專利名稱：：一種含有紅花黃色素b的復方制劑及其應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑領域，具體涉及一種由活性成分a):紅花黃色素B,和b):白藜蘆醇或白藜蘆醇苷組成的復方制劑及其在心腦血管中的應用。
背景技術：
：白黎蘆醇(Resveratrol)，化學名稱為芪三酚，屬于多酚類化合物。廣泛存在于葡萄、花生和多種藥用植物中，目前至少已經(jīng)在21個科、31個屬的72種植物中發(fā)現(xiàn)了白黎蘆醇。對白黎蘆醇生理功能的認識源于WHO的一項流行病學調(diào)查，流行病學調(diào)査資料顯示，法國人血管疾病的發(fā)病率明顯低于其他國家，這與其紅葡萄酒的攝入量較高有關，進一步研究證實，白黎蘆醇是紅葡萄酒中發(fā)揮心血管保護作用的主要物質(zhì)。白黎蘆醇具有廣泛的生物學活性，如抗癌、抗動脈粥樣硬化、抗凝血、抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)及神經(jīng)保護等。對心血管方面的作用，白黎蘆醇主要通過以下方面加于調(diào)節(jié)(1)減少缺血-再灌注心肌細胞凋亡，保護缺血性心肌細胞免收損傷；(2)減少低密度脂蛋白的氧化，阻斷氧化性低密度脂蛋白引起動脈粥樣硬化病變早期標^中脂質(zhì)條紋的形成，降低人血清脂質(zhì)水平；(3)抑制血栓烷的形成，同時還可降低由二磷酸腺苷(ADP)、膠原和凝血酶誘導的血小板聚集率；(4)通過抑制巨噬細胞中LPS誘導的核因子-kB而減少胞質(zhì)一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的穩(wěn)定狀態(tài)的mRNA水平，以達到抗氧化作用。紅花黃色素B為紅花中的有效成分之一，對其深入的研究目前尚且較少，中國專利CN1765357A公開了紅花黃色素B在心血管疾病方面的應用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明公開了一種由活性成分紅花黃色素B和選自白藜蘆醇或白藜蘆醇苷中的任一種組成的復方制劑。本發(fā)明中的復方制劑中，每一個最小單位制劑中所含紅花黃色素B的劑量為5-300mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷的劑量為5-300mg。本發(fā)明中的復方制劑中，每一個最小單位制劑中所含紅花黃色素B的劑量優(yōu)選為10-200mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷的劑量為10-200mg。本發(fā)明中所提到的"最小單位制劑"是至每種制劑的最小分包裝，如制成膠囊劑是指一個膠囊，制成片劑是至一片片劑，制成水針是指一支水針，制成粉針是指一支粉針，制成滴丸是指一個滴丸，其它制劑諸如此類推。研究中發(fā)現(xiàn)，將白藜蘆醇或白藜蘆醇苷與紅花黃色素B組合在一起，在治療心腦血管疾病方面具有很強的作用，其效價強于任何一種單一成分單獨使用。本發(fā)明復方制劑中除含有有效成分外，還含有藥學上可接受的其它輔料，如稀釋劑、潤滑劑、崩解劑、潤濕劑、助懸劑、乳化劑、防腐劑、助溶劑等。本發(fā)明活性成分所制成的制劑，可以是口服制劑，如口服固體制劑、口服液，也可以是非口服制劑，如注射劑，經(jīng)皮吸收制劑，經(jīng)直腸給藥制劑等。具體實施例以下從紅花黃色素B同,藜蘆醇或白藜蘆醇苷合用的體內(nèi)外實驗來說明本發(fā)明復方在心血管方面的協(xié)同治療作用。1、對冠狀動脈結(jié)扎誘導大鼠急性心肌缺血的保護作用50只wistar大鼠，雌雄不限，體重220-250g，隨機分為5組，每組10只，分別為假手術組(A組)、對照組(B組)、紅花黃色素B10mg/kg組(C組)、白藜蘆醇或白藜戸醇苷組15mg/kg(D組)、紅花黃色素B6mg/kg+白藜蘆醇或白藜蘆醇苷9mg/kg組(E組)。大鼠用3%己戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定，以心電圖機記錄n導聯(lián)心電圖監(jiān)測心臟情況，分離一側(cè)股靜脈供給藥用。用血管鉗沿第4肋間，鈍性分離肋問肌，開胸，撐開第4、5肋骨，剪開心包膜，暴露心臟。將心臟擠出胸腔。在左心耳與肺動脈圓錐之間找到與左冠狀動脈伴行的大靜脈并使之充分暴露，在左心耳下方2mm處用3號絲線穿線，連同心大靜脈一齊結(jié)扎左冠狀動脈前降支。結(jié)扎前于心大靜脈處放一小段細硅膠管，引線潤滑。結(jié)扎冠狀動脈后迅速將心臟放人胸腔，輕擠胸腔排出胸腔氣體及殘留血液。胸部皮膚用血管鉗閉合胸腔,引線尾端留在胸外。