專利名稱：脫氫表雄酮組合治療方法
發明概述本發明提供了通過增強或消減白細胞介素12和/或白細胞介素10的合成或效率用于恢復白細胞介素12(IL-12)和/或白細胞介素10(IL-10)的正常水平的化合物組合治療法。
在本發明的一個方面，本發明人已經發現如美國專利號4,956,355(Prendergast)公開，當用于與抑制白細胞介素10的合成和/或作用的藥劑一起組合治療時具有其它有益的治療效果的抗病毒藥劑(本文中的通式)。當用于本文所述的篩選方案(篩選IL-10)時可以通過鑒定除了已證實抑制白細胞介素10的藥劑外具有抑制環狀AMP活性能力的化合物可以鑒定抑制白細胞介素10的藥劑。采用各種各樣的化合物，包括下面的化合物-硫酸刀豆氨酸，L-硫酸刀豆氨酸，Heroimycin A(Wako Pure化學有限公司，日本)，染料木因(希格瑪化學公司，圣路易斯，美國)，黑麥酮酸D，異黃素類化合物，細胞激動素，兩親性三萜類或上面這些的類似物和白細胞介素10或它的任何一種肽序列的多克隆或單克隆抗血清合在一起的任何一種或其組合可以抑制白細胞介素10的合成。
抗病毒藥劑是具有通式(1)的17-酮甾類的化合物
其中R是氫原子，R1是化學基團，該基團選自于由氫原子，SO2OM基團(其中M選自由氫原子，鈉原子的基團組成的組)，硫脂基團組成的組
其中，R2和R3可以是相同或不同，他們各選自由1到14個碳原子的直鏈和支鏈烷基的基團，磷脂基團組成的組
其中R2和R3可以相同或不同，它們各自選自由1到14個碳原子的直鏈和支鏈烷基的基團，和葡糖苷酸基團組成的組
其中間斷線代表旋光雙鍵，第5位的氫原子有α-或β-構型，或者該化合物包括兩種構型的混合物。當R1不是氫原子時，該化合物是共軛化合物。
在本發明的另一方面，提供了當使用一個或多個17-甾酮化合物作為抗病毒，抗細菌，抗菌質或抗細胞內寄生蟲藥劑時，增強Th1免疫保護應答的方法，該方法將該藥劑與白細胞介素10(細胞因子抑制因子)的多或單克隆抗血清和/或與任何化合物結合，該化合物可以有效抑制該特異細胞因子白細胞介素10和/或白細胞介素10(細胞因子抑制因子)受體分子封阻試劑的合成或生物功能。
例如，需要抗癌，抗病毒，抗轉移，抗多種藥物抗性癌細胞和/或細菌，非抗性細菌感染治療的病人需要Th1免疫保護應答。
本發明同時涉及在制造藥劑時使用這樣的化合物用于提供任何這樣的治療。
本發明的藥物配方可以局部地或全身地給藥。全身給藥是指導致在血液或離所述活性成分的給藥位點遙遠的位點中出現有效水平的活性成分的任何給藥方式或途徑。
本發明的用于全身給藥的藥物配方可以配制為用于腸道的，非腸胃的或局部的給藥。事實上，所有三種類型的配方可以同時使用以便達到該活性成份的全身給藥。
合適的口服給藥配方包括硬的或軟的明膠膠囊，糖衣藥丸，丸劑，片劑，包括包衣片劑，甘香酒劑，懸浮液，糖漿或吸入劑和它們的控制釋放形式。
除了為口服給藥配制的形式，固體劑量形式包括直腸栓劑。
合適的用于局部給藥的配方包括奶液，凝膠，凍膠，膠漿，糊劑和軟膏。為了達到全身地給藥，透皮給藥的這些化合物也可以配制為例如，透皮膏藥的形式。
合適的可注射溶液包括靜脈內，皮下和肌肉內注射溶液。這些化合物也可以以輸注溶液的形式或作為鼻吸入劑或噴劑形式給藥。
本發明的藥物配方可以以含有10-1000毫克的活性成分的單位劑量給藥。優選地，每單位劑量含有各50-500毫克的各個活性成分。本發明的各藥物配方至少含有兩個活性成分。
根據本發明的實施方案，組合治療以每天1單位劑量到10單位劑量的速度給藥。按照本發明，治療方法的給藥可以連續至少一天的時期，某些情況下可以對個體終身給藥。
全部引入本文作為參考的美國專利號4,956,355(Prendergast)公開了通式(1)的化合物。
優選地在通式(Ⅰ)的化合物中，R1和R2各是氫。特別優選的化合物是脫氫表雄酮(DHEA)，其中R和R1各是氫并存在雙鍵。
在本發明的另一實施方案中，該化合物是表雄酮，其中R和R1各是氫并存在雙鍵。這一5-位不飽和的甾類同時也可以作為抗病毒藥劑制備，其中R位置由下面任一鹵素(溴，氯，氟，碘)占據。
在本發明的另一實施方案中，該化合物是16α-溴表雄酮，其中R是溴，R1是H并且存在雙鍵。仍然在另一實施方案中，該化合物是通式1的物質，其中R是溴，R1是H，但不存在雙鍵(即，通式1顯示的點線處是單鍵)。
其它優選的化合物是硫酸脫氫表雄酮。其中R是H,R1是SO2-OM，并且M如本文前面定義，和存在雙鍵，以及5β-雄甾烯-3β-醇-17酮。
