專利名稱：用于治療心腦血管疾病的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療心腦血管疾病的藥物組合物，具體地說是涉及包含銀杏黃酮和三七總皂苷為活性成分的新穎藥物組合物。
背景技術(shù)：
銀杏及其提取物在心腦血管疾病的治療中具有顯著療效(陳維洲等，中國新藥與臨床雜志，1999，18(5)315；郭海平等，天津藥學(xué)，2001，13(3)62-64)。研究表明，銀杏提取物可與其他活性物質(zhì)聯(lián)用，并呈現(xiàn)出一定的協(xié)同作用(黃雄偉等，中成藥，2002，24(9)686-688；張水源，福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，11(3)10-12)。近年來，銀杏提取物聯(lián)合三七提取物在治療心腦血管疾病方面的應(yīng)用引起了人們的關(guān)注(屈漢寅，中醫(yī)研究，2001，14(5)24-25；陳小紅，湖北中醫(yī)雜志，2002，24(5)27)。
銀杏提取物(EGb)中的主要活性物質(zhì)為銀杏黃酮(Ginkgo Flavone Glycosides)和銀杏內(nèi)酯(Ginkgolides)，而三七提取物的主要活性成分是三七總皂苷(Panax Notoginoside，PNS)。在一些已公開的技術(shù)文獻(xiàn)中(例如，CN1240654A、CN1129118A或CN1262103A)，雖然涉及了同時包括這兩類提取物以及其他活性成分的方案，但是針對多靶點(diǎn)復(fù)方制劑的復(fù)雜的整合調(diào)節(jié)作用規(guī)律并沒有作出明確的教導(dǎo)，因此目前市場上并沒有同時含有這兩類提取物的產(chǎn)品。在臨床實(shí)踐中，通常是分別施用含有上述提取物的制劑。
上述狀況與這兩類提取物的自身理化特性有密切關(guān)系。銀杏葉提取物制劑主要采用EGb761標(biāo)準(zhǔn)(DE2117429A)，其中還包含有機(jī)酸、烷基酚和烷基酚酸、甾體化合物及微量元素等復(fù)雜化學(xué)成分。此外，銀杏黃酮本身理化性質(zhì)給藥用制劑的制備和質(zhì)量控制帶來了一定的難題。為此，制劑專家提出一些解決方案，例如，在注射劑中加入特定溶劑(CN1298738A)，或者制備銀杏黃酮的包裹體等。然而，常規(guī)的銀杏黃酮制劑均存在一定質(zhì)量問題，例如溶解度差、穩(wěn)定性不佳、溶劑刺激性以及色澤易變化等。
至于三七提取物，其有效成分三七總皂苷具有引濕性而易使膠囊劑受潮變軟影響崩解效果，其口服劑型在水性介質(zhì)中的溶解較慢，并且在溶解過程易發(fā)粘、結(jié)塊，再溶解比較困難，很難在心腦血管疾病的治療中取得理想效力，因此臨床上主要是使用其注射劑(例如血塞通)，但是注射劑也存在一定的穩(wěn)定性問題(例如變色、結(jié)晶沉淀和冬天易結(jié)冰等)。制劑專家也對此進(jìn)行了一定的改良，例如將其制成軟膠囊(CN1228960A)或粉針劑(CN1157720A)等。
鑒于兩類提取物的上述理化特性差異，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，當(dāng)銀杏提取物與三七提取物聯(lián)用時，其復(fù)方制劑的其他質(zhì)量問題更是難于預(yù)料，而且在已有技術(shù)中也未發(fā)現(xiàn)相關(guān)解決方案的明確教導(dǎo)。另外，針對二者聯(lián)用在治療心腦血管疾病的不同病癥中的最佳比例閾，以及特定比例下最終制劑的穩(wěn)定性等問題，已有技術(shù)也未能為生產(chǎn)及應(yīng)用提供科學(xué)的依據(jù)。
因此，非常需要將上述兩種提取物制成具有良好穩(wěn)定性和溶解性的藥物組合物，它可提高所述藥物的臨床功效和/或效力，并使上述缺點(diǎn)最小化或受到抑制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供療效顯著、副作用低的藥物組合物。所述組合物包括治療有效量的活性成分——銀杏黃酮和三七總皂苷。在以下描述中，所述“銀杏黃酮”是指按國際標(biāo)準(zhǔn)制備的銀杏黃酮，而“三七提取物”是指三七總皂苷。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實(shí)際情況容易地確定活性成分的用量，例如約占組合物總重的1-85％，優(yōu)選為20-65％。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述藥物組合物在制備用于治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。銀杏黃酮與三七總皂苷具有相似的藥理作用(但機(jī)制可能不同)，例如均可改善心肌缺血、對缺血性腦損傷有保護(hù)作用、抑制血小板聚集、增強(qiáng)紅細(xì)胞的變形能力、抑制紅細(xì)胞的聚集、降低血液粘度、改變血液流變學(xué)以及具有降血脂等功能。值得注意的是，銀杏黃酮具有高度專屬性抗血小板活化因子(PAF)的作用，另外它還具有明顯的增強(qiáng)免疫功能的作用；而PNS作為選擇性的慢鈣通道阻滯劑，具有明顯抗心律失常作用。它能降低增高的血壓但對正常血壓影響較小，能緩解小動脈的痙孿，這可能與其能減輕細(xì)胞內(nèi)Ca2+過負(fù)荷有關(guān)。另外，銀杏黃酮可使已聚集的血小板有解聚作用，因此還具有溶栓作用。上述機(jī)理為本發(fā)明藥物組合物中兩種活性成分所取得的協(xié)同作用提供了有力的生理學(xué)和藥理學(xué)基礎(chǔ)。先導(dǎo)性試驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明藥物組合物的效力顯著強(qiáng)于單味藥物。同時，我們還驚奇地發(fā)現(xiàn)，二者不同配比(例如1∶10-10∶1)與效應(yīng)之間的關(guān)系是非線性的，例如，在以銀杏黃酮為主效應(yīng)的范圍內(nèi)(例如流變學(xué)、抑制血小板聚集和粘性、改善心肌缺血等方面)，藥效并不總是隨著銀杏黃酮的增加而表現(xiàn)出更強(qiáng)的態(tài)勢，推測這可能與二者存在多靶點(diǎn)效應(yīng)有關(guān)。經(jīng)過深入研究，我們進(jìn)一步確定了銀杏黃酮與三七總皂苷的重量比例為1∶10-10∶1，優(yōu)選為1∶5-8∶1，更優(yōu)選為1∶1-5∶1。
在一方面，本發(fā)明提供具有良好穩(wěn)定性和生物利用度的藥物組合物，所述藥物組合物可制成供口服給藥的任何劑型，例如顆粒劑、片劑、膠囊劑、干凝膠劑、滴丸以及微丸等維持治療時便于施用的劑型。
在制備藥物顆粒的過程中，通常要加入有機(jī)溶劑、助溶劑或表面活性劑來促進(jìn)藥物的溶解。然而，已有技術(shù)中并未教導(dǎo)適于同時增溶并穩(wěn)定這兩類活性成分的藥用賦形劑。在制備本發(fā)明顆粒劑的過程中，適宜的表面活性劑或藥用高分子包括但不限于聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、吐溫-80、吐溫-20、1，2-丙二醇、丙三醇、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆、卵磷脂、氨基酸(例如精氨酸、組氨酸和賴氨酸的鹽酸鹽)或它們的混合物，優(yōu)選為吐溫-80、1，2-丙二醇、丙三醇、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆或它們的混合物。也可制成由磷脂復(fù)合物或環(huán)糊精包合物構(gòu)成的顆粒。上述制得的顆粒也可進(jìn)一步制成片劑、膠囊劑、微丸。
