專利名稱：一種胎盤多肽注射液制備方法
技術領域：
本發明涉及一種生物化學藥品的制備方法，具體涉及一種胎盤多肽注射液制備方法。
背景技術：
當前市場上的胎盤制品，如胎盤組織注射液，主要生產工藝沿襲傳統中藥炮制方法，采用高溫煮沸提取，減壓濃縮等工藝制備，另外，也有企業使用抗體檢查后的胎盤作為原料，采用低溫提取工藝制備胎盤制劑，在乙型肝炎的治療過程中輔助使用。前者容易做到，將產品中的可能殘留的病毒滅活，從而保障產品的安全，但由于是在高溫下操作，因此，但出現將產品中的活性成分減少或活性降低極低的情況，后者則恰好與前者相反，由于是低溫操作，雖然可以較好的保持產品的活性，以保證其效力，但卻容易出現些病毒不會被去除或滅活，從而便產品的安全性受到影響的情況。在中藥材制作中的胎盤叫紫河車，現介紹如下
紫河車[異名]胞衣《梅師集驗方》，混沌皮、混元丹《本草蒙簽》，胎衣、混沌衣《綱目》。 [基原]為健康人的胎盤。[藥材]干燥的胎盤為不規則的類圓形或橢圓形碟狀，直徑9 16厘米，厚薄不一。紫紅色或棕紅色，有的為黃色。一面凹凸不平，有多數溝紋，為絨毛葉； 一面為羊膜包被，較光滑，在中央或一側附有臍帶的殘余，四周散布細血管，每具重50 100克。質硬脆，有腥氣，以整齊、黃色或紫紅色、潔凈者為佳。[成分]胎盤的成分較復雜。 胎盤球蛋白制品中含有多種抗體，在臨床上長期以來用于被動免疫。人胎盤中還含有干擾素(interferon商品胎盤球蛋白中也多半含有)，它有抑制多種病毒對人細胞的作用，以及含有能抑制流感病毒的巨球蛋白，稱β—抑制因子。胎盤含有與血液凝固有關的成分，其中有類似凝血因子XIII的纖維蛋白穩定因子；尿激酶Urokinase)抑制物(能抑制尿激酶活化纖維蛋白溶酶元的作用)和纖維蛋白溶酶元活化物。通常情況下纖維蛋白溶酶元活化物的作用低于抑制物。人胎盤中含有的激素有促性腺激素A和B、催乳素，促甲狀腺激素、催乳素樣物質，多種留體激素如雌酮、雌二醇、雌三醇、孕甾嗣、雄甾酮、去氧皮質甾酮、11一去氫皮質甾酮(化合物A)、可的松(化合物 E)、17—羥皮質留酮(化合物F)等。人胎盤催乳素與人垂體生長激素的化學結構上相關， 有免疫交叉反應，在垂體切除大鼠與生長激素也有明顯的協同作用，所以也稱催乳素一生長激素；或謂胎盤催乳素有生長激素的作用。人胎盤的酸性抽提物中還得到較多量的能松馳大鼠十二指腸和降大鼠血壓的成分，其性質同前列腺素Ep人胎盤中含有多種有應用價值的酶，如溶菌酶、激肽酶、組胺酶、催產素酶等。另含紅細胞生成素、磷脂(其中卵磷脂占45. 5 46. 5%)、多種多糖。[藥理]①抗感染作用胎盤Y—球蛋白含有麻疹、流感等抗體以及白喉抗毒素等， 可用于預防或減輕麻疹等傳染病。因系蛋白質，故口服無效，必須注射。胎盤Y—球蛋白中還含干擾素，臨床上可用于預防或控制病毒感染。胎盤中還含有溶菌酶，可防止小鼠(腹腔注射)由腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、弗氏痢疾桿菌的內毒素引起的死亡；對內毒素對大鼠的傷害也有一定的保護作用；但對大腸桿菌引起的內毒素血癥無作用。②增強機體抵抗力給小鼠口服胎盤粉，能減輕其結核病變，而在試管中反能促進結核桿菌的生長，故認為其作用主要在于增加機體抵抗力。