可選擇的方法，該化合物選自硫酸酯，磷脂或葡糖苷酸脫氫表雄酮，其中R是H,R1如本文上面定義是硫脂，磷脂，或葡糖苷酸基團并存在雙鍵。特別是，當R1不是氫，該化合物是DHEA共軛物，如己基硫酸酯，十二烷基硫酸酯，十八烷基硫酸酯，十八酰基乙二醇硫酸酯，O-雙十六烷基甘油基硫酸酯，十六烷基磺酸酯，雙十八酰基甘油磷酸酯，O-十六烷基甘油磷酸酯。在休斯頓的研究在HIV-病人中使用DHEA治療的實驗證據已經證明在四星期的DHEA單一治療后如抗體ELISA方法測量，IL-12水平上升，天然殺傷細胞水平與γ干擾素的合成和存在一起增加，通過HIV PCR(RNA)測量和定量培養技術測量的HIV病毒負荷顯示超過一個對數以上的減少。但是，當病毒負荷水平相當大地減少時，不發生Th1免疫改良。事實上，由于利用DHEA的單一治療產生的白細胞介素12水平的增高，白細胞介素10的水平增加，這引起了T4(輔助物)細胞數目隨后下降和Th1的消失(緩發型超敏感應答)。通過DHEA單一治療如病人資料證實的病人中的皮膚反應減量調節。與前面的一些認識相反，皮膚反應只能通過除去在DHEA單一治療中升高的白細胞介素10而恢復。在舊金山的研究(體內)下面是在患有HIV疾病的病人中的口服DHEA(脫氫表雄酮)的耐受性和藥學動力學的開放標記自動調整劑量試驗中使用DHEA作為單一治療的概要。在DHEA試驗的第一期(早期癥狀的HIV疾病和200到500個CD4+淋巴細胞/微升)中，對照，分配安慰劑的病人中的絕對CD4數目以每月5個細胞的中數下降。相反，DHEA試驗第一期中研究的最低劑量組中的病人(預期它們的免疫系統將不會比其它試驗中安慰劑治療的病人下降得更快)具有每月31個細胞的CD4+中數下降。利用結合治療進行體內試驗為了抵抗這一DHEA單一治療的Th1抑制性免疫副作用，不得不將這一抗病毒甾類與一種藥劑組合使用以便抑制或中斷白細胞介素10的合成和/或作用。這一組合治療是使用所述的抗病毒藥劑(通式1的化合物)的優選實施方案，其中抗病毒藥劑被允許產生Th1應答。抵消抗病毒治療的Th1抑制性白細胞介素10免疫副作用效果的組合治療的成分可以是白細胞介素10的原始的多克隆或單克隆抗血清和/或抑制或中斷不需要的白細胞介素10的合成或效果的化合物。在全部引入本文作為參考的美國專利號5,292,725(Prendergast)中公開了抑制白細胞介素10的代表性化合物，它們可以用于組合治療以便抵抗抗病毒單一治療的Th1抑制免疫副作用。
相對于單一治療，當對HIV+病人進行組合治療給藥時，每個患者血液中的病毒顆粒的去除增加了3的對數值，同時增強80％以上的Th1(T4輔助細胞數)。在血清轉換中失去的延緩型超敏感應答同時得到恢復。這一組合治療利用了與抑制白細胞介素10合成和/或白細胞介素10的效果必需的抗血清和/或化合物組合的作為非毒性，非抗性菌株開發抗病毒藥劑的DHEA，允許獲得實質性的治療優勢，這是前面單獨使用DHEA單一治療時不能完成的。免疫系統的正向調節的有益作用和通式1的化合物(美國專利號4,956,355-Prendergast)的抗病毒作用給藥將比HIV治療具有更廣泛的治療用途。討論在DHEA給藥后的細胞因子生產方面允許我們總結前面有關DHEA治療中敘述的治療優勢。我們現在知道DHEA治療對狼瘡病人和其它Th1自體免疫癥狀的治療優勢直接與通過DHEA給藥的病人中獲得內源的白細胞介素10水平的增加有關。通過DHEA給藥增強IL-10水平，骨髓移植的排斥反應得到緩解。醫生的報告病人RD-DOB14/7/1983RD是由我治療的病人。他在異基因骨髓移植之后急性骨髓白血病M3得到緩解。他的主要現行問題是GUT抗寄主移植排斥疾病和嚴重的肺病。RD的一般健康狀況在過去3個月中得到改善。這是他進行治療的結果，現在他從診斷以來第一次擁有良好的健康，他已經能夠全天在學校了。他不再需要鼻胃進食或遭受腹瀉。他的肺功能仍然是30％，但他的鍛煉耐受力明顯地提高了。他不再需要輪椅并能承受輕量鍛煉。因為他沒有進行其它藥物治療方法并服這種藥劑將近3個月，我們不得不認為這種治療在他身體中產生了這些有益的效果。在開始治療以前，每天對他噴霧Ventolin,Atrovent和Pulmicort四次并必要時口服甾類。現在他一天只噴霧兩次。我從未見過他的健康有如此巨大的進步，并且沒有明顯副作用。
