專利名稱：氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯化合物及其作為佐劑和免疫效應物的用途的制作方法
技術領域：
本發明一般涉及具有作為佐劑和免疫效應物的活性的氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGP)化合物和與之相關的方法和組合物。
疫苗將來自產生疾病的病原體的外源抗原傳遞給宿主，使得宿主可以增加保護性免疫反應。通常的疫苗抗原是導致疾病的微生物的滅活或減毒形式。在這些滅活或減毒疫苗中非必需的成分和抗原的存在對純化包括使用化學和重組技術開發的充分明確的合成抗原在內的疫苗成分具有相當令人鼓舞的成就。然而，純化和簡化微生物疫苗已經伴隨導致功效的喪失。盡管低分子量合成抗原可以避免潛在的有害污染物，但是它們自身并不是免疫原性的。這些觀察結果使得研究人員有可能給疫苗組合物添加佐劑以便強化純化疫苗成分的活性。
目前在美國允許用于人體的唯一佐劑是明礬，它是一組鋁鹽(例如氫氧化鋁、磷酸鋁)，其中配制了疫苗抗原。類似于明礬這樣的微粒載體用于通過巨噬細胞促進吸收、加工和呈遞可溶性抗原。然而明礬并非沒有副作用且僅促進體液(抗體)免疫。
有效的佐劑可以強化預防接種動物體內的體液和細胞免疫反應。此外，佐劑必須提高宿主的天然免疫反應而不會使該宿主的系統惡化。不含體外物質的穩定且易于制備的充分明確的合成佐劑會提供這些特性。然而，已經制備并測試了佐劑性的化合物(Shimizu等1985，Bulusu等1992，Ikeda等1993，Shimizu等1994，Shimizu等1995，Miyajima等1996)通常顯示出毒性特性、不穩定和/或基本上不具有免疫刺激作用。
發現和開發有效的佐劑對改善現存疫苗的功效和安全性來說是必不可少的。佐劑使得合成肽類和碳水化合物抗原具有足夠的免疫原性以便確保合成疫苗成功進入。存在對具有有效免疫調節作用的新型化合物的需求。
發明概括本發明主題的化合物是屬于佐劑和免疫效應物的氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯化合物(AGPs)。氨基烷基(糖苷配基)以糖苷鍵的方式與2-脫氧-2-氨基-α-D-吡喃葡萄糖(氨基葡糖苷)連接而形成所要求保護的分子的基礎結構。這些化合物在氨基葡糖苷環的4位或6位碳上被磷酸化。此外，這些化合物帶有3個3-烷酰氧基烷酰基殘基。
本發明主題的化合物是可增加免疫動物體內抗體產生、刺激細胞因子產生和激活巨噬細胞的免疫效應物分子。根據本發明的主題，本文公開了這些化合物作為佐劑和免疫效應物的使用方法。發明詳述本發明主題的化合物是屬于氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGPs)的佐劑和免疫效應物分子。這些化合物包括以糖苷鍵與氨基烷基(糖苷配基)連接的2-脫氧-2-氨基-α-D-吡喃葡萄糖(氨基葡糖苷)。化合物在氨基葡糖苷環的4位或6位碳上被磷酸化且帶有3個3-烷酰氧基烷酰基殘基。本發明主題的化合物一般由下列通式I所描述 其中X代表直立或平伏(equitorial)位上的氧和硫原子；Y代表氧原子或NH基；“n”、“m”、“p”和“q”是0-6的整數；R1、R2和R3代表帶有1-20個碳原子的正構脂肪酰基殘基且其中R1、R2和R3之一可選是氫；R4和R5是H和甲基；R6和R7是氫、羥基、烷氧基、膦酰基、膦酰氧基、磺基、磺基氧基、氨基、巰基、氰基、硝基、甲酰基或羧基及其酯類和酰胺類；R8和R9是膦酰基或氫。與正構脂肪酰基殘基連接的3’立體化學(stereogenic)中心的構型是R或S型，而優選R型。與R4或R5連接的碳原子的立體化學可以是R或S型。包括對映體和非對映體的所有立體異構體及其混合物均屬于本發明主題的范圍。
本發明主題的化合物中的雜原子X可以是氧或硫。在一個優選的實施方案中，X是氧且一般位于平伏位上。盡管該分子的穩定性可能受到X上取代的影響，但是預計具有這些取代的分子的免疫調節活性沒有改變。
雜原子X與糖苷配基氮原子之間的碳原子數由變量″n″和″m″來決定。變量″n″和″m″可以是0-6的整數。在一個優選的實施方案中，雜原子X與糖苷配基氮原子之間碳原子的總數約為2-約6且最優選約為2-約4。
本發明主題的化合物是被磷酸化的氨基烷基氨基葡糖苷化合物。化合物可以在氨基葡糖苷環4或6位(R8或R9)上被磷酸化且如果至少在這些位置之一上被磷酸化則是最有效的。在一個優選的實施方案中，R8是膦酰基且R9是氫。
在一個實施方案中，本發明主題的化合物六酰化，即它們總計含有6個脂肪酸殘基。氨基烷基氨基葡糖苷部分在氨基葡糖苷單元的2-氨基和3-羥基上和糖苷配基單元的氨基上被3-羥基烷酰基殘基酰化。在通式I中，有3個位置被3-羥基十四酰基部分酰化。3-羥基十四酰基殘基又被正構脂肪酸(R1-R3)取代，從而總計形成了3個3-正-烷酰氧基十四酰基殘基或6個脂肪酸基。
在另一個實施方案中，本發明主題的化合物被五酰化，即它們總計含有5個脂肪酸殘基。更具體地說，通式I的3-羥基十四酰基殘基在R1、R2和R33個位置中的兩個上被正構脂肪酸取代，而R1、R2和R3的第3個位置是氫。換句話說，-OR1、-OR2或-OR3中至少一個是羥基。
正構脂肪酸R1-R3的鏈長可以是1-約20個碳且一般約為7-約16個碳。優選R1-R3約為9-約14個碳。這些正構脂肪酸的鏈長可以相同或不同。盡管僅描述了正構脂肪酸，但是預計在本發明主題化合物R1-R3上取代的不飽和脂肪酸(即具有雙鍵或三鍵的脂肪酸部分)可以產生生物活性分子。此外，預計在3-羥基烷酰基殘基鏈長上的輕度修飾不會顯著影響生物活性。
本發明主題的化合物是可促進免疫動物體內抗體生成、刺激細胞因子產生并刺激包括細胞毒性T-淋巴細胞反應在內的細胞介導的免疫反應的佐劑和免疫效應物。在用于引起個體免疫反應的方法中，可以用藥物上可接受的注射或攝取用載體配制本發明主題的化合物。本文所用的″藥物上可接受的載體″指的是不會干擾活性組分免疫調節活性且對所給予的患者而言是無毒性的介質。藥物上可接受的載體包括水包油型或油包水型乳劑、含水組合物、脂質體、微珠和微粒體。例如，所述的載體可以是微球體或微粒，在該球體或顆粒基質內含有本發明的化合物或在該球體或顆粒表面上吸附有本發明的化合物。所述的載體還可以是含有三乙胺、三乙醇胺或使制品呈堿性的其它試劑的水溶液或膠束分散體或含有氫氧化鋁、氫氧化鈣、磷酸鈣或酪氨酸吸附物的混懸液。
可以經非腸道即腹膜內、皮下或肌內給藥的方式給予本發明主題的化合物制品包括下列優選的載體。皮下用的優選載體的實例包括磷酸緩沖鹽水(PBS)溶液和0.01-0.1％三乙醇胺的USP注射用水溶液。合適的肌內注射用載體包括10％USP乙醇、40％丙二醇和諸如5％葡萄糖這樣的平衡量可接受的等滲溶液。
靜脈內用的優選載體的實例包括10％USP乙醇、40％USP丙二醇和平衡量USP注射用水。另一種可接受的載體包括10％USP乙醇和USP注射用水；另一種可接受的載體是0.01-0.1％三乙醇胺的USP注射用水的溶液。提供這樣的藥物上可接受的非腸道用溶劑，使得溶液或分散體可以通過5微米濾器過濾而不會除去活性組分。
通過粘膜表面給藥的載體的實例取決于特定的途徑。當口服給藥時，使用藥用級甘露糖醇、淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、糖精鈉(sodiumsaccharide)、纖維素、碳酸鎂等，其中優選甘露糖醇。當經鼻內給藥時，可以使用聚乙二醇或二醇類、蔗糖、和/或甲基纖維素和諸如苯扎氯銨、EDTA這樣的防腐劑，其中優選聚乙二醇；而當通過吸入給藥時，合適的載體是聚乙二醇或二醇類、甲基纖維素、分散劑和防腐劑，其中優選聚乙二醇。
以″有效量″對個體給予本發明主題的化合物以提高所述個體的免疫反應。本文所用的″有效量″是表現出超過載體或陰性對照的反應的用量。對患者給予的本發明主題的化合物的精確劑量取決于所用的特定AGP、給藥途徑、藥物組合物和患者。例如，當經皮下給藥以提高抗體反應時，以對典型的70kg成人患者給藥為基準，所用的AGP的量為1-約250微克、優選約25-約50微克。
在疫苗組合物中，將本發明主題的AGPs與抗原一起對包括人在內的溫血動物給藥。為引起所需反應而給予的抗原的用量可以由本領域技術人員方便地確定且根據所給予的抗原類型、給藥途徑和免疫方案的不同而改變。例如，在間隔21天對小鼠經皮下給予0.2μg破傷風類毒素和要求保護的化合物的兩次免疫接種引起了對該抗原的體液免疫反應。
通過使N-酰氧基酰化或N-被護氨基鏈烷醇或氨基烷硫醇(糖苷配基單元)與合適的被護和/或3-O-酰氧基酰化的氨基葡糖苷單元偶聯來合成本發明主題的化合物。在一種用于制備本發明主題的化合物的優選方法中(反應流程1)，在有汞或銀鹽存在的情況下使N-(2，2，2-三氯乙氧基羰基(Troc))-保護的糖基鹵化物1(Z＝F、Cl、Br)與N-[(R)-3-n-烷酰氧基十四酰基]氨基鏈烷醇或硫醇2(具有合適被護形式的R5和R6)通過Koenigs-Knorr型反應偶聯而生成苷中間體3。優選氨基葡糖苷單元1帶有異頭氯原子(Z＝Cl)且偶聯催化劑是三氟甲磺酸銀。還可以在有諸如醚合三氟化硼這樣的路易斯酸存在的情況下通過使糖苷配基單元2與N-Troc-保護的乙酸糖酯(Z＝OAc)或相關的活化衍生物偶聯來制備中間體3。所謂的″活化的″指的是帶有與氨基葡糖苷單元端基異構中心連接的適宜可取代的離去基團″Z″。氨基葡糖苷單元1在3-位上帶有(R)-3-n-烷酰氧基十四酰基殘基，而合適的保護基位于6-羥基和4-磷酸酯基上。磷酸酯基的典型保護基包括但不限于苯基、芐基和鄰-二甲苯基。所述的磷酸酯基優選被兩個苯基保護。6-位可以被通常用于糖化學的保護基團暫時保護，諸如甲硅烷基、芐基或芐氧基甲基醚類或另一方面是碳酸烷基酯。優選6-羥基被保護為1，1-二甲基-2，2，2-三氯乙基碳酸酯(TCBOC)。
用鋅除去Koenigs-Knorr偶聯產物3中基于三氯乙基的保護基并在有合適偶合試劑存在的情況下用(R)-3-n-烷酰氧基十四酸4選擇性地使氨基葡糖苷的氮酰化而生成六酰化衍生物5。然后通過在有鈀或鉑催化劑存在的情況下催化氫化或通過其它適宜方式使5中剩余的保護基裂解而生成通式(I)的化合物。
用于合成糖基供體1的合適原料是2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-氨基-2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-β-D-吡喃葡糖苷，可以使用公開的方法由商購的D-氨基葡糖苷鹽酸鹽來制備它。可以通過本領域公知的方法或本文所述的其改變方法將2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷原料轉化成糖基供體1。可以通過用適宜的(R)-3-n-烷酰氧基十四酸4使商購的原料N-酰氧基酰化或使可以通過化學文獻中公知方法獲得的原料N-乙酰基酰化來制備糖苷配基單元2。另一方面，2中的N-酰氧基酰基殘基可以被適宜的胺保護基取代，所述的胺保護基在諸如下面第二個優選實施方案中所述的偶聯反應之后被除去。
在用于制備本發明主題的化合物的第二種優選方法中(反應流程2)，在使用適合于對存在的氨基和羥基進行化學區分的N-和O-保護基進行糖基化(偶聯)反應后將(R)-3-n-烷酰氧基十四酰基和磷酸酯基引入氨基葡糖苷和糖苷配基單元中。優選在適宜催化劑存在的情況下使N-Troc-保護的糖基供體6與N-烯丙氧基羰基(AOC)保護的氨基鏈烷醇或硫醇7偶聯而生成氨基烷基β-苷8。最優選所述的糖基供體6帶有異頭乙酰氧基(Z＝OAc)且偶聯催化劑是醚合三氟化硼。其它用于糖苷配基氨基的N-保護基包括但不限于對本領域技術人員而言顯然是常用的氨基甲酸酯類，諸如叔丁基(t-BOC)、芐基(Cbz)、2，2，2-三氯乙基(Troc)和9-芴基甲基(Fmoc)。
在本領域中公知的標準條件下使偶聯產物8和4，6-丙酮化物形成中的乙酸酯基進行堿誘導的裂解而生成中間體9。用(R)-3-n-烷酰氧基十四酸4使9進行3-O-酰化，隨后以鈀(O)為介體除去糖苷配基N-AOC基并用(R)-3-n-烷酰氧基十四酸進行酰化而得到中間體10。為制備糖基供體1對4-和6-位進行本文所述的丙酮化物水解和官能化而生成中間體3(Y＝O)，然后如反應流程1中所述進行處理而得到通式(I)的化合物。
通過下列僅用于解釋目的的非限制性實施例和試驗例來進一步描述本發明。重要的是應注意將(R)-3-n-烷酰氧基十四酰基和磷酸酯基引入氨基葡糖苷和糖苷配基單元中不一定必須按照反應流程1和2或如下述實施例中所述的順序進行。 反應流程1 反應流程2
實施例1-43描述了本發明主題的AGP化合物的制備方法。試驗例1-13描述了為測定這些化合物的免疫原性而進行的試驗。表1列舉了這些實施例中各化合物的化學組成和實驗參考號。
表1實施例參考號 R1-R3n p R6q R71 - - - - - - -2B1*n-C13H27CO 0 1 OH 0 H3B2**n-C13H27CO 0 1 OH 0 H4B3 n-C11H23CO 0 1 OH 0 H5B4 n-C10H21CO 0 1 OH 0 H6B5 n-C9H19CO 0 1 OH 0 H7B6***n-C9H19CO 0 1 OH 0 H8B7 n-C8H17CO 0 1 OH 0 H9B8 n-C6H13CO 0 1 OH 0 H10 B9 n-C9H19CO 1 1 OH 0 H11 B10 n-C9H19CO 0 2 OH 0 H12 B11 n-C13H27CO 0 0 CO2H 0 H113 B12 n-C11H23CO 0 0 CO2H 0 H14 B13 n-C10H21CO 0 0 CO2H 0 H15 B14**n-C9H19CO 0 0 CO2H 0 H16 B15*n-C9H19CO 0 0 CO2H 0 H
實施例參考號 R1-R3n p R6q R717B16 n-C8H17CO 0 0CO2H 0 H18B17 n-C7H15CO 0 0CO2H 0 H19B18 n-C6H13CO 0 0CO2H 0 H20B19 n-C13H27CO 0 0 H0 H21B20 n-C9H19CO 0 0 H0 H22B21 2-C13H27CO 1 0 H0 H23B22 n-C13H27CO 2 0 H0 H24B23 n-C13H27CO 4 0 H0 H25B24 n-C13H27CO 0 0 CONH20 H26B25 n-C9H19CO 0 0 CONH20 H27B26 n-C13H27CO 0 0 CO2Me0 H28B27 n-C13H27CO 0 0 H1 CO2H29B28 n-C9H19CO 1 0 H1 CO2H30B29 n-C5H11CO 0 0 CONH20 H31B30 R1＝R3＝n-C9H19CO 0 0 CONH20 H1R2＝n-C5H11CO32B31 n-C5H11CO 0 0 H0 H33B32 R1＝n-C13H27CO0 0 H0 HR2＝n-C17H35COR3＝n-C15H31CO
實施例參考號 R1-R3n p R6q R734 B34 n-C5H11CO 0 0CO2H 0 H35 B35 R1＝n-C5H11CO0 0CO2H 0 HR2＝R3＝n-C9H19CO36 B36 R1＝R3＝n-C9H19CO 0 0CO2H 0 HR2＝n-C5H11CO37 B37 R1＝R2＝n-C9H19CO 0 0CO2H 0 HR3＝n-C5H11CO38 B38 R1＝n-C9H11CO 0 0CO2H 0 HR2＝R3＝n-C5H11CO39 B39 R1＝R3＝n-C5H11CO0 0CO2H 0 HR2＝n-C9H19CO40 B40 R1＝R2＝n-C5H11CO0 0CO2H 0 HR3＝n-C9H19CO41 B41 R1＝R3＝n-C9H19CO0 1 OH0 HR2＝n-C5H11CO42 B42 n-C9H11CO 0 2CO2H 0 H43 B43 R1＝n-C13H27CO 0 0CO2H 0 HR2＝n-C11H23COR3＝H就全部所示的實施例而言X＝Y＝O；R4＝R5＝H；m＝0；R8＝膦酰基；R9＝H*與R5連接的碳原子的立體化學是S。
**與R5連接的碳原子的立體化學是R。
***R8是H和R9是膦酰基。
實施例1(R)-3-N-烷酰氧基十四酸(4)的制備(1)通過噴射氬氣(15分鐘)使3-氧代十四酸甲酯(19g，0.074mol)溶于MeOH(100mL)所得到的溶液脫氣。加入[(R)-Ru(Binap)Cl]2·NEt3催化劑(0.187g，0.111mmol)和2N HCl水溶液(0.5mL)并在60psig和40-50℃下使所得的混合物氫化18小時。將該反應體系用己烷(250mL)稀釋、通過硅膠短柱過濾并濃縮。將粗產物溶于四氫呋喃(THF；200mL)、用2.4N LiOH水溶液(83mL，0.2mol)處理并在室溫下劇烈攪拌4小時。使所得的淤漿在乙醚(200mL)和1N HCl水溶液(200mL)之間分配并分離各層。將水層用乙醚(100mL)提取并干燥合并的醚提取物(Na2SO4)且濃縮。將粗的羥酸溶于熱乙腈(250mL)，用二環己胺(DCHA；17mL，0.085mol)處理并在60℃下攪拌1小時。收集冷卻時結晶的產物并使之從乙腈(650mL)中重結晶而得到28.6g(91％)的(R)-3-羥基十四酸二環己基銨、為一種無色固體mp94-95℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(～t，3H，J～6.5Hz)，1.05-1.58(m，24H)，1.65(m，2H)，1.80(m，4H)，2.01(br d，4H)2.18(dd，1H，J＝15.7，9.4Hz)，2.36(dd，1H，J＝15.7，2.6Hz)，2.94(m，2H)，3.84(m，1H)(2)向上述(1)中制備的化合物(50g，0.117mol)和2，4’-二溴乙酰苯(39g，0.14mol)溶于EtOAc(2.3L)所得到的混合物中加入三乙胺(19.6mL，0.14mol)并在室溫下將所得的溶液攪拌18小時。收集形成的大量沉淀并用溫EtOAc(3×400mL)研制。用1M HCl水溶液、飽和NaCl水溶液洗滌合并的研制物和濾液并干燥(Na2SO4)。在減壓條件下除去揮發性物質并使獲得的粗產物從EtOAc-己烷中結晶而得到47.2g(91％)的(R)-3-羥基十四酸對溴苯甲酰甲酯、為一種無色固體mp109-109.5℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(～t，3H，J～6.5Hz)1.15-1.70(m，20H)，2.56(dd，1H，J＝15.1，9.1Hz)，2.69(dd，1H，J＝15.1，2.9Hz)，3.27(br s，1H)，4.12(m，1H)，5.31(d，1H，J＝16.5Hz)，5.42(d，1H，J＝16.5Hz)，7.65(d，2H，J＝8.5Hz)，7.78(d，2H，J＝8.5Hz).
(3)在室溫下用肉豆蔻酰氯(3.1mL，11.4mmol)處理上述(2)中制備的化合物(4.6g，10.4mmol)溶于含有4-二甲氨基吡啶(0.12g，1.0mmol)和吡啶(5mL，62mmol)的CH2Cl2(50mL)所得到的溶液。在室溫下攪拌5小時后，加入MeOH(0.5mL)并濃縮該反應混合物。使殘余物在Et2O(150mL)與冷的10％HCl水溶液(50mL)之間分配并分離各層。干燥醚層(Na2SO4)并濃縮且在硅膠柱的短襯墊上用5％EtOAc-己烷純化獲得的殘余物。將二酯溶于AcOH(42mL)并在60℃下用3個等份的鋅粉(～6g，90mmol)處理1小時。在60℃下再經過1小時后，將冷卻的反應混合物進行超聲處理(5分鐘)、通過Celite過濾并濃縮。通過使用10％EtOAc-己烷的硅膠快速硅膠色譜法純化殘余物而得到4.17g(82％)的(R)-3-十四酰氧基十四酸、為一種無色固體mp28-29℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(～t，6H)，1.15-1.40(m，38H)，1.50-1.70(m，4H)，2.28(t，2H，J＝7.4Hz)，2.56(dd，1H，J＝15.9，5.8Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.9，7.1Hz)，5.21(m，1H).
(4)按照與實施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(0.57mL，7.0mmol)存在的情況下于CH2Cl2(60mL)中用月桂酰氯(1.45mL，6.5mmol)酰化實施例1-(2)中制備的化合物(2.5g，5.68mmol)且然后在AcOH(40mL)中用鋅(9.3g，142mmol)使之脫保護而得到(R)-3-十二酰氧基十四酸、為一種無色油狀物1H NMR(CDCl3)δ0.90(t，6H，J＝6.5Hz)，1.0-1.75(m，46H)，2.30(m，2H)，2.62(m，2H)，5.22(m，1H).
(5)用十一酸(1.16g，6.25mmol)和EDC MeI(2.08g，7.0mmol)在CH2Cl2(60mL)中處理實施例1-(2)中制備的化合物溶液(2.5g，5.68mmol)且然后如實施例1-(3)中所述在AcOH(40mL)中用鋅(9.3g，142mmol)使之脫保護而得到(R)-3-十一酰氧基十四酸、為一種無色油狀物1H NMR(CDCl3)δ0.89(t，6H，J＝6.7Hz)，1.0-1.75(m，44H)，2.29(m，2H，2.61(m，2H)，5.22(m，1H).
(6)按照與實施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(1.2mL，15.0mmol)存在的情況下在CH2Cl2(100mL)中用癸酰基氯(2.3mL，11mmol)酰化實施例1-(2)中制備的化合物(4.4g，10mmol)且然后在AcOH(60mL)中用鋅(16.4g，250mmol)使之脫保護而得到(R)-3-癸酰氧基十四酸、為一種無色油狀物1H NMR(CDCl3)δ0.89(t，6H，J＝6.8Hz)，1.0-1.75(m，34H)，2.29(t，2H，J＝7.4Hz)，2.61(t，2H，J＝4.2Hz)，5.22(m，1H).
(7)按照與實施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(0.57mL，7.0mmol)存在的情況下在CH2Cl2(60mL)中用壬酰基氯(1.13mL，6.25mmol)酰化實施例1-(2)中制備的化合物(2.5g，5.68mmol)且然后在AcOH(40mL)中用鋅(9.3g，142mmol)使之脫保護而得到(R)-3-壬酰氧基十四酸、為一種無色油狀物1H NMR(CDCl3)δ0.89(t，6H，J＝6.9Hz)，1.0-1.75(m，32H)，2.29(t，2H，J＝7.5Hz)，2.61(m，2H)，5.22(m，1H).
(8)按照與實施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(0.57mL，7.0mmol)存在的情況下在CH2Cl2(60mL)中用辛酰基氯(1.07mL，6.25mmol)酰化實施例1-(2)中制備的化合物(2.5g，5.68mmol)且然后在AcOH(40mL)中用鋅(9.3g，142mmol)使之脫保護而得到(R)-3-辛酰氧基十四酸、為一種無色油狀物1H NMR(CDCl3)δ0.92(t，6H，J＝6.9Hz)，1.0-1.75(m，30H)，2.32(t，2H，J＝7.4Hz)，2.63(t，2H，J＝4.4Hz)，5.23(m，1H).