③激素樣作用，胎盤在生理上能產生絨毛膜促性腺激素，對卵巢作用很小，但對睪丸則有興奮作用；此外，也能產生雌激素及孕激素。胎盤中可能含有這些激素，因而具有這些激素的藥理作用。絨毛膜促性腺激素是蛋白質類物質，口服無效，需要注射。④對血凝的影響胎盤中含有所謂“尿激酶抑制物”，能抑制尿激酶對纖維蛋白溶酶元的“活化”作用；此可解釋妊娠時纖維蛋白溶酶元活性之降低。據測定，妊娠時子宮肌層中纖維蛋白溶酶元活化物與尿激酶抑制物的比例為1:34，而胎中二者之比例則高達 1:1197。人胎盤中含有低分子的凝血因子XIII (—種糖蛋白)，因此可用來治療因XIII凝血因子缺乏的出血患者。此種凝血因子不僅能穩定纖維蛋白凝塊、促進創傷愈合，在動物實驗中還有抗組織胺的作用。(5)其他作用在離體試驗中，胎盤提取物能促進受抑制心臟的恢復。胎盤蛋白中，含有“腎素樣”的升壓物質，在血液循環的調節上，其意義尚待進一步闡明。人胎盤中尚含某種糖蛋白成分，在體外試驗中，能抑制淋巴細胞中DNA的合成，但不影響細胞的活力。胎盤提取物大量時能抑制去氧麻黃堿引起的發熱等等多種作用。功用主治補氣，養血，益精。治虛損，贏瘦，勞熱骨蒸、咳喘，咯血，盜汗，遺精， 陽痿，婦女血氣不足，不孕或乳少。臨床報道①治療支氣管哮喘②治療慢性氣管炎用新鮮胎盤制成20%蒸餾液，每日肌注1次，每次2毫升，10天為一個療程6治療久病體弱、經過其他方法治療不效而反復發作之患者47例，結果無效17例，顯效24例，好轉6例。對咳、痰、喘都有一定的療效， 患者體質也有不同程度的增強。未見副作用。③治療皮膚潰瘍；④治療母乳缺乏癥。《中醫藥大辭典》上海出版社，1985年版，P2363。

發明內容
本發明的目的在于提供一種既可確保有效成分、即在胎盤收集后通過檢驗選出無乙肝、無丙肝、無艾滋病、無梅毒等病毒的原料，改進制作方法，提供一種既可確保有效成分、又可較為徹底殺死病原微生物的胎盤多肽注射液的新型制備方法；制作出的胎盤多肽注射液，除了能作免疫調節劑外，還用在治療下肢骨折的臨床和創面愈合方面有明顯療效。為達到上述的目的，一種胎盤多肽注射液制備方法，發明的方法依次包括以下步驟
(1)、收集健康產婦足月分娩的胎盤，將其胎盤清洗干凈，浙干；
(2)、按胎盤與生理鹽水51的比例加入0. 75 1. 0% (質量百分比)生理鹽水，將胎盤搗碎得到胎盤組織漿；
(3)、再按胎盤組織漿與0.75% 1%(質量百分比)生理鹽水1 :4比例配制好透析液后， 進行透析；共透析3次，第1、2次分別為20 24小時，第3次為40 50小時；
(4)、取經過3次透析后的透析液，澄清，上清液先經過0.45Mfli 1. 0 Mm孔徑的濾芯過濾，再用分子量為5000 10000道爾頓的膜進行超濾；超濾后，在60°C 士0. 5°C下連續10 小時病毒滅活；
(5)將進行病毒滅活后的超濾液用0.22ΜΠ1濾芯除菌過濾后，灌封，檢漏。