在我們的實驗中內源白細胞介素10水平得到升高的病人的狼瘡癥狀得到緩解，而已經給藥DHEA，由于其它細胞因子和免疫因子沒有經歷白細胞介素10的升高的病人，沒有證實癥狀的緩解。所以，我們已經確定導致這些自體免疫癥狀的立即緩解的更直接的手段是以重組的白細胞介素10外源地給藥以便簡化狼瘡和抗寄主移植排斥反應癥狀的緩解。
前面敘述的DHEA潛在的治療優勢的另一方面是增強老年人的免疫系統對疫苗抗原的識別。現在這已經通過分析對DHEA作為疫苗佐劑的治療效率得到的白細胞介素10水平得到鑒定和證實。我們已經鑒定對老年人施用重組的白細胞介素10結合使用或治療以前使用產生增強的佐劑效率的抗原疫苗，該疫苗直接增強抗體應答。而對于DHEA，有機會不產生白細胞介素10水平的升高。DHEA治療的效率真正依賴于得到的代謝血液水平和DHEA與疫苗抗原一起或在其給藥之前對病人給藥的時間安排。重組白細胞介素10的共給藥是在老年人或非常年輕的病人中獲得增強的抗體應答的更直接的手段，并能去除易變的甾類代謝和與DHEA單一治療相關的細胞因子應答。這第一次解釋了為什么DHEA在特異癥狀如狼瘡，MS和HIV的治療中經常產生矛盾的應答，因為真正的治療效率取決于細胞因子分布特征和免疫反應，它們是在給藥甾類和它的類似物的基礎上產生的。所以，作為免疫調節子，DHEA的治療效率是不可預測的，并取決于在DHEA治療過程中或之前病人的甾類代謝和細胞因子分布特征。當第一次給藥甾類時，免疫治療應答與患者有非常大的特異性，并不能可靠地產生一致的治療優勢。只有通過直接使用需要的白細胞介素10細胞因子或通過共給藥白細胞介素10抑制劑和/或它們的特異的抗血清才能獲得需要的免疫治療應答。在組合治療中這樣給藥DHEA將有助于白細胞介素12的增強而沒有白細胞介素10通常的負面效果，而Th1應答是治療效果所需要的。用DHEA和應答DHEA治療和不應答DHEA治療的病人的細胞因子分布的特征的實驗使我發現上升的白細胞介素10是觀察到的負責減輕狼瘡臨床癥狀的治療應答的活性藥劑。其它用DHEA和老年病人的細胞因子分布的實驗使發現白細胞介素10是在產生增強的疫苗應答中起作用的活性藥劑，其中所述病人對疫苗抗原的應答并且增強抗體生產。由于年齡的關系，通常，這一病人特征正常地減少抗原疫苗或免疫應答。重復硬化是Th1自體免疫癥狀，需要白細胞介素10減量調節Th1免疫應答并引起該癥狀的緩解。我們已經發現DHEA治療對這一癥狀有與治療狼瘡同樣的應答，即巨大的可治療病人的可變性。病人的內源白細胞介素10水平明顯上升證明了重復硬化的癥狀的緩解。因此在Lewis大鼠中的重復硬化模型直接吸收重組的白細胞介素10證明了癥狀的緩解。如果在髓磷脂破壞之前以白細胞介素10給藥，這些癥狀完全可以防止。在華盛頓對HIV+血液的體外DHEAIL-12的研究證明DHEA增強白細胞介素12的內源水平的方案由DHEA對HIV特異性細胞介導的免疫應答的恢復通過在存在gp120時，加入DHEA或IL-12刺激一個HIV-1陰性對照(E9B)和三個HIV-1陽性標本(E9C,E9E和E9F)。在這些病例中DHEA引起的刺激相等于或大于IL-12引起的，雖然DHEA引起刺激的濃度隨不同樣品而不同。在余下的血樣中，加入DHEA或IL-12抑制存在gp120時E9A(HIV-1陰性)以及E9D和E9G(HIV-1陽性)增殖。
人IL-12是含有40和35-kD亞單位的二硫鍵連接的雜二聚體細胞因子。編碼這一細胞因子的基因已經被克隆并且已經生產了純化的重組蛋白。最近已經證明對鼠體內給藥鼠白細胞介素12(IL-12)導致細胞毒性天然殺傷細胞(NK)淋巴細胞激活的殺傷細胞的活性增強，胞溶性的T細胞的產生增強，和誘導干擾素γ的分泌。在這一研究中，鼠IL-12抗許多鼠腫瘤的體內活性得到增加。在用IL-12腹膜內治療的鼠中明顯減少了B16F10黑素瘤的實驗性的肺部轉移和皮下生長，導致生存時間的增加。IL-12的治療效率是依賴于劑量的，IL-12在沒有產生嚴重毒性的劑量時有效地治療皮下腫瘤。在確定的皮下Renca腫瘤中在腫瘤外周局部注射IL-12導致這些腫瘤的退化和完全消失。IL-12在NK細胞缺陷的米色鼠或用antiasialo GM1腫瘤剝離NK細胞活性的鼠中是有效的，表明NK細胞不是傳導這一細胞因子的抗腫瘤效應的最初的細胞類型。但是，在裸鼠中IL-12的效力大大減弱，表明T細胞的參與。另外，CD8+而不是CD4+T細胞的剝離明顯減弱IL-12的效力。這些結果證明對于鼠腫瘤，IL-12具有潛在的體內抗腫瘤和抗轉移效果并同時證明CD8+T細胞在介導抗皮下腫瘤的抗腫瘤效應中起關鍵作用。在洛山磯對病人研究在這一專利進行的HIV+病人研究中證明了白細胞介素12參與CD8+細胞的產生。通過以抗人白細胞介素10的多克隆抗體給藥，具有CDE8+細胞群體的病人顯示在基線值以上84％的增加并且HIV病毒負荷減弱到零。由于恢復HIV特異性細胞介導的免疫應答，除去白細胞介素10允許CD8+細胞增加并允許清除HIV病毒。
