專利名稱：陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制備牛、豬或其他哺乳動物肺表面活性提取物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及無機材料，包括陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制備牛、豬或其他哺乳動物肺表面活性提取物中的用途。
背景技術：
牛、豬或其他哺乳動物肺表面活性提取物(PQ是指牛、豬或其他哺乳動物的肺灌洗液或全肺勻漿提取液，經分離、提取、純化得到的產物，所述產物包含多組分磷脂和表面活性物質蛋白，是預防與治療早產兒呼吸窘迫綜合征(NRDS)的重要急救藥，已在全球大多數國家和地區應用，目前應用較多的是意大利Chiesi制藥的豬肺磷脂注射液(Curosurf )、美國雅培公司的子公司Ross生產的全牛肺提取制劑Survanta (Survanta因有效成分卵磷脂含量低，添加了合成的磷脂組分)以及美國ONY公司的 InfasurfS),前兩種制劑都是從全肺勻漿提取液中分離得到的，后一種是從小牛肺的灌洗液中提取得到的。從動物肺提取的肺表面活性提取物，無論其原材料是全肺勻漿提取液，還是肺灌洗液，均需要處理大量的、含有多組分磷脂和表面活性物質蛋白的混懸液或乳濁液。在現有技術中，主要是通過離心如多級離心、差速離心或梯度離心，然后再通過有機溶劑提取、層析純化或超臨界提純等步驟制備肺表面活性提取物。其中多級離心、差速離心或梯度離心步驟用時長，能耗大，收率低，生產成本高。現有技術中也有不使用離心技術，而采用有機膜或復合有機材料作為用于過濾原材料(肺灌洗液或全肺勻漿提取液)的過濾材料，但是有機膜或復合有機材料會與磷脂、蛋白成分相互吸附，活性產物的收率較低。因此，需要尋找一種不影響收率，同時降低能耗和生產成本的工業化PS制劑的方法。

發明內容
本發明人在研究中發現，采用無機材料作為分離提取肺表面活性提取物的過濾材料，可在提高活性產物收率的同時，分別降低能耗和生產周期。為此本發明采用與現有技術不同、能更有效地分離提取肺表面活性提取物的無機材料，解決了 PS制劑生產周期長、能耗高、收率低的問題，更利于肺表面活性物質提取的產業化。在本發明中，選擇無機材料作為過濾材料，將哺乳動物的肺灌洗液或全肺勻漿提取液進行濃縮后，得到截留液僅為肺灌洗液或全肺勻漿提取液的1/5 1/100，截留液的活性成分與肺灌洗液(或全肺勻漿提取液)一致，總磷脂收率大于90%，卵磷脂收率大于 90%，表面活性物質蛋白收率大于85% (以重量計)。截留液經提純步驟制得肺表面活性提取物，在最終制備的肺表面活性提取物中，總磷脂含量大于90%，卵磷脂約占總磷脂的 70-80%，表面活性物質蛋白含量為1-2% (以重量計)。采用本發明制備的肺表面活性提取物，其活性組分、各組分的比例與原工藝一致，各項質量指標包括表面活性也與現有技術制備的PS產品一致。其中，以最終制備的肺表面活性提取物中的總磷脂和過濾前的哺乳動物的肺灌洗液或全肺勻漿提取液為基礎計算最終總磷脂收率。所得最終總磷脂收率比現有技術提高10-15%。本發明所使用的哺乳動物的肺灌洗液或全肺勻漿提取液可以采用本領域公知技術(例如，〈〈Surfactant Replacement Therapy)), Donald L. Shapiro and Robert H. Notter et al，Alan R. Liss Inc. New York，1989年)從哺乳動物的肺制備。所述哺乳動物包括牛、豬或其他哺乳動物。