本方法首先進行原料胎盤病毒檢驗，即在胎盤收集后通過檢驗選出無乙肝、無丙肝、無艾滋病、無梅毒等病毒的原料胎盤。本方法制備的產品為無色或淡黃色澄清液體。由于本發明的操作步驟中，即在胎盤收集后通過檢驗選出無乙肝、無丙肝、無艾滋病、無梅毒等病毒的原料，改進制作方法，并60°C 士 0.5°C連續10小時病毒滅活，增加了低溫透析工藝，提供一種既可確保胎盤多肽注射液有效成分、又可較為徹底殺死在胎盤多肽注射液的病原微生物的新型制備方法。制作出的胎盤多肽注射液，除了能作免疫調節劑外， 還用在治療下肢骨折的臨床和創面愈合方面有明顯療效，預先除去殺死在胎盤多肽注射液的病原微生物殘留物。得到的產品，既確保制品生產和使用的安全性，又提高了產品的生產率，同時最大程度的保留原有成分的活性。下面通過具體實施方式
對本發明的方法作詳細的描述。
具體實施例方式
實施例1
一種胎盤多肽注射液制備方法，首先進行原料胎盤病毒檢驗，即在胎盤收集后通過檢驗選出無乙肝、無丙肝、無艾滋病、無梅毒等病毒的胎盤； 具體依次包括如下步驟 (1)、收集健康產婦足月分娩的胎盤，將其20個胎盤清洗干凈，浙干得胎盤約7000克；
(2)、按胎盤組織與生理鹽水51的比例加入0. 75% 1% (質量百分比)生理鹽水，搗碎得到胎盤組織漿8400克；
(3)、按胎盤組織漿與0.75% 1% (質量百分比)生理鹽水按1 :4比例配制透析液，然后進行透析；共透析3次，第1、2次分別為20 M小時，第3次為40 50小時；
(4)、收集3次透析液提總量90.7L ；
(5)、取3次透析后的透析液，澄清后用0.45Mfli孔徑的濾芯過濾，再用分子量5000 10000道爾頓的膜進行超濾；超濾液在60°C 士0. 5°C下連續10小時病毒滅活；
(6)將進行病毒滅活后的藥液溫度降至5°C士 1°C，用0.22Mffl濾芯除菌過濾后灌封，得每支裝量為細1的胎盤多肽注射液共18850支；
(7)檢漏把產品均勻地擺放在機動門安瓿瓶滅菌器專用車上，將車緩緩推進安瓿滅菌器箱體內，關閉箱門；
檢漏負壓-80 kPa、負壓檢漏時間300秒， 檢漏正壓80 kPa、正壓檢漏時間300秒， 清洗時間600秒、壓力限度130 kPa。(8)設置完成后程序開始運行，先抽真空，當真空度在-80 Ua后，停止抽真空。打開色水閥，將色水吸入滅菌器中至蓋過產品后關閉色水閥。打開氣閥，再將色水抽回貯器罐中；
(9)打開純化水閥門，淋洗產品外壁上的色水1;
(10)打開滅菌器門，取出產品，剔除帶色的漏封產品。實施例2
一種胎盤多肽注射液制備方法，首先進行原料胎盤病毒檢驗，即在胎盤收集后通過檢驗選出無乙肝、無丙肝、無艾滋病、無梅毒等病毒的胎盤；具體依次包括如下步驟 (1)、收集健康產婦足月分娩的胎盤，將其50個胎盤清洗干凈，浙干后得胎盤約17500
克；
(2)、按胎盤組織與生理鹽水51的比例加入0. 75% 1. 0% (質量百分比)生理鹽水， 進行搗碎得到胎盤組織漿21000克；
(3)、按胎盤組織漿與透析液1:4比例配制透析液，進行透析；共透析3次，第1、2次分別為20 24小時，第3次分別為40 50小時；
(4)、收集3次透析總量226.8L；
(5)、取經過3次透析后的透析液，澄清后用1.0 μ 孔徑的濾芯過濾，再用分子量 5000 10000道爾頓的膜進行超濾；超濾液在60°C 士0. 5°C下連續10小時病毒滅活；
(6)將進行病毒滅活后的低溫5°C士 1°C下，用0.22Mffl，除菌過濾后灌封，得每支4ml 的胎盤多肽注射液共46390支。(7)檢漏把產品均勻地擺放在機動門安瓿瓶滅菌器專用車上，將車緩緩推進安瓿滅菌器箱體內，關閉箱門。檢漏負壓-80 kpa，負壓檢漏時間300秒， 檢漏正壓80 kpa,正壓檢漏時間300秒，