(9)按照與實施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(0.57mL，7.0mmol)存在的情況下在CH2Cl2(60mL)中用庚酰基氯(0.97mL，6.25mmol)酰化實施例1-(2)中制備的化合物(2.5g，5.68mmol)且然后在AcOH(40mL)中用鋅(9.3g，142mmol)使之脫保護而得到(R)-3-辛酰氧基十四酸、為一種無色油狀物1H NMR(CDCl3)δ0.89(t，6H，J＝6.8Hz)，1.0-1.75(m，28H)，2.29(t，2H，J＝7.4Hz)，2.61(d，2H，J＝5.8Hz)，5.22(m，1H).
實施例2(B1)3-羥基-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基-2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2).
(1)向2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-氨基-2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-β-D-吡喃葡糖苷(6.46g，20.2mmol)溶于CHCl3(300mL)所得到的溶液中加入1N NaHCO3水溶液(300mL)和氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(8.5g，40mmol)。在室溫下將所得混合物劇烈攪拌3小時。將有機層分離、干燥(Na2SO4)并濃縮至得到一種無色糖漿狀物。進行硅膠快速色譜法(梯度洗脫，30→40％EtOAc-己烷)而得到9.6g(96％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色固體mp 69-70℃；1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.94(m，2H)，1.44和1.52(2s，6H)，2.94(br s，1H)，3.23-3.37(m，2H)，3.48-3.62(m，2H)，3.79(t，1H，J＝～10.5Hz)，3.88-4.08(m，3H)，4.65(d，1H，J＝8.3Hz)，4.74(m，2H)，5.39(d，1H，J＝7.4Hz).
(2)用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺甲碘化物(EDC-MeI；4.94g，16.7mmol)處理上述(1)中制備的化合物(7.5g，15.2mmol)、(R)-3-十四酰氧基十四酸(7.58g，16.7mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(0.25g，1.7mmol)溶于CH2Cl2(95mL)所得到的溶液并在室溫下攪拌16小時。將該反應混合物通過Celite短襯墊過濾、濃縮并在60℃下和90％AcOH水溶液(100mL)中將所得的殘余物加熱1小時。濃縮該混合物并通過與甲苯(2×150mL)共沸而除去殘余的AcOH和水。通過硅膠快速色譜法純化粗二醇(梯度洗脫，30→40％ EtOAc-己烷)而得到11.8g(83％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.9(m，8H)，1.1-1.7(m，42H)，2.30(t，2H，J＝7.4Hz)，2.52(m，2H)，3.36-3.72(m，4H)，3.78-4.03(m，3H)，4.57(d，1H，J＝8.3Hz)，4.65(d，1H，J＝11Hz)，4.77(d，1H，J＝11Hz)，5.0-5.15(m，2H)，5.20(d，1H，J＝7.4Hz).
(3)在0℃下和15分鐘內用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(3.17g，13.2mmol)溶于CH2Cl2(25mL)所得到的溶液滴加處理上述(2)中制備的化合物(10.9g，12mmol)和吡啶(2mL，25mmol)溶于CH2Cl2(125mL)所得到的溶液。在3.5小時內將該反應混合物緩慢溫至環境溫度。依次加入4-吡咯烷子基吡啶(0.89g，6.0mmol)、N，N-二異丙基乙胺(10.5mL，60mmol)和氯磷酸二苯酯(3.7mL，18mmol)并將所得的混合物在室溫下攪拌5小時。將該反應混合物用CH2Cl2(500mL)稀釋、用冷7.5％HCl水溶液(2×250mL)、水(250mL)、飽和NaHCO3水溶液(250mL)洗滌、干燥(Na2SO4)且然后濃縮。通過硅膠快速色譜法純化獲得的殘余物，用12.5％EtOAc-己烷洗脫而得到15.1g(95％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種粘性油狀物1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.8-1.0(m，8H)，1.1-1.65(m，42H)，1.83和1.90(2s，6H)，2.15-2.45(m，4H)，3.34(q，1H，J＝～8Hz)，3.37(m，1H)，3.81(m，1H)，3.95(m，1H)，4.27(dd，1H，J＝12，5Hz)，4.34(d，1H，J＝12Hz)，4.58(d，1H，J＝12Hz)，4.66(q，1H，J＝～9Hz)，4.86(d，1H，J＝12Hz)，5.03(d，1H，J＝7.9Hz)，5.21(m，1H)，5.54-5.70(m，2H)，7.2-7.8(m，10H).
(4)在0℃下，用三氟乙酸(TFA；6mL)滴加處理上述(3)中制備的化合物(1.87g，1.41mmol)溶于CH2Cl2(3mL)所得到的溶液且然后在0℃下攪拌4小時。將該反應混合物濃縮并通過與甲苯(2×5mL)共沸而除去殘余的TFA。在0℃下和15分鐘內用草酰溴(2.0M的CH2Cl2溶液；2.1mL，4.2mmol)逐滴處理內半縮醛(lactol)和二甲基甲酰胺溶于CH2Cl2(14mL)所得到的溶液并在0℃下將所得的混懸液攪拌24小時。使該反應混合物在冷飽和NaHCO3水溶液(25mL)與乙醚(50mL)之間分配并分離各層。將醚層用飽和NaCl水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)并濃縮，得到1.85g(～100％)的2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基溴、為一種無色玻璃狀物。
(5)用EDC·MeI(0.78g，2.79mmol)處理(R)-2-氨基-3-芐氧基-1-丙醇(0.46g，2.33mmol)和(R)-3-十四酰氧基十四酸(1.29g，2.83mmol)溶于CH2Cl2(20mL)所得到的溶液并在室溫下攪拌16小時。將該反應混合物通過Celite短襯墊過濾并濃縮。使用45％EtOAc-己烷進行硅膠快速色譜法而得到1.1g(69％)的3-芐氧基-(R)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙醇、為一種無色固體mp42-44.5℃；1H NMRδ0.88(t，6H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，42H)，2.50(t，2H，J＝7.5Hz)，2.46(m，2H)，3.56(br s，1H，3.5-3.75(m，3H)，3.78(dd，1H，J＝11，4Hz)，4.08(m，1H)，4.51(s，2H)，5.17(m，1H)，6.36(d，1H，J＝7.8Hz)，7.2-7.4(m，5H).
(6)向上述(4)中制備的化合物(1.00g，0.776mmol)和上述(5)中制備的化合物(0.35g，0.57mmol)溶于二氯乙烷(4.5mL)所得到的溶液中加入粉狀的4分子篩(1.25g)和硫酸鈣(2.7g，20mmol)。在室溫下攪拌10分鐘后，將該混合物用氰化汞(1.0g，4.0mmol)處理且然后在避光條件下加熱至回流12小時。將該反應混合物用CH2Cl2(25mL)稀釋并通過Celite襯墊過濾。將濾液用1N KI水溶液(25mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并濃縮。使用EtOAc-己烷-MeOH(80∶20∶0→70∶30∶1，梯度洗脫)對殘余物進行硅膠層析而得到0.66g(63％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰-3-O-[(R)-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMRδ0.88(t，12H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.65(m，84H)，1.79和1.86(2s，6H)，2.1-2.5(m，8H)，3.35-3.55(m，3H)，3.65-3.8(m，3H)，4.1-4.75(m，9H)，5.05-5.3(m，2H)，5.3-5.5(m，2H)，6.04(d，1H，J＝8.4Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(7)在55℃下和1小時內用鋅粉(1.1g，16mmol)分3等份處理上述(6)中制備的化合物(0.60g，0.328mmol)溶于AcOH(9mL)所得到的攪拌溶液。將冷卻的反應混合物進行超聲處理、通過一層Celite過濾并濃縮。使所得的殘余物在CH2Cl2(60mL)與冷的1N HCl水溶液(35mL)之間分配并分離各層。將有機層用5％NaHCO3水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)并濃縮。在室溫下將獲得的殘余物和(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.18g，0.39mmol)溶于CH2Cl2(3.5mL)所得到的混合物與4分子篩(0.1g)一起攪拌30分鐘且然后用2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉(EEDQ；0.12g，0.49mmol)處理。在室溫下將所得的混合物攪拌6小時、通過Celite過濾且然后濃縮。進行硅膠層析(梯度洗脫，0.5→1％MeOH-CHCl3)得到0.31g(50％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氧基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.8(m，126H)，2.1-2.5(m，12H)，3.35-3.75(m，6H)，3.80(m，2H)，4.23(m，1H)，4.46(d，1H，J＝12Hz)，4.51(d，1H，J＝12Hz)，4.65(q，1H，J＝～9.5Hz)，4.82(d，1H，J＝8.1Hz)，5.05-5.25(m，3H)，5.47(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.16(d，1H，J＝8.1Hz)，6.31(d，1H，J＝8.4Hz)，7.1-7.4(m，15H).
(8)在室溫和大氣壓下以及有5％鈀/碳(50mg)存在的情況下，使上述(7)中制備的化合物(0.26g，0.138mmol)溶于THF(25mL)所得到的溶液氫化16小時。在通過過濾除去催化劑后，加入AcOH(3mL)和氧化鉑(0.14g)并在室溫和75psig下繼續氫化24小時。將所得的乳白色反應混合物用2∶1 CHCl3-MeOH(20mL)稀釋并簡短進行超聲處理而得到一種澄清溶液。收集催化劑、用2∶1 CHCl3-MeOH(2×5mL)洗滌并將合并的濾液和洗滌物濃縮。通過在35℃下超聲處理5分鐘而將殘余物溶于1％三乙胺水溶液并將所得的溶液凍干。使用氯仿-甲醇-水-三乙胺(94∶6∶0.5∶0.5→88∶12∶1.0∶1.0，梯度洗脫)進行的硅膠快速色譜法得到0.20g(84％)的產物、為一種無色粉末。將部分層析產物(0.166g)溶于冷的2∶1 CHCl3-MeOH(33mL)并用冷的0.1N HCl水溶液(14mL)洗滌。將下部的有機層過濾并濃縮且將獲得的游離酸從1％三乙胺水溶液(不含致熱原，15mL)中凍干而得到0.160g的3-羥基-(S)-2-[(R)-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種無色固體mp178-180℃(分解)；IR(膜)3293，3103，2959，2924，2855，1732，1654，1640，1553，1467，1377，1259，1175，1106，1086，1050，803，720cm-1；HMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～7Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.15-2.75(m，12H)，3.02(q，6H，J＝7Hz)，3.35-4.1(m，7H)，4.22(q，1H，J＝～9.5Hz)，4.77(d，1H，J＝8Hz)，5.05-5.35(m，4H)，6.58(d，1H，J＝6Hz)，6.73(d，1H，J＝7.5Hz，NH)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.2，170.7，170.5，170.0，100.7，75.9，72.7，71.2，71.0，70.8，70.6，67.9，61.7，60.5，55.0，50.4，45.6，41.4，39.5，34.5，34.4，32.0，31.8，30.3，29.8，29.4，29.3，25.3，25.1，22.7，14.2，8.6.
對C19H192N3O18P·5H2O的計算分析值C，64.84；H，11.10；N，2.29；P，1.69。測定值C，64.69；H，11.24；N，1.93；P，1.44。
實施例3(B2)3-羥基-(R)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2)(1)用吡啶(0.4mL，5mmol)、4-二甲氨基吡啶(催化)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(0.307g，1.23mmol)依次處理實施例2-(5)中制備的化合物(0.63g，1.02mmol)溶于CH2Cl2(7mL)所得到的溶液并在室溫下攪拌16小時。將該反應混合物用CH2Cl2(25mL)稀釋、用飽和NaHCO3水溶液(25mL)洗滌并干燥(Na2SO4)。在真空中除去揮發性物質而得到殘余物，將其溶于THF-AcOH(10mL，9∶1)并在室溫和大氣壓以及有5％鈀/碳(150mg)存在的情況下氫化24小時。在通過過濾除去催化劑并濃縮濾液后，通過使用35％EtOAc-己烷的硅膠快速色譜法純化殘余物而得到0.536g(72％)的3-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基氧基)-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙醇、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝～6.5Hz)，1.1-1.7(m，42H)，1.94(s，6H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.47(d，2H，J＝6Hz)，3.50(br s，1H)，3.72(m，2H)，4.15-4.35(m，3H)，5.15(m，1H)，6.18(d，1H，J＝7.2Hz).
(2)按照與實施例2-(6)中所述相同的方式在有氰化汞(0.43g，1.7mmol)存在的情況下偶聯上述(1)中制備的化合物(0.310g，0.426mmol)和實施例2-(4)中制備的化合物(0.961g，0.745mmol)而得到0.644g(78％)的3-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基氧基)-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，84H)，1.81和1.89(2s，6H)，1.93(s，6H)，2.15-2.55(m，8H)，3.45-3.7(m，2H)，3.80(br d，1H，J＝9Hz)，3.9-4.45(m，6H)，4.6-4.8(m，3H)，4.87(d，1H，J＝8.1Hz)，5.0-5.25(m，2H)，5.48(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.1-6.3(m，2H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式用鋅(1.5g，23mmol)使上述(2)中制備的化合物(0.602g，0.310mmol)脫保護并在有EEDQ(0.115g，0.467mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.17g，0.37mmol)使之酰化而得到0.365g(66％)的3-羥基-(R)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體
1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，126H)，2.15-2.55(m，12H)，3.18(brs，1H)，3.45-3.8(m，8H)，3.85-4.05(m，2H)，4.69(q，1H，J＝～9.5Hz)，5.05-5.25(m，3H)，5.42(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.42(d，1H，J＝7.8Hz)，6.59(d，1H，J＝7.2Hz)，7.1-7.4(m，10H).
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化鉑(175mg)存在的情況下使上述(3)中制備的化合物(0.355g，0.196mmol)氫化而得到0.265g(77％)的3-羥基-(R)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種無色固體mp159-160℃；IR(膜)3291，2956，2922，2853，1738，1732，1716，1650，1643，1556，1468，1171，1109，1083，1051cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.15-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7Hz)，3.25-3.45(m，2H)，3.5-4.05(m，12H)，4.19(q，1H，J＝～9.5Hz)，4.48(d，1H，J＝8.4Hz)，5.04-5.26(m，4H)，7.18(d，1H，J＝7.8Hz)，7.27(d，1H，J＝8.7Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.4，170.7，170.6，170.1，101.0，76.0，72.6，71.4，71.0，70.8，70.6，68.7，61.8，60.5，55.3，50.5，45.6，41.5，41.4，39.5，34.6，34.4，34.3，32.0，29.8，29.4，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
對C99H192N3O18P H2O的計算分析值C，67.50；H，11.10；N，2.39；P，1.76.。測定值C，67.40；H，11.22；N，2.34；P，2.11。
實施例4(B3)3-羥基-(S)-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C11H23CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2)(1)用飽和NaHCO3水溶液(250mL)和氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(14.05mL，102mmol)處理D-氨基葡糖苷鹽酸鹽(20g，92.8mmol)溶于H2O(250mL)所得到的溶液并劇烈攪拌18小時。在多孔漏斗上收集形成的白色固體并在真空中干燥24小時。將該固體溶于吡啶(100mL)所得到的溶液冷卻至0℃并通過經漏斗添加乙酐(100mL)來處理。在室溫下將該溶液攪拌18小時、傾入1L的H2O并用CHCl3(3×500mL)提取。在真空中除去溶劑而得到45g(定量)的N-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃葡糖苷，其可不經過進一步純化使用1H NMR(CDCl3)δ2.06(s，6H)，2.12(s，3H)，2.22(s，3H)，4.03(m，1H)，4.07(d，1H，J＝12.4Hz)，4.22(dt，1H，J＝9.9，3.6Hz)，4.30(dd，1H，J＝12.4，4.0Hz)，4.64(d，1H，J＝9.6Hz)，5.28(dt，1H，J＝10.2，9.9Hz)，6.25(d，1H，J＝3.6Hz).
(2)將(R)-2-氨基-3-芐氧基-1-丙醇(5g，27.6mmol)溶于CH2Cl2(250mL)所得到的溶液用氯甲酸烯丙酯(3.2mL，30mmol)和飽和NaHCO3水溶液(250mL)處理18小時。分離有機層并在真空中濃縮。通過使用30％EtOAc/己烷洗脫的層析法進行純化而得到6.9g(94％)的(R)-2-(烯丙氧基羰基氨基)-3-芐氧基-1-丙醇、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ2.56(brs，1H)，3.69(m，3H)，388(m，2H)，4.54(s，2H)，4.58(d，2H，J＝5.6Hz)，5.23(dd，1H，J＝10.4，1.1Hz)，5.33(dd，1H，J＝17.1，1.1Hz)，5.42(m，1H)，5.93(m，1H)，7.35(m，5H).
(3)在室溫下將上述(1)和(2)中制備的化合物(分別為8.9g、17mmol和3.6g、10mmol)溶于CH2Cl2所得到的溶液用醚合三氟化硼(4.3mL，34mmol)處理16小時。用飽和NaHCO3水溶液(100mL)處理該反應混合物并用EtOAc(3×100mL)提取。干燥(Na2SO4)并濃縮合并的EtOAc提取物。使用20％EtOAc/己烷對獲得的殘余物進行層析而得到6.03g(83％)的3-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脫氧-3，4，6-三-O-乙酰基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ2.02(s，3H)，2.03(s，3H)，2.08(s，3H)，3.45(m，1H)，3.54(m，1H)，3.64(m，1H)，3.76(d，1H，J＝7.2Hz)，3.91(m，2H)，4.12(d，1H，J＝12.2Hz)，4.26(dd，1H，J＝12.4，4.7Hz)，4.37(d，1H，J＝8.2Hz)，4.43(d，1H，J＝12.1Hz，4.55(m，2H)，4.68(m，2H)，4.87(d，1H，J＝8.0Hz)，5.07(m，2H)，5.21(d，1H，J＝9.7Hz)，5.29(d，1H，J＝17.3Hz)，5.91(m，1H)，7.36(m，5H).
(4)在室溫下將上述(3)中制備的化合物(6.0g，8.3mmol)溶于甲醇(83mL)所得到的溶液用氫氧化銨(8.3mL)處理2小時。在真空中除去溶劑并用2，2-二甲氧基丙烷(50mL)置換且加入樟腦磺酸(100mg)。將該反應體系攪拌18小時、用固體NaHCO3(1g)中和、過濾并在真空中濃縮。通過使用50％EtOAc/己烷的層析進行純化而得到4.58g(86％)的3-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷1H NMR(CDCl3)δ1.46(s，3H)，1.53(s，3H)，2.94(m，1H)，3.25(m，1H)，3.55(m，4H)，3.83(m，3H)，3.93(m，3H)，4.52(m，5H)，4.68(d，1H，J＝12.1Hz)，4.77(d，1H，J＝12.1Hz)，5.07(m，1H)，5.26(m，2H)，5.92(m，1H)，7.37(m，5H).
(5)在有EDC MeI(560mg，1.87mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)存在的情況下用(R)-3-十二酰氧基十四酸(730mg，1.71mmol)處理上述(4)中制備的化合物(1.0g，1.56mmol)溶于CH2Cl2(20mL)所得到的溶液。在室溫下將該反應體系攪拌18小時并通過使用20％EtOAc/己烷作為洗脫劑的6×8cm硅膠塞過濾而得到1.33g(82％)的3-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.8Hz)，1.1-1.6(m，38H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.28(t，2H，J＝7.4Hz)，2.49(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.61(dd，1H，J＝15.1，6.6Hz)，3.25-4.0(m，9H)，4.38(m，2H)，4.54(m，2H)，4.65(m，2H)，4.97(m，2H)，5.25(m，5H)，5.88(m，1H)，7.34(m，5H).
(6)向上述(5)中制備的化合物(1.31g，1.25mmol)溶于THF(20mL)所得到的溶液中加入丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)并在氬氣流中將該溶液脫氣30分鐘。加入四(三苯膦)鈀(O)(200mg)并在室溫下將該反應體系攪拌2小時且然后在真空中濃縮。將所得的殘余物進行硅膠層析，使用5-10％EtOAc/CHCl3洗脫。在有EEDQ(370mg，1.5mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液存在的情況下用(R)-3-十二酰氧基十四酸(560mg，1.38mmol)使獲得的游離胺酰化。在室溫下攪拌18小時后，在真空中除去溶劑并使所得的油狀物進行硅膠層析，使用20％EtOAc/己烷洗脫，從而得到1.02g(63％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為-種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，78H)，1.38(s，3H)，1.46(s，3H)，2.26(m，4H)，2.49(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.61(dd，1H，J＝15.1，6.6Hz)，3.25-4.0(m，9H)，5.01(m，2H)，6.02(d，1H，J＝8.4Hz)，7.34(m，5H).
(7)在60℃下，用90％AcOH水溶液(20mL)將上述(6)中制備的化合物(1.0g，0.78mmol)處理1小時。將該溶液在真空中濃縮并通過與甲苯共沸(10mL)而除去殘余的AcOH和H2O。將殘余物溶于CH2Cl2、冷卻至0℃并用吡啶(0.076mL，0.94mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(205mg，0.86mmol)溶于CH2Cl2(5mL)所得到的溶液處理。然后將該反應混合物溫熱并在室溫下攪拌18小時。將所得的淡黃色溶液用氯磷酸二苯酯(0.24mL，1.17mmol)、三乙胺(0.22mL，1.56mmol)和催化劑4-吡咯烷子基吡啶(50mg)處理且然后在室溫下再攪拌24小時。將該反應混合物用Et2O(100mL)稀釋并用10％HCl水溶液(50mL)洗滌。分離有機層、用Na2SO4干燥并在真空中濃縮。使用10％EtOAc/己烷進行硅膠層析而得到1.13g(85％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.6(m，78H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.6Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.23(m，15H).
(8)按照于實施例2-(7)相同的方式用鋅(2.1g，32mmol)使上述(7)中制備的化合物(1.1g，0.65mmol)脫保護并在有EEDQ(230mg，0.94mmol)存在的情況下用(R)-3-十二酰氧基十四酸(330mg，0.78mmol)使之酰化而得到399mg(37％)的3-芐氧基-(S)-2[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體。
(9)按照于實施例2-(8)相同的方式在有氫氧化鈀(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化鉑(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情況下使上述(8)中制備的化合物(399mg，0.24mmol)氫化而得到65mg(16％)的3-羥基-(S)-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色粉末mp181-184℃(分解)IR(膜)3306，2956，2922，2852，1732，1644，1549，1467，1377，1164，1106，1051，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，123H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.3-4.0(m，13H)，4.23(m，1H)，4.44(d，1H，J＝7.7Hz)，5.0-5.3(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，173.5，173.3，170.8，170.5，170.1，101.0，75.5，73.0，71.1，70.9，70.6，67.9，61.6，60.7，54.4，50.4，45.8，41.6，41.4，39.6，34.6，31.9，29.7，29.4，29.3，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.
對C93H180N3O18P·H2O的計算分析值C，66.59；H，10.94；N，2.50；P，1.85。測定值C，66.79；H，10.65；N，2.36；P，1.70。
實施例5(B4)3-羥基-(S)-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C10H21CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例4-(5)中所述相同的方式在有EDC·MeI(560mg，1.87mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的CH2Cl2(20mL)溶液存在的情況下用(R)-3-十一酰氧基十四酸(705mg，1.71mmol)酰化實施例4-(4)中制備的化合物(1.0g，1.56mmol)而得到1.23g(77％)的3-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，＝6.9Hz)，1.1-1.6(m，36H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.28(m，2H)，2.52(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.61(dd，1H，＝15.5，6.8Hz)，3.25(m，1H)，3.35-4.0(m，9H)，4.31(m，2H)，4.54(m，2H)，4.64(m，2H)，5.02(m，2H)，5.18(m，2H)，5.25(m，1H)，5.86(m，1H)，7.34(m，5H).
(2)按照于實施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(200mg)存在的情況下在THF(20mL)中使上述(1)中制備的化合物(1.21g，1.17mmol)脫保護且然后在有EEDQ(370mg，1.5mmol)存在的情況下用(R)-3-十一酰氧基十四酸(540mg，1.30mmol)使之酰化而得到921mg(61％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，72H)，1.38(s，3H)，1.46(s，3H)，2.26(m，3H)，2.38(m，5H)，2.49(dd，1H，J＝15.2，6.0Hz)，2.61(dd，1H，J＝15.0，6.5Hz)，3.25-4.0(m，9H)，4.30(m，2H)，4.59(m，3H)，6.03(d，1H，J＝8.2Hz)，7.34(m，5H).