多克隆抗血清的說明產品說明名稱兔抗人IL-10形式液體濃度2.7毫克/毫升穩定劑 沒有防腐劑 沒有無菌度 過濾滅菌寄主類型兔抗體類型IgG所用抗原重組人IL-10純化方法離子交換層析定量方法Pierce BCA蛋白質測定特異性 人IL-10交叉反應性 用EIA測定的與WHO標準IL-1a,IL-1B,IL-2,IL-3,IL-4,IL-6,IL-7,IL-8,MIP-1a,TNFa和GM-CSF沒有交叉反應儲存4℃短期，-20℃長期材料和藥劑用于證明DHEA增強白細胞介素12合成的能力1．IL-2 ELISA，實驗室可得，最少6個平板2．MTS測試，Promega，最少7個平板3．IL-12 R&D系統，(#219-IL)5fg足夠用于整個實驗4．人IL-2受體的抗體，R&D系統(AB-233-NA)，1毫克凍干，羊人。
5．抗人IL-2的p40鏈的兔多克隆抗體，MA，劍橋遺傳研究所(617-498-8647)6．天然gp120，實驗室可得(50fg/小瓶，約1毫克/毫升)需要5納摩爾/毫升。50fg足夠用于各兩個平板的測試。
7．未受刺激的正常人(HIV-1陰性)PBMC8．5個HIV+L樣，從中得到非應答PBMC，每樣品5毫升9．DHEA(脫氫表雄酮)，希格瑪D4000,1克足夠用于整個實驗
10．溶解DHEA的100％的乙醇11．R10培養基RPM1,10％PBS,50fg/毫升慶大霉素12．96孔平底組織培養級群集培養盤，每血樣2個盤方案1．對每個血樣，分離出PBMCs并對細胞計數2．利用所有病人樣品中得到的細胞。如果存在10×106個或多個細胞，在兩個96孔平板中播種細胞。對于10×106個細胞，達到0.5×105個細胞/孔或2.5×105個細胞/毫升結束。如果更少，只利用一個平板。紀錄每孔實際培養的數目。如果使用兩個平板，一個用于IL-2檢測并將接受人IL-2受體的抗體。另一平板將用于細胞增殖測試并不接受該抗體。如果只使用一個平板，該平板將接受抗體。
3．如果使用一個平板，在20毫升R10中重懸浮細胞。如果使用兩個平板重懸浮于40毫升。每孔200 fL等分試樣。允許過夜穩定。如果自然穩定不可行，將平板包裹在塑料包皮中，并利用溫和離心。
4．制備方案表明特殊培養基將加到孔中。(已知由于IL-2 ELISA需要空白和標準，不是所有生長的重復試樣都用于ELISA)5．每個實驗需要16或32毫升含有5納摩爾/毫升的天然gp120的培養基。FW=120,000。在每16毫升中加入96fL的100fg/毫升的儲液(每毫升培養基加入6fL的100fg/毫升)。
同時每個測試使用12或24毫升的R10培養基注意這是PBMC是否發生反應的關鍵。如果存在gp120和沒有gp120時細胞增殖和產生IL-2，這些細胞是正常反應細胞。如果它們與對方有同樣的增殖和IL-2生產，不管是否加入gp120，細胞是不反應的。只有在非反應細胞中，我們應該看到IL-12和DHEA的效果。
6．在用于IL-12的ELISA的每個樣品的16毫升含有gp120和12毫升R10培養基中，加入2fg/毫升的抗IL-2受體的抗體。
7．DHEA的制備7.1在1毫升純乙醇(100％)中溶解1克DHEA。在37℃水浴溫育。其它乙醇可以加入到3.47毫升。這將得到1M溶液。如果全部3.47毫升對于配成溶液不必要，則對于R10培養基可以有些差別。
7.2對于每個樣品，我們需要下面濃度的DHEA,10-4,10-6,10-10,10-12的培養基。
7.3如果使用第二個平板，每次稀釋制備2毫升培養基(已經含有gp120和步驟6的抗體)和含有另外2毫升含有gp120但沒有抗體的培養基。對于10-8，各需要6毫升。
在每次稀釋中，制備2×1.5毫升的R10培養基，沒有gp120，有或沒有步驟6的抗體。對于10-8，各需要3毫升。
7.4進行稀釋。使用5毫升的試管。
A．將20fL的1M DHEA加入到2毫升的R10培養基=10-2M。