在制備片劑的過程中，可采用常規(guī)的制劑技術(shù)和藥用輔料。另外，由于兩種活性成分的理化特性明顯不同，因此很容易出現(xiàn)活性成分在最終制劑中分散不均勻、尤其是分離的現(xiàn)象，這對于制備均勻片劑而言是不利的，同時也不利于獲得適宜的口服生物利用度。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在最初混合物中加入特定輔料，在改善藥物粒子的同時，顯著地改善了活性成分的混合均勻性，降低了活性成分的分離。所述輔料包括但不限于微晶纖維素、微粉硅膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、碳酸鈣、淀粉、十二烷基硫酸鎂、聚乙二醇4000和聚乙二醇6000。有利地，所述片劑也可進(jìn)一步做包衣處理。
為了減少用藥次數(shù)并提高制劑的生物利用度，本發(fā)明還提供緩控釋制劑。除了含有阻滯劑之外，本發(fā)明緩控釋制劑還含有改善銀杏黃酮溶解性能的藥用賦形劑，例如卵磷脂、聚乙二醇(例如PEG4000或PEG6000)、聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基甲基纖維素、泊洛沙姆、β-環(huán)糊精、吐溫-80、十二烷基硫酸鈉、pH調(diào)節(jié)劑(例如磷酸鹽、氨基酸鹽、檸檬酸鹽或酒石酸鹽等)。所述阻滯劑包括但不限于羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、卡波普、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素或海藻酸鈉等。
在一個實(shí)施方案中，將本發(fā)明藥物組合物制成了分散片劑型。有利地，為了確保兩種活性成分在適宜時間內(nèi)迅速地均勻崩解，可采用特定崩解劑，例如羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮、羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙基纖維素或它們的混合體系。適于本發(fā)明的稀釋劑包括預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、乳糖、羥丙纖維素、甘露醇或它們的混合體系。有利地，本發(fā)明分散片中也可加入表面活性劑(例如吐溫-80、十二烷基硫酸鈉、磺基丁二酸二辛酯鈉、泊洛沙姆)，以促進(jìn)崩解作用。另外，還可加入助流劑(例如微晶纖維素、微粉硅膠)，它一方面可改善顆粒和粉末的流動性，另一方面也利于水分滲入片劑，促進(jìn)片劑的崩解和藥物的溶出。
在另一個實(shí)施方案中，將本發(fā)明藥物組合物制成了利于老年人和吞咽困難患者的口服干凝膠劑。該干凝膠劑在使用無需加熱，與定量水性溶液混合即可形成粥樣凝膠。所用的膠凝劑應(yīng)保證在低于40℃、優(yōu)選室溫的情況下加水迅速形成凝膠。所述膠凝劑包括但不限于預(yù)膠化淀粉、磷酸淀粉鈉、卡波普、角叉菜膠、果膠、低取代羥丙纖維素、羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素等，優(yōu)選采用預(yù)膠化淀粉或者羧甲基纖維素鈉與微晶纖維素的混合物。任選地，所述干凝膠劑中還包括粘合劑、濕潤劑、表面活性劑等藥用輔料在制備膠囊劑、尤其是軟膠囊劑的過程中，兼顧兩種活性成分不同的溶解性，混懸介質(zhì)或溶劑可選用液態(tài)聚乙二醇、吐溫-80、液態(tài)石蠟油、植物油(例如大豆油、花生油、橄欖油、茶油等)或者它們的混合體系。有利地，還可加入表面活性物質(zhì)(例如卵磷脂)或蜂蠟，它們一方面可使PNS混懸于其中，另外還可穩(wěn)定銀杏黃酮。在一個實(shí)施方案中，將提取物與環(huán)糊精混合，任選凍干后，混懸于(油性)基質(zhì)中制成軟膠囊。所述環(huán)糊精優(yōu)選為β-環(huán)糊精、更優(yōu)選為羥丙基β-環(huán)糊精。有利地，為了進(jìn)一步改善銀杏黃酮的溶解性，可向顆粒中加入具有增溶性能的聚山梨酯表面活性劑(例如吐溫-80)、聚乙二醇類(例如聚乙二醇400)，以及能促進(jìn)活性成分胃腸道吸收的多元醇類(例如木糖醇、肌醇、乳糖醇、甘油或丙二醇)或者它們的混合體系。
在本發(fā)明的另一方面，還可將所述藥物組合物制成注射劑型，這包括注射液、大輸液和凍干粉針劑。為了避免溶劑的不良影響，本發(fā)明制劑中盡量不采用藥用有機(jī)溶劑，因此在這種情況下，要著重解決注射液的穩(wěn)定性和溶解性問題，適于本發(fā)明的藥用賦形劑包括但不限于吐溫-20、吐溫-80、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、1，2-丙二醇、丙三醇、羥丙基β-環(huán)糊精、低分子右旋糖苷、氨基酸(例如精氨酸、組氨酸和賴氨酸的鹽酸鹽)或它們組成的混合體系。優(yōu)選為聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、羥丙基β-環(huán)糊精、吐溫-80或它們的混合體系。本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，在制備凍干粉針劑的過程中，向藥物組合物中加入上述藥用賦形劑，還可解決活性成分在重建過程中溶解不充分的問題，即可促進(jìn)活性成分溶解而迅速重建成澄清溶液。
有利的是，注射劑中還可任選加入藥用穩(wěn)定劑和/或pH調(diào)節(jié)劑，以進(jìn)一步改善活性成分的溶解度和穩(wěn)定性。所述穩(wěn)定劑包括但不限于L-半胱氨酸、煙酰胺、泊洛沙姆或它們的混合物。所述pH調(diào)節(jié)劑包括但不限于各種磷酸鹽緩沖液、鹽酸、氫氧化鈉或它們的混合物。有利地，本發(fā)明凍干粉針劑中還可加入藥用凍干賦形劑。優(yōu)選地，所述賦形劑選自甘露醇、山梨醇、氯化鈉、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖醇、乳糖、氨基酸或它們的混合物，優(yōu)選為甘露醇。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)藥品本發(fā)明復(fù)方凍干粉針劑；銀杏黃酮注射液(德國威瑪舒藥廠)；三七注射液(昆明制藥股份有限公司)。
上述藥物以重蒸餾水溶解稀釋，按1∶0.5的間距設(shè)置多個劑量組。
1.對兔離體血管環(huán)的舒張作用按龍超良等的方法(中國藥理學(xué)通報(bào).1997；13308-311)，對日本大耳白家兔(體重2.5-3.5kg)的胸主動脈進(jìn)行處理。選擇內(nèi)皮完整的血管環(huán)，加入不同劑量的藥物，觀察藥物對去甲腎上腺素(NE)預(yù)收縮后血管環(huán)的最大舒張作用及EC50值。以血管最大收縮為100％，計(jì)算藥物對血管的舒張程度。
表1結(jié)果表明，本發(fā)明制劑對內(nèi)皮完整的離體血管環(huán)具有劑量依賴性的舒張作用。本發(fā)明制劑通過協(xié)同作用使其舒張血管的作用得到增強(qiáng)。
表1 藥物對離體血管環(huán)的舒張作用(n＝8 X±SD)