(3)按照與實施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(2)中制備的化合物(910g，0.71mmol)脫保護且然后用吡啶(0.071mL，0.88mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(195mg，0.80mmol)的CH2Cl2溶液處理，隨后用氯磷酸二苯酯(0.23mL，1.10mmol)、三乙胺(0.20mL，1.46mmol)和催化劑4-吡咯烷子基吡啶(50mg)處理而得到1.10g(89％)的3-芐氧基-(S)-2[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.7Hz)，1.1-1.6(m，72H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.7Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.6Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(4)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(2.0g，30mmol)使上述(3)中制備的化合物(1.0g，0.59mmol)脫保護并在有EEDQ(210mg，0.85mmol)存在的情況下用(R)-3-十一酰氧基十四酸(292mg，0.71mmol)使之酰化而得到388mg(40％)的3-芐氧基-(S)-2[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體。
(5)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化鉑(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情況下，使上述(4)中制備的化合物(388mg，0.24mmol)氫化而得到65mg(17％)的3-羥基-(S)-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色粉末mp183-184℃；IR(膜)3306，2956，2922，2852，1732，1644，1550，1467，1377，1164，1106，1052，721cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，117H)，2.2-2.7(m，12H)，3.07(q，6H，J＝7.1Hz)，3.3-3.9(m，13H)，4.23(m，1H)，4.45(d，1H，J＝8.2Hz)，5.0-5.3(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.5，173.3，170.8，170.5，170.1，101.0，75.5，73.1，71.5，71.3，70.9，70.6，67.8，61.6，60.7，54.4，50.5，45.8，41.5，41.4，39.5，34.6，34.4，32.0，31.2，29.8，29.7，29.4，28.6，26.1，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
對C90H174N3O18P·H2O的計算分析值C，66.10；H，10.85；N，2.57；P，1.89。測定值C，66.34；H，10.69；N，2.32；P，1.99。
實施例6(B5)3-羥基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1 R8＝PO3H2)(1)按照與實施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC MeI(1.12g，3.74mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)的CH2Cl2(40mL)溶液存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(1.36g，3.42mmol)使實施例4-(4)中制備的化合物(2.0g，3.12mmol)酰化而得到2.49g(79％)的3-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.7Hz)，1.1-1.6(m，34H)，1.36(s，3H)，1.46(s，3H)，2.27(t，2H，J＝6.9Hz)，2.48(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.60(dd，1H，J＝15.1，6.7Hz)，3.25(m，1H)，3.35-4.0(m，9H)，4.23(m，1H)，4.42(m，1H)，4.52(m，4H)，4.95(m，2H)，5.17(m，3H)，5.88(m，1H)，7.36(m，5H).
(2)按照與實施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(2.0mL，1.75mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(400mg)存在的情況下在THF(40mL)中使上述(1)中制備的化合物(2.47g，2.42mmol)脫保護且然后在有EEDQ(740mg，3mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(1.06g，2.66mmol)使之酰化而得到1.86g(60％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體
1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，68H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.32(m，4H)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.62(dd，1H，J＝15.1，6.8Hz)，3.29(m，2H)，3.44(m，1H)，3.55(m，1H)，3.74(m，3H)，3.93(m，1H)，4.18(m，1H)，4.34(m，1H)，4.57(d，1H，J＝11.8Hz)，4.65(m，2H)，5.01(m，2H)，6.04(d，1H，J＝8.3Hz)，7.36(m，5H).
(3)按照與實施例4-(7)中所述相同的方式在90％AcOH水溶液(40mL)中使上述(2)中制備的化合物(900mg，0.72mmol)脫保護且然后用吡啶(0.071mL，0.88mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(195mg，0.80mmol)的CH2Cl2溶液處理，隨后用氯甲酸二苯酯(0.23mL，1.10mmol)、三乙胺(0.20mL，1.46mmol)和催化劑4-吡咯烷子基吡啶(50mg)處理而得到1.05g(86％)的3-芐氧基-(S)-2[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.3Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.5Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(4)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(2.0g，30mmol)使上述(3)中制備的化合物(1.0g，0.60mmol)脫保護并在有EEDQ(210mg，0.86mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(285mg，0.72mmol)使之酰化而得到332mg(34％)的3-芐氧基-(S)-2[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體。
(5)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化鉑(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情況下使上述(4)中制備的化合物(332mg，0.20mmol)氫化而得到173mg(55％)的3-羥基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色粉末mp179-181℃；IR(膜)3295，2956，2923，2853，1732，1650，1555，1467，1377，1320，1169，1134，1104，1051，979，801，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，12H)，3.07(q，6H，J＝6.5Hz)，3.3-4.3(m，14H)，4.45(d，1H，J＝8.0Hz)，5.0-5.3(m，4H)，7.39(m，1H)，7.53(d，1H，J＝9.1Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.4，173.2，170.7，170.5，170.1，101.0，75.4，73.1，71.6，71.1，70.8，70.5，67.8，61.4，60.8，54.3，50.4，45.8，41.3，39.5，34.5，31.9，29.8，29.7，29.4，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
對C87H168N3O18P·H2O的計算分析值C，65.58；H，10.75；N，2.64；P，1.94。測定值C，65.49；H，10.75；N，2.64；P，1.97。
實施例7(B6)3-羥基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-6-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R8＝H，R6＝OH，P＝1 R9＝PO3H2)(1)按照與實施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使在實施例6-(2)中制備的化合物(900mg，0.72mmol)脫保護。將殘余物溶于CH2Cl2(20mL)、冷卻至0℃并用三乙胺(0.14mL，1.0mmol)和氯磷酸二苯酯(0.17mL，0.8mmol)處理。將該混合物再攪拌6小時且然后用50mL的10％HCl處理。將產物用EtOAc(3×50mL)提取并用Na2SO4干燥。使用50％EtOAc/己烷進行硅膠層析而得到636mg(63％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-6-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.0Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.79(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.89(d，1H，J＝6.5Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.75(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.65(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(2)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(722mg，11mmol)使上述(1)中制備的化合物(620g，0.44mmol)脫保護并在有EEDQ(170mg，0.58mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(190mg，0.48mmol)使之酰化而得到254mg(36％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-6-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體。
(3)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化鉑(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情況下使上述(2)中制備的化合物(254mg，0.16mmol)氫化而得到34mg(13％)的3-羥基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-6-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色粉末mp169-171℃；IR(膜)3306，2922，2853，1732，1644，1548，1467，1377，1316，1165，1106，1053，856，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，12H)，3.05(m，6H)，3.3-3.95(m，12H)，4.11(m，1H)，4.34(m，1H)，4.89(m，1H)，5.0-5.3(m，4H).13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.4，171.1，170.5，101.3，75.3，74.9，71.2，71.0，70.6，68.8，67.3，65.1，61.4，53.4，50.7，45.9，41.5，41.3，39.6，34.6，32.0，29.8，29.6，29.4，25.3，25.1，22.7，14.1，8.7.
對C87H168N3O18P·H2O的計算分析值C，65.58；H，10.75；N，2.64；P，1.94。測定值C，65.60；H，10.34；N，2.36；P，2.01。
實施例8(B7)3-羥基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C8H17CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1 R8＝PO3H2)(1)按照與實施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(560mg，1.87mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的CH2Cl2(20mL)溶液存在的情況下用(R)-3-壬酰氧基十四酸(660mg，1.71mmol)使實施例4-(4)中制備的化合物(1.0g，1.56mmol)酰化而得到1.31g(83％)的3-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，6H，J＝6.8Hz)，1.1-1.6(m，32H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.27(t，2H，J＝7.4Hz)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.1，6.8Hz)，3.26(m，1H)，3.35-4.0(m，9H)，4.32(d，1H，J＝7.8Hz)，4.41(d，1H，J＝12.0Hz)，4.51(m，4H)，4.95(m，2H)，5.18(m，2H)，5.29(d，1H，J＝17.2Hz)，5.88(m，1H)，7.36(m，5H).
(2)按照與實施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(200mg)存在的情況下，在THF(20mL)中使上述(1)中制備的化合物(1.29g，1.28mmol)脫保護且然后在有EEDQ(370mg，1.5mmol)存在的情況下用(R)-3-壬酰氧基十四酸(540mg，1.41mmol)使之酰化而得到1.02g(65％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.1Hz)，1.1-1.7(m，64H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.28(m，4H)，2.50(dd，1H，J＝15.5，6.0Hz)，2.62(dd，1H，J＝14.8，6.3Hz)，3.27(m，2H)，3.44(m，1H)，3.55(m，1H)，3.74(m，3H)，3.93(m，1H)，4.18(m，1H)，4.34(m，2H)，4.57(d，1H，J＝11.8Hz)，4.65(m，2H)，4.97(t，1H，J＝9.6Hz)，5.06(d，1H，J＝8.6Hz)，5.15(m，2H)，6.05(d，1H，J＝8.2Hz)，7.35(m，5H).
(3)按照與實施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(2)中制備的化合物(1.0g，0.81mmol)脫保護、用吡啶(0.080mL，0.98mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(215mg，0.89mmol)的CH2Cl2溶液處理，隨后用氯磷酸二苯酯(0.25mL，1.22mmol)、三乙胺(0.21mL，1.52mmol)和催化劑4-吡咯烷子基吡啶(50mg)處理而得到1.17g(87％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.1Hz)，1.1-1.6(m，64H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.5Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41.(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(4)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式用鋅(2.2g，33mmol)使上述(3)中制備的化合物(1.1g，0.66mmol)脫保護并在有EEDQ(235mg，0.95mmol)存在的情況下用(R)-3-壬酰氧基十四酸(305mg，0.79mmol)使之酰化而得到373mg(35％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體。
(5)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化鉑(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情況下使上述(4)中制備的化合物(373mg，0.23mmol)氫化而得到43mg(12％)的3-羥基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色粉末mp176-179℃；IR(膜)3298，2956，2923，2853，1733，1646，1551，1467，1337，1316，1254，1166，1106，1053，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.87(t，18H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，105H)，2.2-2.7(m，12H)，3.03(q，6H，J＝7.0Hz)，3.3-4.3(m，14H)，4.43(d，1H，J＝7.1Hz)，5.0-5.3(m，4H)，7.12(d，1H，J＝7.7Hz)，7.17(d，1H，J＝8.2Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，173.5，173.3，170.8，170.5，170.1，100.9，75.5，73.1，71.4，71.1，70.9，70.6，67.8，61.6，60.7，54.3，50.5，45.8，41.6，41.4，39.5，34.6，34.4，32.0，31.9，29.8，29.4，29.3，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
對C88H164N3O18P的計算分析值C，65.81；H，10.65；N，2.74；P，2.02。測定值C，66.14；H，10.46；N，2.58；P，1.84。
實施例9(B8)3-羥基-(S)-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C6H13CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1 R8＝PO3H2)(1)按照與實施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(560mg，1.87mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的CH2Cl2(20mL)溶液存在的情況下用(R)-3-庚酰氧基十四酸(610mg，1.71mmol)使實施例4-(4)中制備的化合物(1.0g，1.56mmol)酰化而得到1.24g(82％)的3-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.0Hz)，1.1-1.6(m，28H)，1.38(s，3H)，1.47(s，3H)，2.29(t，2H，J＝7.4Hz)，2.51(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.1，6.8Hz)，3.26(m，1H)，3.35-4.0(m，9H)，4.32(d，1H，J＝7.3Hz)，4.41(d，1H，J＝12.0Hz)，4.51(m，4H)，4.95(m，2H)，5.18(m，2H)，5.29(d，1H，J＝17.3Hz)，5.88(m，1H)，7.36(m，5H).
(2)按照與實施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(200mg)存在的情況下在THF(20mL)中使上述(1)中制備的化合物(1.22g，1.25mmol)脫保護且然后在有EEDQ(370mg，1.5mmol)存在的情況下用(R)-3-庚酰氧基十四酸(490mg，1.38mmol)使之酰化而得到925mg(62％)的3-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，56H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.32(m，4H)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.62(dd，1H，J＝15.1，6.8Hz)，3.29(m，2H)，3.44(m，1H)，3.55(m，1H)，3.74(m，3H)，3.93(m，1H)，4.18(m，1H)，4.34(m，1H)，4.57(d，1H，J＝11.8Hz)，4.65(m，2H)，5.01(m，2H)，6.04(d，1H，J＝8.3Hz)，7.36(m，5H).
(3)按照與實施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(2)中制備的化合物(920mg，0.76mmol)脫保護且然后用吡啶(0.075mL，0.92mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(200mg，0.84mmol)的CH2Cl2溶液處理，隨后用氯磷酸二苯酯(0.24mL，1.14mmol)、三乙胺(0.21mL，1.52mmol)和催化劑4-吡咯烷子基吡啶(50mg)處理而得到1.03g(83％)的3-芐氧基-(S)-2[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.3Hz)，1.1-1.6(m，56H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.5Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(4)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(2.0g，31mmol)使上述(3)中制備的化合物(1.0g，0.61mmol)脫保護并在有EEDQ(220mg，0.88mmol)存在的情況下用(R)-3-庚酰氧基十四酸(260mg，0.73mmol)使之酰化而得到203mg(21％)的3-芐氧基-(S)-2[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體。
(5)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀(100mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化鉑(200mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情況下使上述(4)中制備的化合物(203mg，0.13mmol)氫化而得到39mg(21％)的3-羥基-(S)-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色粉末mp171-172℃；IR(膜)3305，2955，2924，2853，1734，1644，1553，1466，1377，1170，1102，1052，722cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.1-1.7(m，93H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.3-4.0(m，13H)，4.23(q，1H，J＝9.3Hz)，4.43(d，1H，J＝8.2Hz)，5.0-5.3(m，4H)，7.30(d，1H，J＝8.5Hz)，7.43(d，1H，J＝8.5Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.5，173.2，170.8，170.5，170.2，101.0，77.2，75.5，73.1，71.6，71.1，70.9，70.6，67.8，61.6，60.8，54.4，50.5，45.8，41.6，41.4，39.5，34.6，34.4，32.0，31.6，29.8，29.6，29.4，28.9，25.4，25.1，22.7，22.6，14.1，8.6.
對C78H150N3O18P·H2O的計算分析值C，63.86；H，10.44；N，2.86；P，2.11。測定值C，63.47；H，10.20；N，2.59；P，2.02。
實施例10(B9)4-羥基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]丁基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝P＝1，M＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例4-(3)中所述相同的方式，在有醚合三氟化硼(3.0mL，23.6mmol)存在的情況下使實施例4-(1)中制備的化合物(3.1g，5.9mmol)與(R)-3-(烯丙氧基羰基氨基)-4-芐氧基-1-丁醇(1.1g，3.94mmol)偶聯而得到1.96g(67％)的4-芐氧基-(S)-3-(烯丙氧基羰基氨基)丁基2-脫氧-3，4，6-三O-乙酰基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體。按照與實施例4-(4)中所述相同的方式，在甲醇(25mL)中用氫氧化銨(5mL)使上述制備的化合物(1.8g，2.43mmol)脫去乙酰基且然后用2，2-二甲氧基丙烷(25mL)和樟腦磺酸(100mg)處理而得到1.34g(84％)of 4-芐氧基-(S)-3-(烯丙氧基羰基氨基)-丁基-2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷。
(2)按照與實施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(550mg，1.85mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的存在下于CH2Cl2(15mL)中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(670mg，1.68mmol)使上述(1)中制備的化合物(1.0g，1.53mmol)酰化而得到1.03g(65％)的4-芐氧基-(S)-3-(烯丙氧基羰基氨基)丁基-2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.6(m，34H)，1.37(s，3H)，1.47(s，3H)，1.85(m，2H)，2.28(t，2H，J＝7.6Hz)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.1，6.7Hz)，3.30(m，1H)，3.49(m，4H)，3.68(t，1H，J＝9.4Hz)，3.77(t，1H，J＝10.4Hz)，3.92(m，3H)，4.54(m，5H)，4.69(m，2H)，5.1-5.4(m，4H)，5.91(m，1H)，7.33(m，5H).
(3)按照與實施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(200mg)存在的情況下在THF(20mL)中使上述(2)中制備的化合物(1.0g，0.97mmol)脫保護且然后在有EEDQ(317mg，1.28mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(425mg，1.07mmol)使之酰化而得到660mg(51％)的4-芐氧基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，68H)，1.37(s，3H)，1.47(s，3H)，2.26(q，2H，J＝7.1Hz)，2.41(m，2H)，2.62(dd，1H，J＝14.9，6.4Hz)，3.29(m，1H)，3.48(m，3H)，3.71(m，2H)，3.92(m，2H)，4.18(m，1H)，4.49(m，2H)，4.68(q，2H，J＝11.5Hz)，5.15(m，2H)，5.55(d，1H，J＝8.8Hz)，6.17(d，1H，J＝7.2Hz)，7.32(m，5H).
(4)按照與實施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(3)中制備的化合物(640mg，0.48mmol)脫保護且然后用吡啶(0.047mL，0.58mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(127mg，0.53mmol)的CH2Cl2溶液處理，隨后用氯磷酸二苯酯(0.15mL，0.72mmol)、三乙胺(0.13mL，0.96mmol)和催化劑4-吡咯烷子基吡啶(50mg)處理而得到389mg(47％)的4-芐氧基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.79(s，3H)，1.86(s，3H)，2.22(m，4H)，2.40(m，4H)，3.49(m，4H)，3.78(m，1H)，3.93(m，1H)，4.1-4.5(m，5H)，4.9-4.6(m，4H)，5.13(m，2H)，5.51(t，1H，J＝8.9Hz)，5.84(d，1H，J＝6.9Hz)，6.09(d，1H，J＝8.0Hz)，7.26(m，15H).
(5)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(752mg，11.5mmol)使上述(4)中制備的化合物(375g，0.23mmol)脫保護并在有EEDQ(70mg，0.28mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(101mg，0.25mmol)使之酰化而得到270mg(67％)的4-芐氧基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體。
(6)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀(150mg)/碳于EtOH(10mL)中和氧化鉑(300mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情況下使上述(5)中制備的化合物(270mg，0.15mmol)氫化而得到93mg(39％)的4-羥基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色粉末mp179-181℃(分解)；IR(膜)3287，2956，2923，2853，1734，1654，1552，1466，1378，1246，1164，1106，1085，1052，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，14H)，3.06(q，6H，J＝6.9Hz)，3.2-4.0(m，13H)，4.21(m，1H)，4.50(d，1H，J＝7.7Hz)，5.0-5.3(m，4H)，7.11(m，2H)；13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.5，173.3，170.9，170.5，170.1，101.1，77.2，75.5，72.8，71.3，71.0，70.6，66.4，64.0，60.7，54.8，50.2，45.8，41.6，39.5，34.6，34.5，34.4，32.0，30.6，29.8，29.7，29.6，29.5，29.4，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.
對C88H170N3O18P的計算分析值C，66.65；H，10.78；N，2.64；P，1.95。測定值C，66.65；H，10.68；N，2.50；P，1.94。
實施例11(B10)4-羥基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]丁基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，p＝2，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例4-(3)中所述相同的方式，在有醚合三氟化硼(4.9mL，38.0mmol)存在的情況下使實施例4-(1)中制備的化合物(5.1g，9.7mmol)與(R)-3-(烯丙氧基羰基氨基)-4-芐氧基-1-丁醇(1.8g，6.45mmol)偶聯而得到2.92g(61％)的4-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脫氧-3，4，6-三-O-乙酰基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體。按照與實施例4-(4)中所述相同的方式(100mg)在甲醇(35mL)中用氫氧化銨(7mL)使上述制備的化合物(2.6g，3.51mmol)脫去乙酰基且然后用2，2-二甲氧基丙烷(35mL)和樟腦磺酸(100mg)處理而得到1.9g(72％)的4-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丁基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷。
(2)按照與實施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(550mg，1.85mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的存在下于CH2Cl2(15mL)中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(670mg，1.68mmol)使上述(1)中制備的化合物(1.0g，1.53mmol)酰化而得到1.28g(81％)的4-芐氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丁基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，34H)，1.37(s，3H)，1.47(s，3H)，1.82(m，2H)，2.28(t，2H，J＝7.7Hz)，2.50(dd，1H，J＝15.3，6.0Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.2，6.7Hz)，3.16(m，1H)，3.56(m，3H)，3.65(t，1H，J＝9.6Hz)，3.75(t，1H，J＝10.4Hz)，3.88(m，4H)，4.32(d，1H，J＝8.5Hz)，4.46(s，2H)，4.54(m，2H)，4.67(m，2H)，4.90(m，1H)，5.26(m，3H)，5.89(m，1H)，7.33(m，5H).
(3)按照與實施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(200mg)存在的情況下在THF(20mL)中使上述(2)中制備的化合物(1.25g，1.21mmol)脫保護且然后在有EEDQ(362mg，1.46mmol)在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(530mg，1.33mmol)使之酰化而得到1.16g(72％)的4-芐氧基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為-種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.4Hz)，1.1-1.7(m，68H)，1.37(s，3H)，1.45(s，3H)，2.26(q，2H，J＝7.4Hz)，2.34(m，1H)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.62(dd，1H，J＝15.4，6.3Hz)，3.12(m，1H)，3.5-3.95(m，7H)，4.14(m，1H)，4.29(d，1H，J＝8.0Hz)，4.67(m，2H)，4.86(t，1H，J＝9.6Hz)，5.15(m，2H)，6.16(d，1H，J＝8.3Hz)，7.35(m，5H).
(4)按照與實施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(3)中制備的化合物(1.1g，0.83mmol)脫保護且然后用吡啶(0.080mL，1.0mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(220mg，0.91mmol)的CH2Cl2溶液處理，隨后用氯磷酸二苯酯(0.15mL，0.72mmol)、三乙胺(0.26mL，1.25mmol)和催化劑4-吡咯烷子基吡啶(50mg)處理而得到802mg(56％)的4-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.8Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.79(s，3H)，1.88(s，3H)，2.23(m，4H)，2.37(m，4H)，3.57(m，4H)，3.83(m，1H)，4.29(m，3H)，4.44(m，2H)，4.69(m，4H)，5.14(m，4H)，5.62(d，1H，J＝7.6Hz)，6.15(d，1H，J＝8.3Hz)，7.25(m，15H).
(5)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.42g，21.7mmol)使上述(4)中制備的化合物(750mg，0.43mmol)脫保護并在有EEDQ(130mg，0.53mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(190mg，0.48mmol)使之酰化而得到483mg(64％)的4-芐氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色非晶固體。
(6)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化鉑(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情況下使上述(5)中制備的化合物(483mg，0.27mmol)氫化而得到238mg(55％)的4-羥基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色粉末mp181-183℃(分解)；IR(膜)3294，2956，2923，2853，1732，1650，1556，1466，1377，1320，1246，1172，1108，1082，1058，859，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，14H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-4.0(m，13H)，4.21(m，1H)，4.46(d，1H，J＝8.3Hz)，5.0-5.3(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，173.4，173.2，171.2，170.7，101.0，77.2，75.4，73.1，71.4，71.3，71.1，70.9，70.6，60.7，58.4，54.7，46.3，45.9，41.6，41.1，39.7，34.8，34.6，34.4，31.9，29.8，29.6，29.5，29.3，25.4，25.3，25.1，22.7，14.1，8.6.
對C88H170N3O18P的計算分析值C，66.51；H，10.78；N，2.64；P，1.95。測定值C，66.81；H，10.68；N，2.53；P，1.79。
實施例12(B11)N-(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝ON＝M＝P＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2).
(1)按照與實施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(0.353g，1.19mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.541g，1.19mmol)使L-絲氨酸芐酯(0.212g，1.08mmol)酰化而得到0.642g(94％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-L-絲氨酸芐酯、為一種蠟狀的固體mp56-61℃；1HNMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝～7Hz)，1.1-1.7(m，42H)，2.29(t，2H，J＝7.5Hz)，2.50(m，2H)，3.87(br t，1H)，3.95(m，2H)，4.65(m，1H)，5.1-5.25(m，3H)，6.69(d，1H，J＝7Hz)，7.34(br s，5H).
(2)按照與實施例2-(6)中所述相同的方式，在有氫化汞(0.3g，1.2mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(0.19g，0.30mmol)與實施例2-(4)中制備的化合物(0.635g，0.478mmol)偶聯而得到0.425g(77％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯、為一種非晶固體。
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(0.72g，11mmol)使上述(2)中制備的化合物(0.405g，0.22mmol)脫保護并在有EEDQ(0.082g，0.33mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.12g，0.26mmol)使之酰化而得到0.277g(66％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)1.0-1.75(m，126H)，2.15-2.45(m，10H)，2.53(dd，1H，J＝14.7，6.0Hz)，2.67(dd，1H，J＝14，6.0Hz)，3.25(br t，1H，J＝7Hz)，3.35-3.75(m，4H)，3.88(dd，1H，J＝11.1Hz)，4.23dd，1H，J＝11.1，3Hz)，4.6-4.75(m，2H)；5.03(d，1H，J＝8.1Hz)，5.05-5.25(m，4H)，5.48(t，1H，J＝～10Hz)，6.40(d，1H，J＝7.5Hz)，7.01(d，1H，J＝8.1Hz)，7.1-7.4(m，15H).
