專利名稱：一種穿心蓮內酯凍干粉針劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于中藥制藥技術領域，具體涉及一種穿心蓮內酯凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術：
穿心蓮系爵床科植物，具有清熱解毒功效，主治泄瀉痢疾、感冒發熱、咽喉腫痛、口舌生瘡、癰腫瘡瘍。穿心蓮內酯(Andrographolide)系自爵床科植物穿心蓮Andrographis Paniculata(Burm.f.)NeeS中提取得到的二萜內酯類化合物，是中藥藥用植物穿心蓮的重要提取物和有效活性成份，具有清熱解毒、涼血消腫等功能。
現代藥理研究表明，穿心蓮內酯及其衍生物(如脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯、穿琥寧注射液、蓮必治注射液、病毒凈滴眼液、復方穿琥寧涂膜劑等)具有消炎解熱抗菌、抗病毒感染、抗腫瘤、抗心血管疾病、免疫刺激、保肝利膽及抗生育等作用，臨床用于上呼吸道炎癥和細菌性痢疾等癥，臨床也用于菌痢、腸炎、傷寒、呼吸道感染、鉤體病、結核病、麻風病、皮膚感染、肝炎、中耳炎、盆腔炎、絨毛膜上皮癌、亞性葡萄胎、引產、血栓閉塞性脈管炎等。穿心蓮內酯化學結構式中二萜雙環母核及其五元內酯環結構為清熱解毒的基本骨架。由于穿心蓮內酯化合物難溶于水，目前都采用化學結構修飾的辦法引進親水基團制備各種穿心蓮內酯鹽制劑。但是，這些藥品改變了穿心蓮內酷化合物的結構，因其結構的變化降低了穿心蓮內酯的藥物活性作用，而且提高了藥物毒副作用；而穿心蓮全草粗提取物人體直接用藥，成份復雜且有效成成份生物利用度低。近年來屢有報道，使用穿心蓮提取物制劑(例如穿琥寧制劑)產生不良反應的報道。臨床應用的蓮必治注射液(亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯)由于亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯具有一個二萜的內酯結構，其水溶液對熱不穩定，易開環降解，在貯存過程中不穩定，放置一段時間后pH值會明顯降低，同時含量有所下降，從而影響療效，使臨床用藥的質量受到影響，給藥物的制備和貯藏帶來不便，同時水溶液運輸也存在不便。
專利(申請號200310111332和申請號200310112722)分別公開了亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯粉針劑的制備方法，以上專利采用常規工藝將亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯制備成粉針，沒有創造性，雖然在一定程度上提高了穩定性，但由于亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯是的加成產物，因此與穿心蓮內酯相比其活性、療效、毒副作用有一定影響，且對內酯環的穩定性沒有本質改變。專利(申請號03111128)公開了一種環糊精包合穿心蓮內酯的方法及其制劑，該專利中用超聲法包合穿心蓮內酯，穿心蓮內酯用量為3-8g，環糊精或衍生物用量為10-80g，該范圍跨度比較大，其包合的具體效果也未知，而研究表明不同環糊精衍生物包合不同藥物時具有較強的選擇性，用量也有顯著差別，而以上用量在說明書中也沒有得到具體體現，從該專利的實施例中可以看出包合時的羥丙基-β-環糊精用量為穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精為1∶3到1∶5，但研究表明用羥丙基-β-環糊精包合藥物時用量在該比例范圍時包合效果比較差，包合率和藥物利用率都極低，而且從該專利實施例1可以知道該專利半成品穿心蓮內酯包合物以溶液狀態直接與輔料混合制備凍干粉，顯然這不符合中藥注射劑與凍干制劑新藥研究的基本要求，不利于質量控制。