在本發明中，所述無機材料通常與磷脂、蛋白組分不產生相互吸附，可以使得到的截留液僅為肺灌洗液或全肺勻漿提取液的1/5 1/100，總磷脂收率大于90%，卵磷脂收率大于90%，表面活性物質蛋白收率大于85% (以重量計)。所述無機材料的實例包括，但不限于陶土材料，陶土材料經過各種物理、化學方法處理制成的無機材料，如陶瓷材料，以及玻璃材料等。在本發明中，無機材料孔徑為10-1000nm，優選10-350nm。在本發明中，無機材料優選微孔陶瓷材料或微孔玻璃材料，其可以采用微孔陶瓷濾管或微孔玻璃濾管的形式。因此，本發明涉及選自陶土材料、陶瓷材料或玻璃材料的無機材料在制備牛、豬或其他哺乳動物肺表面活性提取物中的用途。采用下述兩種方法檢測本法制備的肺表面活性提取物，與原工藝相比，其相關指標達到國際同類PS制劑標準(1)體外活性檢測-最低表面張力使用經國家藥典會技術鑒定的，專門用于檢測 PS制劑表面活性的可控閉泡式表面張力儀(CB-1型，具體參見可控閉泡式表面張力測定儀專利說明書，CN 94200787. 5)，檢測本發明所制備樣品的表面張力(可控閉泡式表面張力測定儀的研制；中國醫療器械雜志，1994年第2期)。結果表明，當本發明的肺表面活性提取物在l_5mg/ml濃度范圍內時，其表面張力可在1分鐘內迅速降低到lmN/m以下，說明其可在氣液界面迅速擴散，具有優良的生理活性；(2)體內活性試驗將豚鼠經生理鹽水灌洗肺部制成肺表面活性物質缺乏模型， 然后經氣管插管給予本發明所制備的肺表面活性提取物，觀察給藥前后豚鼠血氧分壓和肺順應性變化(具體參見劉傳合，董聲煥等，兩種肺表面活性劑藥效的實驗比較。中國新藥雜志，1997年第6卷第2期)，以評價PS制劑的藥效。試驗結果表明本發明所制備的肺表面活性提取物，可在5-10分鐘內迅速改善豚鼠的血氧飽和度，在30-60分鐘內將豚鼠的肺順應性恢復到正常水平的70-80%左右，改善迅速，療效顯著。本發明方法與現有技術相比，處理量大，總磷脂收率高，生產周期縮短約40-50%， 能耗下降60 %左右，工業化程度大大提高。
具體實施例方式實施例1 參照Donald L. Shapiro禾口 Robert H. Notter 等的文獻(《Surfactant Replacement TherapyKAlan R. Liss Inc. New York，1989年)中記載的方法，采用自制牛肺灌洗液1000L 制備牛肺表面活性提取物，不同之處在于使用江蘇久吾公司的微孔陶瓷濾管(孔徑350nm) 過濾步驟代替離心步驟。對牛肺灌洗液進行濃縮過濾后，得到截留液50L。截留液經提取純化處理制得牛肺表面活性提取物185g。總磷脂測定采用鉬蘭法，先將樣品用硫酸或高氯酸消化，再用鉬酸銨顯色；卵磷脂測定采用HPLC法(蒸發光散射檢測器)；蛋白測定使用BCA試劑盒(美國Sigma公司)，用前將試劑BCA試劑與Cu試劑按體積比50 1混合，檢測波長560nm左右。截留液檢測結果肺灌洗液或全肺勻漿提取液經濃縮過濾后，總磷脂收率92%， 卵磷脂收率95 %，表面活性物質蛋白收率為90 %。牛肺表面活性提取物檢測結果總磷脂含量為93%，卵磷脂占總磷脂的比例為 80%，表面活性物質蛋白含量為1.5%。表面活性檢測結果牛肺表面活性提取物采用CB-I型可控閉泡式表面張力測定儀進行檢測，樣品在最低濃度(lmg/ml)條件下，表面張力可在30秒內降到0.8mN/m。豚鼠試驗結果顯示，本法所制牛肺表面活性提取物可在30分鐘內明顯提高豚鼠的肺順應性，根據劑量(40到70mg/kg體重)不同可使肺順應性恢復到正常水平的 75-85%。最終產物的總磷脂收率為50%，全部生產周期為3工作日，總能耗約400千瓦時。