋白溶液。本發明優選采用三元溶液或溴化鋰溶液進行溶解；所述三元溶液由氯化鈣、水和乙醇混合制得；所述氯化鈣、水和乙醇的物質的量比優選為1: (7?9): (1.5?2.5)，更優選為1:8:2 ;所述脫膠絲蛋白的質量和三元溶液的體積比優選為Ig: (8?12)mL，更優選為lg:10mL。在本發明中，所述溴化鋰溶液的摩爾濃度優選為9mol/L?9.3mol/Lo在本發明中，所述溶解的時間優選為4h?6h。本發明優選采用截留分子量為3500的透析袋進行透析；所述透析的時間為2.5天?3.5天，透析過程中優選每2h換一次水。本發明優選將透析后得到的溶液進行離心；所述離心優選采用本領域技術人員熟知的離心機進行離心；所述離心的速度優選為8500rpm?9500rpm，更優選為9000rpm ;所述離心的時間優選為15min?25min，更優選為20min ;本發明優選進行離心兩次。得到的絲蛋白溶液的質量分數優選為6%?10%。
[0051]本發明優選將絲蛋白溶液第一濃縮至質量分數15 %?40 %，更優選為20 %?35%。本發明優選將絲蛋白溶液置于烘箱中或置于通風處進行第一濃縮；所述第一濃縮的溫度優選為40°C?90°C，更優選為50°C?85°C ;所述第一濃縮的時間優選為2天?5天，更優選為3天或5天。完成第一濃縮后，本發明將得到的第一濃縮產物和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液。本發明優選在磁力攪拌器的攪拌下進行混合。在本發明中，所述丙三醇和蠶絲的質量比為20?80:100 ;更優選為30?70:100 ;所述丙三醇和第一濃縮產物混合的時間優選為2h?24h，更優選為5h?20h。
[0052]得到絲蛋白外膜溶液后，本發明將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜。本發明優選采用外膜模具將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型。在本發明中，所述外膜模具優選為實心圓柱形狀物或實心圓臺形狀物；所述外膜模具的材質優選為316不銹鋼或聚四氟乙烯。在本發明中，所述外膜模具的縱軸長度優選為5cm?15cm，頂面直徑優選為0.5cm?1cm，底面直徑優選為0.1cm?0.4cm。本發明優選采用外膜模具蘸取絲蛋白外膜溶液，干燥后取下，得到外膜。在本發明中，外膜模具上蘸有的絲蛋白外膜溶液優選在50°C?70°C的烘箱中進行干燥；外膜模具上蘸有的絲蛋白外膜溶液干燥的時間優選為8h?48h，更優選為24h?48h。在本發明中，所述外膜的厚度優選為0.03mm?0.1mm,更優選為0.05mm ?0.09mm。
[0053]本發明提供的促瘺管修復材料包括內芯，其外表面包裹有外膜。在本發明中，所述內芯包括絲蛋白；所述內芯具有海綿結構。在本發明中，所述內芯具有海綿結構，內芯作為生物支架，能夠誘導組織再生和重塑，對瘺管具有修復作用；所述內芯為圓柱形或圓臺形。
[0054]在本發明中，所述內芯的制備方法包括以下步驟:
[0055]將絲蛋白溶液第二濃縮和稀釋，得到絲蛋白內芯溶液；
[0056]將所述絲蛋白內芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內芯；所述內芯具有海綿結構。
[0057]本發明將所述絲蛋白溶液第二濃縮和稀釋，得到絲蛋白內芯溶液。在本發明中，制備內芯時所用的絲蛋白溶液與上述技術方案所述絲蛋白溶液一致，在此不再贅述。本發明優選將絲蛋白溶液第二濃縮至質量分數10%?40%，更優選為15%?35%。本發明優選將絲蛋白溶液置于烘箱中進行第二濃縮；所述第二濃縮的溫度優選為55°C?65°C，更優選為60°C ;所述第二濃縮的時間優選為2.5天?3.5天，更優選為3天。完成第二濃縮后，本發明將第二濃縮產物稀釋，得到絲蛋白內芯溶液；所述絲蛋白內芯溶液的質量分數優選為2%?6%。本發明優選在絲蛋白內芯溶液中加入等體積的明膠；所述明膠的質量分數優選為0.8%?1.2% ;所述明膠可用于組織修復、替代、止血，具有生物相容性和可降解性。
[0058]得到絲蛋白溶液后，本發明將所述絲蛋白內芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內芯，所述內芯具有海綿結構。本發明優選采用內芯模具將所述絲蛋白內芯溶液注塑成型。在本發明中，所述內芯模具包括空心管狀物和底座；所述空心管狀物和底座相連接；所述空心管狀物為圓柱形或圓臺形。所述空心管狀物插入底座的凹槽中，用來固定空心管狀物。本發明將絲蛋白內芯溶液置于內芯模具中后進行冷凍。本發明優選在-20°C下進行冷凍；優選冷凍4h?48h，更優選冷凍12h?40h。冷凍結束后，本發明將冷凍產物進行干燥，得到內芯。本發明優選采用真空干燥機進行干燥。在本發明中，冷凍產物進行干燥的溫度優選為4h?25h，更優選為15h?25h ;冷凍產物進行干燥的時間優選為48h?72h，更優選為68h?72h。