發明內容
基于上述原因，本發明經反復研究，優選了穿心蓮內酯用羥丙基-β-環糊精包合的最佳方法及用量，穿心蓮內酯包合物與藥用輔料混合制備成凍干粉針劑，本發明的穿心蓮內酯凍干粉針劑具有很好的穩定性、溶解度，藥理實驗表明本發明具有更好的藥理作用。
本發明的目的在于提供一種穩定性好、療效顯著的穿心蓮內酯凍干粉針劑。
本發明的目的還在于提供該凍干粉針劑的制備方法。
本發明通過以下技術方案實現。
一、工藝制法(1)取穿心蓮內酯，以飽和水溶液法用羥丙基-β-環糊精進行包合稱取羥丙基-β-環糊精，加蒸餾水加熱溶解，配成飽和溶液，冷至室溫，按穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精＝1∶10-18的比例加入穿心蓮內酯，邊加邊攪拌，攪拌時間2-5小時，溫度控制45℃以下，靜置，離心，濾過，低溫干燥，得到穿心蓮內酯包合物；(2)本發明的制劑的處方重量份組成為穿心蓮內酯包合物為29-60份，藥用輔料為2-11份；(3)按照本發明制劑處方取穿心蓮內酯包合物和藥用輔料混合，加注射用水溶解完全，調節pH值為4-6，用0.22um的濾膜過濾，濾液注入西林瓶中，冷凍干燥，得到穿心蓮內酯凍干粉針劑。
羥丙基-β-環糊精是近年來應用日益廣泛的一種衍生物，與傳統常用的β-環糊精比較具有水溶性顯著提高，熱穩定性好，溶血作用顯著降低的優點，且能用于注射制劑，本發明將水溶性和穩定性都較差的穿心蓮內酯用羥丙基-β-環糊精進行了包合，可顯著增強藥物的穩定性，提高藥物在水中溶解度，利于制備凍干粉針劑，采用本發明制備工藝制備的凍干粉針劑其藥效作用也得到了顯著提高。
二、包合方法的選擇分別取穿心蓮內酯采用常用的包合方法飽和水溶液法、超聲法、噴霧干燥法進行了比較實驗，并分別測定各組實驗的包合率。
飽和水溶液法將羥丙基-β-環糊精溶于蒸餾水中，加熱溶解，制成飽和溶液，冷至室溫，取穿心蓮內酯4g加乙醇溶解，按穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精(1∶10)的比例加入的飽和溶液中，邊加邊攪拌，攪拌時間4小時，溫度控制45℃以下，靜置，濾過，低溫干燥，即得。
研磨法取5倍量水與羥丙基-β-環糊精40g混合，再將穿心蓮內4g溶于乙醇中，加入混合物中，在研磨機中充分研磨5小時，低溫干燥，即得。
超聲波法(參照專利申請號03111128公開的方法)；用蒸餾水配制濃度40-60％的乙醇溶液，將穿心蓮內酯4g加入到醇溶液中，加熱至60-75℃，使之溶解；羥丙基-β-環糊精40g與注射用蒸餾水溶解后加入到穿心蓮內酯醇溶液中，移至超聲波發生器中超聲振蕩30-45分鐘，控制溫度45℃以下，靜置，低溫干燥，即得。
噴霧干燥法將羥丙基-β-環糊精40g溶于水中，加熱溶解成溶液，冷至室溫，取穿心蓮內酯4g加乙醇溶解，按穿心蓮內酯羥丙基-β-環糊精(1∶10)的比例加入至的羥丙基-β-環糊精飽和溶液中，邊加邊攪拌，攪拌0.5小時后，進行噴霧干燥，噴霧干燥條件為進風口溫度170℃～180℃，出風口溫度70～80C，壓力0.04-0.05MPa，即得。
分別測定以上四種方法所得穿心蓮內酯包合物的包合率，結果見表1。
表1 不同方法包合率比較

由以上試驗結果可知。以上四種方法中在主客體比例相同的情況下，包合率不盡相同，以飽和水溶液法包合率最高，說明穿心蓮內酯用飽和水溶液法包合效果較好。