B．將20fL的10-2M DHEA加入到2毫升的步驟4.3培養基中=10-4M。
將15fL的10-2M DHEA加入到1.5毫升的R10中=10-4M。
C．將20fL的10-4M DHEA加入到2毫升的步驟4.3培養基=10-6M。
將15fL的10-4M DHEA加入到1.5毫升的R10=10-6M。
D．將40fL的10-6M DHEA加入到4毫升的步驟4.3培養基=10-8M。
將30fL的10-6M DHEA加入到3毫升的R10=10-8。
E．將20fL的10-8M DHEA加入到2毫升的步驟4.3培養基=10-10M。
將15fL的10-8M DHEA加入到1.5毫升的R10=10-10M。
F．將20fL的10-10M DHEA加入到2毫升的步驟4.3培養基=10-12M。
取15fL的10-12M。
7.5在10-8M DHEA培養基的一半中加入抗人IL-12的抗體。
7.6每個平板中的IL-12培養基A．在2毫升含有和沒有抗IL-2的抗體的gp120培養基中加入10單位/毫升重組的IL-12。
B．在1.5毫升含有和沒有抗IL-2抗體的R10中加入10單位/毫升的重組IL-12。
C．1ED50=1單位。對于該藥劑，文獻中接受了IL-12的ED50。
8．從細胞中吸走培養基，根據本方案，在每孔中加入200fL合適的培養基。在外周孔中放額外的培養基。用塑料包皮包裹平板，放置于有水的盤中。在37℃,5％CO2中溫育。
9．如果這是兩個平板的測試。5天之后在從沒有抗IL-2受體的抗體的平板中吸走培養基。用100fL/孔的R10培養基替代。用4小時溫育進行細胞增殖測試。
10．在利用含有抗IL-2受體的抗體7天后，取100fL/每孔，用于進行IL-2 ELISA。
11．如果只有一個平板用于測試，除去和冰凍每孔中的上清液的余下部分，然后在7天時加入100fL/孔的R10培養基和進行細胞增殖測試。
12．從HIV-血液首先進行PBMC以便看是否所有藥劑如前面預期的用HIV+樣品進行的那樣。
13．在所有HIV+樣品完成后，另一HIV-樣品應該進行測試。
14．編輯和分析數據。
方案概要題目為患有HIV感染，已經發展為對蛋白酶和RT抑制劑有抗性的人特別配制的和作為特異的白細胞介素10的抑制劑的異戊烯5′-單磷酸腺苷結合給藥的DHEA的臨床試驗與異戊烯5′-單磷酸腺苷組合的DHEA本文稱為化合物(D+1)。
適應癥HIV-1感染的治療研究類型I/Ⅱ期臨床試驗研究目的a．確定給藥的化合物(D+1)在患有晚期的HIV疾病的人中的安全性和耐受性。
b．確定化合物(D+1)的給藥的對HIV病毒負荷的作用。與HIV p24抗原一起的血清PCR(RNA)水平(通過酸分離方法)。
c．確定給藥的化合物(D+1)的免疫性和毒性效果。
d．確定給藥的化合物(D+1)的藥學動力學。
包含體標準a．年齡18或更大；b．HIV-1血清陽性；c．在相距72小時到28天分別測量兩個獨立的情況，在進入研究之前一個月內CD4+-T-淋巴細胞計數為50到300細胞/立方毫米；d．下面是基本實驗值血紅蛋白＞9克/dlWBCs＞1500個細胞/微升嗜中性白細胞＞1000個細胞/微升血小板25,000個細胞/微升膽紅素＜2.0毫克/dlAST,ALT，堿性磷酸酶＜5×正常的上限肌酸酐＜1.5毫克/dle．前面抗逆病毒治療的歷史如下f．在以前有單獨利用AZT,ddl,ddC或d4T或與蛋白酶抑制劑組合使用的抗逆病毒治療歷史的病人中，在開始研究時不接受這樣的治療。這些病人在開始研究時必須中斷這些藥劑。
g．有懷孕能力的婦女應用合適的避孕方法(對于有懷孕能力的婦女在開始研究之前一星期內需要進行一個陰性血清懷孕測試，β-HCG)。
h．在開始研究時，高PR HIV RNA效價的培養基。
例外的原則a．在登記的八星期內先用化學治療藥劑治療過；b．活化的，主要的感染，包括確定為AIDS的隨機的感染，或其它威脅生命的醫學危機；c．懷孕或哺乳期；d．以研究者的意見，將使病人處于危險或危及試驗的目的的任何癥狀；e．在開始研究時，接受包括干擾素或藥學劑量的甾類免疫調節治療劑；安全測量每周分析下面的參數直達4星期ⅰ．不利事件的文件提供和評估。
ⅱ．血液學。
ⅲ．臨床化學和尿分析。
ⅳ．化合物(D+1)導致的免疫應答的評估。
ⅴ．隨治療改變的PCR(DNA)和DNA測量的評估。
