專(zhuān)利名稱(chēng)：注射用復(fù)方苦參制劑的制備方法及其醫(yī)療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種自苦參、白土苓制備的注射用制劑及其在用于治療癌癥，特別是對(duì)癌性疼痛、癌性出血、改善腫瘤患者生存質(zhì)量中和肝炎治療中的醫(yī)療用途，屬于藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
復(fù)方苦參注射液由苦參和白土苓組成，具有抗腫瘤，止痛，止血等作用，由于其在腫瘤的臨床治療上療效確切，近年來(lái)的銷(xiāo)售額逐年攀升。
復(fù)方苦參注射液是我公司的拳頭產(chǎn)品，于1997年7月16日申請(qǐng)了專(zhuān)利，專(zhuān)利號(hào)ZL97112532.5(公告號(hào)CN 1062181C)。鑒于本產(chǎn)品實(shí)際生產(chǎn)中出現(xiàn)的一些問(wèn)題，我們有針對(duì)性地對(duì)原生產(chǎn)工藝進(jìn)行了系統(tǒng)的創(chuàng)新性提高，追加工藝專(zhuān)利申請(qǐng)，并就藥物的適應(yīng)癥進(jìn)行了擴(kuò)大保護(hù)。
目前，復(fù)方苦參類(lèi)似名詞的專(zhuān)利有3個(gè)(1)納米復(fù)方苦參制劑藥物及其制備方法，公告號(hào)為CN 1368220A。它公開(kāi)了一種納米復(fù)方苦參制劑藥物，是以納米苦參、納米白土苓為原料，按比例配制，制成新的藥物制劑，其顆粒細(xì)度達(dá)1200-1500目，粒徑為0.1-200nm，其中絕大部分粒徑小于100nm。采用微波萃取、減壓濃縮、超音速射流技術(shù)噴霧干燥等步驟制備。結(jié)論對(duì)復(fù)方苦參采用納米處理，與我們申請(qǐng)專(zhuān)利的創(chuàng)新內(nèi)容無(wú)關(guān)。(2)獸用復(fù)方苦參注射液，公告號(hào)CN 1048406C。它公開(kāi)了一種獸用復(fù)方苦參注射液，處方由黃芩300-1200克、黃柏200-800克、苦參300-1200克制成1000ml注射液。結(jié)論該專(zhuān)利與我們所申請(qǐng)的復(fù)方苦參的藥物組成不同，不妨礙我們所申請(qǐng)專(zhuān)利的創(chuàng)新性。(3)復(fù)方苦參潔陰沖洗液，公告號(hào)CN 1403117A。它公開(kāi)了一種復(fù)方苦參潔陰沖洗液，其處方組成為苦參、蛇床子、大黃、蒼術(shù)、巴戟、土茯苓、白蘚皮、黃柏、薏苡仁、地膚子、皂刺、紅花、枯礬；適應(yīng)癥為包括老年性陰道炎、滴蟲(chóng)性陰道炎等婦女生殖系統(tǒng)疾病。結(jié)論該專(zhuān)利與我們申請(qǐng)的復(fù)方苦參的藥物組成不同。
苦參是臨床常用中藥，為豆科槐屬植物苦參(Sophora flavscens Alt.)的干燥根，具有清熱、除濕、殺蟲(chóng)、利尿等作用；我國(guó)廣泛分布，資源豐富，苦參含有生物堿和黃酮類(lèi)成分，其生物堿成份主要為槐果堿(Sophocarpine)，苦參堿(matrine)，槐定堿(sophoridine)，氧化苦參堿(Oxymatrine)，氧化槐果堿(Oxysophocarpine)。藥理實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用證明，苦參及其制劑具有廣泛的藥理作用。含苦參及其化學(xué)處方的有關(guān)專(zhuān)利共67個(gè)，其中單味苦參的專(zhuān)利9個(gè)，苦參化學(xué)成分(苦參堿、氧化苦參堿等)的專(zhuān)利55個(gè)，含苦參的中藥復(fù)方專(zhuān)利11個(gè)(包括化合物的復(fù)方)。這些專(zhuān)利主要集中于苦參堿和氧化苦參堿的合成、提取工藝、制劑及其藥理作用上。
白土苓為百合科植物肖菝葜(Heterosmilax japonica Kunth.)或短柱肖菝葜(Heterosmilaxyunnanensis Gagnep.)的干燥根莖，具有除濕，解毒，通利關(guān)節(jié)的作用，用于濕熱淋濁，帶下，癰腫，瘰癘，疥癬，梅毒及汞中毒所致的肢體拘攣，筋骨疼痛等癥；主要分布于廣西、貴州、湖南等地區(qū)，是民間習(xí)用藥材，常用于代替土茯苓，但是在原植物上與土茯苓(為百合科植物光葉菝葜Smilax glabra Roxb.的干燥根莖)具有質(zhì)的區(qū)別。其化學(xué)成分研究很少，最近有人對(duì)白土苓進(jìn)行了化學(xué)成分的研究，發(fā)現(xiàn)它含有人參皂苷和大黃蒽醌等成分。但是，經(jīng)我們實(shí)際檢測(cè)證明該藥材中不含這些成分，推測(cè)研究者在原植物種的鑒定上有誤；我們的研究證實(shí)白土苓的主要成分為皂苷(總皂苷約8～9％)，化合物的結(jié)構(gòu)在確定中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種注射用復(fù)方苦參制劑的方法及其醫(yī)療用途，以增加臨床藥用劑型；同時(shí)，克服現(xiàn)有注射劑的法定臨床使用劑量不能滿足實(shí)際臨床應(yīng)用需要和注射液制劑不穩(wěn)定的缺點(diǎn)(氧化苦參堿在放置過(guò)程中含量降低)，達(dá)到提高臨床療效的目的。本發(fā)明的另一目的是提供復(fù)方苦參制劑新的醫(yī)療用途，以滿足患者的需要。
具體實(shí)施例方式
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案予以實(shí)施。
1、注射用復(fù)方苦參中間體的制備注射用復(fù)方苦參中間體制備方法的主要技術(shù)特征在于(1)發(fā)明內(nèi)容中的注射用復(fù)方苦參制劑的原料為苦參和白土苓；其中苦參系豆科槐屬植物苦參(Sophora flavscens Alt.)的干燥根；白土苓系百合科植物肖菝葜(Heterosmilaxjaponica Kunth.)或短柱肖菝葜(Heterosmilax yunnanensis Gagnep.)的干燥根莖；苦參和白土苓的比例為5∶2～2∶1，優(yōu)選7∶3。
(2)用苦參和白土苓飲片或粗粉利用提取溶劑進(jìn)行分別單獨(dú)提取后合并或混合提取，得到提取液。所指的提取溶劑為水、0.1％～60％稀酸、1％～80％的醇，優(yōu)選稀酸和水；優(yōu)選先稀酸滲漉后，再以水煎煮提取；稀酸滲漉采用藥學(xué)可使用的有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸，其濃度0.1％～60％，在5℃～40℃的條件下浸泡2～60小時(shí)后滲漉；其中滲漉所用的酸優(yōu)選5％～50％的醋酸或鹽酸，滲漉溫度優(yōu)選10℃～30℃，滲漉的浸泡時(shí)間優(yōu)選8～48小時(shí)；所指的回流提取條件是以0％～80％的水-醇溶劑進(jìn)行回流提取1～4次，優(yōu)選0％～60％的水醇溶劑，回流提取2次；所指的醇為1～5個(gè)碳的脂肪醇，優(yōu)選甲醇和乙醇。
(3)上述所得到的提取液在≤100℃的溫度下的常壓濃縮或減壓濃縮，得到濃縮物；優(yōu)選30～80℃的減壓濃縮。
(4)濃縮物經(jīng)過(guò)多次的醇沉-冷藏-過(guò)濾-回收溶劑的過(guò)程，得到醇溶物；所指的醇沉-冷藏-過(guò)濾-回收溶劑過(guò)程，其醇沉條件是利用高濃度的醇加入到藥物濃縮液中。第一次醇沉?xí)r，藥液中的醇濃度達(dá)到30％～80％，優(yōu)選50％～70％，第二次醇沉?xí)r，藥液中的醇濃度達(dá)到50％～90％，優(yōu)選70％～85％，第三次醇沉?xí)r，藥液中的醇濃度達(dá)到80％～95％，優(yōu)選85％～92％，醇沉次數(shù)優(yōu)選為三次；醇沉液的冷藏條件為-20℃～10℃，4～48小時(shí)，優(yōu)選-16℃～8℃，8～36小時(shí)；過(guò)濾條件為板框過(guò)濾或離心過(guò)濾或膜過(guò)濾；過(guò)濾后的藥液在減壓條件下，回收溶劑，回收溫度30℃～90℃，優(yōu)選40℃～75℃；每次濃縮浸膏的相對(duì)密度為1.02～1.40(60℃)，優(yōu)選1.05～1.35(60℃)。
(5)醇溶物以一定比例的注射用水返溶、冷藏、過(guò)濾，得到濾液；所指的水返溶條件為加入1∶1～1∶10(藥液∶水液，W/V)，優(yōu)選1∶1.5～1∶6(藥液∶水液，W/V)；水返溶液冷藏的條件為放置在10℃～-20℃過(guò)夜，優(yōu)選5℃～-10℃；冷藏液過(guò)濾條件是離心過(guò)濾或0.45μm濾膜過(guò)濾；濾液的濃縮條件為在45℃～95℃的減壓濃縮；藥物中間體的密度為1.10～1.40(60℃)，優(yōu)選1.15～1.35(60℃)。放置中間體冷庫(kù)的條件為10℃～-20℃，優(yōu)選5℃～-10℃。
(6)濾液濃縮成一定密度，即制備得到藥物中間體；測(cè)定中間體的藥物含量和指紋圖譜，放置于冷庫(kù)中。所指藥物中間體的含量為氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總和不低于5mg/ml，優(yōu)選不低于15mg/ml；所指中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰，并由苦參堿、槐果堿等組成。
2、不同規(guī)格的復(fù)方苦參注射液的制備不同規(guī)格的復(fù)方苦參注射液的制備方法的特征在于(1)利用上述發(fā)明內(nèi)容1制備的藥物中間體，加入注射用溶劑，經(jīng)活性炭脫色、過(guò)濾；所指的注射用溶劑包括注射用水或生理鹽水或等滲葡萄糖液，加入0.1％～10％注射用活性炭在40℃～100℃加熱5～30分鐘脫色，優(yōu)選1％～8％注射用活性炭在60℃～100℃加熱5～20分鐘；脫色液的過(guò)濾條件是0.22μm超微濾膜過(guò)濾。
(2)經(jīng)過(guò)2次以上的調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程，得到“注射用藥液”。所指的經(jīng)過(guò)2次以上的調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程，為先調(diào)pH至7.0～9.0，優(yōu)選pH7.5～8.8，冷藏，過(guò)濾；再調(diào)pH至3.0～6.5，優(yōu)選pH4.0～5.5，冷藏，過(guò)濾；再調(diào)pH至4.0～7.5，優(yōu)選pH5.0～7.0，冷藏，過(guò)濾；再調(diào)pH至7.5～9.5，優(yōu)選pH7.5～9.0，冷藏，過(guò)濾；所指的冷藏條件為放置在10℃～-20℃過(guò)夜，優(yōu)選5℃～-10℃；所指的過(guò)濾條件是0.10～0.45μm超微濾膜過(guò)濾，優(yōu)選0.22μm。
(3)“注射用藥液”測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜；所指的含量系注射液中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總和不低于2mg/ml，優(yōu)選不低于10mg/ml。所指的指紋圖譜是以氧化苦參堿為主，包含苦參堿、槐果堿等。
(4)注射用藥液經(jīng)精濾；所指的精濾系經(jīng)0.10～0.22μm過(guò)濾。
(5)灌裝、封口、滅菌，即得不同規(guī)格的注射液；所指的規(guī)格為1～500ml，優(yōu)選2ml，5ml，10ml，12ml，20ml，25ml，50ml，100ml，250ml和500ml。
3、復(fù)方苦參凍干粉的制備發(fā)明復(fù)方苦參凍干粉的主要特征在于由藥物中間體或“注射用藥液”與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制，灌封，冷干。
方法1利用上述發(fā)明內(nèi)容1制備的藥物中間體與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制，經(jīng)活性炭脫色、過(guò)濾，經(jīng)過(guò)2次以上的調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程，得到注射用藥液，測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜；再經(jīng)精濾后，灌封于西林瓶中，放入冷凍機(jī)中，按照冷凍曲線冷凍干燥，取出得到的復(fù)方苦參凍干粉，鋁蓋壓口。