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有5％鈀/碳(50mg)和氧化鉑(120mg)存在的情況下使上述(3)中制備的化合物(0.253g，0.133mmol)氫化而得到0.155g(62％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽、為一種無色固體mp180℃(分解)；IR(膜)3322，2956，2924，2852，1736，1732，1681，1673，1667，1660，1651，1467，1456，1247，1174，1110，1081cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～7Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.2-2.75(m，12H)，3.05(q，6H，J＝7Hz)，3.30(brs，13H)，3.7-3.9(m，3H)，3.96(d，1H，J＝12Hz)，4.05-4.3(m，2H)，4.34(m，1H)，4.53(d，1H，J＝7.8Hz)，5.05-5.3(m，4H)，7.25-7.35(m，2H)；13C NMR(CDCl3)δ173.4，173.2，171.0，170.3，170.2，169.9，169.8，100.8，75.1，73.4，71.1，70.7，70.4，70.3，60.2，54.3，45.6，41.2，41.1，39.2，34.6，34.4，34.2，32.0，29.8，29.5，25.4，25.2，22.7，14.2，8.6.
對C99H190N3O19P·5H2O的計算分析值C，64.35；H，10.91；N，2.27；P，1.68。測定值C，64.16；H，10.92；N，2.37；P，1.91.
實施例13(B12)N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C11H23CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2).
(1)按照與實施例2-5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(745mg，2.5mmol)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-十二酰氧基十四酸(935mg，2.2mmol)使L-絲氨酸芐酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到1.08g(90％)的N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-L-絲氨酸芐酯mp53-54℃.1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.5Hz)，1.1-1.6(m，46H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.50(d，2H，5.6Hz)，2.62(t，1H，J＝6.2Hz)，3.97(m，2H)，4.65(m，1H)，5.19(m，3H)，6.63(d，1H，J＝6.8Hz)，7.35(br s，5H).
(2)按照與實施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-十二酰氧基十四酸(946mg，2.22mmol)使實施例2-(1)中制備的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在AcOH水溶液(25mL)中脫保護而得到1.30g(81％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，28H)，1.59(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.6Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.2Hz)，4.71(m，2H)，5.07(m，2H)，5.27(d，1H，J＝8.8Hz).
(3)按照與實施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(398mg，1.66mmol)和吡啶(0.15mL，1.83mmol)于CH2Cl2(25mL)中處理上述(2)中制備的化合物(1.30g，1.51mmol)，隨后用三乙胺(0.42mL，3.02mmol)、氯磷酸二苯酯(0.47mL，2.27mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)處理而得到1.39g(71％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體
1HNMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，46H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.23(m，6H)，3.34(m，1H)，3.59(m，1H)，3.80(m，1H)，3.96(m，1H)，4.32(m，2H)，4.63(m，2H)，4.83(d，1H，J＝11.9Hz)，5.02(d，1H，J＝8.2Hz)，5.20(m，1H)，5.65(m，2H)，7.29(m，10H).
(4)在0℃下，用TFA(5mL)處理上述(3)中制備的化合物(1.30g，1.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液且然后將該體系溫至室溫18小時。在真空中除去溶劑并通過與甲苯共沸而除去剩余的TFA。在0℃下，用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)于CH2Cl2(20mL)中制備的Vilsmeier試劑處理內半縮醛(lactol)。將該反應體系緩慢溫至室溫下過夜并使之在50mL飽和NaHCO3水溶液和乙醚(50mL)之間分配。分離各層并用Na2SO4干燥有機相且在真空中濃縮。通過使用10％EtOAc/己烷的硅膠快速色譜法進行純化而得到1.09g(90％)的2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、為一種白色泡沫體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.8Hz)，1.2-1.70(m，46H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.43(m，2H)，4.30(m，4H)，4.72(m，3H)，5.09(m，1H)，5.50(t，1H，J＝9.5Hz)，5.79(d，1H，J＝8.0Hz)，6.27(d，1H，J＝3.6Hz)，7.19(m，10H).
(5)向(1)和(4)中制備的化合物(分別為540mg、0.90mmol和1.0g、0.82mmol)溶于1，2-二氯乙烷(20mL)所得到的溶液中加入粉狀4分子篩(300mg)并將該混懸液攪拌30分鐘。一次加入AgOTf(1.16g，4.5mmol)，30分鐘后將淤漿通過硅膠過濾并用30％EtOAc/己烷洗脫而得到1.10g(75％)的N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.5Hz)，1.1-1.65(m，92H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.67(m，2H)，4.30(m，3H)，4.72(m，5H)，5.18(m，4H)，5.46(m，1H)，6.07(m，1H)，6.62(d，1H，J＝7.9Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.83g，28mmol)使上述(5)中制備的化合物(1.0g，0.56mmol)脫保護并在有EEDQ(185mg，0.74mmol)存在的情況下用(R)-3-十二酰氧基十四酸(285mg，0.67mmol)使之酰化而得到420mg(44％)的N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯、為一種非晶固體。
(7)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀/碳于EtOH(10mL)中和氧化鉑(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情況下使上述(6)中制備的化合物(420mg，0.24mmol)氫化而得到240mg(60％)的N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽、為一種白色粉末mp181-182℃；IR(膜)3289，2956，2920，2851，1731，1656，1557，1467，1378，1182，1108，1080，1052，852，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，123H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.35(m，1H)，3.70(m，6H)，3.88(m，2H)，4.20(m，1H)，4.56(d，1H，J＝8.1Hz)，4.59(br s，1H)，5.16(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ176.9，173.3，173.2，172.7，169.6，169.1，101.5，74.8，71.2，70.9，69.2，60.5，53.1，51.4，46.1，41.5，41.0，39.2，34.3，34.2，34.0，32.0，29.8，29.7，29.4，29.2，25.6，25.3，25.2，25.1，22.7，14.1，8.7.
對C93H178N3O19P H2O的計算分析值C，66.04；H，10.73；N，2.48；P，1.83。測定值C，66.04；H，10.73；N，2.48；P，1.86。
實施例14(B13)N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O
膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C10H21CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(745mg，2.5mmol)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-十一酰氧基十四酸(905mg，2.2mmol)使L-絲氨酸芐酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到1.08g(92％)的N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-L-絲氨酸芐酯mp53-54℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，44H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.49(d，2H，J＝5.8Hz)，3.99(m，2H)，4.65(m，1H)，5.19(m，3H)，6.58(d，1H，J＝6.9Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照與實施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-十一酰氧基十四酸(915mg，2.22mmol)使實施例2-(1)中制備的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化而得到1.41g(82％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，32H)，1.60(m，4H)，2.31(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.6Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.2Hz)，4.71(m，2H)，5.07(m，2H)，5.27(d，1H，J＝8.7Hz).
(3)按照與實施例2-(3)中所述相同的方式，用2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基氯甲酸酯(403mg，1.68mmol)和吡啶(0.15mL，1.85mmol)在CH2Cl2(25mL)中處理上述(2)中制備的化合物(1.30，1.53mmol)，隨后用三乙胺(0.43mL，3.06mmol)、氯磷酸二苯酯(0.48mL，2.30mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)處理而得到1.37g(70％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1HNMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，44H)，1.80(s，3H)，1.89(s，3H)，2.23(m，6H)，3.58(m，3H)，4.32(m，1H)，4.71(m，2H)，4.83(d，1H，J＝12.1Hz)，5.01(d，1H，J＝8.1Hz)，5.20(m，1H)，5.62(m，2H)，7.25(m，10H).
(4)按照與實施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(4)中制備的化合物(1.28g，1.0mmol)脫保護且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)于CH2Cl2(20mL)中制備的Vilsmeier試劑處理而得到1.12g(93％)的2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、為-種白色泡沫體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.7Hz)，1.1-1.55(m，44H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(m，2H)，2.43(m，2H)，4.34(m，4H)，4.72(m，3H)，5.09(m，1H)，5.50(t，1H，J＝9.6Hz)，5.80(d，1H，J＝8.0Hz)，6.26(d，1H，J＝3.4Hz)，7.26(m，10H).
(5)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情況下使(1)和(4)中制備的化合物(分別為530mg、0.90mmol和1.0g、0.83mmol)偶聯而得到1.11g(76％)的N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯1HNMR(CDCl3)δ0.88(m，12H)，1.0-1.65(m，88H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.37(m，1H)，3.64(m，1H)，3.85(m，1H)，4.30(m，3H)，4.78(m，5H)，5.18(m，4H)，5.46(m，1H)，6.07(m，1H)，6.62(d，1H，J＝7.7Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(2.0g，30.5mmol)使上述(5)中制備的化合物(1.0g，0.57mmol)脫保護并在有EEDQ(185mg，0.75mmol)存在的情況下用(R)-3-十一酰氧基十四酸(280mg，0.68mmol)使之酰化而得到470mg(50％)的N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯、為一種非晶固體。
(7)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀/碳于EtOH(10mL)中和氧化鉑(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情況下使上述(6)中制備的化合物(470mg，0.27mmol)氫化而得到130mg(30％)的N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-O-[2脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽、為一種白色粉末mp181-183℃；IR(膜)3294，2923，2853，1734，1655，1466，1377，1163，1080，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，117H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.4-3.2(m，5H)，3.6-3.9(m，4H)，4.20(d，1H，9.8Hz)，4.54(d，1H，J＝8.0Hz)，4.62(br.s，1H)，5.17(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.3，172.8，172.2，169.6，169.1，101.5，77.2，74.8，70.9，69.2，60.5，58.5，53.1，51.5，46.1，41.5，41.1，39.2，34.6，34.4，34.1，32.0，29.8，29.7，29.4，29.2，25.6，25.2，25.1，22.7，1 8.5，14.2，8.7.
對C90H172N3O19P的計算分析值C，66.26；H，10.63；N，2.58；P，1.90。測定值C，66.56；H，10.57；N，2.47；P，1.91。
實施例15(B14)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-D-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(745mg，2.5mmol)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(875mg，2.2mmol)使D-絲氨酸芐酯(390mg，2.2mmol)酰化而得到1.05g(91％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-D-絲氨酸芐酯mp51-52℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(m，6H)，1.1-1.7(m，34H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.50(m，2H)，3.68(s，1H)，3.93(d，2H，J＝3.1Hz)，4.62(m，1H)，5.22(m，3H)，6.63(d，1H，J＝6.9Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照與實施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(884mg，2.22mmol)使實施例2-(1)中制備的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在AcOH水溶液(25mL)中脫保護而得到1.30g(77％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，30H)，1.59(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.6Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.2Hz)，4.71(m，2H)，5.07(m，2H)，5.27(d，1H，J＝8.8Hz).
(3)按照與實施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(396mg，1.65mmol)和吡啶(0.15mL，1.81mmol)于CH2Cl2(25mL)中處理上述(2)中制備的化合物(1.25，1.50mmol)，隨后用三乙胺(0.42mL，3.00mmol)、氯磷酸二苯酯(0.47mL，2.25mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)處理而得到1.31g(69％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.89(m，8H)，1.1-1.7(m，34H)，1.82(s，3H)，1.90(s，3H)，2.30(m，4H)，3.40(q，1H，J＝9.6Hz)，3.65(m，1H)，3.89(m，1H)，4.32(m，2H)，4.63(m，2H)，4.82(d，1H，J＝12.1Hz)，5.01(d，1H，J＝8.2Hz)，5.63(m，2H)，7.29(m，10H).
(4)按照與實施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(4)中制備的化合物(1.27g，1.0mmol)脫保護且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)的制備的Vilsmeier試劑處理而得到1.06g(89％)的2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、為一種白色泡沫體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.6Hz)，1.1-1.55(m，34H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.43(m，2H)，4.32(m，4H)，4.71(m，3H)，4.83(m，3H)，5.09(m，1H)，5.50(t，1H，J＝9.5Hz)，5.77(d，1H，J＝8.0Hz)，6.26(d，1H，J＝3.4Hz)，7.20(m，10H).
(5)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情況下使(1)和(4)中制備的化合物(分別為520mg、0.90mmol和1.0g、0.84mmol)偶聯而得到1.13g(78％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-D-絲氨酸芐酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.65(m，68H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.2-2.6(m，8H)，3.40(m，1H)，3.64(m，1H)，4.01(m，2H)，4.27(m，2H)，4.44(d，1H，J＝7.1Hz)，4.60(m，2H)，4.77(m，2H)，5.19(m，6H)，6.61(d，1H，J＝8.3Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.9g，29mmol)使上述(5)中制備的化合物(1.0g，0.58mmol)脫保護并在有EEDQ(190mg，0.77mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(280mg，0.70mmol)使之酰化而得到420mg(44％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-D-絲氨酸芐酯、為一種非晶固體。
(7)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀/碳于EtOH(10mL)中和氧化鉑(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情況下使上述(6)中制備的化合物(420mg，0.25mmol)氫化而得到118mg(30％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-D-絲氨酸三乙銨鹽、為一種白色粉末mp179-181℃；IR(膜)3283，3100，2921，2852，1732，1660，1651，1564，1556，1464，1417，1378，1322，1181，1061，856，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(m，6H)，3.33(m，5H)，3.78(m，2H)，3.95(m，2H)，4.22(m，1H)，4.45(d，1H，J＝7.5Hz)，4.68(br.s，1H)，5.13(m，3H)，5.26(m，1H)；13C NMR(CDCl3)δδ173.7，173.5，173.1，171.1，169.9，100.3，75.1，73.9，71.9，71.1，70.9，70.2，60.9，53.9，52.7，46.0，41.3，40.8，39.4，34.6，34.4，31.9，29.8，29.7，29.5，29A，25.6，25.4，25.2，25.1，22.7，14.1，8.6.
對C87H166N3O19P的計算分析值C，65.75；H，10.53；N，2.64；P，1.95。測定值C，65.32；H，10.28；N，2.53；P，1.89。
實施例16(B15)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(357mg，1.2mmol)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(478mg，1.2mmol)使L-絲氨酸芐酯(250mg，1.08mmol)酰化而得到0.52g(84％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-L-絲氨酸芐酯mp52-53℃；1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，34H)，2.29(t，2H，J＝7.5Hz)，2.49(d，2H，J＝5.8Hz)，3.67(s，1H)，3.97(m，2H)，4.63(m，1H)，5.19(m，3H)，6.61(d，1H，J＝7.1Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(500mg，0.87mmol)和實施例15-(4)中制備的化合物(1.08g，0.90mmol)偶聯而得到1.35g(89％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.0-1.65(m，68H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.38(q，1H，J＝9.1Hz)，3.65(m，1H)，3.84(m，1H)，4.27(m，3H)，4.70(m，5H)，4.84(m，4H)，5.14(m，3H)，5.46(t，1H，J＝9.7Hz)，6.07(m，1H)，6.62(d，1H，J＝8.0Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.13g，17.2mmol)使上述(2)中制備的化合物(600mg，0.34mmol)脫保護并在有EEDQ(124mg，0.50mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(150mg，0.38mmol)使之酰化而得到362mg(60％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯、為一種非晶固體。
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有鈀/碳(100mg)和氧化鉑(200mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情況下使上述(3)中制備的化合物(300mg，0.17mmol氫化而得到120mg(44％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-D-絲氨酸三乙銨鹽、為一種白色粉末mp175-176℃；IR(膜)
3304，2956，2923，2853，1733，1654，1541，1466，1377，1164，1107，1080，845，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.75(m，12H)，3.07(q，6H，J＝7.2Hz)，3.37(m，1H)，3.5-3.95(m，8H)，4.21(q，1H，11.0Hz)，4.54(d，1H，J＝8.9Hz)，4.61(br.s，1H)，5.17(m，4H)，7.10(d，1H，J＝9.0Hz)，7.43(d，1H，J＝7.9Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.3，173.4，173.2，172.8，172.0，169.6，169.2，101.4，74.7，70.9，69.3，60.4，53.2，51.6，46.1，41.4，41.0，39.1，34.5，34.3，34.2，34.1，31.9，29.8，29.7，29.6，29.4，29.3，29.2，25.5，25.1，25.0，22.7，14.1，8.6.
對C87H166N3O19P·H2O的計算分析值C，65.01；H，10.54；N，2.61；P，1.93。測定值C，64.92；H，10.38；N，2.58；P，2.06。
實施例17(B16)N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C8H17CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(845mg，2.5mmol)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-壬酰氧基十四酸(780mg，2.2mmol)使L-絲氨酸芐酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到1.0g(89％)的N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-L-絲氨酸芐酯mp52-53℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，32H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.51(d，2H，J＝5.8Hz)，2.62(t，1H，J＝6.0Hz)，3.98(m，2H)，4.65(m，1H)，5.19(m，3H)，6.58(d，1H，J＝6.8Hz)，7.35(br s，5H).
(2)按照與實施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-壬酰氧基十四酸(852mg，2.22mmol)使實施例2-(1)中制備的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在AcOH水溶液(25mL)中脫保護而得到1.31g(79％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，28H)，1.59(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.6Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.2Hz)，4.71(m，2H)，5.07(m，2H)，5.27(d，1H，J＝8.8Hz).
(3)按照與實施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(400mg，1.67mmol)和吡啶(0.15mL，1.84mmol)于CH2Cl2(25mL)中處理上述(2)中制備的化合物(1.25，1.52mmol)，隨后用三乙胺(0.42mL，3.04mmol)、氯磷酸二苯酯(0.47mL，2.28mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)處理而得到1.30g(67％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，32H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.22(m，6H)，3.33(m，1H)，3.53(m，1H)，3.80(m，1H)，3.96(m，1H)，4.31(m，2H)，4.55(m，2H)，4.83(d，1H，J＝12.0Hz)，5.01(d，1H，J＝7.9Hz)，5.62(m，1H)，7.28(m，10H).
(4)按照與實施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(4)中制備的化合物(1.267g，1.0mmol)脫保護且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)制備的Vilsmeier試劑處理而得到1.07g(91％)的2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、為一種白色泡沫體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.25-1.55(m，32H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.43(m，2H)，4.34(m，4H)，4.70(m，3H)，4.83(m，3H)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝10.2Hz)，5.78(d，1H，J＝8.0Hz)，6.25(d，1H，J＝3.6Hz)，7.19(m，10H).
(5)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情況下使上述(1)和(4)中制備的化合物(分別為505mg、0.90mmol和1.0g、0.85mmol)偶聯而得到1.03g(71％)的N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.0-1.65(m，64H)，1.78(s，3H)，1.82(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.38(m，1H)，3.64(m，1H)，3.83(m，1H)，4.25(m，3H)，4.73(m，5H)，5.18(m，5H)，6.07(m，1H)，6.60(d，1H，J＝7.8Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.93g，29.5mmol)使上述(5)中制備的化合物(1.0g，0.59mmol)脫保護并在有EEDQ(195mg，0.78mmol)存在的情況下用(R)-3-壬酰氧基十四酸(273mg，0.71mmol)使之酰化而得到405mg(42％)的N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯、為一種非晶固體。
(7)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀/碳于EtOH(10mL)中和氧化鉑(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情況下使上述(6)中制備的化合物(405mg，0.25mmol)氫化而得到185mg(48％)的N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽、為一種白色粉末mp177-179℃；IR(膜)3306，2955，2923，2853，1732，1660，1538，1467，1378，1252，1165，1106，1080，960，844，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，105H)，2.2-2.75(m，12H)，3.07(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-3.5(m，5H)，3.85(m，4H)，4.23(d，1H，10.2Hz)，4.51(d，1H，J＝8.0Hz)，4.64(br.s，1H)，5.18(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.3，172.8，172.2，169.6，169.1，101.5，74.8，70.9，70.8，69.3，60.5，53.2，51.5，46.1，41.5，41.0，39.2，34.5，34.3，34.1，32.0，31.9，29.8，29.6，29.4，29.3，25.6，25.2，25.1，22.7，14.1，8.7.
對C84H160N3O19P的計算分析值C，65.21；H，10.42；N，2.72；P，2.00。測定值C，65.48；H，10.32；N，2.62；P，2.12。
實施例18(B17)N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C7H15CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(745mg，2.5mmol)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-辛酰氧基十四酸(815mg，2.2mmol)使L-絲氨酸芐酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到1.02g(93％)的N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-L-絲氨酸芐酯mp50-51℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，30H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.51(d，2H，J＝5.8Hz)，2.60(t，1H，J＝6.0Hz)，3.97(m，2H)，4.65(m，1H)，5.22(m，3H)，6.61(d，1H，J＝6.9Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照與實施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-辛酰氧基十四酸(821mg，2.22mmol)使實施例2-(1)中制備的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在90％AcOH水溶液(25mL)中脫保護而得到1.35g(83％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，26H)，1.60(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.53(m，2H)，3.42(m，1H)，3.53(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.4Hz)，3.94(m，2H)，4.56(d，1H，J＝8.3Hz)，4.64(d，1H，J＝11.8Hz)，4.77(d，1H，J＝11.8Hz)，5.08(m，2H)，5.30(br.s，1H).
(3)按照與實施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(425mg，1.77mmol)和吡啶(0.16mL，1.95mmol)于CH2Cl2(25mL)中處理上述(2)中制備的化合物(1.30，1.61mmol)，隨后用三乙胺(0.45mL，3.22mmol)、氯磷酸二苯酯(0.50mL，2.42mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)處理而得到1.42g(71％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，30H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.23(m，6H)，3.37(m，1H)，3.65(m，1H)，3.83(m，1H)，3.96(m，1H)，4.55(m，2H)，4.83(d，1H，J＝11.8Hz)，5.01(d，1H，J＝8.2Hz)，5.20(m，1H)，7.29(m，10H).
(4)按照與實施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(3)中制備的化合物(1.24g，1.0mmol)脫保護且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)制備的Vilsmeier試劑處理而得到1.0g(87％)的2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、為一種白色泡沫體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.7Hz)，1.25-1.55(m，30H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.43(m，2H)，4.29(m，4H)，4.72(m，3H)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝9.9Hz)，5.79(d，1H，J＝7.9Hz)，6.25(d，1H，J＝3.5Hz)，7.29(m，10H).
(5)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情況下使上述(1)和(4)中制備的化合物(分別為490mg、0.90mmol和1.0g、0.86mmol)偶聯而得到0.99g(69％)的N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯
1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.0-1.65(m，60H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.37(m，1H)，3.65(m，1H)，3.83(m，1H)，4.27(m，3H)，4.72(m，5H)，5.18(m，4H)，5.46(t，1H，J＝9.8Hz)，6.06(m，1H)，6.60(d，1H，J＝8.0Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.86g，28.5mmol)使上述(5)中制備的化合物(0.95g，0.57mmol)脫保護并在有EEDQ(185mg，0.75mmol)存在的情況下用(R)-3-辛酰氧基十四酸(252mg，0.68mmol)使之酰化而得到433mg(47％)的N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯、為一種非晶固體。
(7)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀/碳(250mg)于EtOH(10mL)中和氧化鉑(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情況下使上述(6)中制備的化合物(433mg，0.27mmol)氫化而得到196mg(48％)的N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽、為一種白色粉末mp177-178℃；IR(膜)3296，2956，2923，2853，1732，1645，1546，1466，1378，1315，1170，1082，1056，961，846，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，99H)，2.2-2.75(m，12H)，3.08(q，6H，J＝7.1Hz)，3.39(d，1H，J＝8.8Hz)，3.6-4.0(m，8H)，4.22(q，1H，10.3Hz)，4.53(d，1H，J＝8.2Hz)，4.63(m，1H)，5.18(m，4H)，7.04(d，1H，J＝8.8Hz)，7.42(d，1H，J＝8.0Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.8，173.3，173.2，172.7，172.2，169.6，169.1，101.5，74.8，70.9，70.8，69.3，60.5，53.2，51.5，46.2，41.5，41.1，39.2，34.5，34.3，34.1，34.0，32.0，31.8，29.8，29.6，29.4，29.3，29.2，29.1，25.6，25.3，25.2，25.0，22.7，14.1，8.7.
對C81H154N3O19P·H2O的計算分析值C，63.87；H，10.32；N，2.76；P，2.03。測定值C，63.96；H，10.29；N，2.69；P，1.67。
實施例19(B18)N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C6H13CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(745mg，2.5mmol)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-庚酰氧基十四酸(780mg，2.2mmol)使L-絲氨酸芐酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到0.97g(91％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-L-絲氨酸芐酯mp46-48℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，28H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.50(d，2H，J＝5.8Hz)，2.62(t，1H，J＝6.0Hz)，3.97(m，2H)，4.65(m，1H)，5.19(m，3H)，6.61(d，1H，J＝6.9Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照與實施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-庚酰氧基十四酸(790mg，2.22mmol)使實施例2-(1)中制備的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在90％AcOH水溶液(25mL)中脫保護而得到1.30g(81％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，24H)，1.59(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.5，4.2Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.3Hz)，4.64(d，1H，J＝12.1Hz)，4.76(d，1H，J＝11.9Hz)，5.09(m，2H)，5.31(d，1H，J＝8.7Hz).