測量效果病毒負荷的測定包括HIV-p24抗原血癥，和HIV-RNAPCR(無細胞，血清)和細胞HIV-DNA分析。
當從CD4/CD8比例中的基線改變時，測出免疫應答的改善。在白細胞介素10水平對臨床淋巴細胞計數，以WBC中百分數的變化表示，這將證明化合物(D+1)引起病人的免疫系統朝TH-1狀態移動的能力。
由總體重，Karnofsky性能得分，和基底時疾病的信號和癥狀的改變對臨床優點進行評估。
將對新的隨機的感染的緩解和發生進行概括。
研究設計開放標記，每天給藥的劑量為每個病人1200毫克/天。在治療4星期后，總結和評估供給劑量時間表和效率。
研究規模5個病人(總共)-5個病人@1200毫克/天，30天。
測試物品測試藥物化合物(D+1)顆粒大小分布，87％；＜5μm,100％；＜15μm，以每膠囊200毫克的明膠膠囊給藥。每膠囊含有600毫克的DHEA和600毫克的異戊烯5′-單磷酸腺苷。
對照藥物沒有安慰劑沒有在化合物(D+1)給藥之前和以后需要的病人資料。
權利要求
1．增強Th1免疫保護應答的方法，該方法利用一種或多種的17-酮甾類化合物作為抗病毒，抗細菌，抗菌質或抗細胞內寄生蟲藥劑，該方法是將該藥劑與白細胞介素10的多或單克隆的抗血清(細胞因子抑制因子)，或任何能夠有效地抑制這一特異細胞因子白細胞介素10(DHEA單一治療不利地增強了白細胞介素10的合成)的合成和生物學功能的化合物，或與白細胞介素10(細胞因子抑制因子)受體分子封阻試劑一起組合使用。
2．增強Th2免疫應答的方法，該方法利用一種或多種17-酮甾類化合物作為抗病毒，抗細菌或抗細胞內的寄生蟲藥劑，該方法是將該藥劑與抗白細胞介素12的多或單克隆抗血清，或與可以有效地抑制這一特異細胞因子白細胞介素12的合成或生物學功能的任何化合物，或與白細胞介素12受體分子封阻試劑一起組合使用，在Th1激活疾病狀態的過程，DHEA單一治療不利地增強了白細胞介素12的合成。
3．增強Th2免疫應答的方法，該方法利用一種或多種17-酮甾類化合物作為抗病毒，抗細菌或抗細胞內的寄生蟲藥劑，該方法是將該藥劑與抗白細胞介素2的多或單克隆抗血清，或與可以有效地抑制這一特異細胞因子白細胞介素2的合成或生物學功能的任何化合物，或與白細胞介素2受體分子封阻試劑一起組合使用，在Th1激活疾病狀態的過程，DHEA單一治療不利地增強了白細胞介素12的合成。
4．增強Th1免疫應答的方法，該方法利用一種或多種17-酮甾類作為抗病毒，抗細菌，抗菌質或抗寄生蟲藥劑，該方法是將該藥劑與人α-胎兒蛋白或同樣的人細菌，病毒或合成起源的多克隆或單克隆抗血清一起使用。
5．根據權利要求1-4中任何一個所述的方法，其中病人需要Th1免疫保護應答，病人需要抗癌，抗病毒，抗轉移，抗多種藥物抗性癌細胞和/或細菌非抗性細菌感染治療。
6．根據權利要求1所述的方法，其中將多克隆和/或單克隆抗血清用于除去或中和白細胞介素10并特異地抗埃巴二氏病毒開放讀碼框架BCRF1，該框架具有與人細胞因子合成抑制因子(白細胞介素10)同源的氨基酸序列。
7．對病人進行組合治療給藥的方法，該方法是給藥至少一種17-酮甾類和白細胞介素10抑制劑或白細胞介素10受體分子封阻試劑。
8．對病人進行組合治療給藥的方法，該方法是至少給藥一種17-酮甾類與白細胞介素12抑制劑或白細胞介素12受體分子封阻試劑。
9．對病人進行組合治療給藥的方法，該方法是至少給藥一種17-酮甾類與白細胞介素2抑制劑或白細胞介素2受體分子封阻試劑一起給藥。
10．治療或抑制病人的免疫功能障礙的發展的方法，該病人需要這樣的治療，該方法包括以至少一種17-酮甾類與白細胞介素10抑制劑或白細胞介素10受體分子封阻試劑一起給藥進行組合治療。
11．治療或抑制病人的免疫功能障礙的發展的方法，該病人需要這樣的治療，該方法包括以至少一種17-酮甾類與白細胞介素12抑制劑或白細胞介素12受體分子封阻試劑一起給藥進行組合治療。
12．治療或抑制病人的免疫功能障礙的發展的方法，該病人需要這樣的治療，該方法包括以至少一種17-酮甾類與白細胞介素2抑制劑或白細胞介素2受體分子封阻試劑一起給藥進行組合治療。
13．對病人進行給藥的方法，該方法將重組或克隆的白細胞介素10給藥用于治療狼瘡和/或抗寄主移植排斥疾病。
14．對病人進行給藥的方法，該方法在疫苗治療中以重組或克隆的白細胞介素10作為佐劑。
15．對需要所述治療的病人的多種硬化癥進行治療的方法，該方法包括對所述病人以重組或克隆的白細胞介素10給藥。