清洗時間600秒，壓力限度130 kpa。(8)設置完成后程序開始運行，先抽真空，當真空度在-SOKpa后，停止抽真空。打開色水閥，將色水吸入滅菌器中至蓋過產品后關閉色水閥。打開氣閥，再將色水抽回貯器罐中。(9)打開純化水閥I，淋洗產品外壁上的色水。(IO)打開滅菌器門，取出產品，剔除帶色的漏封產品。產品質量標準
本產品為小容量注射劑，按國家藥品標準《WS-10001- (HD-1430) -2003-2006))執行， 其質量標準如下
外觀應為無色至淡黃色澄明液體。鑒別應在258士4nm處有最大吸收峰。可見異物20支檢查的供試品中，均不得檢出明顯可見異物。如檢出微細可見異物的供試品僅有1只，應另取20支同法復試，均不得檢出。裝量應不低于4ml/支。pH 值應為 6.0 6. 5。非蛋白氮含量顏色應淺于對照管。含量測定應不低于0. 6。不溶性微粒測定每瓶含IOMm以上的微粒不得過6000粒，每瓶含25Mm以上的微粒不得過600粒。過敏性實驗攻擊后30分鐘內不得出現過敏反應。無菌檢查應無菌生長。異常毒性檢查小白鼠應均健存，體重均增加。熱原檢查注射劑量按家兔體重每Ikg注射3. 0ml，按以下兩個條件判定一、在初試3只家兔中，體溫升溫均低于0. 60°C，并且3只家兔升溫總和低于1. 4°C:或在復試的5只家兔中，體溫升高0. 6°C或0. 6°C以上的家兔僅1只，并且初試、復試合并8只家兔的體溫升高總和為3. 5°C或3. 5°C以下，判定熱原檢查符合規定。二、在初試3只家兔中，體溫升溫均低于0. 60C以上的家兔超過1只或在復試的 5只家兔中，體溫升高0. 6°C或0. 6°C以上的家兔超過1只或在初試、復試合并8只家兔的體溫升高總和超過3. 5°C，判定熱原檢查不符合規定。臨床效果
胎盤多肽注射液在治療骨傷和創面愈合方面的作用，能夠有效縮短骨折和骨傷的愈合治療周期。所述的治療效果好、有效率高、無毒副作用。夠有效縮短創面愈合和疤痕修復的治療周期。胎盤多肽注射液是以健康產婦的胎盤為原料，經先進的生物制藥技術獲得的小容量生物制劑，含有多種營養素、生長因子及免疫因子等，這些大量的活性成分幫助協調、 提高自身免疫，增強新陳代謝，促進受損細胞和創傷的自我修復和愈合。將胎盤多肽注射液以0. 9%的氯化鈉溶劑或5%的葡萄糖溶液或葡萄糖氯化鈉溶液稀釋后，經靜脈滴注或肌肉注射，或將胎盤多肽注射液原液或其稀釋液直接注射或外用于患病部位，從而達到治療作用。能有效縮短治療周期、治療效果好、有效率高、無毒副作用。臨床一般資料本組(1)病例均為住院病人，其中男性62例，女性47例；年齡15 80歲；鎖骨骨折10例，肱骨外科頸骨折8例，肱骨骨折8例，肱骨髁上骨折5例，橈骨、尺骨骨折10例，克雷氏骨折10例，掌指骨骨折6例，股骨粗隆間骨折9例，股骨骨折8例，髕骨骨折8例，脛骨、腓骨骨折11例，內踝骨、外踝骨折7例，跖骨骨折6例。(2)分組方法采用單盲隨機配對原則，分為治療組和用藥對照組。其中治療組53 例，對照組53例。(3)治療方法兩組患者均接受復位、固定、功能鍛煉治療；采用單盲隨機配對方法，治療組給予胎盤多肽注射液8ml+葡萄糖或生理鹽水靜滴，每天1次，以10天為一療程， 連用2個療程。對照組給予丹參針液靜滴。觀察疼痛腫脹消退時間。1周后觀察骨折愈合情況。(4)療效判斷標準