實施例2 使用實施例1所述方法，采用自制豬全肺勻漿提取液1000L制備豬肺表面活性提取物，不同之處僅在于使用I^all公司微孔玻璃濾管(孔徑lOnm)代替微孔陶瓷濾管。豬全肺勻漿提取液進行濃縮過濾后，得到截留液40L。制得豬肺表面活性提取物184g。使用實施例1所述方法進行檢測，截留液總磷脂收率90%，卵磷脂收率92%，表面活性物質蛋白收率88 % ；豬肺表面活性提取物總磷脂含量90 %，卵磷脂占總磷脂的比例為 75%，表面活性物質蛋白含量1.2%。表面活性檢測結果豬肺表面活性提取物采用CB-I型可控閉泡式表面張力測定儀進行檢測，樣品在1. 5mg/ml濃度條件下，表面張力可在60秒內降到0. 95mN/m ；豚鼠試驗結果顯示，本實施例方法所制豬肺表面活性提取物(70到100mg/kg體重)可在30分鐘內將豚鼠的肺順應性恢復到正常水平的70% -80%。最終產物的總磷脂收率為46. 2%，全部生產周期為2. 7工作日，總能耗約370千瓦時。實施例3 自制牛肺灌洗液1000L，使用現有梯度離心方法(Donald L. Shapiro和Robert H. Notter 等的〈〈Surfactant Replacement Therapy)), Alan R. Liss Inc. New York, 1989年) 進行處理得到粗品，該粗品經提取純化制得牛肺表面活性提取物130g，終產物總磷脂收率為35 %，全部生產周期為8工作日，總能耗約1000千瓦時。表面活性檢測結果牛肺表面活性提取物采用CB-I型可控閉泡式表面張力測定儀進行檢測，樣品在最低濃度條件(lmg/ml)下，表面張力可在30秒內降到1. 0mN/m。豚鼠試驗結果顯示，本法所制牛肺表面活性提取物(70到100mg/kg體重)可明顯提高豚鼠的肺順應性，在30分鐘內肺順應性恢復到正常水平的70-80%左右。實施例4 自制豬肺勻漿液1000L，使用實施例3的方法進行處理得到粗品，該粗品經提取純化制得豬肺表面活性提取物107g，終產物總磷脂收率為27 %，全部生產周期為7. 2工作日， 總能耗約925千瓦時。表面活性檢測結果豬肺表面活性提取物采用CB-I型可控閉泡式表面張力測定
5儀進行檢測，樣品在最低濃度條件(lmg/ml)下，表面張力可在30秒內降到1. 19mN/m。豚鼠試驗結果顯示，本法所制豬肺表面活性提取物(70到100mg/kg體重)可明顯提高豚鼠的肺順應性，在30分鐘內肺順應性恢復到正常水平的65% -75%左右。對比實施例1、2、3和4，可以發現，本發明實施例1和2的方法與現有技術實施例 3和4的離心方法相比，最終總磷脂收率提高15-20%，生產周期縮短約40-60%，能耗下降 60 %左右，工業化程度大大提高。
權利要求
1.選自陶土材料、陶瓷材料或玻璃材料的無機材料在制備牛、豬或其他哺乳動物肺表面活性提取物中的用途。
2.權利要求1的用途，其中所述無機材料孔徑為lO-lOOOnm。
3.權利要求1的用途，其中所述無機材料孔徑為10-350nm。
4.權利要求1至3任一項的用途，其中所述無機材料是微孔陶瓷濾管或微孔玻璃濾管。
全文摘要
本發明涉及陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制備牛、豬或其他哺乳動物肺表面活性提取物中的用途。
文檔編號A61K35/42GK102553355SQ201110261440
公開日2012年7月11日 申請日期2011年9月6日 優先權日2011年9月6日
發明者于順廷, 周宜遂, 寇同欣, 張宇, 楊小杉 申請人:北京雙鶴藥業股份有限公司