[0059]干燥后，本發明將所述絲蛋白內芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后優選還包括:將干燥得到的內芯半成品進行醇處理或水處理。在本發明中，醇處理時所采用的醇類化合物優選包括甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的一種或多種。在本發明中，所述水處理的方式優選為真空水蒸氣處理；所述醇處理的方式優選為浸泡或真空醇蒸汽處理。在本發明的實施例中，本發明采用真空水蒸氣處理干燥后的冷凍產物；優選真空水處理0.5h?24h。本發明采用真空醇蒸汽處理干燥后的冷凍產物；優選真空醇蒸氣處理0.5h?24h。本發明將干燥后的冷凍產物浸泡在醇類化合物中；優選浸泡30min?12h。
[0060]在本發明中，所述促瘺管修復材料的縱軸長度優選為5cm?15cm，更優選為8cm?12cm ；
[0061]所述促瘺管修復材料的頂面直徑優選為0.5cm?1cm，更優選為0.6cm?0.9cm ;
[0062]所述促瘺管修復材料的底面直徑優選為0.1cm?0.4cm，更優選為0.15cm?
0.35cm。
[0063]本發明提供了一種促瘺管修復材料的制備方法，包括以下步驟:
[0064]將絲蛋白溶液第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液；
[0065]將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜；
[0066]將絲蛋白溶液第二濃縮后稀釋，得到絲蛋白內芯溶液；
[0067]將所述絲蛋白內芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內芯；所述內芯具有海綿結構；
[0068]將所述內芯和外膜復合，得到促瘺管修復材料；
[0069]所述促瘺管修復材料包括內芯和包裹在所述內芯表面的外膜；
[0070]所述促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形。
[0071]在本發明中，所述絲蛋白溶液和上述技術方案所述絲蛋白溶液的種類和來源一致，在此不再贅述。
[0072]在本發明中，所述外膜和內芯的制備過程與上述技術方案所述外膜和內芯的制備過程一致，在此不再贅述。
[0073]本發明將所述內芯和外膜復合，得到促瘺管修復材料。在本發明中，所述內芯和外膜組合的方式優選為牽引或擠壓。本發明對所述牽引或擠壓的方法沒有特殊的限制，采用本領域技術人員熟知的牽引或擠壓的技術方案即可。
[0074]本發明以大鼠作為試驗動物，其為上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供的SD大鼠；本發明通過建立簡單動物模型:從大鼠臀部開始貫穿直達以上肌肉層為止，制得試驗大鼠。本發明采用本領域技術人員熟知的HE染色法和免疫組化切片對試驗大鼠的組織細胞進行炎癥感染反應的測試。測試結果表明:巨噬細胞和中性粒細胞數量明顯減少50%以上；術后兩個周到一個月:應用此修復材料的組織炎癥反應消失，開始長入血管和膠原纖維，成纖維細胞與肉芽組織增殖與迀移。
[0075]本發明提供了一種促瘺管修復材料，包括內芯和包裹在內芯表面的外膜；所述促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形；所述內芯包括絲蛋白；所述內芯具有海綿結構；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。本發明提供的促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形，與瘺管形狀相似，有利于置于瘺管中，其一次性植入瘺管中，外膜具有良好的生物相容性和生物降解性，可以被人體細胞吸收降解，無需二次手術取出；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇，具有管狀結構，具有引流作用；所述內芯包括絲蛋白，具有海綿結構，內芯作為生物支架，具有修復作用，因此，本發明提供的促瘺管修復材料具有修復作用，且使用方便。另外，本發明提供的促瘺管修復材料具有可控的生物降解性和優良的生物相容性，誘導組織再生和重塑，有效地促進肛瘺的愈合；該促瘺修復材料具有優良的力學性能和較高的孔隙率，使其適用于臨床；采用本發明提供的促瘺管修復材料具有復發率低、炎癥感染率低。實驗結果表明:本發明提供的促瘺管修復材料的抗縫線拉力> 3N/針；所述促瘺管修復材料的孔隙率大于90%。
[0076]為了進一步說明本發明，下面結合實施例對本發明提供的一種促瘺管修復材料及其制備方法進行詳細地描述，但不能將它們理解為對本發明保護范圍的限定。
[0077]實施例1
[0078]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結束后洗滌7次，重復處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白；
[0079]稱取1g脫膠絲素蛋白溶于10mL三元溶液中(CaCl2/水/乙醇摩爾比為1:8:2配成)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時換一次水，透析后的溶液高速離心機9000rpm轉速下離心20min，兩次；得到絲蛋白溶液，其質量分數為6% ;然后將溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質量分數達到20%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質量比20%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲蛋白外膜溶液；