16．對需要治療的病人的狼瘡或抗寄主移植排斥疾病進行治療的方法，該方法包括對所述病人以重組或克隆的白細胞介素10給藥。
17．根據權利要求1,7或10所述的方法，其中白細胞介素10的合成受到下面化合物的任何一個或組合的抑制-硫酸刀豆氨酸，L-硫酸刀豆氨酸，HeroimycinA，染料木因，黑麥酸D，異黃素類化合物，細胞激動素，兩親性的三萜類，或上面任何一種的類似物。
18．根據權利要求17所述的方法，其中細胞激動素選自具有下面通式的組
其中R1=H,R2=CH3,R3=CH3，和R4=H，或R1=H或CH3S和
和R5=CH3,Cl,OH或單磷酸基團R6=CH3,CH2OH或ClR7=H或Br或R1=H和
和X1,X2各自選自H，甲基，乙基，羥基，鹵素和羧基或
或
或
和
或R8=(CH2)7CH3；和R2=OH和R3=OH，單磷酸，二磷酸或三磷酸基團，或者將R2和R3連接在一起形成3′,5′-環化單磷酸衍生物，或所述化合物的代謝物，所述代謝物是包括下面物質的組N6-(Δ2-異戊烯基)腺苷；6-N-(3-甲基-3-羥丁氨基)嘌呤；腺苷；次黃嘌呤；尿酸；和甲基化黃嘌呤。
19．根據權利要求1-12,17和18中的任何一個所述的方法，其中所述17-酮甾類具有通式
其中R是氫原子，和R1是選自由氫原子，SO2OM基團(其中M選自由氫原子，鈉原子的基團組成的組)，硫酸酯基團組成的組的化學基團
其中R2和R3可以相同或不同，各選自由1-14個碳原子的直鏈和支鏈烷基的基團，磷酸酯基團組成的組
其中R2和R3可以相同或不同，各選自由1-14個碳原子的直鏈和支鏈烷基的基團，和葡糖苷酸基團組成的組
在位置5的原子有α-或β-構型，或該化合物包括兩種構型的混合物。
20．對需要所述治療的病人的病毒感染，細菌感染，菌質感染或寄生蟲感染進行治療的方法，包括對所述病人給藥(1)一種或多種17-酮甾類化合物，和(2)選自由抗白細胞介素10的多或單克隆抗血清，可以有效抑制白細胞介素10的合成或生物功能的化合物，和白細胞介素10受體分子封阻試劑組成的組。給藥的各成份的量是提供所述治療有效的量。
21．根據權利要求20所述的方法，其中所述病人患有HIV感染。
22．對需要治療的病人的癌，病毒感染，轉移，多種藥物抗性癌和/或細菌，非抗性細菌進行治療的方法，包括對所述病人給藥(1)一種或多種17-酮甾類化合物，和(2)一個或多個選自由白細胞介素10的多或單克隆抗血清，可以有效抑制白細胞介素10的合成或生物學功能的化合物，和白細胞介素10受體分子封阻試劑組成的組。各自給藥的量是提供所述治療有效的量。
23．對需要治療的病人的狼瘡或重復硬化癥和/或抑制排斥寄主疾病進行治療的方法，包括對病人以重組或克隆的白細胞介素10給藥。
24．一種組合物，包括(1)一種或多種17-酮甾類化合物，和(2)一種或多種選自由白細胞介素10的多或單克隆抗血清的，可以有效白細胞介素10的合成或生物學功能的化合物，和白細胞介素10受體分子封阻試劑組成的組。
25．試劑盒，包括(1)至少一單位劑量的17-酮甾類化合物，和(2)至少一單位劑量的選自由白細胞介素10的多或單克隆抗血清，可以有效抑制白細胞介素10的合成或生物學功能的化合物，和白細胞介素10受體分子封阻試劑組成的組的一個或多個。
26．對需要治療的病人的狼瘡或多種硬化和/或移植排斥寄主疾病進行治療的方法，該方法包括對所述病人以起源于存在于白細胞介素10分子或模仿白細胞介素10的免疫抑制作用的序列中的序列的重組或克隆序列給藥。
27．對需要治療的病人的癌，病毒感染，轉移，多種藥物抗性癌和/或細菌，非抗性細菌進行治療的方法，包括對所述病人給予組合藥物的給藥，包括(1)重組或克隆白細胞介素12，和(2)一個或多個選自由白細胞介素10的多或單克隆的抗血清，可以有效抑制白細胞介素10的合成或生物學功能的化合物，白細胞介素10受體分子封阻試劑組成的組，各成份的量是提供所述的有效治療的量。
28．根據權利要求1,7或10所述的方法，其中白細胞介素10的合成受到下面化合物的任何一種或組合的抑制-硫酸刀豆氨酸，L-硫酸刀豆氨酸，Herbimycin A，染料木因，黑麥酸D，異黃素類化合物，兩親性三萜類，或上面任何一種的類似物。
29．根據權利要求1,7或10所述的方法，其中白細胞介素10的合成受到至少一種細胞激動素的抑制，附帶條件是所述的細胞激動素不是選自具有下面通式的組