(3)按照與實施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(417mg，1.74mmol)和吡啶(0.15mL，1.91mmol)在CH2Cl2(25mL)中處理上述(2)中制備的化合物(1.25，1.58mmol)，隨后用三乙胺(0.44mL，3.16mmol)、氯磷酸二苯酯(0.49mL，2.37mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)處理而得到1.34g(69％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1HNMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，28H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.35(m，4H)，3.37(m，1H)，3.61(m，1H)，3.80(m，1H)，4.32(m，2H)，4.63(m，2H)，4.83(d，1H，J＝12.0Hz)，5.01(d，1H，J＝8.2Hz)，5.62(m，2H)，7.29(m，10H).
(4)按照與實施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(3)中制備的化合物(1.23g，1.0mmol)脫保護且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)制備的Vilsmeier試劑處理而得到1.0g(87％)的2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、為一種白色泡沫體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.25-1.55(m，28H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.6Hz)，2.43(m，2H)，4.26(m，4H)，4.73(m，3H)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝10.2Hz)，5.77(d，1H，J＝8.0Hz)，6.25(d，1H，J＝3.3Hz)，7.19(m，10H).
(5)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情況下使上述(1)和(4)中制備的化合物(分別為480mg、0.90mmol和0.98g、0.86mmol)偶聯而得到1.06g(75％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯1HNMR(CDCl3)δ0.88(m，12H)，1.0-1.65(m，56H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.38(m，1H)，3.64(m，1H)，3.83(m，1H)，4.25(m，3H)，4.78(m，5H)，5.16(m，4H)，5.46(t，1H，J＝9.9Hz)，6.06(m，1H)，6.60(d，1H，J＝7.7Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(2.0g，30.5mmol)使上述(5)中制備的化合物(1.0g，0.61mmol)脫保護并在有EEDQ(200mg，0.80mmol)存在的情況下用(R)-3-庚酰氧基十四酸(260mg，0.73mmol)使之酰化而得到440mg(45％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯、為一種非晶固體。
(7)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀/碳(250mg)于EtOH(10mL)中和氧化鉑(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情況下使上述(6)中制備的化合物(440mg，0.28mmol)氫化而得到208mg(51％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽、為一種白色粉末mp176-177℃；IR(膜)3307，2956，2924，2854，1732，1650，1545，1466，1378，1316，1170，1080，956，841，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.1-1.7(m，93H)，2.2-2.75(m，12H)，3.08(q，6H，J＝7.2Hz)，3.40(d，1H，J＝10.2Hz)，3.6-4.0(m，7H)，4.24(m，2H)，4.52(d，1H，J＝8.0Hz)，4.63(m，1H)，5.19(m，4H)，7.04(d，1H，J＝8.6Hz)，7.40(d，1H，J＝8.4Hz)；13C NMR(CDCl3)δ177.1，173.2，173.1，172.7，172.3，169.5，168.9，101.5，75.0 74.8，71.2，70.9，69.1，60.5，53.1，51.4，46.1，41.5，41.0，39.2，34.5，34.3，34.1，34.0，31.9，31.6，31.5，29.8，29.6，29.4，29.0，28.9，28.8，25.6，25.3，25.1，25.0，22.7，22.6，14.1，8.7.
對C78H148N3O19P的計算分析值C，64.04；H，10.20；N，2.87；P，2.12。測定值C，63.77；H，10.11；N，2.85；P，2.02。
實施例20(B19)
2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)將2-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷(330mg，1.1mmol)和(R)-3-十四酰氧基十四酸(500mg，1.1mmol)溶于CH2Cl2(10mL)并用粉狀4分子篩(500mg)處理。1小時后加入EEDQ(297mg，1.2mmol)并將該反應體系攪拌18小時、通過Celite過濾并在真空中濃縮。使用15％EtOAc/己烷將殘余物進行硅膠層析而得到675mg(92％)的無色固體。通過在室溫下攪拌2小時用TBAF(1M的THF溶液，1mL，1mmol)在THF(5mL)中使一部分該物質(500mg，0.68mmol)脫保護。將該反應混合物用Et2O(50mL)稀釋并用鹽水(2×50mL)洗滌。將該鹽水重新用Et2O(2×50mL)提取并將合并的有機提取物用Na2SO4干燥并在真空中濃縮而得到338mg(62％)的2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]乙醇、為一種灰白色固體。
(2)按照與實施例2-(6)中所述相同的方式，在有氰化汞(770mg，3.05mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(338mg，0.68mmol)和實施例2-(4)中制備的化合物(786mg，0.61mmol)偶聯而得到245mg(24％)的2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1HNMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.8(m，84H)，1.81(s，3H)，1.89(s，3H)，2.15-2.55(m，8H)，3.25(m，1H)，3.47(m，2H)，3.67(m，1H)，3.83(m，2H)，4.28(dd，1H，J＝12.2，4.9Hz)，4.36(d，1H，J＝11.0Hz)，4.68(m，2H)，4.78(d，1H，J＝11.6Hz)，4.94(d，1H，J＝11.6Hz)，5.16(m，2H)，5.53(t，1H，J＝10.0Hz)，6.06(d，1H，J＝4.9Hz)，6.19(m，1H)，7.25(m，10H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(980mg，15mmol)使上述(2)中制備的化合物(500mg，0.29mmol)脫保護并在有EEDQ(110mg，0.44mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(155mg，0.34mmol)使之酰化而得到315mg(62％)的2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體。
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化鉑(100mg)存在的情況下使上述(3)中制備的化合物(200mg，0.113mmol)氫化而得到142mg(76％)的2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色固體mp175-176℃；IR(膜)3285，3098，2955，2919，2851，1731，1659，1642，1556，1468，1379，1250，1228，1174，1110，1083，1046，962，857cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.0Hz)，1.1-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，15H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-4.1(m，8H)，4.21(q，1H，J＝9.9Hz)，4.51(d，1H，J＝8.2Hz)，5.05-5.25(m，4H)，7.33(d，1H，J＝8.5Hz)，7.50(br t，1H，J＝4.8Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.3，170.6，170.3，169.9，100.9，75.8，73.0，71.3，71.1，70.9，70.6，68.3，60.6，55.1，45.7，41.6，41.2，39.5，34.6，34.5，34.4，32.0，29.8，29.4，29.3，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.
對C98H190N3O17P·2H2O的計算分析值C，67.28；H，11.18；N，2.40；P，1.77。測定值C，67.01；H，11.18；N，2.15；P，2.01.
實施例21(B20)2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3癸酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例20-(1)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(594mg，2.0mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(600mg，1.5mmol)使2-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷(450mg，1.5mmol)酰化且然后用TBAF(1.0M的THF溶液，2.5mL，2.5mmol)在THF(10mL)中使之脫保護而得到488mg(81％)的2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]乙醇、為一種灰白色固體。
(2)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式在有AgOTf(560mg，2.2mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(385g，0.87mmol)和實施例15-(4)中制備的化合物(1.05g，0.87mmol)偶聯而得到1.04g(74％)的2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.44(m，2H)，4.34(m，5H)，4.72(m，2H)，4.83(q，1H，J＝9.3Hz)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝10.2Hz)，5.79(d，1H，J＝8.0Hz)，6.26(d，1H，J＝3.4Hz)，7.31(m，10H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.42g，21.7mmol)使上述(2)中制備的化合物(700mg，0.44mmol)脫保護且然后在有EEDQ(148mg，0.6mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(190mg，0.48mmol)使之酰化而得到432mg(62％)的2-[(R)-3-癸氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體。
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化鉑(200mg)存在的情況下使上述(3)中制備的化合物(400mg，0.25mmol)氫化而得到200mg(52％)的2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色固體mp165-166℃；IR(膜)3289，3094，2956，2922，2853，1732，1658，1644，1556，1467，1379，1247，1164，1107，1081，1048cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，15H)，3.05(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-3.85(m，9H)，4.52(d，1H，J＝8.2Hz)，5.05-5.25(m，4H)，7.21(d，1H，J＝8.5Hz)，7.42(brt，1H)；13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.3，170.7，170.3，170.0，100.9，75.6，73.0，71.3，70.9，70.6，68.3，60.7，55.0，45.8，41.6，41.2，39.5，34.5，34.4，34.1，31.9，29.8，29.6，29.5，29.4，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.對C86H166N3O17P·H2O的計算分析值C，66.08；H，10.83；N，2.69；P，1.98。測定值C，65.80；H，10.63；N，2.63；P，2.04。
實施例22(B21)3-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝1，M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例20-(1)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(595mg，2.0mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(680mg，1.5mmol)使3-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷(470mg，1.5mmol)酰化且然后用TBAF(1.0M的THF溶液，2.0mL，2.0mmol)在THF(10mL)中使之脫保護而得到698mg(91％)的3-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙醇、為一種灰白色固體。
(2)按照與實施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(10mL)使實施例2-(3)中制備的化合物(7.9g，5.88mmol)脫保護且然后用由DMF(1.8mL，23.5mmol)和草酰氯(1.03mL，11.76mmol)制備的Vilsmeier試劑處理而得到6.32g(85％)的2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、為一種白色泡沫體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.8Hz)，1.2-1.55(m，42H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.5Hz)，2.43(m，2H)，4.31(m，4H)，4.68(d，1H，J＝11.9Hz)，4.74(d，1H，J＝11.9Hz)，4.83(q，1H，J＝9.3Hz)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝9.7Hz)，5.78(d，1H，J＝8.0Hz)，6.26(d，1H，J＝3.4Hz)，7.31(m，10H).
(3)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(642mg，2.5mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(613mg，1.2mmol)和上述(2)中制備的化合物(1.5g，1.2mmol)偶聯而得到1.43g(68％)的3-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.8(m，86H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.20(t，2H，J＝7.6Hz)，2.29(t，2H，J＝7.7Hz)，2.44(m，4H)，3.21(m，1H)，3.42(m，1H)，3.54(m，2H)，3.80(m，1H)，3.94(m，1H)，4.28(dd，1H，J＝12.3，5.2Hz)，4.38(d，1H，J＝10.8Hz)，4.70(m，3H)，4.81(d，1H，J＝8.2Hz)，5.14(m，2H)，5.47(t，1H，J＝9.6Hz)，6.13(d，1H，J＝7.6Hz)，6.22(br.s，1H)，7.25(m，10H).
(4)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.32g，20.1mmol)使上述(3)中制備的化合物(700mg，0.40mmol)脫保護且然后在有EEDQ(125mg，0.5mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(200mg，0.44mmol)使之酰化而得到435mg(60％)的3-[(R)-3-十四氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體。
(5)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化鉑(200mg)存在的情況下使上述(4)中制備的化合物(400mg，0.22mmol)氫化而得到170mg(45％)的3-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色固體mp171-172℃；IR(膜)3288，3094，2955，2919，2850，1731，1658，1344，1556，1468，1378，1320，1251，1226，1172，1106，1083，1044cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.0Hz)，1.1-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，15H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-4.1(m，8H)，4.21(q，1H，J＝9.9Hz)，4.51(d，1H，J＝8.3Hz)，5.05-5.25(m，4H)，7.23(t，1H，J＝5.3Hz)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.4，170.6，170.2，169.9，100.6，75.8，71.5，70.9，70.5，66.8，60.4，55.3，45.6，41.4，39.4，36.3，34.6，34.5，34.2，31.9，29.7，29.4，29.3，29.1，25.4，25.1，22.7，14.1，8.5.
對C99H192N3O17P·2H2O的計算分析值C，67.42；H，11.20；N，2.38；P，1.76。測定值C，66.97；H，11.01；N，2.38；P，1.95。
實施例23(B22)4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝2，M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例20-(1)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(595mg，2.0mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(695mg，1.53mmol)使4-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)丁烷(500mg，1.53mmol)酰化且然后用TBAF(1.0M的THF溶液，2.5mL，2.5mmol)在THF(15mL)中使之脫保護而得到651mg(81％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-1-丁醇、為一種灰白色固體。
(2)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(650mg，1.25mmol)和實施例22-(2)中制備的化合物(1.6g，1.25mmol)偶聯而得到1.65g(75％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.8(m，88H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.15-2.55(m，8H)，3.24(m，2H)，3.50(m，2H)，3.83(m，2H)，4.27(dd，1H，J＝12.1，3.8Hz)，4.32(d，1H，J＝11.5Hz)，4.66(m，2H)，4.78(d，1H，J＝12.1Hz)，4.89(d，1H，J＝8.0Hz)，5.15(m，2H)，5.54(t，1H，J＝9.7Hz)，5.95(m，2H)，7.25(m，10H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.30g，19.8mmol)使上述(2)中制備的化合物(700mg，0.39mmol)脫保護且然后在有EEDQ(125mg，0.5mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(195mg，0.43mmol)使之酰化而得到421mg(60％)的4-[(R)-3-十四氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷、為-種非晶固體。
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化鉑(200mg)存在的情況下使上述(3)中制備的化合物(400mg，0.22mmol)氫化而得到212mg(55％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色固體mp171-172℃；IR(膜)3298，2955，2920，2851，1732，1645，1550，1467，1378，1181，1107，1083，1044，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，19H)，3.05(q，6H，J＝7.1Hz)，3.18(m，2H)，3.3-3.5(m，6H)，3.78(m，3H)，3.97(d，1H，J＝12.5Hz)，4.23(q，1H，J＝10.0Hz)，4.50(d，1H，J＝8.5Hz)，5.13(m，4H)，7.12(d，1H，J＝9.1Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，173.4，173.3，170.8，169.9，169.8，101.0，75.6，73.2，71.4，71.1，70.6，68.9，60.7，54.8，45.9，41.5，39.6，38.9，34.6，34.3，32.0，29.8，29.5，29.0，28.9，26.3，25.4，25.1，22.7，14.2，8.7.
對C100H194N3O17P H2O的計算分析值C，68.26；H，11.23；N，2.39；P，1.76。測定值C，68.21；H，11.03；N，2.26；P，1.73。
實施例24(B23)4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]己基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝4，M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例20-(1)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(1.35g，4.56mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(2.07g，4.56mmol)使6-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)己烷(1.48mg，4.15mmol)酰化且然后用TBAF(1.0M的THF溶液，1.53mL，1.53mmol)在THF(46mL)中使之脫保護而得到700mg(30％)的6-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-1-己醇、為一種灰白色固體。
(2)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.28g，5.0mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(689mg，1.20mmol)和實施例22-(2)中制備的化合物(1.25g，1.00mmol)偶聯而得到1.59g(94％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]己基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1HNMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.8(m，92H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.22(t，2H，J＝7.6Hz)，2.29(t，2H，J＝7.4Hz)，2.45(m，4H)，3.22(m，1H)，3.46(m，2H)，3.83(m，2H)，3.94(m，1H)，4.31(m，2H)，4.64(m，2H)，4.83(d，1H，J＝12.1Hz)，4.97(d，1H，J＝7.8Hz)，5.17(m，2H)，5.59(t，1H，J＝8.8Hz)，5.75(m，1H)，5.84(d，1H，J＝7.6Hz)，7.25(m，10H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(2.88g，44.1mmol)使上述(2)中制備的化合物(1.57g，0.88mmol)脫保護且然后在有EEDQ(327mg，1.32mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(481mg，1.06mmol)使之酰化而得到1.57g(97％)的4-[(R)-3-十四氧基十四酰基氨基]己基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體。
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式在有氧化鉑(157mg)存在的情況下使上述(3)中制備的化合物(1.57g，0.85mmol)氫化而得到130mg(10％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]己基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種白色固體mp150-152℃；IR(膜)3284，3099，2954，2920，2851，1731，1657，1637，1557，1467，1418，1378，1320，1249，1179，1108，1083，1044，856，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.89(t，18H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，23H)，3.05(q，6H，J＝7.1Hz)，3.18(m，2H)，3.39(d，1H，J＝8.2Hz)，3.49(q，1H，J＝7.5Hz)，3.82(m，2H)，3.99(d，1H，J＝11.9Hz)，4.25(q，1H，J＝8.9Hz)，4.59(m，2H)，5.18(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.3，170.6，169.7，169.4，100.6，75.5，73.1，71.3，70.9，70.6，69.2，60.6，55.2，45.8，41.7，41.4，39.5，39.4，34.6，34.3，34.2，34.1，31.9，29.7，29.4，29.2，26.5，25.5，25.3，25.1，22.7，14.1，8.6.
對C102H198N3O17P·H2O的計算分析值C，68.53；H，11.28；N，2.33；P，1.73。測定值C，68.63；H，11.12；N，2.26；P，1.66。
實施例25(B24)N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺(SERINAMIDE)三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CONH2，R8＝PO3H2)(1)用三乙胺(0.18mL，1.3mmol)處理L-絲氨酰胺(serinamide)鹽酸鹽(0.157g，1.18mmol)和(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.61g，1.34mmol)溶于CH2Cl2(6mL)所得到的混懸液并將所得溶液與4分子篩一起攪拌30分鐘。然后加入EEDQ(0.437g，1.77mmol)并在室溫下將該混合物攪拌16小時。收集沉淀的產物并用CH2Cl2(2×25mL)洗滌而得到0.455g(71％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-L-絲氨酰胺、為一種無色粉末mp126-130℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝～7Hz)，1.15-1.7(m，42H)，2.31(t，2H，J＝7.5Hz)，2.51(d，2H，J＝6.3Hz)，3.56(br s，1H)，3.65(dd，1H，J＝11.2，5.5Hz)，3.86(dd，1H，J＝11.2，4.5Hz)，4.21(s，2H)，4.40(m，1H)，5.22(m，1H).
(2)按照與實施例2-(6)中所述相同的方式，在有氰化汞(0.43g，1.7mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(0.23g，0.246mmol)和實施例2-(4)中制備的化合物(0.961g，0.745mmol)偶聯而得到0.527g(71％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝～7H)，1.0-1.7(m，84H)，1.80和1.89(2s，6H)，2.21(t，2H，J＝7.5Hz)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.37(m，2H)，2.47(m，2H)，3.54(m，1H)，3.68(dd，1H，J＝8，J＝11Hz)，3.86(br d，1H，J＝11Hz)，4.16(dd，1H，J＝11，4Hz)，4.24(dd，1H，J＝12，4.3Hz)，4.40(d，1H，J＝12Hz)，4.6-4.8(m，4H)，5.00(d，1H，J＝8Hz)，5.1-5.25(m，2H)，5.4-5.55(m，2H)，5.84(br s，1H)，6.61(br s，2H)，7.1-7.35(m，10H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(0.83g，13mmol)使上述(2)中制備的化合物(0.44g，0.254mmol)脫保護且然后在有EEDQ(0.095g，0.38mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.14g，0.31mmol)使之酰化而得到0.271g(59％)的N-[(R)-3-十四氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺、為一種非晶固體
1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，126H)，2.03(br s，1H)，2.15-2.55(m，12H)，3.5-4.05(m，5H)，4.14(dd，1H，J＝10，3.5Hz)，4.5-4.65(m，2H)，4.68(d，1H，J＝8.1Hz)，5.05-5.25(m，3H)，5.31(t，1H，J＝～10Hz)，5.58(br s，1H)，6.31(d，1H，J＝8Hz)，6.85-6.95(m，2H)，7.1-7.4(m，10H).
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化鉑(0.125g)存在的情況下使上述(3)中制備的化合物(0.25g，0.14mmol)氫化而得到0.195(80％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺三乙銨鹽、為一種無色固體mp190-191℃；(分解)；IR(膜)3418，3293，2921，2850，1732，1717，1651，1636，1557，1540，1458，1165，1033cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～7Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，12H)，3.05(q，6H，J＝7.2Hz)，3.2-3.45(m)，3.5-4.15(m，5H)，4.21(q，1H，J＝～10Hz)，4.53(d，1H，J＝8.1Hz)，4.58(m，1H)，5.0-5.3(m，4H)，7.25(d，1H，J＝8.4Hz)，7.40(d，1H，J＝7.2Hz)；13C NMR(CDCl3-CD3OD)δ173.7，173.5，172.5，170.7，170.5，170.4，101.4，75.5，73.4，71.1，70.9，70.2，68.6，60.0，53.9，52.2，45.6，41.2，41.0，38.9，34.4，34.2，31.8，29.6，29.5，29.3，29.1，25.2，24.9，22.6，14.0，8.3.
對C99H191N4O18P·2.5H2O的計算分析值C，66.00；H，10.97；N，3.11；P，1.72。測定值C，66.04；H，10.99；N，3.03；P，1.95。
實施例26(B25)N-(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CONH2，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例25-(1)中所述相同的方式，在有EEDQ(371mg，1.5mmol)存在的情況下在CH2Cl2中(R)-3-癸酰氧基十四酸(478mg，1.2mmol)使L-絲氨酰胺鹽酸鹽(169mg，1.2mmol)酰化而得到428mg(74％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-L-絲氨酰胺、為一種白色固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H)，1.1-1.7(m，34H)，2.33(t，2H，J＝7.5Hz)，2.54(d，2H，J＝6.6Hz)，3.35(s，2H)，3.72(dd，1H，J＝11.0，5.2Hz)，3.84(dd，1H，J＝11.3，5.0Hz)，4.20(t，1H，J＝5.1Hz)，5.26(t，1H，J＝6.4Hz).
(2)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(560mg，2.2mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(410mg，0.85mmol)和實施例15-(4)中制備的化合物(1.05g，0.87mmol)偶聯而得到780g(56％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H)，1.1-1.6(m，68H)，1.80(s，3H)，1.89(s，3H)，2.30(m，8H)，3.53(m，1H，3.68(m，1H)，3.85(br.d，1H，J＝9.4Hz)，4.15(dd，1H，J＝10.8，3.7Hz)，4.24(dd，1H，J＝12.3，4.6Hz)，4.40(d，1H，J＝10.8)，4.65(m，4H)，5.00(d，1H，J＝8.2Hz)，5.18(m，2H)，5.46(m，2H)，5.83(m，1H)，6.60(m，2H)，7.30(m，10H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(1.19g，18.2mmol)使上述(2)中制備的化合物(600mg，0.36mmol)脫保護且然后在有EEDQ(124mg，0.50mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(160mg，0.4mmol)使之酰化而得到371mg(62％)的N-[(R)-3-癸氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺、為一種非晶固體。
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化鉑(200mg)存在的情況下使上述(3)中制備的化合物(330mg，0.20mmol)氫化而得到120mg(44％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺三乙銨鹽、為一種白色粉末mp187-189℃；IR(膜)3419，3286，3220，3098，2955，2922，2852，1732，1680，1662，1644，1559，1467，1247，1167，1107，1080，1051，965，913cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.89(t，18H，J＝7.0Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，12H)，3.07(q，6H，J＝7.1Hz)，3.68(m，1H)，3.87(m，1H)，4.09(dd，1H，J＝10.8，3.6Hz)，4.22(m，1H)，4.53(d，1H，J＝8.2Hz)，4.58(m，1H)，5.13(m，3H)，5.28(m，1H)，7.53(d，1H，J＝9.0Hz)，7.56(d，1H，J＝7.7Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.2，170.2，169.8，102.3，75.7，73.5，71.3，70.7，70.1，68.8，60.8，53.9，51.7，45.8，41.5，41.1，39.1，34.6，34.5，34.2，32.0，29.7，29.6，29.5，29.4，25.7，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
對C87H167N4O18P·H2O的計算分析值C，65.05；H，10.60；N，3.49；P，1.93。測定值C，65.06；H，10.40；N，3.31；P，2.00。
實施例27(B26)N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-1-絲氨酸甲酯三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2ME，R8＝PO3H2)(1)在室溫和大氣壓以及有5％鈀/碳(50mg)存在的情況下，使實施例12-(2)中制備的化合物(0.290g，0.157mmol)溶于THF(20mL)所得到的溶液氫化3小時。通過過濾除去催化劑并濃縮濾液。將在0℃下殘余物溶于CHCl3(5mL)所得到的溶液用重氮甲烷(0.5mmol)溶于乙醚(5mL)所得到的溶液處理且然后在0℃下攪拌30分鐘。加入AcOH(0.5mL)并將所得無色溶液用乙醚(50mL)處理、用飽和NaHCO3水溶液(25mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并濃縮。進行硅膠快速色譜法純化(梯度洗脫，20→25％EtOAcs-己烷)得到0.199g(72％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基甲氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸甲酯、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝～6.5Hz)，1.1-1.75(m，84H)，1.81和1.89(2s，6H)，2.36(t，2H，J＝7.5Hz)，2.25-2.6(m，6H)，3.48(q，1H，J＝～8Hz)，3.7-3.9(m，5H)，4.2-4.4(m，3H)，4.6-4.85(m，4H)，4.88(d，1H，J＝7.8Hz)，5.03-5.22(m，2H)，5.49(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.21(br s，1H)，6.59(d，1H，J＝7.8Hz)，7.1-7.4(m，10H).