[0080]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取上述絲蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中待干燥后取下，得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜，該外膜的抗縫線拉力> 3N/針，具有良好的力學性能。
[0081]稱取1g脫膠絲素蛋白溶于10mL三元溶液中(CaCl2/水/乙醇摩爾比為1:8:2配成)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時換一次水，得到絲蛋白溶液，其濃度為6%，然后將溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質量分數達到20 %，用去離子水稀釋到2 %，得到絲蛋白內芯溶液；
[0082]利用定制的合金圓臺形模具，模具的長度為12cm，頂端直徑為0.5cm，低端直徑為
0.3cm，將上述稀釋后的絲蛋白內芯溶液注入到此模具中，在-20°C的低溫條件下經過24小時的冷凍過程，進行冷凍處理獲得冷凍體；對冷凍結晶體進行冷凍處理48小時，得到成孔性良好海綿材料，其原子力顯微鏡觀察見圖1，圖1為本發明實施例1制備的海綿材料的原子力顯微鏡圖；由圖1可以看出:此海綿材料中含有較多納米線，納米結構的形成有利于提高支架的成孔率。
[0083]將此絲蛋白海綿材料放入底部加有50%甲醇的真空干燥器中，蒸汽處理4小時，然后在去離子水中浸泡8小時，將甲醇浸泡出來，再次冷凍干燥即得到二級結構穩定的絲蛋白海綿材料，即內芯；
[0084]本發明對所得的內芯進行掃描電鏡分析，如圖2所示，圖2為本發明實施例1制備的內芯的掃描電鏡圖；由圖2可以看出:支架成孔性與孔連接性良好，孔徑大小在200 μπι?250 μm，優良的多孔結構有利于細胞的生長與組織的再生。
[0085]將上述內芯夾持住，通過牽引作用引入外膜中，完成復合，得到促瘺管修復材料。
[0086]本發明實施例1制備的促瘺管修復材料透明柔軟，同時結合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術取出，使用方便。
[0087]本發明采用HE染色法和免疫組化切片進行試驗，HE染色法測試結果如圖3、圖4和圖5所示，圖3為本發明實施例1的HE染色7天時的結果；圖4為本發明實施例1的HE染色14天時的結果；圖5為本發明實施例1的HE染色30天時的結果。免疫組化切片的測試結果如圖6和圖7所示，圖6為本發明實施例1的免疫組化切片14天時的結果，圖7為本發明實施例1的免疫組化切片30天時的結果。
[0088]HE染色法和免疫組化切片測試結果表明:巨噬細胞和中性粒細胞數量明顯減少50%以上；術后兩個周到一個月:應用此材料的組織炎癥反應消失，開始長入血管和膠原纖維，成纖維細胞與肉芽組織增殖與迀移。
[0089]實施例2
[0090]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結束后洗滌6次，重復處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白；
[0091]將15g脫膠絲素蛋白溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理4小時，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時換一次水，去除溶液中的LiBr，透析后的溶液高速離心機9000rpm轉速下離心20min，兩次，得到6%的絲蛋白溶液；
[0092]把上述絲素蛋白溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質量分數達到30%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質量比40%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲蛋白外膜溶液；
[0093]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取絲蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中待干燥后取下，得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜，該外膜具有良好的力學性能。
[0094]上述濃縮后的絲蛋白溶液，用去離子水稀釋到2%，利用定制的合金的圓錐形模具，模具的長度為12cm，頂端直徑為0.5cm，底端直徑為0.3cm，將上述稀釋后的絲蛋白溶液注入到此模具中，在-20°C的低溫條件下冷凍12小時，然后利用真空干燥機真空干燥處理48小時，得到成孔性良好的海綿材料；
[0095]將上述海綿材料放入底部加有水的真空干燥器中，真空處理6小時，獲得不溶于水的絲蛋白促瘺管修復的生物海綿材料，即內芯；