①臨床治愈比同類骨折愈合時間提前1/3以上達到臨床愈合標準者；
②顯效比同類骨折愈合時間提前1/4 1/3，達到臨床愈合標準者；
③有效比同類骨折愈(有)效與同類骨折正常愈合時間相同。(5)治療結果胎盤多肽注射液的有效率為95. 8%，無不良反應發生。臨床資料⑴李某某，女，36歲，已婚，于2006年3月確診為急性膽囊炎。行膽囊切除術，觀察一周發現手術傷口愈合不良，加用胎盤多肽注射液2支(8ml)稀釋于250ml 0. 9%的生理鹽水中進行靜脈滴注，未出現過敏反應，連續用藥7天后，傷口愈合明顯好轉。 患者感覺身體情況良好，無不適現象。骨折臨床資料
1病例選擇符合骨折診斷標準
除了多發性骨折、多段骨折、骨不連接以及肝腎功能不全者。1. 1 一般資料觀察病例50例，男性27例，女性23例，病程3_4周。1. 2 一般資料觀察病例50例，男性27例，女性23例，病程3_4周。
1. 3治療方法應用胎盤多肽注射液8ml，加入生理鹽水注射液250ml或500ml靜滴，每天1次，按病情及患者經濟條件應用3-4周。1. 4觀察項目觀察患者治療前后骨折部位骨痂生長情況。顯效X線片有大量骨痂生長；有效x線片見中等量骨痂生長；無效:x線片僅有少量骨痂生長或無骨痂生長。1. 5安全觀察治療期間密切觀察藥物毒副反應的發生。2.結果
2. 1 50例骨折患者中，顯效3例，有效35例，總有效率76%以上。2.2治療期間未發生任何明顯的不良反應。3. 1 討論
骨折愈合一個復雜的過程，損傷組織可刺激多種細胞增生形成新生組織即骨痂。骨折初期為纖維性骨痂，通過軟骨內化骨和膜內化骨方式發生鈣鹽沉積，并且產生大量的膠原， 形成骨性骨痂。骨性骨痂把骨缺損的兩端連在一起，以致外來壓力施加到骨缺損處時，不再發生斷裂。本臨床觀察結果顯示，胎盤多肽注射液可促進骨性骨痂組織的形成，并無不良反應事件發生，推斷其機制可能與影響膠原組織的合成以及鈣鹽沉積相關。選取自2006年8 月 2009年12月收治的閉合性下肢骨折病例132例，均給予手術治療，其中男89例，女43 例，年齡為15 65歲，平均為30. 4歲，其中脛骨骨折78例，股骨骨折54例。所選患者均無糖尿病、高血壓、肺心病等可能影響骨折愈合的基礎疾病，所有患者均采用隨機法分為治療組和對照組，每組各66例。3. 2治療方法
兩組患者均采用切開復位、鋼板或骨內釘內固定術，術后給予理療及肢體功能鍛煉，常規術后應用抗生素，在此基礎上治療組靜脈滴注胎盤多肽注射液，一次8ml稀釋于250ml 0.9%氯化鈉注射液中，1次/日，14日為一個療程，每個患者治療1個療程。對照組除常規用藥外，均不給予其他促進骨折愈合藥物。兩組患者出院后均隨訪6—10月。3. 3療效判斷
(1)采用骨折臨床愈合標準①局部無壓痛及縱向叩擊痛；②局部無異常活動；③X 線照片顯示骨折線模糊，有連續骨痂通過骨折線；④功能測定在解除固定情況下，上肢能平舉I kg重量達I min ；下肢能徒步連續步行3 min，并不少于30步；⑤連續觀察2周，骨折處不變形，則觀察的第1天即為臨床愈合日期。4.統計方法