(2)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(0.36g，5.5mmol)使上述(1)中制備的化合物(0.195g，0.111mmol)脫保護且然后在有EEDQ(0.041g，0.17mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.060g，0.13mmol)使之酰化而得到0.138g(69％)的N-[(R)-3-十四氧基十四酰基]-O-[(R)-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸甲酯、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.75(m，126H)，2.15-2.45(m，10H)，2.52(dd，1H，J＝14.7，6Hz)，2.66(dd，1H，J＝14.7，6Hz)，3.35(brs，1H)，3.4-3.8(m，7H)，3.88(dd，1H，J＝11Hz)，4.18(dd，1H，J＝11Hz)，4.6-4.75(m，2H)，5.03(d，1H，J＝7.8Hz)，5.1-5.25(m，3H)，5.50(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.50(d，1H，J＝7.2Hz)，6.97(d，1H，J＝7.8Hz)，7.1-7.4(m，10H).
(3)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化鉑(50mg)存在的情況下使上述(2)制備的化合物(0.100g，0.055mmol)氫化而得到0.055g(57％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸甲酯三乙銨鹽、為一種無色固體mp142-143℃；IR(膜)
3289，2955，2921，2852，1733，1718，1699，1652，1558，1540，1521，1506，1469，1457，1375，1360，1259cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，12H)，3.05(q，6H，J＝7.5Hz)，3.31(d，1H，J＝9.3Hz)，3.37(s，1H)，3.55-3.9(m，10H)，3.97(d，1H，J＝12Hz)，4.1-4.25(m，2H)，4.55-4.65(m，2H)，5.05-5.25(m，3H)，7.23(d，1H，J＝8.1Hz)，7.47(d，1H，J＝7.2H)；13C NMR(CDCl3)δ173.6，173.4，170.5，170.4，170.1，100.7，75.9，72.8，71.2，70.8，70.6，68.5，60.3，55.3，52.7，52.4，47.7，41.5，40.9，39.7，34.6，34.5，34.3.32.0，29.8，29.4，25.4，25.1，22.7，14.2，8.5.
對C100H192N3O19P·H2O的計算分析值C，67.11；H，10.93；N，2.35；P，1.73。測定值C，66.91；H，10.93；N，2.31；P，2.11。
實施例28(B27)N-(羧甲基)-N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-氨基乙基2-脫氧-4-O-膦酰基(PHOPHONO)-2[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-d-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝O，R4＝R5＝R6＝R9＝H，R7＝CO2H，Q＝1，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(0.466g，1.57mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.714g，1.57mmol)使N-(2-羥乙基)甘氨酸叔丁酯(0.25g，1.43mmol)酰化而得到0.46g(51％)的N-(2-羥乙基)-N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]甘氨酸叔丁酯、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝～6.5Hz)，1.15-1.7(m，51H)，2.26(t，2H，J＝7.5Hz)，2.60(dd，1H，J＝6.5，15Hz)，2.86(dd，1H，J＝6.7，15Hz)，3.40-4.15(m，7H)，5.25(m，1H).
(2)按照與13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(0.688g，2.68mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(0.21g，0.334mmol)與實施例22-(2)中制備的化合物(0.458g，0.368mmol)偶聯而得到0.39g(64％)的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-[(R)-3十四酰氧基十四酰基]-2-氨基乙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體1H NMR(CDCl3)δ0.8g(t，12H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.95(m，99H)，2.1-2.6(m，7H)，2.84(dd，1H，J＝5，15Hz)，3.2-4.15(m，8H)，4.15-4.45(m，H)，4.55-4.9(m，3H)，5.00(d，1H，J＝8Hz)，5.13(m，2H)，5.4-5.65(m，1H)，6.16(d，1H，J＝7Hz)，7.05-7.4(m，10H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(0.36g，5.54mmol)使上述(2)中制備的化合物(0.339g，0.185mmol)脫保護且然后在有EEDQ(0.068g，0.276mmol)存在的情況下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.100g，0.221mmol)使之酰化而得到0.25g(71％)的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-氨基乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、為一種無色固體。
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化鉑(125mg)存在的情況下于9∶1 THF-AcOH(15mL)中使上述(3)中制備的化合物(0.25g，0.131mmol)氫化。將粗氫解產物溶于CH2Cl2(1mL)、冷卻至0℃并用TFA(0.5mL)滴加處理。在0℃下攪拌2小時后，濃縮該反應混合物并通過與攪拌共沸而除去殘余的TFA。將所得的殘余物(0.23g)溶于1％三乙胺水溶液(12mL)并凍干。使用氯仿-甲醇-水-三乙胺(91∶8∶0.5∶0.5→85∶15∶0.5∶0.5，梯度洗脫)進行硅膠快速色譜純化并通過實施例2-(8)中所述的酸提取而進一步純化且從1％三乙胺水溶液(6mL)中凍干而得到99mg(43％)的N-(羧甲基)-N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-氨基乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種無色固體mp162-163℃(分解)；IR(膜)3286，2922，2852，1732，1651，1556，1455，1434，1378，1260，1088，801cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.75(m，135H)，2.2-3.0(m，14H)，3.04(q，6H，J＝7.2Hz)，3.25-3.8(m，5H)，3.85-4.3(m，5H)，4.55(d，1H，J＝7.5Hz)，4.68(d，1H，J＝8.1Hz)，5.05-5.35(m，4H).
對C100H192N3O19P·3H2O的計算分析值C，65.79；H，10.60；N，2.30；P，1.70。測定值C，65.82；H，10.44；N，2.40；P，1.79。
實施例29(B28)N-(羧甲基)-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-3-氨基丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基])-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-d-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝1，M＝P＝O，R4＝R5＝R6＝R9＝H，R7＝CO2H，Q＝1，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(900mg，3.0mmol)存在的情況下于CH2Cl2中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(1.0g，2.5mmol)使N-(3-羥丙基)甘氨酸叔丁酯(450mg，2.0mmol)酰化而得到0.76g(63％)的N-(3-羥丙基)-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]甘氨酸芐酯、為一種無色油狀物1H NMR(CDCl3)(1∶1旋轉異構體混合物)δ0.88(t，6H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，35H)，1.78(m，1H)，2.26(q，2H，J＝7.6Hz)，2.37和2.54(2dd，1H，J＝14.9，6.9Hz)，2.60和2.89(2dd，1H，J＝14.8，6.0Hz)，3.51(m，4H)，3.70(m，1H)，3.95-4.25(m，2H)，5.1-5.25(m，3H)，7.35(m，5H).
(2)按照與13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.07g，4.15mmol)存在的情況下使上述(1)中制備的化合物(500mg，0.83mmol)與實施例15-(4)中制備的化合物(1.0g，0.83mmol)偶聯而得到1.27g(72％)的N-(芐氧基羰基甲基)-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-3-氨基丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷芐酯1H NMR(CDCl3)(2∶1旋轉異構體混合物)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，69H)，1.80(s，3H)，1.88(s，3H)，2.1-2.6(m，11H)，2.81(dd，1H，J＝14.8，6.2Hz)，3.37(m，1H)，3.52(m，2H)，3.76(m，1H)，3.87(m，1H)，4.05(m，2H)，4.28(m，3H)，4.62(m，3H)，4.77(m，1H)，4.93(d，1H，J＝8.2Hz)，5.15(m，4H)，5.46和5.61(2t，1H，J＝9.5Hz)，5.95和6.05(2d，1H，J＝7.5Hz)，7.1-7.4(m，15H).
(3)按照與實施例2-(7)中所述相同的方式，用鋅(2.31g，3.53mmo1)使上述(2)中制備的化合物(1.25g，0.71mmol)脫保護且然后在有EEDQ(264mg，1.07mmol)存在的情況下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(353mg，0.89mmol)使之酰化而得到670mg(54％)的N-芐氧基羰基甲基-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-3-氨基丙基2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷、為一種非晶固體。
(4)按照與實施例2-(8)中所述相同的方式，在有氫氧化鈀/碳(270mg)和氧化鉑(125mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情況下使上述(3)中制備的化合物(670mg，0.38mmol)氫化而得到240mg(39％)的N-羧甲基-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-3-氨基丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基])-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽、為一種無色粉末mp156-157℃；IR(膜)3284，2929，2853，2729，1732，1655，1628，1551，1466，1378，1314，1164，1108，1047，955，844，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.27(q，6H，J＝6.2Hz)，2.35-2.80(m，9H)，3.05(q，6H，J＝7.2Hz)，3.25-3.60(m，4H)，3.75-4.10(m，4H)，4.23(m，2H)，4.47(d，1H，J＝8.2Hz)，4.61(d，1H，J＝8.3Hz)，5.05-5.25(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.4，173.0，171.1，170.6，l70.3，169.6，100.5，74.5，73.9，71.4，71.2，70.7，70.2，67.0，65.8，60.7，54.6，54.3，51.4，49.2，46.0，45.4，42.1，41.2，39.4，38.0，37.7，34.5，34.3，34.2，31.9，29.8，29.7，29.6，29.5，29.2，28.1，25.4，25.3，25.1，22.7，14.1，11.1，8.6.
對C89H170N3O19P·H2O的計算分析值C，65.37；H，10.60；N，2.57；P，1.89。測定值C，65.35；H，10.42；N，2.43；P，2.05。
實施例30(B29)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺三乙銨鹽(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CONH2，R8＝PO3H2)按照與實施例26和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-絲氨酰胺鹽酸鹽和(R)-3-己酰氧基十四酸來制備N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺三乙銨鹽mp184-185℃；IR(膜)3416，3284，3210，3096，2954，2923，2853，1735，1721，1680，1664，1646，1560，1466，1246，1169，1080，1038cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.90(m，18H)，1.1-1.7(mH)，2.23-2.47(m，6H)，2.48-2.7(m，6H)，3.06(q，6H，J＝6Hz)，3.26-3.34(mH)，3.66(m，1H)，3.77(d，1H，J＝9.5Hz)，3.82-3.96(m，2H)，4.12(dd，1H，J＝2，8Hz)，4.21(q，1H，J＝8Hz)，4.56(d，1H，J＝7Hz)，4.61(m，1H)，5.05-5.18(m，3H)，5.24(m，1H)，7.26(d，1H，J＝6.5Hz)，7.40(d，1H，J＝5.7Hz).
對C75H143N4O18P·H2O的計算分析值C，62.65；H，10.16；N，3.90；P，2.15。測定值C，62.60；H，9.97；N，3.72；P，2.25。
實施例31(B30)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R3＝N-C9H19CO，R2＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CONH2，R8＝PO3H2)
按照與實施例26和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-絲氨酰胺鹽酸鹽和(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸來制備N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酰胺三乙銨鹽mp200-201℃(分解)；IR(膜)3420，3286，2956，2923，2853，1733，1680，1663，1645，1556，1466，1418，1378，1248，1168，1106，1081，1051 859，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.0-1.7(m，103H)，2.15-2.71(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7Hz)，3.68(m，1H)，3.87(m，1H)，4.09(dd，1H，J＝10.8，3.6Hz)，3.35-4.0(mH)，4.15-4.3(m，2H)，4.57-4.7(m，2H)，5.05-5.3(m，4H)，7.42(m，1H)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.1，170.2，169.8，102.2，75.8，73.7，71.3，70.7，70.2，69.0，60.7，53.9，51.7，45.8，41.3，41.1，39.1，34.6，34.5，34.2，32.0，29.7，32.0，31.4，29.8，29.6，29.5，29.4，25.6，25.4，25.1，24.7，22.7，22.4，13.9，8.6.
對C83H159N4O18P·H2O的計算分析值C，64.31；H，10.47；N，3.61。測定值C，64.31；H，10.27；N，3.41。
實施例32(B31)2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)按照與實施例21和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、2-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷和(R)-3-己酰氧基十四酸來制備2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽mp161-162℃；IR(膜)3288，3096，2956，2924，2854，1732，1657，1645，1557，1466，1378，1316，1245，1173，1080，1041cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.89(m，18H)，1.15-1.67(m，87H)，2.23-2.70(m，15H)，3.06(q，6H，J＝7.4Hz)，3.2-3.85(m，9H)，4.52(d，1H，J＝8.0Hz)，5.05-5.27(m，4H)，7.24(d，1H，J＝8.5Hz)，7.43(brt，1H)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.3，173.3，170.6，170.2，169.9，100.9，75.6，73.0，71.3，70.9，70.6，68.3，60.7，55.0，45.8，41.6，41.2，39.5，34.5，34.4，34.4，31.9，31.3，29.7，29.4，25.4，24.7，22.7，22.4，14.1，8.6.
對C74H142N3O17P·H2O的計算分析值C，63.72；H，10.40；N，3.01；P，2.2。測定值C，63.72；H，10.21；N，2.96；P，2.46。
實施例33(B32)2-[(R)-3-十六酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十八酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝C13H27CO，R2＝C17H35CO，R3＝N-C15H31CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)按照與實施例21和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、2-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷以及(R)-3-十四酰氧基十四酸、(R)-3-十八酰氧基十四酸和(R)-3-十六酰氧基十四酸來制備2-[(R)-3-十六酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十八酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽mp180-181℃；IR(膜) 3284，3097，2920，2851，1731，1657，1699，1683，1653，1558，1541，1521，1506，1467，1435，1418，1376，1258，1173，1033cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.8-1.75(mH)，2.2-2.7(mH)，3.08(q，6H，J＝7.2Hz)，3.2-3.5(m，5H)，3.55-4.05(mH)，4.24(q，1H，J＝7Hz)，4.53(d，1H，J＝8Hz)，5.05-5.3(m，4H)，7.32(d，1H，J＝9Hz)，7.49(br t，1H)；13CNMR(CDCl3)δ173.8，173.4，173.3，170.6，170.3，169.9，100.9，75.7，73.0，71.3，70.9，70.6，68.3，60.7，55.0，45.8，41.3，39.5，34.6，34.4，32.0，29.8，29.4，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.
對C104H202N3O17P·4H2O的計算分析值C，66.81；H，11.32；N，2.25。測定值C，66.52；H，10.80；N，2.19.。
實施例34(B33)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照與實施例16和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-絲氨酸芐酯和(R)-3-己酰氧基十四酸來制備N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽mp159-160℃；IR(膜)3317，2954，2924，2854，1734，1654，1540，1466，1377，1316，1245，1173，1082，846，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.08(q，6H，J＝7.2Hz)，3.40(d，1H，J＝9.9Hz)，3.55-3.95(mH)，4.15-4.3(m，1H)，4.51(d，1H，J＝8.0Hz)，4.63(br.s，1H)，5.1-5.3(m，4H)，7.01(d，1H，J＝9.1Hz)，7.37(d，1H，J＝8.8Hz)；13C NMR(CDCl3)δ177.0，173.2，173.2，172.7，172.3，169.6，169.0，101.5，75.0，71.2，70.9，70.8，69.1，60.5，53.1，51.4，46.1，41.4，41.0，39.1，34.5，34.2，34.1，34.0，31.9，31.4，31.3，29.8，29.6，29.4，25.6，25.3，25.1，24.7，24.7，22.7，22.5，22.4，14.1，14.0，8.7.
對C75H142N3O19P·2H2O的計算分析值C，61.83；H，10.10；N，2.88；P，2.13。測定值C，62.07；H，10.01；N，2.94；P，2.40。
實施例35(B35)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝N-C5H11CO，R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照與實施例16和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-絲氨酸芐酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸來制備N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽mp158-159℃；IR(膜)3304，2956，2923，2853，1732，1658，1547，1466，1378，1317，1246，1174，1082，960，846，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.3-3.63(mH)，3.66-3.98(m，4H)，4.1-4.3(m，2H)，4.54(d，1H，J＝8.0Hz)，4.6(m，1H)，5.05-5.27(m，4H)，7.15(d，1H，J＝8.7Hz)，7.46(d，1H，J＝8.2Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.6，173.3，172.8，172.1，169.6，169.2，101.5，74.8，70.9，70.8，69.3，60.5，53.2，51.5，46.1，41.9，41.5，41.0，39.2，34.5，34.3，34.1，31.9，31.4，29.8，29.6，29.4，25.6，25.3，25.1，25.1，25.0，24.8，22.7，22.5，14.1，11.1，8.7.
對C83H158N3O19P H2O的計算分析值C，64.27；H，10.40；N，2.71；P，2.00。測定值C，64.14；H，10.33；N，2.70；P，2.05。
實施例36(B36)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R3＝N-C9H19CO，R2＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照與實施例16和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-絲氨酸芐酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸來制備N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽mp157-158℃(分解)；IR(膜)3306，2955，2924，2853，1734，1657，1545，1466，1378，1245，1170，1081，954，842，722cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.36(d，1H，J＝9.8Hz)，3.43-3.63(mH)，3.68-3.95(m，4H)，4.13-4.27(m，2H)，4.54(d，1H，J＝8.3Hz)，4.6(m，1H)，5.08-5.27(m，4H)；13CNMR(CDCl3)δ176.9，173.4，173.2，172.8，172.2，169.5，169.1，101.4，74.8，71.1，70.9，70.8，69.3，53.2，51.6，46.1，41.8，41.4，41.0，39.2，34.5，34.4，34.3，34.1，34.0，32.0，31.4，29.8，29.6，29.4，29.3，25.6，25.3，25.2，25.1，24.8，22.7，22.4，14.1，14.0，8.7.
對C83H158N3O19P·H2O的計算分析值C，64.27；H，10.40；N，2.71；P，2.00。測定值C，64.09；H，10.31；N，2.70；P，2.06。
實施例37(B37)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝N-C9H19CO，R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)
按照與實施例16和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-絲氨酸芐酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸來制備N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽mp156-157℃(分解)；IR(膜)3306，2956，2923，2852，1732，1659，1545，1466，1378，1246，1173，1081，958，847，722cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.0-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，2.9-3.3(mH)，3.06(q，與前面的多重峰重疊，J＝7.2Hz)，3.36(d，1H，J＝9.6Hz)，3.43-3.63(mH)，3.63-3.95(m，4H)，4.21(m，2H)，4.53(d，1H，J＝8.0Hz)，4.6(brs，1H)，5.06-5.28(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ176.6，173.6，173.3，172.8，172.1，169.6，169.2，101.5，74.8，70.9，70.9，69.4，60.5，53.2，51.5，46.1，41.9，41.5，41.1，39.2，34.6，34.5，34.4，34.1，31.9，313，29.8，29.7，29.6，29.5，29.4，29.3，25.6，25.3，25.2，24.7，22.7，22.4，14.1，14.0，11.1，8.7.
對C83H158N3O19P·H2O的計算分析值C，64.27；H，10.40；N，2.71。測定值C，64.29；H，10.30；N，2.61。
實施例38(B38)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝N-C9H19CO，R2＝R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照與實施例16和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-絲氨酸芐酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸來制備N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽mp152-153℃(分解)；IR(膜)3307，2956，2924，2853，1734，1658，1544，1466，1378，1316，1245，1173，1081，955，843，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.28-3.55(mH)，3.67-3.97(m，4H)，4.13-4.27(m，2H)，4.55(d，2H，J＝7.2Hz)，4.60(m，1H)，5.08-5.28(m，4H)，7.11(d，1H，J＝8.7Hz)，7.42(d，1H，J＝8.0Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.9，173.5，173.2，172.8，172.2，169.5，169.1，101.4，74.8，71.1，70.9，70.8，69.3，60.5，53.2，51.5，46.1，41.8，41.4，41.1，39.2，34.5，34.3，34.2，34.1，34.0，3 1.9，3 1.7，31.4，31.3，29.8，29.6，29.4，29.3，25.6，25.3，25.2，24.7，22.7，22.4，14.1，14.0，11.1，8.7.
對C79H150N3O19P的計算分析值C，64.24；H，10.24；N，2.85。測定值C，64.06；H，10.35；N，2.88。
實施例39(B39)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R3＝N-C5H11CO，R2＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照與實施例16和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-絲氨酸芐酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸來制備N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽mp151-152℃(分解)；IR(膜)3308，2956，2924，2854，1732，1660，1544，1466，1378，1317，1246，1173，1081，957，843，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.0-1.7(mH)，2.18-2.72(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.4Hz)，3.23-3.51(mH)，3.66-3.98(m，4H)，4.12-4.28(m，2H)，4.55(d，1H，J＝7.4Hz)，4.60(m，1H)，5.05-5.28(m，4H)，7.10(d，1H，J＝8.2Hz)，7.43(d，1H，J＝8.5Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.9，173.6，173.2，172.7，172.2，169.5，169.0，101.5，75.0，74.8，71.2，70.9，70.8，69.2，60.5，53.1，51.5，46.1，41.8，41.5，41.1，39.1，34.6，34.5，34.2，34.0，32.0，31.4，31.3，29.8，29.7，29.6，29.4，29.3，25.6，25.3，25.1，24.8，24.7，22.7，22.5，22.4，14.1，14.0，11.1，8.7.
對C79H150N3O19P·H2O的計算分析值C，63.47；H，10.25；N，2.81。測定值C，63.63；H，10.35；N，2.84。
實施例40(B40)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R3＝N-C5H11CO，R2＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照與實施例16和相關步驟中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脫氧-4，6-O-異亞丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-絲氨酸芐酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸來制備N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽mp158-159℃；IR(膜)3308，2956，2924，2854，1734，1659，1545，1466，1378，1316，1245，1173，1081，956，844，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.8-1.0(m，18H)，1.15-1.73(mH)，2.18-2.72(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.4Hz)，3.35(d，1H，J＝10Hz)，3.47-3.67(mH)，3.68-3.97(m，4H)，4.1-4.3(m，2H)，4.54(d，1H，J＝8.0Hz)，4.61(m，1H)，5.07-5.28(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ176.9，173.5，173.2，172.8，172.2，169.6，169.1，101.5，75.0，74.8，71.2，70.9，70.8，69.2，60.5，53.2，51.4，46.1，41.9，41.5，41.0，39.2，34.5，34.2，34.0，31.9，31.4，29.8，29.6，29.4，29.2，25.6，25.3，25.1，25.0，24.8，24.7，22.7，22.5，22.4，14.1，14.0，11.1，8.7.
對C79H150ON3O19P·H2O的計算分析值C，63.47；H，10.25；N，2.81；P，2.07。測定值C，63.43；H，10.22；N，2.83；P，2.13。
實施例41(B41)3-羥基-(R)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽的制備(化合物(1)，R1＝R3＝N-C9H19CO，R2＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2)按照與實施例16和相關步驟中所述相同的方式，由N-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脫氧-α-D-吡喃葡糖苷、(S)-2-氨基-3-芐氧基-1-丙醇以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸來制備3-羥基-(R)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙銨鹽mp151-153℃；IR(膜) 3287，2956，2923，2853，1732，1643，1552，1466，1378，1318，1147，1176，1108，1082，1052，856，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.0-1.72(mH)，2.17-2.71(m，12H)，2.9-3.3(mH)，3.08(q，與前面的多重峰重疊，J＝7.2Hz)，3.31(d，1H，J＝9.6Hz)，3.5-4.02(m，8H)，4.20(d，1H，J＝9.5Hz)，4.60(d，1H，J＝8.0Hz)，5.05-5.25(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.5，173.4，170.6，170.1，101.1，75.5，73.0，71.6，71.3，70.8，70.5，68.2，61.4，60.7，54.8，50.5，45.8，41.4，39.4，34.6，34.5，34.2，31.9，31.4，29.8，29.7，29.5，29.4，29.3，25.4，25.1，22.7，22.4，14.1，14.0，8.6.
對C83H160N3O18P·H2O的計算分析值C，64.84；H，10.62；N，2.55。測定值C，65.01；H，10.50；N，2.55。
實施例42(B42)5-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基氧基]-(S)-4-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]戊酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，P＝2，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.22g，4.77mmol)存在的情況下使(S)-4-(叔丁氧基羰基氨基)-5-羥基戊酸芐酯(0.338g，0.954mmol)和實施例15-(4)中制備的化合物(1.15g，0.954mmol)偶聯而得到0.70g(50％)的(S)-4-(叔丁氧基羰基氨基)-5-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氧基]戊酸芐酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(m，6H)，1.0-2.05(m，55H)，2.12-2.5(m，6H)，3.28-3.90(m，5H)，4.26(dd，1H，J＝4.5，11.5Hz)，4.38(d，1H，J＝11.5Hz)，4.57-4.98(m，5H)，5.11(s，2H)，5.18(m，1H)，5.49(t，1H，J＝9Hz)，5.78(d，1H，J＝7.7Hz)，7.04-7.45(m，15H).