(1)藥物中間體與骨架材料的配比范圍為1∶0.5～1∶3(中間體骨架材料，W/W)的配比進(jìn)行配制，優(yōu)選1∶1。
(2)骨架材料是甘露醇或氯化鈉或葡萄糖。
(3)上述所指的各個(gè)制備過(guò)程的技術(shù)要求同發(fā)明內(nèi)容2中的(1)～(4)。
方法2利用上述發(fā)明內(nèi)容2制備的“注射用藥液”與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制，經(jīng)精濾后，測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜；灌封于西林瓶中，放入冷凍機(jī)中，按照冷凍曲線冷凍干燥，取出得到的復(fù)方苦參凍干粉，鋁蓋壓口。
(1)“注射用藥液”與骨架材料的配比范圍為1∶0.5～1∶3(注射用藥液的固形物∶骨架材料，W/W)配比進(jìn)行配制，優(yōu)選1∶1和1∶1.5。
(2)骨架材料是甘露醇或氯化鈉或葡萄糖。
(3)所指的精濾系在100級(jí)的GMP車(chē)間內(nèi)用0.10～0.45μm超微濾膜過(guò)濾，優(yōu)選0.22μm。
方法3利用上述發(fā)明內(nèi)容2制備的“注射用藥液”，灌封于西林瓶中，放入冷凍機(jī)中，按照冷凍曲線冷凍干燥，得到復(fù)方苦參凍干粉。
方法1～3中所指共性技術(shù)特征(1)西林瓶灌裝是每支西林瓶灌裝2ml或5ml或10ml或15ml或20ml，優(yōu)選5ml和10ml；(2)所指的冷凍干燥包括預(yù)凍和升華階段；預(yù)凍階段預(yù)凍溫度-10℃～-60℃，優(yōu)選-20℃～-50℃；升華階段使真空度達(dá)到30Pa以下，按照每小時(shí)0.5～2℃的升溫速度給產(chǎn)品升溫，產(chǎn)品溫度達(dá)到-5℃～-10℃時(shí)，以每小時(shí)1～5℃的速度升溫，直至產(chǎn)品的溫度升到21℃～31℃，繼續(xù)保持2～8小時(shí)，使制品的溫度與擱板溫度重合(相差1℃以內(nèi))，在100級(jí)的GMP車(chē)間內(nèi)放入無(wú)菌過(guò)濾氣體，使箱門(mén)能夠打開(kāi)，開(kāi)箱，迅速封口，即得復(fù)方苦參凍干粉針。
(3)所指凍干粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01～0.3g/支，優(yōu)選0.03～0.2g/支。
4、注射用復(fù)方苦參粉針的制備發(fā)明注射用復(fù)方苦參粉針的主要特征在于由“注射用藥液”直接噴霧或與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制后噴霧干燥，分裝制備得到。
方法1利用發(fā)明內(nèi)容2制備的“注射用藥液”調(diào)節(jié)到一定的相對(duì)密度后進(jìn)行噴霧干燥，經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺(tái)使?jié)駳夂透煞鄯蛛x，干粉收于收集器中，在無(wú)菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中，封口，即得到注射用復(fù)方苦參粉針。其主要技術(shù)參數(shù)(1)所指的相對(duì)密度為1.01～1.30，優(yōu)選1.05～1.15。
(2)所指的噴霧干燥條件為噴氣壓力調(diào)節(jié)到2～5kg/cm2，抽力4～8kg/cm2，進(jìn)口溫度150～300℃，出口溫度50～100℃。
(3)所指注射用復(fù)方苦參粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01～0.3g/支，優(yōu)選0.03～0.2g/支。
方法2利用發(fā)明內(nèi)容2制備的“注射用藥液”與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制，經(jīng)精濾后，測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜；噴霧干燥，經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺(tái)使?jié)駳夂透煞鄯蛛x，干粉收于收集器中，在無(wú)菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中，封口，即得到注射用復(fù)方苦參粉針。
(1)所指的得到注射用藥液與骨架材料按1∶0.5～1∶3(注射用藥液的固形物骨架材料，W/W)配比進(jìn)行配制，優(yōu)選1∶1；骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖。
(2)所指的精濾是在100級(jí)的GMP車(chē)間內(nèi)用0.10～0.45μm超微濾膜過(guò)濾，優(yōu)選0.22μm。
(3)所指注射用復(fù)方苦參粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01～0.3g/支，優(yōu)選0.03～0.2g/支。
5、注射用復(fù)方苦參制劑的新的醫(yī)療用途發(fā)明內(nèi)容1～4中的各藥品具有抗腫瘤作用、對(duì)化療藥具有增效減毒作用、鎮(zhèn)痛作用、升白作用、提高免疫作用、抗肝炎作用等。
上述發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果在于加強(qiáng)了藥物的穩(wěn)定性，不會(huì)產(chǎn)生效價(jià)的降低，更能發(fā)揮藥物應(yīng)有的臨床效果，同時(shí)便于運(yùn)輸、貯備，減少破損率，降低成本，豐富了復(fù)方苦參制劑的劑型。
下面的實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但它們并非試圖在任何方面限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)驗(yàn)例1處方苦參7000g 白土苓3000g 制成注射用復(fù)方苦參中間體制備方法將苦參和白土苓粉碎成粗粉，混勻，置滲漉缸中，加相當(dāng)于藥量6～8倍的1％醋酸浸漬24小時(shí)(根據(jù)季節(jié)溫度的不同而不同，冬季24小時(shí)，夏季8小時(shí))，進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，滲漉液減壓濃縮(75℃以下)至900～1200ml[或相對(duì)密度1.20(60℃)]，另器存放。
藥渣加入6～8倍量注射用水，煎煮2次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并煎煮液，減壓濃縮至900～1200ml[或相對(duì)密度1.20(60℃)]，放冷，過(guò)濾，得到上清液。
上清液與上述滲漉液的濃縮液合并，用乙醇醇沉3次。第一次加乙醇使溶液的含醇量達(dá)到60％，靜置過(guò)夜或冷藏(0～5℃，24h以上)，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，上清液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.20(60℃)；再加乙醇使含醇量為80％，同上處理；第三次加乙醇使含醇量為90％，同上處理得到相對(duì)密度1.30(60℃)的醇溶物浸膏。
醇溶物浸膏以3000～3500ml的注射用水返溶、在0℃冷藏過(guò)夜、0.45μm濾膜過(guò)濾，得到濾液。濾液在80℃以下的減壓濃縮至相對(duì)1.40(60℃)，即得到藥物中間體1000ml；放置于-5℃～5℃的冷庫(kù)保存。
藥物中間體相對(duì)密度的確定應(yīng)根據(jù)其中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量來(lái)確定，要求其含量大于100mg/ml，中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰，并由苦參堿、槐果堿等組成。
實(shí)驗(yàn)例2處方苦參7000g 白土苓3000g 制成注射用復(fù)方苦參中間體制備方法將苦參粉碎成粗粉，混勻，置滲漉缸中，加相當(dāng)于藥量8～10倍的1％醋酸浸漬24小時(shí)(根據(jù)季節(jié)溫度的不同而不同，冬季24小時(shí)，夏季8小時(shí))，進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，滲漉液減壓濃縮(75℃以下)至600～700ml[或相對(duì)密度1.20(60℃)]，另器存放。
藥渣和白土苓粗粉加入6～8倍量注射用水，煎煮2次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并煎煮液，減壓濃縮至800～1000ml[或相對(duì)密度1.20(60℃)]，放冷，過(guò)濾，得到上清液。
上清液與苦參滲漉液的濃縮液合并，以乙醇醇沉3次。第一次加乙醇使溶液的含醇量達(dá)到60％，靜置過(guò)夜或冷藏(0～5℃，24h以上)，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，上清液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.20(60℃)；再加乙醇使含醇量為80％，同上處理；第三次加乙醇使含醇量為90％，同上處理得到相對(duì)密度1.30(60℃)的醇溶物浸膏。
醇溶物浸膏以2000～3000ml的注射用水返溶、在0℃冷藏過(guò)夜、0.45μm濾膜過(guò)濾，得到濾液。濾液在80℃以下的減壓濃縮至相對(duì)1.40(60℃)，即得到藥物中間體1000ml；放置于-5℃～5℃的冷庫(kù)保存。
藥物中間體相對(duì)密度的確定應(yīng)根據(jù)其中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量來(lái)確定，要求其含量大于100mg/ml，中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰，并由苦參堿、槐果堿等組成。
實(shí)驗(yàn)例3處方苦參7000g 白土苓3000g 制成注射用復(fù)方苦參中間體制備方法將苦參粉碎成粗粉，混勻，置滲漉缸中，加相當(dāng)于藥量8～10倍的0.5％鹽酸浸漬24小時(shí)，進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，滲漉液減壓濃縮(75℃以下)至600～700ml[或相對(duì)密度1.20(60℃)]，另器存放。
藥渣和白土苓粗粉加入6～8倍量注射用水，煎煮2次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并煎煮液，減壓濃縮至800～1000ml[或相對(duì)密度1.20(60℃)]，放冷，過(guò)濾，得到上清液。
上清液與苦參滲漉液的濃縮液合并，以乙醇醇沉3次。第一次加乙醇使溶液的含醇量達(dá)到60％，靜置過(guò)夜或冷藏(0～5℃，24h以上)，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，上清液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.25(60℃)；再加乙醇使含醇量為80％，同上處理；第三次加乙醇使含醇量為90％，同上處理得到相對(duì)密度1.30(60℃)的醇溶物浸膏。
醇溶物浸膏以2000～3000ml的注射用水返溶、在0℃冷藏過(guò)夜、0.45μm濾膜過(guò)濾，得到濾液。濾液在80℃以下的減壓濃縮至相對(duì)1.40(70℃)，即得到藥物中間體；放置于-5℃～5℃的冷庫(kù)保存。
藥物中間體相對(duì)密度的確定應(yīng)根據(jù)其中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量來(lái)確定，要求其含量大于300mg/ml，中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰，并由苦參堿、槐果堿等組成。
實(shí)驗(yàn)例4處方苦參1400g 白土苓600g制備方法
按照實(shí)例1～3的任何一種方法制備成為藥物中間體。藥物中間體中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量大于100mg/ml，中間體的指紋圖譜中應(yīng)以氧化苦參堿為主要峰，并由苦參堿、槐果堿等組成。