[0096]將上述絲蛋白海綿材料夾持住，通過擠壓作用引入外膜中，完成復合，得到促瘺管修復材料。
[0097]本發明實施例2制備的促瘺管修復材料透明柔軟，同時結合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術取出，具有修復作用，且使用方便。
[0098]實施例3
[0099]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結束后洗滌7次，重復處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的絲素蛋白；
[0100]稱取經脫膠處理后的蠶絲15g溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理4小時；然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時換一次水，去除溶液中的LiBr，透析后的溶液高速離心機9000rpm轉速下離心20min，兩次，從而得到6%的絲蛋白溶液，把上述絲素蛋白溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質量分數達到30%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質量比60%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲素蛋白外膜溶液；
[0101]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取絲素蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中待干燥后取下，得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜，具有良好的力學性能，其縫線拉力>3N/針。
[0102]利用定制的合金的圓錐形模具，模具的長度為12cm，頂端直徑為0.5cm，底端直徑為0.3cm,將上述濃縮液稀釋到5%后注入到此模具中，在-20°C的低溫條件下冷凍24小時，然后利用真空干燥機真空干燥處理72小時，得到成孔性良好的海綿材料；
[0103]將上述絲蛋白海綿材料浸泡在80%的乙醇溶液中半小時，得到不溶性絲蛋白海綿材料，即內芯；
[0104]將制備好的絲蛋白海綿材料夾持住，通過牽引方式引入外膜中，完成復合，得到促瘺管修復材料。
[0105]本發明實施例3制備的促瘺管修復材料透明柔軟，同時結合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術取出，具有修復作用，且使用方便。
[0106]實施例4
[0107]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結束后洗滌5次，重復處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白。
[0108]將脫膠絲素蛋白15g溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理4小時，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時換一次水，去除溶液中的LiBr，透析后的溶液高速離心機9000rpm轉速下離心20min，兩次，得到6%左右的絲蛋白溶液。把上述絲素蛋白溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質量分數達到30 %。將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質量比40 %的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻。
[0109]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取混合溶液，放置在60°C烘箱中培育6h，干燥取下得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜；
[0110]利用定制的合金的圓錐形模具，模具的長度為12cm，頂端直徑為0.5cm，低端直徑為0.3cm，將上述濃縮液稀釋到5%再與I %的明膠溶液同體積混合，放置在4°C條件下12h，隨后注入到此模具中，在_20°C的低溫條件下冷凍24小時，然后利用真空干燥機真空干燥處理72小時，得到絲素/明膠海綿材料；
[0111]將上述絲素/明膠海綿材料真空水處理2小時，將其利用拉伸裝置雙方向進行拉伸100%，得到Silk I和Silk II結構的絲蛋白海綿材料，即內芯；
[0112]將內芯夾持住，通過牽引作用引入絲蛋白外膜中，完成復合，得到促瘺管修復材料。
[0113]本發明實施例4制備的促瘺管修復材料透明柔軟，同時結合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術取出，具有修復作用，且使用方便。
[0114]實施例5
[0115]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結束后洗滌7次，重復處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白；