注a與銀杏組比較p＜0.05，b與三七組比較p＜0.05，c與銀杏黃酮組比較p＜0.05，d與三七總皂苷組比較p＜0.05。
表1結(jié)果表明，本發(fā)明制劑對內(nèi)皮完整的離體血管環(huán)具有劑量依賴性的舒張作用。本發(fā)明制劑通過協(xié)同作用使其舒張血管的作用得到增強(qiáng)。
2.對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用取SD大鼠(體重280±38)，經(jīng)結(jié)扎冠狀動脈左前降支(LAD，10min)、再灌注(30min)處理(徐叔云等主編.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)(第3版).人民衛(wèi)生出版社.20011052)。其中假手術(shù)組冠狀動脈LAD處穿一絲線，但不結(jié)扎；損傷對照組結(jié)扎冠狀動脈LAD，造成心肌缺血再灌注損傷。于損傷時腹腔注射受試藥物1g/kg。
于再灌注30min后的時相點(diǎn)，斷頭處死大鼠，取血并分離血清，測定磷酸肌酸激酶(CPK)及乳酸脫氫酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)含量。取血后迅速取出心臟并測定心肌梗死區(qū)面積(IS)。梗塞面積百分率＝心肌梗塞區(qū)面積/心肌總面積×％。結(jié)果如表2所示。
本發(fā)明制劑能使心肌缺血再灌注后心肌酶譜、SOD和IS顯著降低，并且其對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用顯著強(qiáng)于單獨(dú)施用的銀杏黃酮或三七總苷組。
表2 藥物對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響(n＝8，X±SD)