合格的藥物中間體加入注射用水至900ml，經(jīng)3％注射用活性炭加熱回流脫色10分鐘、0.22μm超微濾膜過(guò)濾。
濾液經(jīng)過(guò)4次調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程。第一次調(diào)至pH7.8，在0℃左右冷藏過(guò)夜，0.22μm超微濾膜過(guò)濾；第二次調(diào)至pH5.0，同法處理；第三次調(diào)至pH6.8，同法處理。調(diào)pH用20％NaOH和40％醋酸進(jìn)行。
第四次調(diào)pH至8.8后，加注射用水調(diào)至1000ml，在-5℃左右冷藏過(guò)夜，0.22μm超微濾膜過(guò)濾。分別灌封成2ml/瓶，5ml/瓶，10ml/瓶，12ml/瓶，20ml/瓶，25ml/瓶。封口、并在105℃滅菌30分鐘，包裝，檢查合格，入庫(kù)。
實(shí)驗(yàn)例5處方苦參1400g 白土苓600g 氯化鈉18g制備方法按照實(shí)例1～3的任何一種方法制備成為藥物中間體。藥物中間體中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量大于100mg/ml，中間體的指紋圖譜中應(yīng)以氧化苦參堿為主要峰，并由苦參堿、槐果堿等組成。
氯化鈉用適量的注射用水溶解后，加入合格的藥物中間體，并加入注射用水至900ml，經(jīng)3％注射用活性炭加熱回流脫色10分鐘、0.22μm超微濾膜過(guò)濾。
濾液經(jīng)過(guò)4次調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程。第一次調(diào)至pH7.8，在0℃左右冷藏過(guò)夜，0.22μm超微濾膜過(guò)濾；第二次調(diào)至pH5.0，同法處理；第三次調(diào)至pH6.8，同法處理。調(diào)pH用20％NaOH和40％醋酸進(jìn)行。
第四次調(diào)pH至8.8后，加注射用水調(diào)至2000ml，在-5℃左右冷藏過(guò)夜，0.22μm超微濾膜過(guò)濾。分別灌封成50ml/瓶，100ml/瓶，250ml/瓶，500ml/瓶。封口、并在105℃滅菌30分鐘，包裝，檢查合格，入庫(kù)。
實(shí)驗(yàn)例6處方苦參1400g 白土苓600g 葡萄糖100g制備方法
按照實(shí)例1～3的任何一種方法制備成為藥物中間體。藥物中間體中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量大于100mg/ml，中間體的指紋圖譜中應(yīng)以氧化苦參堿為主要峰，并由苦參堿、槐果堿等組成。
葡萄糖用適量的注射用水完全溶解后，加入合格的藥物中間體，并用注射用水至900ml，經(jīng)3％注射用活性炭加熱回流脫色10分鐘、0.22μm超微濾膜過(guò)濾。
濾液經(jīng)過(guò)4次調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程。第一次調(diào)至pH7.8，在0℃左右冷藏過(guò)夜，0.22μm超微濾膜過(guò)濾；第二次調(diào)至pH5.0，同法處理；第三次調(diào)至pH6.8，同法處理。調(diào)pH用20％NaOH和40％醋酸進(jìn)行。
第四次調(diào)pH至7.8后，加注射用水用水調(diào)至2000ml，在-5℃左右冷藏過(guò)夜，0.22μm超微濾膜過(guò)濾。分別灌封成50ml/瓶，100ml/瓶，250ml/瓶，500ml/瓶。封口、并在105℃滅菌30分鐘，包裝，檢查合格，入庫(kù)。
實(shí)驗(yàn)例7處方苦參1400g 白土苓600g制備方法按照實(shí)例1～3的任何一種方法制備成為藥物中間體。藥物中間體中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量大于100mg/ml，中間體的指紋圖譜中應(yīng)以氧化苦參堿為主要峰，并由苦參堿、槐果堿等組成。
在100級(jí)的GMP車(chē)間內(nèi)，骨架材料(甘露醇200g)加入適量的注射用水完全溶解后，加入合格藥物中間體200g，加入注射用水至450ml，經(jīng)3g注射用活性炭加熱至80℃并保溫30分鐘，冷至45℃時(shí)脫炭0.22μm超微濾膜過(guò)濾。
濾液經(jīng)過(guò)4次調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程。第一次調(diào)至pH7.8，在0℃左右冷藏過(guò)夜，0.22μm超微濾膜過(guò)濾；第二次調(diào)至pH5.0，同法處理；第三次調(diào)至pH6.8，同法處理。調(diào)pH用20％NaOH和40％醋酸進(jìn)行。
第四次調(diào)pH至7.8后，加注射用水調(diào)至500ml，在-5℃左右冷藏過(guò)夜，用0.22μm超微濾膜過(guò)濾，半成品檢查(測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜)。灌封于7ml西林瓶中，每瓶裝2ml；或灌封于10ml西林瓶中，每瓶裝5ml；或灌封于20ml西林瓶中，每瓶裝10ml，蓋上丁基橡膠塞，保留出氣孔，放入凍干機(jī)中按照設(shè)計(jì)的凍干曲線進(jìn)行冷凍干燥；當(dāng)干燥箱內(nèi)的真空度與泵口真空度接近并制品溫度與板溫重合時(shí)，關(guān)閉冷凍系統(tǒng)和真空系統(tǒng)，壓緊瓶塞，放氣，取出樣品，鋁蓋壓口，包裝，檢查合格，入庫(kù)；即得復(fù)方苦參凍干粉針劑。
單純的復(fù)方苦參溶液凍干后不能形成堅(jiān)實(shí)的骨架，稍加震動(dòng)后樣品即成粉末狀，可能影響其復(fù)溶，故需對(duì)其與甘露醇或氯化鈉或葡萄糖等以不同的比例進(jìn)行骨架篩選，復(fù)方苦參中間體與甘露醇等骨架材料之比在1∶0.5～3(W/W)范圍之內(nèi)，選取1∶1和1∶1.5，凍干后樣品外觀均良好，且易溶解。
凍干曲線包括預(yù)凍和升華兩個(gè)階段預(yù)凍階段本品的共晶點(diǎn)為-15～-20℃，凍干過(guò)程一般將樣品溫度降低到共晶點(diǎn)-10℃以下，開(kāi)始升華；預(yù)凍溫度越低，在升溫、升華過(guò)程中樣品不易飛揚(yáng)，凍干物的粒子均勻細(xì)膩，溶解速度快。因此，選擇預(yù)凍溫度在-30℃或更低的溫度時(shí)開(kāi)始升溫、升華較佳。
升華階段在開(kāi)冷凝器1小時(shí)后使真空度達(dá)到30Pa以下，優(yōu)選9～20Pa，按照每小時(shí)0.5～2℃的升溫速度給產(chǎn)品升溫，產(chǎn)品溫度達(dá)到-5℃～-10℃時(shí)，以每小時(shí)1～5℃的速度升溫，直至產(chǎn)品的溫度升到21℃～31℃，繼續(xù)保持2～8小時(shí)，使制品的溫度與擱板溫度重合(相差1℃以內(nèi))，放入無(wú)菌過(guò)濾氣體，使箱門(mén)能夠打開(kāi)，開(kāi)箱，迅速封口，即得冷干粉針。為使水氣升華完全，凍干品的殘留水分低，升溫及保溫時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。
采用復(fù)方苦參凍干粉針劑對(duì)家兔的試驗(yàn)，結(jié)果表明本品對(duì)家兔耳緣靜脈未產(chǎn)生明顯刺激性，通過(guò)給豚鼠腹腔注射，結(jié)果表明豚鼠未引起全身過(guò)敏性反應(yīng)；按常規(guī)溶血試驗(yàn)方法觀察2mg/ml注射，結(jié)果顯示在4小時(shí)內(nèi)對(duì)家兔紅細(xì)胞無(wú)明顯溶血作用，也未見(jiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。
本發(fā)明制成的復(fù)方苦參制品骨架疏松，粒子均勻細(xì)膩，震搖不易碎，加水能迅速溶解。凍干粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01～0.3g/瓶，優(yōu)選0.03～0.2g/瓶。
實(shí)驗(yàn)例8骨架材料選用氯化鈉，按復(fù)方苦參中間體與骨架材料(氯化鈉)之比1∶1.5，余皆同實(shí)施例7。
實(shí)驗(yàn)例9骨架材料選用葡萄糖，按復(fù)方苦參中間體與骨架材料之比1∶1，余皆同實(shí)施例7。
實(shí)驗(yàn)例10
按照實(shí)施例4中制備的合格注射用藥液，直接噴霧(噴氣壓力調(diào)節(jié)到4kg/cm2，抽力6kg/cm2，進(jìn)口溫度180℃，出口溫度80℃)，經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺(tái)使?jié)駳夂透煞鄯蛛x，干粉收于收集器中，在無(wú)菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中，封口，包裝，檢查合格，入庫(kù)，即得到注射用復(fù)方苦參粉針。注射用復(fù)方苦參粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01～0.3g/支，優(yōu)選0.03～0.2g/支。
實(shí)驗(yàn)例11按照實(shí)施例4中制備的合格注射用藥液與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制，0.22μm精濾后，直接噴霧，噴霧條件等其余制備過(guò)程同實(shí)施例10。
注射用藥液與骨架材料按1∶0.5～1∶3(注射用藥液的固形物骨架材料，W/W)配比進(jìn)行配制，優(yōu)選1∶1和1∶1.5；骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖。注射用復(fù)方苦參粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01～0.3g/支，優(yōu)選0.03～0.2g/支。
實(shí)驗(yàn)例12注射用復(fù)方苦參制劑的鎮(zhèn)痛試驗(yàn)一.用小鼠熱板法測(cè)定復(fù)方苦參注射液的鎮(zhèn)痛作用1.靜脈注射復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響小鼠全部用雌性，實(shí)驗(yàn)室溫度保持在20℃，將小鼠置于55℃的恒溫?zé)岚迳希蕴蚝笞阕鳛橥捶磻?yīng)的指標(biāo)，用秒表記錄小白鼠放上熱板至出現(xiàn)舔足的反應(yīng)時(shí)間作為該鼠的痛閾值，挑選出痛閾值5-30秒的小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，第二天復(fù)試，將過(guò)敏、遲純或喜歡跳動(dòng)的動(dòng)物均剔除不用，小鼠按體重和基礎(chǔ)痛閾值隨機(jī)分為5組，正常對(duì)照組(生理鹽水0.2ml/只)、復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同劑量組(0.8g/kg、1.6g/kg和3.2g/kg)和陽(yáng)性對(duì)照組(度冷丁25mg/kg)。除度冷丁肌肉注射外，其余各組均尾靜脈注射。給藥后0.5、1、2、3、4小時(shí)分別測(cè)定痛閾一次，共5次。計(jì)算對(duì)照組和給藥組的痛閾值進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，用藥后痛閾值超過(guò)60秒，為防止?fàn)C傷即予取出，仍以60秒計(jì)算。
從表1看出，復(fù)方苦參注射液三個(gè)劑量0.8g/kg、1.6g/kg和3.2g/kg均能明顯提高痛閾值，給藥后半小時(shí)，均顯出鎮(zhèn)痛作用，隨著復(fù)方苦參注射液劑量的增加，其作用持續(xù)時(shí)間也增加，鎮(zhèn)痛強(qiáng)度也隨著劑量的增大而增強(qiáng)，高劑量組痛閾值提高率可達(dá)83.74％，鎮(zhèn)痛時(shí)間可持續(xù)三個(gè)小時(shí)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，復(fù)方苦參注射液對(duì)熱刺激引起的疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
表1復(fù)方苦參注射液iv對(duì)小鼠熱板痛閾值的影響(X±SD)