其中R1=H,R2=CH3,R3=CH3和R4=H，或R1=H或CH3S，和
和R5=CH3,Cl,OH或單磷酸基團R6=CH3,CH2OH或ClR7=H或Br或R1=H和
和X1和X2各自選自H，甲基，乙基，羥基，鹵素，和羧基或
或
或
和
或R8=(CH2)7CH3；和R2=OH和R3=OH，單磷酸，二磷酸，三磷酸基團或將R2和R3連接在一起形成環化3′,5′環化單磷酸衍生物，或所述化合物的代謝物，所述代謝物是由N6-(Δ2-異戊烯基)腺苷6-N-(3-甲基-3-羥丁氨基)嘌呤；腺苷；次黃嘌呤；尿酸；和甲基化黃嘌呤組成的組。
30．對需要治療的病人的狼瘡或移植排斥寄主疾病進行治療方法，包括對所述病人給藥(1)一種或多種17-酮甾類化合物，(2)選自由白細胞介素12的多或單克隆抗血清，可以有效抑制白細胞介素12的合成或生物學功能的化合物，和白細胞介素12受體分子封阻試劑組成的組的一個或多個。各自的劑量為提供所述的治療的有效量
31．對需要治療的病人進行狼瘡或移植排斥寄主疾病的治療方法，包括對所述病人給藥(1)一種或多種17-酮甾類化合物，(2)選自由白細胞介素2的多或單克隆抗血清，可以有效抑制白細胞介素2的合成或生物學功能的化合物，和白細胞介素2受體分子封阻試劑組成的組的一個或多個。各自的劑量為提供所述的治療的有效量
32．對需要治療的病人的細菌感染，菌質感染或寄生蟲感染進行治療方法，包括對所述病人給藥(1)一種或多種的17-酮甾類化合物，(2)選自由白細胞介素12的多或單克隆抗血清，可以有效抑制白細胞介素12的合成或生物學功能的化合物，和白細胞介素12受體分子封阻試劑組成的組的一個或多個。各自的劑量為提供所述的治療的有效量。
33．對需要治療的病人的細菌感染，菌質感染或寄生蟲感染進行治療方法，包括對所述病人給藥(1)一種或多種17-酮甾類化合物，(2)選自由白細胞介素2的多或單克隆抗血清，可以有效抑制白細胞介素2的合成或生物學功能的化合物，和白細胞介素2受體分子封阻試劑組成的組的一個或多個。有關劑量為提供所述的治療的有效量。
34．在需要治療的病人中防止或減弱細菌易位的方法，包括對所述病人給藥(1)一種或多個17-酮甾類化合物，和(2)選自包括白細胞介素2的多或單克隆抗血清，可以有效抑制白細胞介素2的合成或生物學功能的化合物，和白細胞介素2受體分子封阻試劑的組的一個或多個。各自的劑量為提供所述的治療的有效量。
35．一種組成，包括(1)一種或多個17酮甾類化合物，和(2)選自包括白細胞介素12的多或單克隆抗血清的組，可以有效抑制白細胞介素12的合成或生物功能的化合物，和白細胞介素12受體分子封阻試劑的一個或多個。
36．藥劑盒，包括(1)至少一單位劑量的17酮甾類化合物，和(2)至少一單位劑量的選自由白細胞介素12的多或單克隆抗血清，可以抑制白細胞介素12的合成和生物學功能的化合物，白細胞介素12的受體分子封阻試劑組成的組的一個或多個。
37．組合物，包括(1)一種或多個17酮甾類化合物，和(2)選自由白細胞介素2的多或單克隆抗血清，可以有效抑制白細胞介素2的合成或生物功能的化合物，和白細胞介素2受體分子封阻試劑組成的組的一個或多個。
38．藥劑盒，包括(1)至少一單位劑量的17酮甾類化合物，和(2)至少一單位劑量的選自由白細胞介素2的多或單克隆抗血清，可以抑制白細胞介素2的合成和生物學功能的化合物，白細胞介素2的受體分子封阻試劑組成的組的一個或多個。
39．根據權利要求1所述的方法，其中所述的白細胞介素抑制劑選自1)NG-單甲基-精氨酸(L-NMMA)，和1)硝基氫氰酸鈉(SNP)
全文摘要
提供了藥劑,生產這些藥劑的方法,和藥劑盒,包括(1)17－酮甾類化合物,和(2)抗白細胞介素10,白細胞介素2或白細胞介素12的多或單克隆抗血清,或包括有效抑制白細胞介素10,白細胞介素12,或白細胞介素2的合成或生物學功能的任何化合物,或包含白細胞介素10,白細胞介素12,或白細胞介素2的受體分子封阻試劑或含有抗人α－胎兒蛋白的多或單克隆抗血清。提供了包括這樣的化合物或化合物的組合的治療方法,包括當使用17－酮甾類化合物作為抗病毒,抗病毒,抗菌質或抗細胞內的寄生蟲藥劑時增強Th
文檔編號A61P31/04GK1216470SQ97193912
公開日1999年5月12日 申請日期1997年4月17日 優先權日1996年4月17日
發明者帕特里克·T·普倫德加斯特 申請人:帕特里克·T·普倫德加斯特