注*與模型組比較，p＜0.05，**與模型組比較，p＜0.01，與銀杏內(nèi)酯組比較，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01，▲▲▲p＜0.001，與三七皂甙比較，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01，ΔΔΔp＜0.001。
表2結(jié)果表明，本發(fā)明制劑能使心肌缺血再灌注后心肌酶譜、SOD和IS顯著降低，并且其對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用顯著強(qiáng)于單獨(dú)施用的銀杏內(nèi)酯或三七總皂苷組。
3.對正常家兔血小板聚集性的影響取新西蘭兔(體重2.5-3.5kg)耳緣靜脈注射給藥5天，頸總動脈放血，制備富血小板血漿(PRP)和貧血小板血漿(PPP)，以ADP誘導(dǎo)，采用比濁法測定血小板聚集率，按照下述公式計(jì)算血小板聚集抑制率聚集抑制率(％)＝(最大聚集率對照組-最大聚集率給藥組)/最大聚集率對照組×100％表3 藥物對正常家兔血漿血小板聚集性的影響(n＝8)

注*與對照組比較，p＜0.05，**與銀杏組比較p＜0.05；▲與銀杏內(nèi)酯比較p＜0.05；△與三七總皂甙比較p＜0.05。
4.對正常小鼠非特異性和特異性免疫功能的影響按常規(guī)方法(徐叔云，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).人民衛(wèi)生出版社，1991.286-288.)進(jìn)行網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能試驗(yàn)，昆明系小鼠(體重18-22kg)均按0.5g/kg的劑量連續(xù)ip給藥10天(對照組給予同體積生理鹽水)。
按常規(guī)方法(李儀奎，中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法.上海科技出版社，1991.155-160)進(jìn)行溶血素含量試驗(yàn)，計(jì)算HC50并測OD值。
表4 藥物對小鼠免疫功能的影響(n＝10)