與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0012.腹腔注射復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)處理同試驗(yàn)1，僅改變給藥途徑為腹腔注射，小鼠分為5組，正常對(duì)照組(腹腔給生理鹽水0.2ml/只)，復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同劑量組(1.6，3.2，6.4g/kg)和陽(yáng)性對(duì)照度冷丁組(25mg/kg)，除度冷丁皮下給藥外，其余各組均腹腔注射給藥。
表2復(fù)方苦參注射液ip對(duì)小鼠熱板痛閾值的影響(X±SD)

注與對(duì)照組比較*P＜0.01，**P＜0.001結(jié)果見(jiàn)表2，復(fù)方苦參注射液三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較都有顯著差別，均能明顯提高痛閾，給藥后0.5-2h之間鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng)，痛閾提高率最高可達(dá)60.29％。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)鎮(zhèn)痛作用逐漸減弱，鎮(zhèn)痛時(shí)間可持續(xù)3h。藥物鎮(zhèn)痛強(qiáng)度隨著濃度的增大而增強(qiáng)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)都明顯的量效關(guān)系，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出復(fù)方苦參注射液ip對(duì)熱刺激引起的疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，其鎮(zhèn)痛時(shí)間和強(qiáng)度與度冷丁相似。
二.用酸刺激扭體法測(cè)定復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用1.靜脈注射復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響取健康小鼠，雄雌各半，按體重隨機(jī)分為5組正常對(duì)照組(尾靜脈給生理鹽水0.2ml/只)，復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同劑量組(0.8g/kg、1.6g/kg和3.2g/kg)及陽(yáng)性對(duì)照度冷丁組(25mg/kg)。除陽(yáng)性對(duì)照組肌肉注射外，其余各組均尾靜脈注射給藥，半小時(shí)后分別給每只小鼠腹腔注射1.2％醋酸0.2ml，5min后計(jì)算發(fā)生典型的扭體次數(shù)(伸長(zhǎng)后肢、腹部收縮和扭曲軀體)，記錄各小鼠15min內(nèi)扭體次數(shù)，比較各給藥組和對(duì)照組的扭體次數(shù)，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，并計(jì)算給藥組扭體次數(shù)的減少率。