三、包合工藝羥丙基-β-環糊精最佳用量的確定為了進一步篩選本發明羥丙基-β-環糊精包合的最佳用量，根據上述試驗用飽和水溶液法以下述試驗設計對包合工藝最佳用量進行了進一步確定，分別測定包合率和穿心蓮內酯利用率，結果見表2。
穿心蓮內酯測定方法參照文獻方法(傅欣彤，周富榮，張利民。高效液相色譜法測定制劑中穿心蓮內酯的含量。中國中藥雜志，1995，20(6)351-352)進行。
表2 不同羥丙基-β-環糊精用量包合效果比較

由以上試驗結果可知，羥丙基-β-環糊精包合穿心蓮內酯具有很強的選擇性，客體的投入量對包合率有較大的影響，其中穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精比例為1∶10時比1∶8時包合率顯著提高，繼續增加比例至1∶18時，包合率都在90％以上，且比較穩定，而羥丙基-β-環糊精比例增加至1∶20后包合率反而降低，因此說明本發明穿心蓮內酯用羥丙基-β-環糊精包合時的最佳用量為1∶10至1∶18。
四、穩定性實驗實驗藥物本發明凍干粉針劑(廣東天之驕藥物開發有限公司實驗室提供)；市售蓮必治注射液(無錫山禾藥業股份有限公司)。
實驗方法采用加速實驗方法進行穩定性實驗，將市售蓮必治注射液和本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑放置在室溫37℃，相對濕度為75％的條件保存，分別測定蓮必治注射液的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯和本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑穿心蓮內酯的含量并同0月比較。實驗結果見表3
表2 藥物干浸膏與單一基質的組合實驗(藥物干浸膏∶基質＝1∶3)

表3 藥物干浸膏與單一基質的組合實驗(藥物干浸膏∶基質＝1∶9)

結論通過上述藥理實驗表明，本發明的穿心蓮內酯凍干粉針劑與蓮必治注射液、穿琥寧注射液比較具有更好的抗菌作用。
2.抗病毒作用實驗方法取小鼠120只，雌雄各半，隨機分為4組，每組30只，小鼠用乙醚輕度麻醉后，每鼠滴鼻給予滴度為1∶320鼠肺炎病毒0.04ml，次日腹腔注射給藥，本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑組劑量為50mg/kg，蓮必治注射液組給藥劑量為100mg/kg，穿琥寧注射液組給藥劑量為50 mg/kg，生理鹽水組以0.2ml生理鹽水腹腔注射，連續給藥7d，觀察20d，記錄動物死亡數，結果見表5。
表5 對小鼠感染肺炎死亡率的影響

結論以上藥理實驗結果表明本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑能顯著降低小鼠感染肺炎病毒死亡率，且具有比蓮必治注射液、穿琥寧注射液更好的藥理作用。
3.解熱試驗實驗方法選取健康新西蘭白兔50只，體重為1000-1250g，雌雄各半，實驗當日測肛溫3次，取平均值作為正常體溫，然后于背部皮下注射5％酵母懸液5ml/kg，5小時后選擇體溫上升0.8℃以上的新西蘭白兔40只，隨機分為生理鹽水組，蓮必治注射液、穿琥寧注射液、本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑組，每組動物10只。給藥組腹腔注射給藥，本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑組給藥劑量為50mg/kg，蓮必治注射液組給藥劑量為100mg/kg，穿琥寧注射液組給藥劑量為50mg/kg，生理鹽水組給予0.2ml生理鹽水腹腔注射。給藥后分別于1、2、3小時各測體溫1次，比較各組動物體溫下降值的差異，結果見表6。
表6對新西蘭白兔的解熱作用