注*與對照組相比p＜0.05，**與對照組相比p＜0.01制劑實(shí)施例實(shí)施例1片劑

工藝示例取活性成分、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉和微粉硅膠，置于V型混合器中混合15-25分鐘，過篩整粒。加入硬脂酸鎂，充分混勻，壓片。所得片劑可進(jìn)一步包衣實(shí)施例2分散片

工藝示例取上述原輔料分別過100目篩，然后置于混合器中混合均勻，制粒并干燥，整粒后壓片。也可取原輔料混合均勻后直接壓片。
實(shí)施例3滴丸劑

工藝示例取PEG6000加熱熔融，加入三七總皂苷、泊洛沙姆和硬脂酸，待完全熔融后，攪拌下加入銀杏黃酮。將混合物滴入液體石蠟冷凝液中成丸。
實(shí)施例4口服干凝膠劑

工藝示例取預(yù)定量的活性成分、乳糖和預(yù)膠化淀粉，置于制粒機(jī)中。于約100rpm攪拌10分鐘，再以200rpm攪拌10分鐘。繼續(xù)攪拌下加入粘合劑組合物，接著攪拌至顆粒完全形成。收集并干燥顆粒，獲得本發(fā)明干凝膠劑。
實(shí)施例5軟膠囊劑

工藝示例將蜂蠟溶解于聚乙二醇中，攪拌下加入三七總皂苷，加熱至溶解，冷卻至室溫后加入銀杏黃酮，注入膠體磨中研磨均勻，所得混懸液放置。取上述藥液與膠皮溶液，壓丸，干燥即得。
實(shí)施例6注射液

工藝示例將銀杏黃酮加到含Na2HPO4的注射用水中，攪拌完全溶解。加入三七總皂苷、L-賴氨酸和煙酰胺，攪拌溶解，調(diào)節(jié)PH約為6.8-7.8，然后過濾除去不溶物。加入適量活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭、精濾、灌封、滅菌，即得。
實(shí)施例7粉針劑


工藝示例取銀杏黃酮加到含精氨酸鹽酸鹽的注射用水中，加熱溶解，加入三七總皂苷、木糖醇，充分?jǐn)嚢枋谷芙猓{(diào)節(jié)PH，冷卻至室溫后過濾除去不溶物。加入適量活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭、過濾，無菌分裝于西林瓶中，送至冷凍干燥箱內(nèi)冷凍干燥，在箱內(nèi)壓塞加鋁蓋。
權(quán)利要求
1.銀杏黃酮和三七總皂苷的藥物組合物在制備用于治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，其中活性成分銀杏黃酮與三七總皂苷的重量比例為1∶10-10∶1。
2.如權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中銀杏黃酮與三七總皂苷的重量比例為1∶5-8∶1。
3.如權(quán)利要求1的應(yīng)用，所述銀杏黃酮與三七總皂苷的重量比例為1∶1-5∶1。
4.一種復(fù)方藥物組合物，包括銀杏黃酮、三七總皂苷以及藥用賦型劑，其中銀杏黃酮與三七總皂苷的重量比例為1∶10-10∶1。
5.如權(quán)利要求4的復(fù)方藥物組合物，其中銀杏黃酮與三七總皂苷的重量比例為1∶5-8∶1。
6.如權(quán)利要求4的復(fù)方藥物組合物，其中銀杏黃酮與三七總皂苷的重量比例為1∶1-5∶1。
7.如權(quán)利要求4-6之一的復(fù)方藥物組合物，所述的藥用賦形劑選自至少一種以下物質(zhì)卵磷脂、聚乙二醇、聚山梨酯表面活性劑、聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基甲基纖維素、泊洛沙姆、卡波姆、β-環(huán)糊精、十二烷基硫酸鈉、pH值調(diào)節(jié)劑、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、多元醇、低分子右旋糖苷、氨基酸。
8.如權(quán)利要求7之一所述的復(fù)方藥物組合物，為選自顆粒劑、普通片劑、緩釋片劑、分散片、膠囊劑、微丸、口服干凝膠劑或滴丸的口服劑型。
9.如權(quán)利要求7所述的復(fù)方藥物組合物，為選自注射液、大輸液、粉針或凍干粉針劑的劑型。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療心腦血管疾病的藥物組合物，其中包括活性成分銀杏黃酮和三七總皂苷。本發(fā)明還公開了采用所述藥物組合物制成的多種劑型。
文檔編號A61K9/48GK1742764SQ200510112969
公開日2006年3月8日 申請日期2005年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月18日
發(fā)明者閆彬, 吳磊 申請人:閆彬