表3復(fù)方苦參注射液iv對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響(X±SD)

與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001由表3可知，小鼠注射復(fù)方苦參注射液后，可以明顯降低用醋酸引起扭體的發(fā)生率，三個(gè)不同劑量組的扭體減少率分別達(dá)到38.29％、54.63％、60.52％，其減少率隨著藥物劑量的增大而增大。
2.肌肉注射復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響實(shí)驗(yàn)方法，數(shù)據(jù)處理同“2.1”，僅改變給藥途徑為肌肉注射，小鼠分為5組正常對(duì)照組給生理鹽水0.2ml/只，復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同劑量組(2.4、4.8、9.6g/kg)及陽(yáng)性對(duì)照度冷丁組(25mg/kg)。除陽(yáng)性對(duì)照組皮下注射外，其余各組均肌肉注射給藥。
表4復(fù)方苦參注射液im對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響(X±SD)

結(jié)果見(jiàn)表4，復(fù)方苦參注射液組與對(duì)照組相比較能明顯降低因醋酸引起的扭體發(fā)生率，三個(gè)不同劑量組的減少率分別為50.00％，57.91％和89.55％其抑制作用隨著藥物濃度增大而增強(qiáng)，與對(duì)照組比較具有非常顯著的差異，說(shuō)明復(fù)方苦參注射液對(duì)醋酸刺激引起的疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，復(fù)方苦參注射大劑量組扭體次數(shù)減少率與度冷丁相比，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異。
實(shí)驗(yàn)例13抗腫瘤作用的研究1.復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響小鼠40只，每只在右腋部皮下接種S180腹水瘤0.1(含104個(gè)細(xì)胞)轉(zhuǎn)為實(shí)體瘤。第二天將動(dòng)物隨機(jī)分為5組，對(duì)照組iv生理鹽水0.2ml/只陽(yáng)性藥物組ip環(huán)磷酰胺35mg/kg；另三組給復(fù)方苦參注射液，分別ip 3.2，6.4，12.8g/kg，陽(yáng)性藥隔日給藥一次，其余各組每天給藥一次，共計(jì)給藥11天，停藥次日解剖動(dòng)物，取出腫瘤并稱(chēng)重，各組與對(duì)照組比較瘤重，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，計(jì)算瘤重抑制率。

表5復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠腫瘤S180生長(zhǎng)的影響(X±SD)

與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001結(jié)果見(jiàn)表5，復(fù)方苦參注射液小、中、大三個(gè)劑量組，瘤重抑制率分別為38.9％、40.9％、58.5％，與對(duì)照組比較有顯著性差異，說(shuō)明復(fù)方苦參注射液有明顯抑制S180腫瘤生長(zhǎng)的作用。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三批，結(jié)果相似。
2.復(fù)方苦參對(duì)小鼠肝癌H22實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響瘤源用H22代替S180，其它方法包括動(dòng)物、分組、藥物劑量、觀察指標(biāo)等與本試驗(yàn)1相同。
表6復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠肝癌H22生長(zhǎng)的影響(X±SD)

注與對(duì)照組比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001結(jié)果見(jiàn)表6，復(fù)方苦參注射液小、中、大三個(gè)劑量組，瘤重抑制率分別為50.0％，51.4％，51.2％，與對(duì)照組比較有顯著性差異，說(shuō)明復(fù)方苦參注射液有明顯抑制H22腫瘤生長(zhǎng)的作用。重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果相似。
實(shí)驗(yàn)例14對(duì)免疫功能的作用研究1、對(duì)荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響方法BALB/C雄性小鼠54只，體重18-20g，隨機(jī)分為6組，每組9只，II事先在小鼠右腋/皮下接種S180腹水瘤0.1ml(含106個(gè)瘤細(xì)胞)，第二天開(kāi)始給藥，正常對(duì)照組，荷瘤組ip生理鹽水0.2ml/20g。陽(yáng)性藥物組為po青春寶0.4ml/20g，復(fù)方苦參注射液三組分別ip3.2、6.4、12.8g/kg(體積均為0.2ml/20g)。連續(xù)給藥12天，停藥后24小時(shí)斷頭放血處死小鼠，在無(wú)菌條件下取出脾臟，用1640培養(yǎng)液(含10％小牛血清)制成脾細(xì)胞懸液，并將小鼠脾細(xì)胞調(diào)整到5×106細(xì)胞/ml，加到96孔培養(yǎng)板中，每孔100μl，每個(gè)脾加雙份(即一個(gè)加ConA，一個(gè)不加ConA)。ConA 20μl(濃度為100μg/ml)，1640培養(yǎng)液80μl，使每孔至200μl體積，于5％ CO237℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)72小時(shí)，終止培養(yǎng)前24小時(shí)，每孔加3H-TdR 3.7×109(iucr)。用細(xì)胞收集器(TITERTEK CELL HARVESTER 550)收集細(xì)胞于49型玻璃纖維濾紙上，依次用蒸餾水、5％三氨醋酸、無(wú)水乙醇洗滌，將濾紙片置60℃溫箱烘干，加到含5ml閃爍液的杯內(nèi)，經(jīng)液閃儀(BECKMEN LS 9800)測(cè)參入放射性活度(cpm)，然后計(jì)算刺激指數(shù)(SI)，即