注與生理鹽水組比較*P＜0.05，**P＜0.01結論以上藥理試驗表明本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑具有較好的解熱作用，且比蓮必治注射液、穿琥寧注射液作用更強。
4.抗炎試驗；實驗方法取健康小鼠40只，雌雄各半，隨機分為4組，分為生理鹽水組、蓮必治注射液組，穿琥寧注射液組，本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑組、給藥組腹腔注射給藥，本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑組給藥劑量為50mg/kg，蓮必治注射液組給藥劑量為100mg/kg，穿琥寧注射液組給藥劑量為50mg/kg，生理鹽水組給予0.2ml生理鹽水腹腔注射，每天給藥1次，共7天，末次給藥1h，用二甲苯棉球接觸小鼠左耳約5s，15分鐘后脫頸椎處死小鼠，剪下雙耳，打孔稱重，計算每組小鼠的耳腫脹度，并求抑制率，結果見表7。
表7 對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

注與生理鹽水組比較*P＜0.05，**P＜0.01結論以上藥理試驗表明本發明穿心蓮內酯凍干粉針劑具有較好的抗炎作用，且比蓮必治注射液、穿琥寧注射液作用更強。
六、制備實施例實施例1
(1)取穿心蓮內酯50g，采用飽和水溶液法用羥丙基-β-環糊精進行包合稱取羥丙基-β-環糊精，加蒸餾水加熱溶解，配成飽和溶液，冷至室溫，按照穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精＝1∶10的比例加入穿心蓮內酯，邊加邊攪拌，攪拌時間2小時，溫度控制45℃以下，靜置，離心，濾過，低溫干燥，得到穿心蓮內酯包合物590g；(2)本發明的制劑的處方為穿心蓮內酯包合物590g，甘露醇為60g。
(3)取穿心蓮內酯包合物和藥用輔料混合，加注射用水溶解完全，調節pH值為4-6，用0.22um的濾膜過濾，濾液注入西林瓶中，冷凍干燥，得到穿心蓮內酯凍干粉針劑1000瓶。
實施例2(1)取穿心蓮內酯40g，采用飽和水溶液法用羥丙基-β-環糊精進行包合稱取羥丙基-β-環糊精，加蒸餾水加熱溶解，配成飽和溶液，冷至室溫，按照穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精＝1∶15的比例加入穿心蓮內酯，邊加邊攪拌，攪拌時間3小時，溫度控制45℃以下，靜置，離心，濾過，低溫干燥，得到穿心蓮內酯包合物600g；(2)本發明的制劑的處方為穿心蓮內酯包合物600g，乳糖50g；(3)取穿心蓮內酯包合物和乳糖混合，加注射用水溶解完全，調節pH值為4-6，用0.22um的濾膜過濾，濾液注入西林瓶中，冷凍干燥，得到穿心蓮內酯凍干粉針劑1000瓶。
實施例3(1)取穿心蓮內酯30g，采用飽和水溶液法用羥丙基-β-環糊精進行包合稱取羥丙基-β-環糊精，加蒸餾水加熱溶解，配成飽和溶液，冷至室溫，按照穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精＝1∶18的比例加入穿心蓮內酯，邊加邊攪拌，攪拌時間4小時，溫度控制45℃以下，靜置，離心，濾過，低溫干燥，得到穿心蓮內酯包合物550g；(2)本發明的制劑的處方為穿心蓮內酯包合物550g，果聚糖50g；(3)取穿心蓮內酯包合物和果聚糖混合，加注射用水溶解完全，調節pH值為4-6，用0.22um的濾膜過濾，濾液注入西林瓶中，冷凍干燥，得到穿心蓮內酯凍干粉針劑1000瓶。