穩(wěn)定10min(穩(wěn)定后心電圖不正常者棄去)，缺血10min后從股靜脈緩慢注射給藥，20min后剪斷結(jié)扎線，使前降支再灌注30min。再灌后腹主動脈取血，離心取血清，以自動生化儀測定乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸酶活性(CPK)。見表l。結(jié)扎3h后立即取下心臟稱重，每組取5只冷凍。在冠脈結(jié)扎線下，平行于冠狀溝，將心室橫切成0.1cm厚的心肌片，生理鹽水沖洗后，置于0.05%氯化硝基四氮唑藍液(N—BT)37t:恒溫水浴中染色30min，染色過程中不時振搖染色液，使之與心肌充分接觸，染色后立即用水沖去多余染料。正常心肌染為暗藍色，梗死區(qū)不著色。減去梗死心肌稱重計算梗死區(qū)重占全心重的百分比。每組中的另5只將心肌希^成10%組織勻漿，3000r/min離心10min后取上清液-70°(:保存，待測丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)。測定時嚴格按照各試劑盒說明書進行。表l對心肌缺血大鼠CPK和LDH的影響G±s)組別劑量(mg/kg)CPK(U/mL)LDH(U/L)A—30.47±7.211617.15±187.64B——54.27±8.076781.47±218.21C1037.38±7.26*5475.39±247.65*D1536.20±7.58*5519.43±281.17*E6+931.47±8.13*5219.671257.37=*=與對照組相比，*P<0.01從上表中可知，心肌缺血組的CPK和LDH水平明顯高于假手術組，各治療組的CPK和LDH水平低于對照組，差別具有顯著意義(PO.01),復方組與單一成分組相比，在劑量分別低于各自單獨治療的情況下，其CPK和LDH水平較單一成分組要低，說明兩成分能協(xié)調(diào)降低CPK和LDH水平。表2對心肌缺血大鼠心肌梗死面積的影響(；±s)組別劑量(mg/kg)梗死百分比(°/(0A—0B一41.27±4.58C1034.56±3.47*D1530.24士3，E6+927.59±3.26*與對照組相比，*P<0.05研究結(jié)果顯示，用TUNEL法染色的陽性心肌細胞具有形態(tài)變圓或不規(guī)則，與周圍組織脫離、核固縮、染色質(zhì)濃聚等典型的凋亡細胞的形態(tài)特征，主要位于心肌梗死區(qū)與非梗死區(qū)交界處，而在心肌梗死區(qū)和非梗死區(qū)僅見極少數(shù)凋亡細胞。與心肌缺血對照組相比，預先給予治療藥物后，凋亡指數(shù)有不同程度的降低，差異有顯著性(P0.05)，其中尤為明顯的是復方組。表3對心肌缺血大鼠SOD、MDA活性的影響(；±s)與假手術組相比，#P<0.01;與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01大鼠冠狀動脈結(jié)扎后，模型組大鼠血清SOD含量顯著降低，MDA含量顯著升高，與假手術組相比，具有顯著差異(PO.Ol)，預先給予藥物處理后，其血清SOD含量較模型組升高，差別有顯著性(P<0.05)，復方組差異更為明顯(PO.Ol)，血mg/kgSOD(imol/L固AU/mL一268.5±40.3—142.6±37.5#10217.4±39.7*15228.3±41.3*6+9260.8±41.2**5.37±0.5110.14±1.04#8.62±0.81*8.13±0.57*7.06±0.54*且自ABcDE清MDA含量較模型組降低，各組差別均有顯著性。2、對局灶性永久性腦缺血損傷的保護作用Wistar大鼠24只，雌雄不限。照文獻(TamuraA，GrahamDI，McCullochJ，etal.Focalcerebralischaemiaintherat;1.Descriptionoftechniqueandearlyneuropathologicalconsequencesfollowingmiddlecerebralarteryocclusion[J].JCerebBloodFlowMetab,1981,1(1)53-60)方法進行造局灶性永久腦缺血模型。大鼠以12%水合氯醛麻醉(350mg/kg，ip)，側(cè)臥位固定于手術臺上，沿右外耳道與右眼外眥連線的中點垂直于連線切開皮膚約2cm，然后在手術顯微鏡下沿顳肌中線依次切斷顳肌和咬肌，將這些肌肉向兩側(cè)分開，暴露顴骨弓，操作時注意保護面神經(jīng)和腮腺。除去顴骨弓，并沿顱骨剪開筋膜，暴露出顳前窩。在顴骨和鱗狀骨前聯(lián)合的前下方約2mm處鉆一直徑2mm的顱窗，透過硬腦膜就可見一條較直且少分支的小血管，即為中動脈(MCA)。MCA幾乎垂直經(jīng)過嗅束上行。用電凝電灼凝固嗅束內(nèi)lmm至大腦下靜脈(inferiorcerebralvein)之間的MCA。