表7復(fù)方苦參注射液對(duì)荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響(X±SD)

與荷瘤對(duì)照組比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001結(jié)果見(jiàn)表7，小鼠接種瘤細(xì)胞后，刺激指數(shù)明顯低于正常組(P≤0.05)。在給青春寶和復(fù)方苦參注射液小、中、大三個(gè)劑量后，刺激指數(shù)明顯上升，與荷瘤對(duì)照組比較有顯著性差異，P＜0.05。結(jié)果提示復(fù)方苦參注射液對(duì)COnA刺激荷瘤小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化有促進(jìn)作用，即對(duì)T淋巴細(xì)胞免疫功能有增強(qiáng)作用。
2.對(duì)溶血空斑(PFC)形成的影響分組、給藥同“三.1”淋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)，于第8天給藥10分鐘后，用2×108/ml SRBC致敬小鼠，每鼠iv0.1ml。5天后解剖取脾，制備脾細(xì)胞懸液及計(jì)數(shù)同淋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)。取試管若干去，每管依次加入脾細(xì)胞0.2％SRBC、1∶10豚鼠血清各0.5ml，混勻，置30℃水浴中溫育1小時(shí)，3000rpm離心5分鐘后取上清液，在UV-754分光光度計(jì)413nm波長(zhǎng)下記錄吸收度。
表8復(fù)方苦參注射液對(duì)荷瘤小鼠PFC的影響(X±SD)

與荷瘤對(duì)照組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001結(jié)果見(jiàn)表8，小鼠接種瘤細(xì)胞后，光密度明顯低于正常組(P＜0.05)。在給了青春寶和復(fù)方苦參注射液小、中、大三個(gè)劑量后，光密度明顯上升，與荷瘤對(duì)照組比較都有顯著性差異，P＜0.05。結(jié)果提示復(fù)方苦參注射液對(duì)荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗錦羊紅細(xì)胞抗體溶血素有促進(jìn)作用，即對(duì)B淋巴細(xì)胞體液免疫功能有增強(qiáng)作用。
實(shí)驗(yàn)例15止血作用的研究1、對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響將健康小鼠體重平均分為5組，分別為正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和復(fù)方苦參注射液的三個(gè)不同劑量組，正常對(duì)照組小鼠ip與試驗(yàn)組體積相同的生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠ip0.75g/kg止血敏。試驗(yàn)組分別ip1.5、3.0、6.0g/kg復(fù)方苦參注射液，連續(xù)給藥三天，末次給藥30min后，用內(nèi)徑為1mm的玻璃毛細(xì)管從小鼠眼眶采血，至血液充滿毛細(xì)管，并開(kāi)始記時(shí)，每隔30s折斷毛細(xì)管一小段，檢查有無(wú)出現(xiàn)血凝絲。計(jì)算從毛細(xì)管充滿血液到出現(xiàn)血凝絲的時(shí)間，為凝血時(shí)間，與生理鹽水對(duì)照組比較，以判藥效。
表9復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響(X±SD)

結(jié)果見(jiàn)表9，小鼠ip不同劑量的復(fù)方苦參注射液后，其凝血時(shí)間與正常對(duì)照組相比，均有顯著性差異，這表明了復(fù)方苦參注射液能縮短小鼠的凝血時(shí)間。
2.對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響出血時(shí)間的測(cè)定，經(jīng)出血自然停止作為測(cè)試出血時(shí)間指標(biāo)，取18-20g健康雄性小鼠，按體重平均分為正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同的劑量組，正常對(duì)照組小鼠ip與試驗(yàn)組體積相同的生理鹽水。陽(yáng)性對(duì)照組小鼠ip 0.75g/kg止血敏，試驗(yàn)組分別ip 1.5，3.0，6.0g/kg復(fù)方苦參注射液，給藥30min后，分別以利剪將小鼠尾尖3mm處橫斷，待血液自行溢出時(shí)開(kāi)始記時(shí)，每隔30s用濾紙吸去血滴一次，直到濾紙吸時(shí)無(wú)血為止，為出血時(shí)間，將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行時(shí)間t檢驗(yàn)。
表10復(fù)方苦參注射液對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響(X±SD)

結(jié)果見(jiàn)表10，小鼠腹腔注射不同劑量的復(fù)方苦參注射液后，大劑量和中劑量組出血時(shí)間與正常對(duì)照組相比，具有顯著性差異，小劑量組的小鼠出血時(shí)間與正常對(duì)照組無(wú)明顯差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)方苦參注射液能縮短小鼠的出血時(shí)間。
實(shí)驗(yàn)例16復(fù)方苦參注射液對(duì)環(huán)磷酰胺化療的增效和減毒作用1.復(fù)方苦參注射液對(duì)環(huán)磷酰胺的增效作用小鼠40只，體重22.3±1.3g接種瘤細(xì)胞，取已生長(zhǎng)一周的S180腹水瘤瘤源，用生理鹽水(N.S)1∶4稀釋(計(jì)數(shù)為3×104/mm3)接種0.1ml于每只小鼠右腋皮下，24小時(shí)后分組，共分成4組。第1組為對(duì)照組，給N.S組合Cy 20mg/kg；3組為Cy 20mg/kg+復(fù)方苦參注射液6.4g/kg；4組為Cy 20mg/kg+復(fù)方苦參注射液12.8g/kg；以上各組均為腹腔注射給藥，其中復(fù)方苦參注射液每天1次連續(xù)9天，環(huán)磷酰胺隔天1次共4次，第10于全部斷頸椎處死取瘤，用電子天平稱(chēng)重，結(jié)果見(jiàn)表11。
由表11可見(jiàn)，Cy 20mg/kg和35mg/kg均能抑制瘤重，與對(duì)照組比分別給N.S；2組為Cy 100mg/kg分別加復(fù)方苦參注射液6.4、12.8g/kg兩劑量后，有抑制瘤重的增效作用，分別P＜0.05，P＜0.001。
2.復(fù)方苦參注射液對(duì)化療減毒的作用小鼠51只，體重19.4±0.78g，隨機(jī)分成5組。第1組為對(duì)照組給N.S；2組為Cy100mg/kg；3組為Cy 100mg/kg+復(fù)方苦參注射液12.8g/kg；4組為Cy 100mg/kg+復(fù)方苦參注射液6.4g/kg；5組為Cy 100mg/kg+復(fù)方苦參注射液3.2g/kg。以上各組均為腹腔注射給藥，其中復(fù)方苦參注射液每天1次連續(xù)7天，Cy均于每6、7天各給藥1次，第8天從眼眶取血和股骨取骨髓用血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀沒(méi)WBC，骨髓有核細(xì)胞。結(jié)果見(jiàn)表12。
由表12可見(jiàn)，Cy 100mg/kg使WBC、骨髓有核細(xì)胞均降低，在加用復(fù)方苦參注射液后，骨髓有核細(xì)胞有明顯的增加，在加用復(fù)方苦參注射液3.2g/kg后，WBC明顯上升，均P＜0.05，其中復(fù)方苦參注射液6.4g/kg、3.2g/kg兩組與單純Cy組比較P＜0.05。
表11復(fù)方苦參注射液對(duì)環(huán)磷酰胺的增效作用(X±SD)