[0116]稱取1g脫膠絲素蛋白溶于10mL三元溶液中(CaCl2/水/乙醇摩爾比為1:8:2配成)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時換一次水，透析后的溶液高速離心機9000rpm轉速下離心20min，兩次；得到絲蛋白溶液，其質量濃度為6% ；
[0117]將溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質量分數達到20%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質量比20%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲蛋白外膜溶液；
[0118]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取上述絲蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中待干燥后取下，得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜，具有良好的力學性能。
[0119]稱取1g脫膠絲素溶于10mL三元溶液中(CaCl2/水/乙醇摩爾比為1:8:2配成)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時換一次水，得到絲素蛋白溶液，其濃度為6 %，取上述絲蛋白溶液15mL，放入聚乙烯培養皿中，在濕度為60%的室溫條件下24小時成膜，隨后將絲素膜溶解于15mL的去離子水中，將溶膜液放置4°C冰箱使之充分自組裝；48小時后取出溶膜液重新注入培養皿中自然成膜，反復4次后得到絲蛋白納米線水溶液；將該溶膜液稀釋到2%，放置在4°C條件下培育12h，隨后注入到模具中，在-20°C的低溫條件下冷凍24小時，然后利用真空干燥機真空干燥處理72小時，得到絲素海綿材料；將絲素海綿材料真空水處理2小時，再將其利用拉伸裝置雙向拉伸100%，得到Silk I和Silk II結構的絲蛋白海綿材料，即內芯；
[0120]將內芯夾持住，通過牽引作用引入絲蛋白外膜中，完成復合，得到促瘺管修復材料。
[0121]本發明實施例5制備的促瘺管修復材料透明柔軟，同時結合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術取出，具有修復作用，且使用方便。
[0122]實施例6
[0123]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結束后洗滌5?7次，重復處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白；
[0124]將脫膠絲素蠶絲15g溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理6小時，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，透析后的溶液高速離心機9000rpm轉速下離心20min兩次，把上述絲素蛋白溶液放置在通風處中(風機角度90度，濕度40%的條件下)緩慢揮發濃縮5d，使之質量分數達到30%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質量比60%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲蛋白外膜溶液；
[0125]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取絲蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中培育12h，干燥取下，得到外膜；
[0126]稱取經脫膠處理后的蠶絲15g溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理4小時，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時換一次水，去除溶液中LiBr，透析后的溶液高速離心機9000rpm轉速下離心20min，兩次，得到質量分數為6%的絲蛋白溶液；
[0127]取上述絲蛋白溶液15mL，放入聚乙烯培養皿中，在濕度為60%的室溫條件下24小時成膜，隨后將絲素膜溶解于15mL的去離子水中，將溶膜液放置4°C冰箱使之充分自組裝；48小時后取出溶膜液重新注入培養皿中自然成膜，反復3次后得到絲蛋白納米線水溶液；將該溶膜液稀釋到5%，放置在4°C條件下培育12h ;隨后注入到模具中，在_20°C的低溫條件下冷凍24小時，然后利用真空干燥機真空干燥處理72小時，得到絲素蛋白海綿材料；
[0128]將上述絲素蛋白海綿材料真空水處理2小時，將其利用拉伸裝置雙方向進行拉伸100%，得到Silk I和Silk II結構的絲蛋白海綿材料，即內芯；
[0129]將內芯夾持住，通過牽引作用引入絲蛋白外膜中，完成復合，得到促瘺管修復材料。