骨折愈合時間采用均數士標準差(X is)表示，結果用SPSS 11. 5軟件進行統計學分析，治療組和對照組采用t檢驗，選定P<0. 05為有統計學意義。術后發生感染人數為計量資料，以率表示，統計方法采用兩樣本率的X檢驗，P<0，05為差異有統計學意義
5.結果治療過程中，患者耐受性良好，治療組和對照組均未發生毒副反應，治療組中 1例股骨骨折患者術后發生感染，對照組有兩例脛骨骨折患者術后并發感染，給予傷口分泌物細菌培養及藥敏試驗后，應用敏感抗生素，加強傷口換藥，感染得以控制，未繼發骨髓炎， 傷口延期愈合。其余患者治療前后血尿常規及肝腎功能檢驗均未發生異常。治療組骨折愈合時間明顯短于對照組(表1)；
表1治療組和對照組骨折愈合時間(周)(X士 S) 組別股骨干脛骨治療組13.8+1. 5 14. 5+1. 2
對照組16. 7+2. 117. 1+2.0
(表2)資料(略)表明感染發生率對照組高于治療組。
本組臨床資料表明，對于下肢骨折，在嚴格手術操作的前提下，胎盤多肽注射液可明顯提高骨折的愈合時間；此外，可以提高人體免疫力，具有較為明顯的抗感染作用。胎盤多肽中的小分子多肽對骨折愈合的具體作用機制尚有待進一步作基礎研究，但其對骨折愈合時間的縮短，通過臨床觀察，確有明顯的促進作用。
權利要求
1. 一種胎盤多肽注射液制備方法，其特征是首先進行原料胎盤病毒檢驗，即在胎盤收集后通過檢驗選出無乙肝、無丙肝、無艾滋病、無梅毒病毒的胎盤； 具體依次包括如下步驟(1)、收集上述健康產婦足月分娩的胎盤，將其胎盤清洗干凈，浙干；(2)、按胎盤與生理鹽水51的比例加入0. 75 1. 0%質量百分比的生理鹽水，將胎盤搗碎得到胎盤組織漿；(3)、再按胎盤組織漿與質量百分比0.75% 1%的生理鹽水1 :4比例配制好透析液后， 進行透析；共透析3次，第1、2次分別為20 24小時，第3次為40 50小時；(4)、取經過3次透析后的透析液，澄清，上清液先經過0.45ΜΠ1 1. 0 Mm孔徑的濾芯過濾，再用分子量為5000 10000道爾頓的膜進行超濾；超濾后，在60°C 士0. 5°C下連續10 小時病毒滅活；(5)、將進行病毒滅活后的超濾液用0.22ΜΠ1濾芯除菌過濾后，灌封，檢漏。
全文摘要
本發明公開的一種胎盤多肽注射液制備方法，方法依次包括經過病毒檢驗的胎盤，用胎盤與生理鹽水配合搗碎得到胎盤組織漿;進一步用胎盤組織漿配制好透析液后，進行透析3次，透析液澄清后的上清液先經過0.45μm～l.0μm孔徑的濾芯過濾，再用分子量為5000～10000道爾頓的膜進行超濾；超濾后，在60℃±0.5℃下連續10小時病毒滅活的超濾液用0.22μm濾芯除菌過濾后，灌封，檢漏；由于采用了低溫透析工藝，提供一種既可確保胎盤多肽注射液有效成分、又可較為徹底殺死除去在胎盤多肽注射液的病原微生物的新型制備方法，制作出的胎盤多肽注射液，療效顯著，既確保制品生產和使用的安全性，又提高了產品的生產率。
文檔編號A61K9/00GK102284057SQ201110209778
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月26日 優先權日2011年7月26日
發明者李祥, 王 華, 蘇嘉麗, 趙學梅, 鐘正曉 申請人:貴州泰邦生物制品有限公司