(1)與對(duì)照組比較^P＜0.05(2)與Cy比較*P＜0.05，**P＜0.001表12復(fù)方苦參注射液對(duì)化療減毒作用(X±SD)

(1)與對(duì)照組比較^P＜0.001(2)與Cy比較*P＜0.05實(shí)驗(yàn)例17復(fù)方苦參注射液治療慢性乙型肝炎臨床研究1.病例選擇 431例慢性乙型肝炎診斷符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。患者HBV感染超過(guò)半年，肝功能ALT及AST異常超過(guò)3個(gè)月，有不同程度的乏力、納差等，血清ALT(142±106)U/L，AST(110±97)U/L，血清總膽紅素(51±39)μmol/L，HBeAg陽(yáng)性，血清白蛋白在正常范圍，臨床上排除肝硬化及其他病毒性肝炎。431例患者隨機(jī)分為復(fù)方苦參注射液+干擾素組和干擾素組。復(fù)方苦參注射液+干擾素組222例，男122例，女100例；干擾素組209例，男119例，女90例。兩組患者一般情況差別無(wú)顯著性。
2.治療方法 復(fù)方苦參注射液+干擾素組給予60ml+10％葡萄糖液250mL靜脈滴注，每天1次共3個(gè)月，α-2b干擾素50μg肌注，每天1次共10d，以后50μg肌注，隔日1次共90次；干擾素組單用α-2b干擾素治療，其劑量、用法、療程與治療組一致。兩組患者同時(shí)使用強(qiáng)力寧或甘利欣、古拉丁等護(hù)肝藥物治療。
3.結(jié)果3.1治療前后ALT及AST變化 兩組患者治療前及治療3周，6周，12周及24周時(shí)，其ALT及AST的變化，包括下降幅度，恢復(fù)的時(shí)間似乎有區(qū)別，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異均無(wú)顯著意義。見(jiàn)表13。
3.2兩組患者治療前后血清中HBeAg、抗HBe及HBV-DNA的變化 復(fù)方苦參注射液+干擾素組的患者治療結(jié)束時(shí)，血清中HBV-DNA，HBeAg的轉(zhuǎn)陰率分別為73％及68％，抗HBe陽(yáng)轉(zhuǎn)率為61％，單用干擾素組治療結(jié)束時(shí)，上述指標(biāo)分別為46％，43％及36％，治療組的療效明顯優(yōu)于對(duì)照組，見(jiàn)表14。
表13治療前后ALT及AST變化X±SD，U/L