[0130]本發明實施例6制備的促瘺管修復材料透明柔軟，同時結合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術取出，具有修復作用，且使用方便。
[0131 ]由以上實施例可知，本發明提供了一種促瘺管修復材料，包括內芯和包裹在內芯表面的外膜；所述促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形；所述內芯包括絲蛋白；所述內芯具有海綿結構；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。本發明提供的促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形，與瘺管形狀相似，有利于置于瘺管中，其一次性植入瘺管中，外膜包括絲蛋白和丙三醇，具有良好的生物相容性和生物降解性，可以被人體細胞吸收降解，無需二次手術取出；所述外膜具有引流作用；所述內芯包括絲蛋白，具有海綿結構，內芯作為生物支架，具有修復作用，因此，本發明提供的促瘺管修復材料具有修復作用，且使用方便。另外，本發明提供的促瘺管修復材料具有可控的生物降解性和優良的生物相容性，誘導組織再生和重塑，有效地促進肛瘺的愈合；該促瘺修復材料具有優良的力學性能和較高的孔隙率，使其適用于臨床；采用本發明提供的促瘺管修復材料具有復發率低、炎癥感染率低。實驗結果表明:本發明提供的促瘺管修復材料的抗縫線拉力> 3N/針；所述促瘺管修復材料的孔隙率大于90%。
[0132]另外，本發明提供的促瘺管修復材料通過手術或內鏡方式置入肛瘺瘺道中，在手術過程沒有明顯并發癥，無絕對的手術禁忌，而且失禁等手術并發癥非常小。
[0133]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。
【權利要求】
1.一種促瘺管修復材料，包括內芯和包裹在所述內芯表面的外膜； 所述促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形； 所述內芯包括絲蛋白；所述內芯具有海綿結構； 所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。
2.根據權利要求1所述的促瘺管修復材料，其特征在于，所述促瘺管修復材料的縱軸長度為5cm?15cm ； 所述促瘺管修復材料的頂面直徑為0.5cm?Icm ； 所述促瘺管修復材料的底面直徑為0.1cm?0.4cm ； 所述外膜的厚度為0.03mm?0.1mm。
3.一種促瘺管修復材料的制備方法，包括以下步驟: 將絲蛋白溶液第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液； 將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜； 將絲蛋白溶液第二濃縮后稀釋，得到絲蛋白內芯溶液； 將所述絲蛋白內芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內芯；所述內芯具有海綿結構； 將所述內芯和外膜復合，得到促瘺管修復材料； 所述促瘺管修復材料包括內芯和包裹在所述內芯表面的外膜； 所述促瘺管修復材料為圓柱形或圓臺形。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述促瘺管修復材料的縱軸長度為5cm ?15cm ； 所述促瘺管修復材料的頂面直徑為0.5cm?Icm ； 所述促瘺管修復材料的底面直徑為0.1cm?0.4cm ； 所述外膜的厚度為0.03mm?0.1mm。
5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白溶液的質量分數為6%?10%。
6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白溶液第一濃縮至質量分數 15%?40% ； 所述絲蛋白溶液第二濃縮至質量分數10%?40%。
7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述丙三醇和蠶絲的質量比為20?80:100ο
8.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白溶液第一濃縮的溫度為40°C?90°C ； 所述絲蛋白溶液第一濃縮的時間為2天?5天。
9.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白溶液第二濃縮的溫度為55°C?65°C ； 所述絲蛋白溶液第二濃縮的時間為2.5天?3.5天。
10.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白內芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后還包括:將干燥得到的內芯半成品進行醇處理或水處理，得到內芯。
【文檔編號】A61B17/00GK104491933SQ201510023518
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2015年1月16日 優先權日:2015年1月16日
【發明者】吳昊, 呂強, 林莎莎 申請人:絲科普樂（北京）生物科技有限公司