實施例4(1)取穿心蓮內酯30g，采用飽和水溶液法用羥丙基-β-環糊精進行包合稱取羥丙基-β-環糊精，加蒸餾水加熱溶解，配成飽和溶液，冷至室溫，按照穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精＝1∶10的比例加入穿心蓮內酯，邊加邊攪拌，攪拌時間5小時，溫度控制45℃以下，靜置，離心，濾過，低溫干燥，得到穿心蓮內酯包合物290g；(2)本發明的制劑的處方為穿心蓮內酯包合物290g，甘露醇80g，右旋糖苷30g；(3)取穿心蓮內酯包合物和甘露醇、右旋糖苷混合，加注射用水溶解完全，調節pH值為4-6，用0.22um的濾膜過濾，濾液注入西林瓶中，冷凍干燥，得到穿心蓮內酯凍干粉針劑1000瓶。
實施例5(1)取穿心蓮內酯40g，采用飽和水溶液法用羥丙基-β-環糊精進行包合稱取羥丙基-β-環糊精，加蒸餾水加熱溶解，配成飽和溶液，冷至室溫，按照穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精＝1∶10的比例加入穿心蓮內酯，邊加邊攪拌，攪拌時間3小時，溫度控制45℃以下，靜置，離心，濾過，低溫干燥，得到穿心蓮內酯包合物410g；
(2)本發明的制劑的處方為穿心蓮內酯包合物410g，葡萄糖90g；(3)取穿心蓮內酯包合物和葡萄糖混合，加注射用水溶解完全，調節pH值為4-6，用0.22um的濾膜過濾，濾液注入西林瓶中，冷凍干燥，得到穿心蓮內酯凍干粉針劑1000瓶。
實施例6(1)取穿心蓮內酯40g，采用飽和水溶液法用羥丙基-β-環糊精進行包合稱取羥丙基-β-環糊精，加蒸餾水加熱溶解，配成飽和溶液，冷至室溫，按照穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精＝1∶12的比例加入穿心蓮內酯，邊加邊攪拌，攪拌時間4小時，溫度控制45℃以下，靜置，離心，濾過，低溫干燥，得到穿心蓮內酯包合物480g；(2)本發明的制劑的處方為穿心蓮內酯包合物480g，甘露醇20g；(3)按照本發明制劑處方取穿心蓮內酯包合物和甘露醇混合，加注射用水溶解完全，調節pH值為4-6，用0.22um的濾膜過濾，濾液注入西林瓶中，冷凍干燥，得到穿心蓮內酯凍干粉針劑1000瓶。
權利要求
1.一種穿心蓮內酯凍干粉針劑，其特征在于制劑處方重量份組成為穿心蓮內酯包合物29-60份，藥用輔料2-11份。
2.根據權利要求1所述的一種穿心蓮內酯凍干粉針劑的制備方法，其特征包括以下步驟(1)取穿心蓮內酯，采用飽和水溶液法稱取羥丙基-β-環糊精，加蒸餾水加熱溶解，配成飽和溶液，冷至室溫，按照穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精＝1∶10-18的比例加入穿心蓮內酯，邊加邊攪拌，攪拌時間2-5小時，溫度控制45℃以下，靜置，離心，濾過，低溫干燥，得到穿心蓮內酯包合物；(2)按本發明制劑處方取穿心蓮內酯包合物和藥用輔料混合，加注射用水溶解完全，調節pH值為4-6，用0.22um的濾膜過濾，濾液注入西林瓶中，冷凍干燥，得到穿心蓮內酯凍干粉針劑。
3.根據權利要求1所述的一種穿心蓮內酯凍干粉針劑，其特征在于穿心蓮內酯包合物用羥丙基-β-環糊精進行包合的比例為穿心蓮內酯∶羥丙基-β-環糊精＝1∶10-18。
全文摘要
本發明公開了一種穿心蓮內酯凍干粉針劑及其制備方法，其特征在于將穿心蓮內酯活性成分，用經優選的方法和最佳用量的羥丙基－β－環糊精包合，提高了穿心蓮內酯的穩定性、溶解度，與藥用輔料混合，制備成凍干粉針劑。藥理實驗結果表明，本發明的穿心蓮內酯凍干粉針劑，具有更好的藥理作用。
文檔編號A61P11/00GK1679546SQ20051000489
公開日2005年10月12日 申請日期2005年2月4日 優先權日2005年2月4日
發明者張海峰 申請人:張海峰