表14治療前后HBeAg抗HBe及HBV-DNA的變化

實(shí)驗(yàn)例18毒副作用本品經(jīng)過(guò)2588例的臨床觀察中，未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用，且大部病例在接受治療后，精神、食欲、睡眠等一般狀況也隨之改善，全身體力狀態(tài)評(píng)分上升，提高患者的生存質(zhì)量。因而，無(wú)論患者一般狀況如何，均可安全的使用，可廣泛的適用于中晚期癌的治療。
權(quán)利要求
1.一種注射用復(fù)方苦參制劑，其特征在于其原料為苦參和白土苓；主要含有氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿、槐定堿、白土苓皂苷等。其特征在于(1)藥物經(jīng)過(guò)一定的制備工藝，得到藥物中間體；(2)藥物中間體經(jīng)過(guò)一定的制備方法，得到不同規(guī)格的復(fù)方苦參注射液；(3)藥物中間體經(jīng)過(guò)一定的制備方法，得到復(fù)方苦參凍干粉；(4)藥物中間體經(jīng)過(guò)一定的制備方法，得到注射用復(fù)方苦參粉針。
2.權(quán)利要求1中的中間體，其特征在于利用下述方法制備而成(1)一定比例的苦參和白土苓用溶劑按照一定的制備方法進(jìn)行提取；(2)提取液濃縮，得到濃縮物；(3)濃縮物經(jīng)過(guò)多次的醇沉-冷藏-過(guò)濾-回收溶劑的過(guò)程，得到醇溶物；(4)醇溶物以一定比例的注射用水返溶、冷藏、過(guò)濾，得到濾液；(5)濾液濃縮成一定密度，即得藥物中間體；(6)測(cè)定中間體的藥物含量和指紋圖譜，放置于冷庫(kù)中。
3.權(quán)利要求1中的復(fù)方苦參注射液，其特征在于是利用下述方法制備而成(1)利用權(quán)利1和2制備的藥物中間體，加入注射用溶劑，經(jīng)活性炭脫色、過(guò)濾；(2)經(jīng)過(guò)2次以上的調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程，得到注射用藥液；(3)測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜；(4)注射用藥液經(jīng)精濾；(5)灌裝；(6)封口、滅菌，即得不同規(guī)格的注射液。
4.權(quán)利要求1中的復(fù)方苦參凍干粉，其特征在于是利用下述方法制備而成(1)利用權(quán)利要求1，2和3(1)～3(4)制備的注射用藥液，灌封于西林瓶中，放入冷凍機(jī)中，按照冷凍曲線冷凍干燥，得到復(fù)方苦參凍干粉。(2)利用權(quán)利要求1、2制備的藥物中間體與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制，經(jīng)活性炭脫色、過(guò)濾，經(jīng)過(guò)2次以上的調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程，得到注射用藥液，測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜；再經(jīng)精濾后，灌封于西林瓶中，放入冷凍機(jī)中，按照冷凍曲線冷凍干燥，得到復(fù)方苦參凍干粉。(3)利用權(quán)利要求1、2和3(1)～3(2)制備的注射用藥液與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制，經(jīng)精濾后，測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜；灌封于西林瓶中，放入冷凍機(jī)中，按照冷凍曲線冷凍干燥，得到復(fù)方苦參凍干粉。
5.權(quán)利要求1中的注射用復(fù)方苦參粉針，其特征在于是利用下述方法制備而成(1)利用權(quán)利要求1、2和3(1)～3(4)制備的注射用藥液調(diào)節(jié)到一定的相對(duì)密度后進(jìn)行噴霧干燥，經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺(tái)使?jié)駳夂透煞鄯蛛x，干粉收于收集器中，在無(wú)菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中，封口，即得到注射用復(fù)方苦參粉針。(2)利用權(quán)利要求1、2和3(1)～3(2)制備的注射用藥液與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制，經(jīng)精濾后，測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜；噴霧干燥，經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺(tái)使?jié)駳夂透煞鄯蛛x，干粉收于收集器中，在無(wú)菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中，封口，即得到注射用復(fù)方苦參粉針。
6.權(quán)利要求1～2中的中間體制備方法的技術(shù)特征在于(1)原料苦參和白土苓的比例為5∶2～2∶1，優(yōu)選7∶3；(2)所指的提取溶劑為水、0.1％～60％稀酸、1％～80％的醇，優(yōu)選稀酸和水；(3)所述的提取方法是藥物飲片或粗粉利用滲漉提取和回流提取方法進(jìn)行單獨(dú)提取后合并或混合提取，優(yōu)選先稀酸滲漉后，再以水煎煮提取；稀酸滲漉條件為藥學(xué)可使用的有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸，濃度0.1％～60％，5℃～40℃，2～60小時(shí)，優(yōu)選5％～50％的醋酸或鹽酸，10℃～30℃，8～48小時(shí)；回流提取條件為以0％～80％的水-醇溶劑進(jìn)行回流提取1～4次，優(yōu)選0％～60％的水醇溶劑，回流提取2次；所指的醇為1～5個(gè)碳的脂肪醇，優(yōu)選甲醇和乙醇；(4)所指的濃縮是在≤100℃的溫度下的常壓濃縮或減壓濃縮，優(yōu)選30～80℃的減壓濃縮；(5)所指的醇沉-冷藏-過(guò)濾-回收溶劑過(guò)程，其醇沉條件是利用高濃度的醇加入到藥物濃縮液中，第一次醇沉?xí)r，藥液中的醇濃度達(dá)到30％～80％，優(yōu)選50％～70％，第二次醇沉?xí)r，藥液中的醇濃度達(dá)到50％～90％，優(yōu)選70％～85％，第三次醇沉?xí)r，藥液中的醇濃度達(dá)到80％～95％，優(yōu)選85％～92％，醇沉次數(shù)優(yōu)選為三次；醇沉液的冷藏條件為-20℃～10℃，4～48小時(shí)，優(yōu)選-16℃～8℃，8～36小時(shí)；過(guò)濾條件為板框過(guò)濾或離心過(guò)濾或膜過(guò)濾；過(guò)濾后的藥液在減壓條件下，回收溶劑，回收溫度30℃～90℃，優(yōu)選40℃～75℃；每次回收溶劑后浸膏的相對(duì)密度為1.02～1.40(60℃)，優(yōu)選1.05～1.35(60℃)。(6)所指的水返溶條件為加入1∶1～1∶10(藥液∶水液，W/V)，優(yōu)選1∶1.5～1∶6(藥液∶水液，W/V)；水返溶液冷藏的條件為放置在10℃～-20℃過(guò)夜，優(yōu)選5℃～-10℃；冷藏液過(guò)濾條件是離心過(guò)濾或0.45μm濾膜過(guò)濾；濾液的濃縮條件為在45℃～95℃的減壓濃縮；藥物中間體的密度為1.10～1.40(60℃)，優(yōu)選1.15～1.35(60℃)。放置中間體冷庫(kù)的條件為10℃～-20℃，優(yōu)選5℃～-10℃。(7)所指藥物中間體的含量為氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總和不低于5mg/ml，優(yōu)選不低于15mg/ml。(8)所指中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰，并由苦參堿、槐果堿等組成。
7.權(quán)利要求1～3中的復(fù)方苦參注射液制備方法的技術(shù)特征在于(1)合格的藥物中間體加入計(jì)算量的注射用水或生理鹽水或等滲葡萄糖液，加入0.1％～10％注射用活性炭在40℃～100℃加熱5～30分鐘脫色，優(yōu)選1％～8％注射用活性炭在60℃～100℃加熱5～20分鐘；脫色液的過(guò)濾條件是0.22μm超微濾膜過(guò)濾。(2)所指的經(jīng)過(guò)2次以上的調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾過(guò)程，為先調(diào)pH至7.0～9.0，優(yōu)選pH7.5～8.8，冷藏，過(guò)濾；再調(diào)pH至3.0～6.5，優(yōu)選pH4.0～5.5，冷藏，過(guò)濾；再調(diào)pH至4.0～7.5，優(yōu)選pH5.0～7.0，冷藏，過(guò)濾；再調(diào)pH至7.5～9.5，優(yōu)選pH7.5～9.0，冷藏，過(guò)濾；所指的冷藏條件為放置在10℃～-20℃過(guò)夜，優(yōu)選5℃～-10℃；所指的過(guò)濾條件是0.10～0.45μm超微濾膜過(guò)濾，優(yōu)選0.22μm。(3)上述過(guò)濾液即為注射用藥液，測(cè)定藥物的含量和指紋圖譜；(4)注射用藥液再經(jīng)0.10～0.22μm精濾后，灌封，滅菌，即得不同規(guī)格的注射液。(5)注射液的規(guī)格為1～500ml，優(yōu)選2ml，5ml，10ml，12ml，20ml，25ml，50ml，100ml，250ml和500ml。(6)注射液中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量不低于2mg/ml，優(yōu)選5～80mg/ml。
8.權(quán)利要求1～4中的復(fù)方苦參凍干粉制備方法的技術(shù)特征在于(1)利用權(quán)利要求6和7(1)～7(3)得到注射用藥液經(jīng)0.10～0.22μm精濾后，灌封于西林瓶中，塞孔；放入冷凍機(jī)中，按照冷凍曲線冷凍干燥，取出得到的復(fù)方苦參凍干粉，鋁蓋壓口。(2)權(quán)利要求4(2)所指的藥物中間體與骨架材料按照1∶0.5～1∶3(中間體∶骨架材料，W/W)的配比進(jìn)行配制，優(yōu)選1∶1；骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖；(3)權(quán)利要求4(2)所指的活性炭脫色、過(guò)濾、調(diào)pH-冷藏-過(guò)濾環(huán)節(jié)的技術(shù)要求同權(quán)利要求7(1)和7(2)；(4)權(quán)利要求4(3)所指的得到注射用藥液與骨架材料按1∶0.5～1∶3(注射用藥液的固形物∶骨架材料，W/W)配比進(jìn)行配制，優(yōu)選1∶1；骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖；所指的精濾在100級(jí)的GMP車(chē)間內(nèi)用0.10～0.45μm超微濾膜過(guò)濾，優(yōu)選0.22μm。(5)凍干粉中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01～0.3g/支，優(yōu)選0.03～0.2g/支。
9.權(quán)利要求1～3和5中的注射用復(fù)方苦參粉針噴霧干燥工藝制備方法的技術(shù)特征在于(1)所指的相對(duì)密度為1.01～1.30，優(yōu)選1.05～1.15；(2)所指的噴霧干燥條件為噴氣壓力調(diào)節(jié)到2～5kg/cm2，抽力4～8kg/cm2，進(jìn)口溫度150～300℃，出口溫度50～100℃；(3)所指的得到注射用藥液與骨架材料按1∶0.5～1∶3(注射用藥液的固形物∶骨架材料，W/W)配比進(jìn)行配制，優(yōu)選1∶1；骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖；(4)所指的精濾是在100級(jí)的GMP車(chē)間內(nèi)用0.10～0.45μm超微濾膜過(guò)濾，優(yōu)選0.22μm。(5)粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01～0.3g/支，優(yōu)選0.03～0.2g/支。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的復(fù)方苦參凍干粉的凍干制備方法，其技術(shù)特征在于(1)每支西林瓶灌裝2ml或5ml或10ml或15ml或20ml，優(yōu)選5ml和10ml；(2)預(yù)凍溫度-10℃～-60℃，優(yōu)選-20℃～-50℃；(3)升華階段使真空度達(dá)到30Pa以下，按照每小時(shí)0.5～2℃的升溫速度給產(chǎn)品升溫，產(chǎn)品溫度達(dá)到-5℃～-10℃時(shí)，以每小時(shí)1～5℃的速度升溫，直至產(chǎn)品的溫度升到21℃～31℃，繼續(xù)保持2～8小時(shí)，使制品的溫度與擱板溫度重合(相差1℃以內(nèi))，放入無(wú)菌過(guò)濾氣體，使箱門(mén)能夠打開(kāi)，開(kāi)箱，迅速封口，即得冷干粉針。
11.根據(jù)權(quán)利要求1～10制備的產(chǎn)品具有抗腫瘤作用，其特征在于(1)具有抗腫瘤作用；(2)對(duì)化療藥具有增效減毒作用；
12.根據(jù)權(quán)利要求1～10制備的產(chǎn)品具有鎮(zhèn)痛作用。
13.根據(jù)權(quán)利要求1～10制備的產(chǎn)品具有升白和提高免疫功能的作用。
14.根據(jù)權(quán)利要求1～10制備的產(chǎn)品具有抗肝炎作用。
15.根據(jù)權(quán)利要求1～10制備的產(chǎn)品沒(méi)有發(fā)現(xiàn)毒副作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種注射用復(fù)方苦參制劑的制備方法及其在腫瘤和肝炎臨床治療中的用途。其配方是以苦參和白土苓為原料，可以是單獨(dú)提取后混合或混合提取。提取方法以水或稀酸或稀醇提取、濃縮，再經(jīng)多次醇沉－過(guò)濾－濃縮、水返溶、脫色、調(diào)pH得到注射用藥液，它可直接灌封為不同規(guī)格注射液，或加入分散劑經(jīng)冷凍干燥得到凍干粉，或經(jīng)噴霧干燥得到注射用粉末進(jìn)行分裝而制備得到。該制劑的特點(diǎn)是以氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿等為主要有效成分。該制劑具有抗腫瘤、緩解癌腫疼痛、對(duì)腫瘤的化療藥物具有增效解毒作用，同時(shí)還具有免疫增強(qiáng)作用，抗肝炎作用，可用于腫瘤和肝炎的臨床治療。
文檔編號(hào)A61K9/14GK1876016SQ20051007484
公開(kāi)日2006年12月13日 申請(qǐng)日期2005年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月7日
發(fā)明者王智民, 李安平 申請(qǐng)人:北京振東光明藥物研究院, 山西振東金晶制藥有限公司