電凝時，用細分針輕挑起與嗅束交界處的MCA，盡量減少血管內(nèi)血量，避免電凝不完全引起的出血，同時用濕棉球保護周圍組織避免燒傷。阻斷MCA后，用小塊肌肉組織輕敷于顱窗上，達到止血作用，術后同籠詞養(yǎng)。以上過程均在恒定室溫進行。將造好膜的大鼠隨機分為4組，分別為陰性對照組(給予給藥組等同體積的生理鹽水)，紅花黃色素B10mg/kg組、白藜蘆醇15mg/kg、紅花黃色素B6mg/kg+白黎蘆醇9mg/kg組，尾靜脈注射給藥。結(jié)果見表4表4對局灶性永久性腦缺血損傷大鼠的保護作用(；土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>大鼠局灶性腦缺血給予藥物治療后，與對照組相比，腦壞死率明顯減少(PO.05),其中復方組在較低劑量即可達到白藜蘆醇或紅花黃色素B單獨治療的效果。3、對大鼠全腦缺血-再灌注損傷的保護作用Wistar大鼠24只，雌雄不限，找文獻(徐叔云，卞如濂，等.藥理實驗方法[M]，北京人民衛(wèi)生出版社，1991,945-947.)采用四動脈閉塞法建立模型。大鼠用12%水合氯醛麻醉，在枕后暴露第一頸椎橫突孔，用電凝電灼凝固雙側(cè)椎動脈，在顱骨上鉆孔安置皮層腦電極，用牙托粉固定。然后在頸部作一切口分離雙側(cè)頸動脈，用l號絲線縫合傷口。術后24h、大鼠清醒時，用帶硅膠管的無損傷動脈夾將雙側(cè)頸動脈夾閉，即造成4根動脈閉塞引起全腦缺血，lh后松開動脈夾。缺血期與再灌期時間均為lh。用生理記錄儀記錄缺血后腦電圖消欠時間和恢復再灌注后腦電圖恢復時間。凡缺血期內(nèi)腦電圖未消失或未出現(xiàn)嚴重抑制者一律剔除。對造模成功的24只大鼠，分組，分組情況及給藥方式同2項。給藥時間在缺血前l(fā)min。評價指標及相應數(shù)據(jù)見表5表5對大鼠全腦缺血-再灌注損傷的保護作用(；土s)組別劑量mg/kg腦電圖消失時間/s腦電圖恢復時間/s腦含水量/%對照組(生理鹽水)紅花黃色素B白黎戸醇紅花黃素素B+白藜蘆醇10156+9142±85310±127*267±103*321±131*621±227120土57**143±62**103±51**肌1±1.078.4±0.6*78.7土0.5*78.1±0.6*與對照組相比，*P<0.05，**P<0.01實驗結(jié)果表明，各給藥組與生理鹽水組相比，均能延長全腦缺血-再灌注大鼠缺血后腦電圖消失時間，明顯縮短腦電圖恢復時間，并能明顯改善大鼠腦水腫情況(P0.05，PO.Ol)，但復方組較單一成分組作用效果更為明顯。下文提到的是本發(fā)明制劑配方說明性而非限定性實例1)、白黎蘆醇5g紅花黃色素B300g2)、白藜蘆醇300g紅花黃色素B5g3)、白藜蘆醇10g紅花黃色素B200g4)、白藜蘆醇200g紅花黃色素B10g5)、白藜蘆醇100g紅花黃色素B150g6)、白藜蘆醇苷150g紅花黃色素B100g7)、白藜蘆醇苷150g紅花黃色素B150g8)、白藜蘆醇50g紅花黃色素B250g淀粉700g9)、白黎蘆醇10g紅花黃色素B15g甘露醇400g上述組合物通過適宜的制劑工藝，加上一些適宜的藥用輔料，可制成口服、非腸道、直腸或透皮給藥的固體、半固體、液體、半液體、粉末、顆粒或脂質(zhì)體形式。上述處方為iooo個制劑單位的原料藥處方。權利要求1、一種含有紅花黃色素B的復方制劑，其特征是所述復方制劑由活性成分a)紅花黃色素B，和；b)白藜蘆醇或白藜蘆醇苷；組成。2、如權利要求1所述的復方制劑，其中每一個最小單位制劑中含紅花黃色素B劑量為5-300mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷劑量為5-300mg。3、如權利要求2所述的復方制劑，其中每一個最小單位制劑中含紅花黃色素B劑量為10-200mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷劑量優(yōu)選為10-200mg。4、如權利要求1、2或3所述的復方制劑在制備具有預防或治療心腦血管疾病的藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明涉及一種由紅花黃色素B和白藜蘆醇或白藜蘆醇苷組成的復方制劑，每個最小單位制劑中，含紅花紅色素B為5-300mg，含白藜蘆醇或白藜蘆醇苷為5-300mg。本發(fā)明復方制劑具有保護缺血性心肌細胞和缺血性腦細胞免受損傷的作用，可用以制備具有預防和治療心腦血管疾病的藥物。文檔編號A61K31/045GK101352430SQ20071011945公開日2009年1月28日申請日期2007年7月25日優(yōu)先權日2007年7月25日發(fā)明者熊國裕申請人:北京星昊醫(yī)藥股份有限公司