(2)將上述(1)中制備的化合物(0.67g，0.45mmol)溶于CH2Cl2(5mL)所得到的溶液冷卻至0℃、用TFA(70μL)滴加處理并在室溫下攪拌3小時。將該反應混合物用CH2Cl2(15mL)稀釋、用飽和NaHCO3水溶液洗滌并干燥(Na2SO4)。加入(R)-3-癸酰氧基十四酸(0.20g，0.50mmol)和EDC·MeI(0.15g，0.5mmol)并將所得混合物在室溫下攪拌16小時。將該反應混合物通過Celite襯墊過濾并濃縮。將獲得的粗產物通過硅膠快速色譜法純化(梯度洗脫，15→30％EtOAc-己烷)而得到0.36g(45％)的(S)-4-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-5-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氧基]戊酸芐酯1H NMR(CDCl3)δ0.89(m，12H)，1.0-1.978(mH)，2.12-2.5(m，10H)，3.45-3.65(m，2H)，3.79(dd，2H，J＝3.8，10Hz)，4.06(m，1H)，4.27(dd，1H，J＝4.9，12Hz)，4.35(d，1H，J＝12Hz)，4.6-4.8(m，3H)，4.83(d，1H，J＝8.3Hz)，5.10(s，2H)，5.17(m，2H)，5.48(t，1H，J＝10Hz)，5.79(d，1H，J＝7.7Hz)，6.05，(d，1H，J＝8.8Hz)，7.07-7.42(m，15H).
(3)按照與由實施例15-(5)中制備的化合物制備化合物B14所述相同的方式，由上述(2)中制備的化合物制備5-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基氧基]-(S)-4-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]戊酸三乙銨鹽mp184-188℃；IR(膜)3284，2955，2919，2848，1730，1654，1548，1459，1374，1259，1165，1081，1032，800cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝7Hz)，1.0-2.0(mH)，2.18-2.75(m，12H)，3.08(q，6H，J＝7.4Hz)，3.33-4.42(mH)，4.44(d，1H，J＝8.5Hz)，5.02-5.31(m，4H)，7.54(d，1H，J＝8Hz)，)，7.61(d，1H，J＝7Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.8，173.6，173.3，170.8，170.2，101.1，75.1，73.7，71.7，71.1，70.8，70.1，60.8，54.1，48.8，45.9，41.4，41.2，39.4，34.5，34.4，34.1，31.9，31.3，29.8，29.7，29.6，29.5，29.4，26.9，25.5，25.3，25.1，22.7，14.1，8.6.
對[M-H]-計算的負FAB-MS為1514.0889；測定值1514.0816。
實施例43(B43)N-[(R)-3-羥基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽的制備(化合物(I)，R1＝N-C13H27CO，R2＝N-C11H23CO，R3＝H，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照與實施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(0.828g，3.22mmol)存在的情況下使N-烯丙氧基羰基-L-絲氨酸芐酯(0.225g，0.806mmol)和實施例22-(2)中制備的化合物(1.104g，0.886mmol)偶聯而得到1.01g(83％)的N-烯丙氧基羰基-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(m，6H)，1.0-1.7(m，42H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.12-2.48(m，4H)，3.26(m，1H)，3.66(m，1H)，3.80(dd，1H，J＝3，10Hz)，4.19-4.38(m，4H)，4.48-4.85(m，6H)，4.98(d，1H，J＝7.7Hz)，5.08-5.38(m，5H)，5.49(m，1H)，5.60-5.75(m，2H)，5.82-6.0(m，1H)，7.06-7.42(m，15H).
(2)在氬氣環境中將上述(1)中制備的化合物(1.01g，0.68mmol)和丙二酸二乙酯(1.50g，9.48mmol)溶于THF所得到的溶液脫氣(1小時)、用四(三苯膦)鈀(O)(0.10g，0.09mmol)處理并在室溫下攪拌過夜。將該反應混合物用2％MeOH-CHCl3通過硅膠墊過濾并濃縮濾液。將獲得的粗胺溶于CH2Cl2(20mL)所得到的溶液用(R)-3-羥基十四酸(0.18g，0.75mmol)和EDC·MeI(0.66g，1.02mmol)處理、在室溫下攪拌過夜且然后濃縮。將獲得的粗產物通過硅膠快速色譜法純化(梯度洗脫，30→40％EtOAc-己烷)而得到0.506g(46％)的N-[(R)-3-羥基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸芐酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(m，9H)，1.0-1.7(m，62H)，1.79(s，3H)，1.87(s，3H)，2.19(t，2H，J＝7Hz)，2.3-2.5(m，4H)，3.1(br s，1H)，3.55(q，1H，J＝9Hz)，4.0-4.43(m，5H)，4.56-4.85(m，4H)，5.13-5.32(m，4H)，6.59(d，1H，J＝7.4Hz)，6.83(br s，1H)，7.17-7.41(m，15H).
(3)按照與由實施例13-(5)中制備的化合物制備化合物B12所述相同的方式，由上述(2)中制備的化合物制備N-[(R)-3-羥基十四酰基]-O-[2-脫氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-絲氨酸三乙銨鹽mp170-173℃(分解)；IR(膜)3313，2955，2923，2853，1734，1662，1655，1558，1541，1467，1458，1376，1248，1166，1108，1078，1049，953，942，842cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.3-3.63(mH)，3.66-3.98(m，4H)，4.1-4.3(m，2H)，4.54(d，1H，J＝8.0Hz)，4.6(m，1H)，5.05-5.27(m，4H)，7.15(d，1H，J＝8.7Hz)，7.46(d，1H，J＝8.2Hz)；13C NMR(CDCl3)δ177.0，173.3，172.8，172.3，171.9，169.2，101.2，74.9，74.8，74.3，70.8，70.6，69.3，68.4，59.9，53.1，51.5，42.5，41.5，39.2，37.1，34.6，34.4，34.3，34.1，32.0，29.8，29.4，25.6，25.2，22.7，22.5，14.5，8.7.
對C83H160N3O18P·2H2O的計算分析值C，64.10；H，10.63；N，2.70；P，1.99。測定值C，64.28；H，10.42；N，2.70；P，1.84。
試驗例1對抗-破傷風類毒素抗體產生的刺激本發明主題的AGPs可促進針對鼠模型中純化破傷風類毒素的抗體的產生。將10mg的各AGP樣品加入到1ml含有角鯊烯油+12％卵磷脂的油-卵磷脂混合物中。將該混合物在56℃的水浴中加熱并超聲處理而獲得澄清溶液。將五十(50)μl的各溶液通過在2ml含有1.0μg破傷風類毒素抗原/ml的無菌、預溫熱的0.1％Tween80鹽水中渦旋而乳化。在對小鼠給藥前對制劑再次進行渦旋。通過將制成0.1ml的合適制劑經皮下注入各小鼠的腹側來處理雌性C57BL/6×DBA/2F小鼠(8只/組)。小鼠破傷風類毒素和AGP化合物最終的劑量分別為0.2μg和50μg。對照組小鼠接受破傷風類毒素的載體溶液(油-Tween鹽水)。將全部小鼠在第0天時進行處理，隨后在第21天時進行第二次免疫接種。第二次免疫接種后14天對小鼠取血并通過離心分離血清。
通過使用破傷風類毒素包被的微量滴定板的酶免疫測定(EIA)分析對來自各小鼠的血清進行抗破傷風類毒素抗體評價。估計IgM、總Ig以及IgG1、IgG2a和IgG2b同型的抗破傷風抗體滴度。將最初按1∶200稀釋的血清的11份稀釋液中的每份血清樣品稀釋2倍。結果如表2-4中所示。
表2經處理的小鼠的抗破傷風類毒素抗體滴度物質 總IgGIgG1IgG2aIgG2bIgMT/C*滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度B11 3.623,200 1.86 400,000 2.06 10,4500.93 26,800 4.75 7,600B23.84 24,800 2.16 464,000 4.28 21,7001.57 45,200 4.50 7,200B13.97 25,600 3.42 736,000 3.78 19,2002.45 70,400 2.38 3,800B25 8.93 57,600 2.68 576,000 1.67 8,500 3.28 94,400 2.0 3,200B21 4.71 30,400 2.23 480,000 5.83 29,6006.07 174,400 5.50 8,800B15 18.85 121,6004.17 896,000 6.80 34,5002.79 80,256 4.0 6,400載體 6,450215,000 5,075 28,750 1,600*T/C比＝實驗測試滴度÷載體對照滴度表3經處理的小鼠的抗破傷風類毒素抗體滴度物質 T/C*IgM T/C IgG2aT/C IgG2bB123.14800139.4 2370 149 9840B161.6256066.81135 104 6880B133.96080220 3740 ＞208 ＞13,760B113.35120347 5900 127.3 8400載體- 1760 - 25 - 98*T/C比＝實驗測試滴度÷載體對照滴度表4經處理的小鼠的抗破傷風類毒素抗體滴度物質 總Ig IgM IgG1IgG2aIgG2bT/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度B26 10.5 2,490 1.1 600 16.9 25,20029.3 440 42.6 2,260B15 144.5 34,400 2.7 1,520 118.3 176,000 259.3 3,890603.8 32,000B22 60.0 19,050 0.8 440 18.4 27,400345.8 5,18759.6 3,160B28 228.6 54,500 3.7 2,080 92.5 137,600 664.7 9,970519.2 27,520載體238 560 1,48815 53*T/C比＝實驗測試滴度÷載體對照滴度本發明主題的化合物在與破傷風類毒素共同給藥時顯示出劑量反應。給BFD1(C57B1/6 X DBA/2)雌性小鼠(8只/組)免疫接種0.2ml含有AGP+0.2μg破傷風類毒素的乳劑。在初次免疫接種后21天給予第二次免疫接種。在第二次注射后21天對各小鼠取血。結果如表5和6中所示。
表5免疫接種破傷風類毒素的小鼠的AGPs劑量反應物質 總IgIgMIgG1IgG2aIgG2bT/C 滴度 T/C 滴度 T/C 滴度 T/C 滴度 T/C 滴度比*比 比 比 比B15 50μg3.3 7,000 13.4 37,6004.1 26,300 150.0 11,2253.2 2500B15 25μg5.8 12,4002.1 6,000 4.5 28,800 52.0 3900 7.0 5400B15 10μg5.3 11,4501.4 4,000 5.5 35,100 33.8 2538 9.9 7650B27 50μg3.2 6,800 4.0 11,2001.6 10,400 12.0 900 11.6 9,000載體 21502800 6350 75 775*T/C比＝實驗測試滴度÷載體對照滴度表6免疫接種破傷風類毒素的小鼠的AGPs劑量反應物質 IgM 總Ig IgG1IgG2aIgG2bT/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度B12 50μg 5.43 869 368.55 47,543141.22 259,429nd 499.35 12,983B12 25μg 3.14 503 403.98 52,114145.21 266,743 16.86 354 196.92 5,120B12 10μg 3.71 594 248.06 32,00081.12 149,029 6.81 143 181.12 4,709B12 5μg3.43 549 489.92 63,20084.11 154,514 34.14 717 352.54 9,166B12 1μg1.71 274 326.02 42,05790.08 165,486 73.71 1,548175.81 4,571B15 50μg 3.14 503 233.88 30,17190.08 165,486 50.05 1,051235.62 6,126B15 25μg 2.29 366 181.91 23,467106.14 194,971 10.43 219 158.23 4,114B15 10μg 2.86 457 170.10 21,94339.07 71,771 2.57 54 84.38 2,194B15 5μg1.71 274 248.06 32,000103.15 189,486 3.00 63 210.88 5,483B15 1μg1.57 251 166.56 21,48672.04 132,343 7.62 160 114.27 2,971載體 1601291837 21 26*T/C＝實驗測試滴度÷載體對照滴度nd-未進行實驗測試試驗例2對抗卵清蛋白抗體產生的刺激給BDF1雌性小鼠(8只/組)免疫接種0.2ml含有50μg AGPs+50μg卵清蛋白的乳劑。在初次免疫接種后21天給予第二次免疫接種。在第二次注射后14天對各小鼠取血。將顯示出總IgG和IgM的免疫接種小鼠的抗體滴度以及包括IgG、IgG2a和IgG2b在內的IgG亞型的滴度列在表7中。
表7免疫接種卵清蛋白的BDF1小鼠體內的佐劑活性物質 總Ig IgMT/C*滴度 T/C 滴度B110.7 1501.3 250B2 2.5 5630.9 175B1 0.5 1190.8 150B251.9 4380.8 150B210.5 1131.3 250B154.1 9252.3 438B270.6 1381.6 300載體 225 188*T/C比＝實驗測試滴度÷載體對照滴度表7續物質IgG1IgG2a IgG2bT/C*滴度T/C滴度-T/C滴度B11 1.62650 1.7 5501.6375B2 5.08300 2.5 8252.3550B1 0.5763 0.2 56 0.8188B25 5.28500 0.5 1635.01188B21 0.61000 0.1 25 0.8200B15 0.6950 0.3 11316.7 3963B27 0.81275 0.1 38 0.5113載體1650 - 325 - 238*T/C比＝實驗測試滴度÷載體對照滴度本發明主題的AGP化合物在與抗原卵清蛋白一起對溫血動物給藥時刺激了針對該抗原的抗體的產生。
試驗例3對傳染性流感的保護性免疫反應的產生接種了福爾馬林滅活的流感疫苗和本發明主題的AGP化合物的小鼠對流感攻擊的保護性免疫反應提高并產生了針對該抗原的抗體。給動物接種該抗原和AGP化合物的不同載體的溶液。通過鼻內(IN)給予約10 LD50的傳染性流感A/HK/68對小鼠進行攻擊來測定保護程度。在攻擊后21天評價死亡率。在攻擊劑量下存活的小鼠數量是對疫苗功效的直接評價。就提供的實驗而言，該數據與產生抗體的量沒有必然的聯系。
1)用含有1個血凝單位(HAU)的福爾馬林滅活的流感A/HK/68(FI-Flu)和50μg不含載體對照疫苗的AGP的0.2％三乙醇胺(TEoA)/水溶液配制疫苗，其中所述的載體對照疫苗不含AGP。僅給ICR小鼠(10只/組)接種一次疫苗。通過在接近腹股溝淋巴結的2個不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的總計0.2ml的疫苗/小鼠來給予疫苗。在接種疫苗后14天從眼眶叢中對小鼠(僅5只小鼠/組)取血。收集血清并在-20℃下凍干至用于酶聯免疫吸附測定(ELISA)。在接種疫苗后30天通過鼻內(IN)給予約10LD50的傳染性流感A/HK/68對全部小鼠進行攻擊。在攻擊后21天評價死亡率。獲自接種TEoA制品的抗流感抗體滴度和相應的接種該制品小鼠的存活率如表8中所示。
表8經處理小鼠的抗流感抗體滴度和存活率物質 滴度-1存活百分率總IgG未免疫＜1000載體 ＜1000B96400 44B10 1600 40B7200 33B31600 33B14 6400 44B15 6400 502)用含有1個血凝單位(HAU)的福爾馬林滅活的流感A/HK/68(FI-Flu)和25μg不含鹽水和不含AGP的載體對照疫苗的AGP的2％角鯊烯溶液配制疫苗。僅給BALB/c小鼠(10只/組)接種一次疫苗。通過在接近腹股溝淋巴結的2個不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的總計0.2ml的疫苗/小鼠來給予疫苗。在接種疫苗后14天從眼眶叢中對小鼠(僅5只小鼠/組)取血。收集血清并在-20℃下凍干至用于酶聯免疫吸附測定(ELISA)。在接種疫苗后35天通過鼻內(IN)給予約10LD50的傳染性流感A/HK/68對全部小鼠進行攻擊。在攻擊后21天評價死亡率。獲自接種角鯊烯制品的抗流感抗體滴度和相應的接種該制品動物的存活率如表9中所示。
表9經處理小鼠的抗流感抗體滴度和存活率滴度-1物質總IgGIgG1IgG2aIgG2b存活百分率未免疫 ＜100＜100 ＜100＜100 0鹽水800 100 800 100 62.5載體1600 16001600 1600 100B25 3200 16006400 1600 100B15 1600 32003200 400 100B9 1600 16003200 800 87.5B10 400 400 400 400 62.5B3 3200 32006400 800 87.5B6 800 800 400 1600 75B14 3200 64003200 6400 87.5B28 800 400 400 100 503)在初次、然后是二次接種后將接種疫苗的小鼠的抗體滴度和存活率進行比較。用含有1個血凝單位(HAU)的福爾馬林滅活的流感A/HK/68(FI-Flu)、25μg AGP、但不包括不含AGP的載體對照疫苗的0.2％TEoA/水溶液配制疫苗。通過在接近腹股溝淋巴結的2個不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的總計0.2ml的疫苗/小鼠來對ICR小鼠(20只/組)給予疫苗。在初次接種疫苗后35天將各組分成2個亞組。此時對各亞組之一進行攻擊，剩余的亞組接受第二次接種。在接種疫苗(初次和二次)后14天從眼眶叢中對小鼠(僅5只小鼠/組)取血。收集血清并在-20℃下凍干至用于ELISA。在初次或二次接種疫苗后35天通過鼻內(IN)分別給予約10LD50或40LD50的傳染性流感A/HK/68對小鼠進行攻擊。在攻擊后21天評價死亡率。初次接種和二次接種后小鼠的抗流感抗體滴度和存活率如表10中所示。第二次接種的小鼠的抗體滴度和存活率較高。
表10經處理小鼠的抗體滴度和存活率IgG 滴度-1存活百分率物質 初次接種后 二次接種后 初次接種后二次接種后未免疫200 100 0 0載體 800 102,400 2040B96400 12,8008050B10 1600 25,6006090B73200 ＞102,400 6060B4800 25,6005070B33200 102,400 7060B51600 ＞102,400 6090B61600 102,400 8070B14 800 51,2003370試驗例4脂肪酸鏈長對佐劑性的作用測試脂肪酸鏈長R1-R3對活性的作用。用含有1個血凝單位(HAU)的福爾馬林滅活的流感A/HK/68以及25μg AGP、但不包括不含AGP的載體對照疫苗的0.2％TEoA/水溶液配制疫苗。僅給ICR小鼠(10只/組)接種一次疫苗。通過在接近腹股溝淋巴結的2個不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的總計0.2ml的疫苗/小鼠來給予疫苗。在接種疫苗后14天從眼眶叢中對小鼠(僅5只小鼠/組)取血。收集血清并在-20℃下凍干至用于ELISA。在接種疫苗后35天通過鼻內給予約10LD50的傳染性流感A/HK/68對全部小鼠進行攻擊。在攻擊后21天評價死亡率。看起來脂肪酸鏈的長度可適度地影響生物活性。結果如表11和12中所示。
表11經處理小鼠的抗體滴度和存活率滴度-1物質鏈長 總IgG IgG1IgG2aIgG2b存活百分率未免疫 … 200100 100 800 0載體 … 200100 100 200 11B18 7800800 800 400 20B17 86400 3200 3200 1600 40B16 98001600 100 800 40B15 10 3200 200 3200 6400 70B14 10 8001600 100 400 30B13 11 1600 800 400 800 50B12 12 200200 100 200 0B11 14 1600 200 1600 400 30
表12經處理小鼠的抗體滴度和存活率滴度-1物質鏈長總IgGIgG1IgG2aIgG2b存活百分率未免疫 …100 100 50 800 0載體 …100 200 50 100 30B8 7 64003200 400 1600 80B7 9 32003200 100 1600 70B5 10 800 200 50 400 44B4 11 3200400 100 1600 60B3 12 16001600 50 800 0B1 14 12,800 6400 1600 1560040
試驗例5雜原子X與糖苷配基氮原子之間的碳鏈長度的變化對佐劑性的作用X與糖苷配基氮原子之間的碳鏈長度通過單原子逐步延伸。研究使這兩種組成之間的鏈延長對佐劑性的作用。用含有1個血凝單位(HAU)的福爾馬林滅活的流感A/HK/68(FI-Flu)以及25μg AGP、但不包括不含AGP的載體對照疫苗的0.2％TEoA/水溶液配制疫苗。僅給ICR小鼠(10只/組)接種一次疫苗。通過在接近腹股溝淋巴結的2個不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的總計0.2ml的疫苗/小鼠來給予疫苗。在接種疫苗后14天從眼眶叢中對小鼠(僅5只小鼠/組)取血。收集血清并在-20℃下凍干至用于ELISA。在接種疫苗后35天通過鼻內給予約10LD50的傳染性流感A/HK/68對全部小鼠進行攻擊。在攻擊后21天評價死亡率。看起來佐劑活性隨著雜原子X與糖苷配基氮原子之間的碳鏈長度增加而降低。然而，取決于與該碳鏈連接的殘基的不同，所述分子的生物和代謝穩定性可能受到影響。結果如表13中所示。
表13經處理小鼠的抗體滴度和存活率滴度-1物質碳鏈總IgGIgG1IgG2bIgG2b存活百分率未免疫 …＜50＜50 ＜50 ＜500載體 …200 200 50 200 25B19 2 12,800 100 800 640050B21 3 6400800 100 160040B22 4 3200100 3200 200 40
試驗例6通過AGP化合物進行的細胞因子誘導本發明主題的AGP化合物誘導人全血離體培養試驗中的細胞因子。將AGP化合物溶于10％EtOH-水中并稀釋成不同濃度。將50μl的各稀釋液加入到450μl的人全血中。將對照組用培養基(RPMI)處理。在37℃下通過在旋轉器上恒定混合而將該反應混合物保溫4小時。將無菌PBS(1.5ml)加入到該反應混合物中、將細胞離心并取出上清液用于細胞因子測試。使用來自R&D Systems的免疫測定ELISA試劑盒測定各上清液中TNF-α和IL-1β的濃度。來自這些研究的結果如表14-19中所示。
表14離體實驗中對細胞因子分泌的刺激物質劑量TNF-αIL-1β(μg)(pg/ml) (pg/ml)B26 20 498.90 33.2510 254.94 25.345 75.62 9.891 38.85 3.90B2 20 1338.42155.0710 817.67 114.415 235.32 34.721 105.52 14.53RPMI - 2 0
表15離體實驗中對細胞因子分泌的刺激物質劑量 TNF-αIL-1β(ng/ml)(pg/ml) (pg/ml)B16 10,000 29155500027753100015539B13 10,000 775 THTC*50007161871000740177B9 10,000 44996500024784100014553B1010,000 20743500012761100073 17B7 10,000 83 16500057 14100026 6RPMI - 2 0*THTC-過高而無法統計表16離體實驗中對細胞因子分泌的刺激物質 劑量 TNF-αIL-1β(ng/ml) (pg/ml) (pg/ml)B4 10,000 4322135000205164100094 70B3 10,000 56726950003903421000189204B5 10,000 169795000143162100043 36B6 10,000 94 52500059 29100030 13B14 10,000 24991500012071100056 46RPMI - 2 0
表17離體實驗中對細胞因子分泌的刺激物質劑量TNF-αIL-1β(ng/ml) (pg/ml) (pg/ml)B1110,000181 62.35000 139 61.71000 115 54.5500 125 55.8100 127 59.8B1310,000583 2825000 592 3901000 478 327500 411 352100 302 261B1510,000320 1535000 280 1261000 209 94.4500 183 104100 133 51.6B1610,000121 41.05000 114 34.01000 7219.5500 5517.1B1410,000114 24.65000 8719.01000 5110.0500 4919.9RPMI-2 0
表18離體實驗中對細胞因子分泌的刺激物質 劑量 TNF-αIL-1β(ng/ml)(pg/ml) (pg/ml)B2 10,000 100 22.25000 7514.01000 389.0500 288.3100 6.1 3.5B1 10,000 2010.05000 115.51000 2.8 4.0500 1.10100 0 0B7 10,000 6114.75000 448.31000 304.3500 273.8100 105.1B4 10,000 232 66.95000 173 66.51000 130 32.0500 116 19.3100 8965.2B3 10,000 433 151.95000 316 200.41000 229 75.1500 212 67.9100 130 35.9B5 10,000 142 24.15000 9923.01000 9610.5500 5916.9100 335.4RPMI - 2 0
表19離體實驗中對細胞因子分泌的刺激物質 劑量 TNF-αIL-1β(ng/ml)(pg/ml) (pg/ml)B17 10,000 2.8 05000 2.2 01000 2.6 0.2B8 10,000 2.8 05000 0.7 0.51000 1.5 0.1B22 10,000 287 175000 111.91000 2.2 0.1B28 10,000 198 135000 197 131000 139 8B12 10,000 1017 1355000 957 1531000 863 175RPMI - 3.9 0
試驗例7細胞毒性T-淋巴細胞反應的刺激通過細胞毒性試驗檢測給予本發明主題的AGP化合物和蛋白質抗原后對細胞毒性T-淋巴細胞反應的誘導作用。對各組C57BL/6小鼠經皮下(腹股溝區)初次免疫接種25μg配制成AGP制劑的卵清蛋白(OVA)。注射體積為200μl。21天后將每個實驗組中的3只小鼠處死并取出脾且收集為單細胞混懸液并計數。
將來自實驗組的脾細胞(75X106個細胞/3-4ml培養基)置于25cm2T-燒瓶中。接下來向該燒瓶中加入1.0ml、5×106/ml經照射的(20,000拉德)E.G7(OVA)細胞。使體積達到10ml。通過將所述T-燒瓶豎直地置于37℃和5％CO2的培養箱中而將培養物維持4天。在第4天時從燒瓶中回收存活的細胞、用新鮮培養基洗滌1X、重新懸浮于5.0ml中并計數。
將回收的效應細胞調整至5×106個活細胞/ml并以一式三份的形式將100μl體積連續稀釋入96孔圓底平板(Corning25850)的各孔中、使用100μl/孔培養基作為稀釋劑。接下來以1×105個細胞/ml將100μl體積的51Cr-標記的(參見下文)靶物[E.G7(OVA)-卵清蛋白基因轉染的EL-4細胞系]加入到各孔中。自發釋放(SR)的孔中含有100μl的靶物和100μl的培養基。釋放最多(MR)的孔中含有100μl的靶物和100μl的洗滌劑(2％Tween20)。效應物/靶物(E/T)比為50∶1、25∶1、12.5∶1以400Xg離心平板并在37℃和5％CO2下保溫4小時。在保溫后使用Skatron Supernatant Collection System收集孔中的上清液。 如下用51Cr(鉻酸鈉)標記靶細胞E.G7(OVA)。在15ml錐形管內的1.0ml總體積中混合了5×106個靶細胞和250μCi51Cr。在37℃下的水浴中將細胞混懸液保溫90分鐘，同時每隔15分鐘緩慢攪拌一次。在保溫后通過離心和用15ml體積的培養基潷析來洗滌標記的細胞。在第三次離心后將細胞重新懸浮于10ml新鮮培養基中并使之在室溫下放置30分鐘且然后離心。最終將細胞以1×105個細胞/ml重新懸浮于培養基中。
按照上述步驟免疫接種本發明主題AGPs的小鼠對OVA抗原表現出如表20中所示的細胞毒性T-淋巴細胞反應。
表20經處理的細胞的細胞毒性T-淋巴細胞反應％細胞毒性E∶T物質50∶1 25∶112.5∶1B11 14 8 5B12 13 7 4B13 28 1510B15 58 4930B16 42 2920B17 39 2615B18 36 2015B14 45 3625B28 28 159B27 17 9 5
％細胞毒性E∶T物質 50∶125∶1 12.5∶1B13424 15B36554 42B47266 60B52818 11B75744 29B83620 15B10 6556 38B96555 36B65441 37B22112 6B25 6555 43B26 1484B22 5842 31B21 3826 15B19 5942 33B20 3625 13B29 1695B31 1911 7B35 9 52B36 1374B37 1286B38 3825 16B39 3321 13B40 2012 8B43 1912 6載體對照 ＜10
試驗例8針對破傷風類毒素的血清和粘膜抗體滴度的產生本發明主題的AGPs在通過鼻內給藥時引起了對純化破傷風類毒素的血清和粘膜免疫反應。對各組BALB/c小鼠經鼻內初次免疫接種(1°)10μg破傷風類毒素(TT)+20μg配制成20ul體積的含水制劑(AF)的AGP。14天后給予第二次免疫接種(2°)且在14天后給予與第一次和第二次相同組成的第三次免疫接種(3°)。在第21天(2°后第7天)和第28天(3°后第10天)以及第48天(3°后第20天)對小鼠取血。在2°后第7天和3°后第7天取陰道洗滌物/糞便提取物樣品。通過標準ELISA方法對血清和洗滌樣品測試抗-TT抗體。這些試驗結果如下面的表21和22中所示。
所述的含水制劑包括本發明主題的AGPs和一種或多種表面活性劑。用于含水組合物的表面活性劑包括糖脫氧膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、鞘磷脂、鞘氨醇、磷脂酰膽堿、1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、L-α-磷脂酰乙醇胺和1，2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-膽堿磷酸或其混合物。用于本實施例的含水制劑包括表面活性劑1，2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-膽堿磷酸(DPPC)且如下制備簡單地說，用乙醇制備4mg/ml的DPPC溶液。將該乙醇溶液的等分部分加入到干燥的AGPs中并緩慢渦旋至使AGP濕潤。通過緩慢向小瓶中吹入過濾的氮氣流而除去乙醇。加入注射用水并在60℃下將混懸液超聲處理10分鐘至澄清。所得的含水制劑含有約118μg/ml DPPC、具有約70nm的顆粒并將其進行無菌過濾。
表21經處理小鼠的抗破傷風類毒素抗體滴度抗破傷風類毒素滴度-1陰道洗滌物 糞便提取物IgG IgA IgG IgA物質2° 3° 2° 3° 2° 3° 2° 3°B258006400 6400 64005020032006400B154008006 400640050100640012,800B192004001600 32002525 32006400B4 1600 4001600 64002550 320012,800B5 3200 8003200 32005010032006400B3 1600 1600 6400 64005010032006400B2240080080032002550 16006400PBS＜25 ＜25 ＜5＜25 ＜25 ＜25＜25＜25正常 ＜25 ＜25 ＜25 ＜25 ＜25 ＜25＜25＜25血清表22經處理動物的血清抗破傷風類毒素抗體滴度抗破傷風類毒素滴度-1血清收集物IgG1IgG2aIgAd21 d38 d48 d21 d38d48d21 d38 d48B251M*8M 8M 512K4M 4M 12.8K 102.4K102.4KB152M 8M 8M 512K1M 2M 12.8K 51.2K 25.6KB192M 4M 4M 64K#256K 128K 6.4K 25.6K 12.8KB4 1M 8M 8M 1M 2M 2M 25.6K 102.4K102.4KB5 2M 8M 8M 512K2M 2M 25.6K 102.4K102.4KB3 512K4M 8M 512K2M 2M 12.8K 51.2K 51.2KB221M 2M 4M 64K 256K 256K 6.4K 25.6K 25.6K
抗破傷風類毒素滴度-1血清收集物IgG1IgG2aIgAd21 d38d48d21 d38 d48 d21 d38d48PBS 1,000 16K16K1,000 1,000 1,000 200 200200C 200200200100 100 100 200 200200*M＝106，#K＝103，C＝正常血清鼻內給予用AGP-AF配制的TT誘發了針對該抗原的抗原特異性免疫反應(表22)和粘膜免疫反應(表21)。
試驗例9通過鼻內給藥刺激對乙型肝炎表面抗原的免疫反應經鼻內給予了乙型肝炎表面抗原(HBsAg)與本發明主題的化合物的小鼠產生了針對該抗原的血清IgG和IgA滴度。在陰道洗滌物中檢測到了分泌的IgA且通過細胞毒性試驗檢測了對細胞毒性T-淋巴細胞反應的誘導作用。
對各組BALB/c小鼠經鼻內初次免疫接種(1°)2.5μg HBsAg+10μgAGP-AF的20ul體積溶液。AGP-AF如試驗例8中所述制備。21天后對小鼠經鼻內第二次免疫接種(2°)7.5μg HBsAg+10μg AGP-AF的20ul體積溶液。在第二次免疫接種后28天給予與第二次免疫接種相同組成的第三次免疫接種(3°)。在第二次免疫接種后16天(2°后第16天)和第三次免疫接種后8天(3°后第8天)進行試驗以便檢測細胞毒性T-淋巴細胞活性。在第二次免疫接種后22天(2°后第22天)和第三次免疫接種后21天(3°后第21天)評價血清和粘膜抗體滴度。通過標準ELISA方法進行抗體測定。如試驗例7中所述進行細胞毒性測定。來自本實驗的結果如表23-26中所示。
表23經處理的細胞的細胞毒性T-淋巴細胞反應％細胞毒性(2°后第16天)E/T物質 50∶1 25∶1 12.5∶1 6.25∶1B2536 20 13 9B1513 544B1926 20 11 9B4 28 17 97B3 43 26 17 11B5 43 30 20 11B2233 21 15 8載體 3200正常細胞 3300表24經處理的細胞的細胞毒性T-淋巴細胞反應％細胞毒性(3°后第8天)E/T物質 50∶1 25∶1 12.5∶16.25∶1B25 30 19 13 8B15 56 42 25 16Bl9 71 54 33 24B4 23 15 9 5B3 54 45 32 20B5 44 30 19 12
％細胞毒性(3°后第8天)E/T物質 50∶1 25∶1 12.5∶1 6.25∶1B22 22 13 75載體5 2 11正常細胞 7 5 33表25經處理小鼠的抗肝炎抗體滴度抗HBsAg滴度-1*物質IgG1IgG2aIgAB25 256K#500K 3,200B15 256K 500K 6,400B19 500K 64K 1,600B4 500K 1000K 6,400B3 1000K500K 6,400B5 256K 500K 3,200B22 256K 64K 1,600載體＜2K ＜2K ＜200*2°后第22天，#K＝103表26經處理小鼠的抗肝炎抗體滴度抗HBsAg滴度-1*物質 IgG1IgG2aIgAB25 1000K#1000K 25,600B15 2000K 2000K 25,600B19 2000K 500K 12,800
抗HBsAg滴度-1*物質 IgG1IgG2aIgAB4 1000K 2000K 25,600B3 1000K 1000K 25,600B5 500K 1000K 12,800B22500K 500K 12,800載體 ＜2K ＜2K ＜200*3°后第21天，#K＝103對各組BALB/c小鼠經鼻內免疫接種2.μg HBsAg+10μg AGP-AF并在21天后經鼻內加強接種7.μg HBsAg+10μg AGP-AF。在加強接種后10天收集陰道樣品并檢測抗-HBsAg抗體。本試驗的結果如表27中所示。
表27陰道洗滌物抗HBsAg滴度-1物質IgGIgAB25 100800B15 50 3200B19 ＜50 400B4 1600 6400B3 8001600B5 1600 1600B22 100800載體＜50 ＜50鼻內給予HBsAg與本發明主題的化合物刺激了針對該抗原的體液和細胞免疫反應。鼻內免疫接種用AGP-AF配制的抗原誘發了細胞毒性T-淋巴細胞反應(表23-24)和抗原特異性體液(表25和26)和粘膜(表27)免疫反應。
試驗例10對流感的保護性免疫反應的產生經鼻內免疫接種含有血凝素抗原和本發明主題的AGPs的FLUSHIELD流感疫苗的小鼠產生了可在陰道洗滌物中回收的IgG和IgA。另外防止了免疫接種小鼠隨后受到流感的攻擊。
以21天間隔經鼻內對ICR小鼠免疫接種3次含有0.3μg血凝素抗原(HA)+10μg AGP-AF或重組大腸桿菌熱不穩定腸毒素(LT)的FLUSHIELD流感疫苗(Wyeth-Lederle)。如試驗例8中所述制備AGP-AF。以1μg/ml將LT溶于鹽水。在第二次和第三次免疫接種后14天收集陰道洗滌物。在第三次免疫接種后14天收集血清樣品。在最后的免疫接種后35天用10LD50(致死劑量50)的傳染性流感A/HK/68攻擊小鼠并監測死亡率。表28和29給出了通過用于檢測陰道洗滌物和血清中抗流感抗體滴度的標準ELISA方法進行試驗的結果。
表28陰道洗滌物樣品物質 IgA IgG 預防百分比第二次 第三次 第二次 第三次未免疫 ＜20 ＜20 ＜20＜20 22載體 80 160 160 160 50B25 1280 1280 640 2560 100B19 320 5120 12801280 70B3 1280 2560 12801280 100B22 640 2560 320 640 75LT 2560 2560 2560640 100
表29物質血清滴度 預防百分比總IgG IgG1IgG2aIgG2b未免疫 ＜400 ＜400 ＜400 ＜40022載體 102,400 256,00012,800 102,400 50B25≥819,200 102,400819,200≥819,200100B19819,200 51,200 102,400819,200 70B3 ≥819,200 51,200 819,200≥819,200100B22819,200 51,200 102,400819,200 75LT ≥819,200 ≥819,200 ≥819,200 ≥819,200100這些數據證明當經鼻內給予AGPs的AF溶液時，它可起粘膜佐劑的作用，從而導致在粘膜部位產生IgA。還誘使對通過粘膜入侵的上呼吸道病原體的預防作用增加。
試驗例11由穩定的乳劑制劑產生免疫反應本發明主題的AGP化合物在以穩定乳劑(SE)的形式給藥時刺激了體液和細胞毒性T-淋巴細胞反應。以25μg的劑量水平測試AGPs以便輔助乙型肝炎表面抗原(HBsAg)誘發CTL和抗體反應。在第0天和第21天時經皮下給BALB/c小鼠免疫接種2.0μg HBsAg+25μg的AGP/SE。如試驗例7中所述進行CTL測定。將AGPs配制成穩定的乳劑(SE)并將該組合物命名為AGP-SE。含有10％v/v角鯊烯、0.091％w/vPLURONIC-F68嵌段共聚物、1.909％w/v卵磷脂酰膽堿、1.8％v/v甘油、0.05％w/vα生育酚、10％磷酸銨緩沖液和78.2％v/v注射用水的穩定乳劑的制備方法對本領域技術人員而言應是顯而易見的。將該乳劑勻化至顆粒大小≥0.2μm。表30表明本發明主題的AGPs誘發了對HBsAg的細胞毒性T-淋巴細胞反應。
表30經處理的細胞的細胞毒性T-淋巴細胞反應％細胞毒性E∶T物質 天 50∶125∶1 12.5∶1 6.25∶1B25 1°后第17天 27 12 95B19 74 48 34 24B3 28 15 95B22 42 24 17 7載體-SE 32 16 962°后第16天B25 49 28 20 13B19 73 62 42 31B3 81 47 32 22B22 78 69 58 39載體-SE 38 23 14 8對HBsAg的抗體滴度的結果如表31中所示。在用HBsAg或在HBsAgS-抗原區殘基110-137中發現的B-細胞表位的28個氨基酸肽(p72)包被的ELISA平板上滴定來自2°后第28天所取血的血清。
表31經處理小鼠的抗HBsAg滴度抗HBsAg滴度-1HBsAgp72-肽物質IgG1IgG2aIgG1IgG2aB252048K*2048K128K 64KB191024K 1024K64K 128KB3 512K 1024K16K 128KB221024K 1024K128K 128K載體-SE1024K 64K 64K 4K
AGP-SE處理的小鼠表現出對乙型肝炎表面抗原的體液(表31)和細胞毒性T-淋巴細胞(表30)反應。有意義的是AGP-SE處理的小鼠在血清中顯示出通過兩種抗原檢測的強烈的IgG2a特異性抗體滴度，而載體-SE僅誘發了一種適當的IgG2a反應。
試驗例12對血清抗體滴度的刺激如試驗例3中所述評價AGP化合物B31提高對流感病毒疫苗的血清抗體滴度的能力。簡單地說，對ICR小鼠(10只/組)給予含有1HAU福爾馬林滅活流感A/HK/68+或-25μg用0.2％TEoA/水溶液配制的RC-523。此外，用致死劑量的傳染性流感病毒攻擊小鼠以便評價預防保護作用。將本實驗的結果列在表32中。
表32

試驗例13誘導型氧化氮合成活性對本發明相應AGP化合物的篩選包括對與巨噬細胞活化相關的誘導型氧化氮合成酶或iNOS活性(NOS ED50)的評價，且由此可以將其作為免疫刺激的量度來觀察。就本試驗而言，收集小鼠腹膜流出物細胞并分離粘著的細胞群。使粘著的細胞與不同濃度的可溶性AGP化合物接觸并測定產生的誘導和分泌的亞硝酸鹽。NOS ED50值代表刺激半數亞硝酸鹽釋放最高量所需的AGP濃度且相當于刺激巨噬細胞所需的濃度。
還評價了AGP化合物誘發家兔體內發熱反應的傾向。用10％(v/v)乙醇/水溶液將各化合物配制成100mg/ml，然后用D5W將它們稀釋成所需的濃度。以3ml/kg體重將該物質注入家兔。記錄家兔體核溫度的升高值。將誘導3只家兔累計升高大于或等于1.5度的化合物看作是致熱性的。
將這些實驗的結果列在表33中。
表33


可以理解的是上述實施例僅用于解釋本發明。可以對所用的組合物和/或方法做一定程度的修改且仍然可以實現本發明的目的。認為這類修改屬于本發明要求保護的范圍。
參考文獻Bulusu，M.A.R.C.，Waldsttten，P.，Hildebrandt，J.，Schütze，E.和G.Schulz(1992)“脂A的環狀類似物合成和生物活性”(Cyclic Analogues of Lipid ASynthesis and BiologicalActivities)-《藥物化學雜志》(J.Med.Chem.)353463-3469。Ikeda，K.，Asahara，T.和K.Achiwa(1993)“脂A具生物活性的N-酰化的含L-絲氨酸的D-氨基葡糖苷-4-磷酸酯衍生物的合成”(Synthesis of Biologicaily Active N-acylatedL-serine-Containing Glucosaminide-4-Phosphate Derivatives ofLipid A)-《化學藥物簡報》(Chem.Pharm.Bull.)41(10)1879-1881。Miyajima，K.，Ikeda，K.和K.Achiwa(1996)“脂A和相關化合物XXXI。脂A具生物活性的N-酰化的含L-絲氨酸的D-氨基葡糖苷4-磷酸酯衍生物的合成”(Lipid A and Related Compounds XXXI.Synthesis of Biologically Active N-Acylated L-Serine-ContainingD-Glucosaminide 4-Phosphate Derivatives of Lipid A)-《化學藥物簡報》(Chem.Pharm.Bull.)44(12)2268-2273。Shimizu，T.，Akiyama，S.，Masuzawa，T.，Yanagihara，Y.，Nakamoto，S.，Takahashi，T.，Ikeda，K.和K.Achiwa(1985)“化學合成的脂A的單糖類似物在小鼠體內的抗腫瘤活性和生物作用”(AntitumorActivity and Biological Effects of Chemically SynthesizedMonosaccharide Analogues of Lipid A in Mice)-《化學藥物簡報》(Chem.Pharm.Bull.)33(10)4621-4624。Shimizu，T.，Sugiyama，K.，Iwamoto，Y.，Yanagihara，Y.，Asahara，T.，Ikeda，K.和K.Achiwa(1994)“化學合成的N-酰化的絲氨酸連接的脂A類似物在小鼠體內的生物活性”(Biological Activitiesof Chemically Synthesized N-acylated Serine-linked Lipid AAnalog in Mice)-《國際免疫藥物學雜志》(Int.J.Immunopharmac.)，16(8)659-665。Shimizu，T.，Iida，K.，Iwamoto，Y.，Yanagihara，Y.，Ryoyama，K.，Asahara，T.，Ikeda，K.和K.Achiwa(1995)“合成的脂A類似物連接的N-酰化的絲氨酸的生物活性和抗腫瘤作用”(BiologicalActivities and Antitumor Effects of Synthetic Lipid A AnalogsLinked N-Acylated Serine)-《國際免疫藥物學雜志》(Int.J.Immunopharmac.)17(5)425-431。
權利要求
1.一種具有下列結構的免疫效應物化合物 其中X選自由直立或平伏位上的O和S組成的組；Y選自由O和NH組成的組；n、m、p和q是0-6的整數；R1、R2和R3相同或不同且是帶有1-約20個碳原子的正構脂肪酰基殘基且其中R1、R2和R3之一可選是氫；R4和R5相同或不同且選自H和甲基組成的組；R6和R7相同或不同且選自H、羥基、烷氧基、膦酰基、膦酰氧基、磺基、磺基氧基、氨基、巰基、氰基、硝基、甲酰基和羧基及其酯類和酰胺類組成的組；且R8和R9相同或不同且選自膦酰基和H組成的組，且R8和R9中至少一個是膦酰基。
2.權利要求1所述的化合物，其中R6是羧基。
3.權利要求2所述的化合物，其中X是O；Y是O；n、m、p和q是0；R1、R2和R3是帶有10個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；且R5與具有S構型的立體化學中心連接。
4.權利要求2所述的化合物，其中X是O；Y是O；n、m、p和q為0；R1、R2和R3是帶有12個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有S構型的立體化學中心連接。
5.權利要求2所述的化合物，其中X是O；Y是O；n、m、p和q為0；R1、R2和R3是帶有10個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有R構型的立體化學中心連接。
6.權利要求2所述的化合物，其中X是O；Y是O；n、m、p和q為0；R1、R2和R3是帶有8個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有S構型的立體化學中心連接。
7.權利要求1所述的化合物，其中R6是H。
8.權利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；n是2；m、p和q為0；R1、R2和R3是帶有14個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接。
9.權利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；n是1；m和p為0；q為1；R1、R2和R3是帶有10個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4和R5是H；R7是羧基；R8是膦酰基；R9是H；且R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接。
10.權利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n、p和q為0；R1、R2和R3是帶有14個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；且R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接。
11.權利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n、p和q為0；R1、R2和R3是帶有10個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；且R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接。
12.權利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、p和q為0；n是1；R1、R2和R3是帶有14個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；且R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接。
13.權利要求1所述的化合物，其中R6是羥基。
14.權利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q為0；p是1；R1、R2和R3是帶有12個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4和R5是H；R7是H；R8是膦酰基；且R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有S構型的立體化學中心連接。
15.權利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m和q為0；n和p為1；R1、R2和R3是帶有10個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有S構型的立體化學中心連接。
16.權利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q為0；p是2；R1、R2和R3是帶有10個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有S構型的立體化學中心連接。
17.權利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q為0；p是1；R1、R2和R3是帶有14個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有R構型的立體化學中心連接。
18.權利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q為0；p是1；R1、R2和R3是帶有14個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有S構型的立體化學中心連接。
19.權利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q為0；p是1；R1、R2和R3是帶有11個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有S構型的立體化學中心連接。
20.權利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q為0；p是1；R1、R2和R3是帶有10個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有S構型的立體化學中心連接。
21.權利要求1所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n、p和q為0；R1、R2和R3是帶有10個碳原子的正構脂肪酰基殘基；R4和R5是H；R6是氨基羰基；R7是H；R8是膦酰基；且R9是H；R1、R2和R3各自與具有R構型的立體化學中心連接；而R5與具有S構型的立體化學中心連接。
22.權利要求1所述的化合物，其中R1是氫。
23.權利要求1所述的化合物，其中R2是氫。
24.權利要求1所述的化合物，其中R3是氫。
25.一種用于提高哺乳動物免疫反應的方法，該方法包括對所述的哺乳動物給予有效量的權利要求1的化合物的步驟。
26.一種包括權利要求1的化合物、抗原和合適的載體的疫苗組合物。
27.一種包括權利要求1的化合物和藥物上可接受的載體的藥物組合物。
28.權利要求27所述的組合物，其中所述的藥物上可接受的載體是一種含水組合物，它包括水和一種或多種表面活性劑，該表面活性劑選自糖脫氧膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、鞘磷脂、鞘氨醇、磷脂酰膽堿、1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、L-α-磷脂酰乙醇胺和1，2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-膽堿磷酸或其混合物組成的組。
29.權利要求28所述的組合物，其中所述的一種或多種表面活性劑是1，2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-膽堿磷酸。
30.權利要求28所述的組合物，其中所述化合物與表面活性劑的摩爾比約為10∶1-約1∶25。
31.權利要求28所述的組合物，其中所述化合物與表面活性劑的摩爾比約為4∶1-約1∶9。
32.權利要求27所述的組合物，其中所述的載體是穩定的乳劑，它包括可代謝的油、一種或多種表面活性劑、抗氧化劑和使該乳劑等滲的成分。
33.權利要求32所述的組合物，其中所述的穩定的乳劑包括1-10％v/v角鯊烯、0.9％w/v PLURONIC-F68嵌段共聚物、1.9％w/v卵磷脂酰膽堿、1.75％v/v甘油和0.05％w/vα生育酚。
34.權利要求27所述的組合物，其中所述的載體是包括氫氧化鋁、氫氧化鈣、磷酸鈣或酪氨酸吸附物的混懸液。
35.權利要求27所述的組合物，其中所述的載體是包括三乙胺或三乙醇胺的水溶液或含水的膠束分散體。
36.權利要求27所述的組合物，其中所述的載體包括微球體或微粒且權利要求1所述的化合物位于該微球體或微粒基質內或被吸附在其上。
全文摘要
本發明描述并要求保護屬于佐劑和免疫效應物的氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGP)化合物。這些化合物在含有氨基烷基(糖苷配基)基團的糖苷鍵上帶有2－脫氧－2－氨基葡萄糖。化合物在氨基葡糖苷環上的4或6位碳上被磷酸化且包括3個3－烷酰氧基烷酰基殘基。這些化合物可使免疫動物體內的抗體產生增加并刺激細胞因子產生和激活巨噬細胞。本發明還公開了這些化合物作為佐劑和免疫效應物的使用方法。
文檔編號A61K31/7028GK1409720SQ00816859
公開日2003年4月9日 申請日期2000年11月13日 優先權日1999年11月12日
發明者D·A·約翰遜, C·G·索厄爾 申請人:科里克薩有限公司