專利名稱：一種抽提蛋黃抗體的方法
技術領域：
本發明屬于禽、畜免疫抗體及制法。
利用免疫抗體防治人畜，或禽類的某些傳染性疾病，已有相當長的歷史，傳統的抗血清生產是利用小白鼠、免、馬、牛、羊和豬等動物通過一定的免疫和加強免疫后，收集其血清而制得的。由于經疫苗免疫接種后的禽群中，相應疾病仍時有發生，作為疫苗的補充，國內在80年代后期，開始普通使用高免蛋黃液，但這類高免蛋黃液均由非SPF母雞蛋制備，因而其廣泛使用的結果，不可避免的帶來人為播散病源，經蛋垂直傳染性病原的傳播，如沙氏桿菌、大腸桿菌、白血病毒等，同蛋黃本身含有的大量脂肪、蛋白質等成份，注入禽體后也可能引起類似過敏反應的“蛋黃病”問題，因此抽提蛋黃抗體液的研究就提到日程上來了，國內外對蛋黃抗體抽提方法大部分目的是想尋找血清的TgG替代品，要求純度高，因而一般產量低，有一小部分蛋黃抗體的抽提方法也是需在低溫下進行，操作繁雜，設備要求較高，成本較高，雖然有些在現場應用，但因設備、操作及成本問題而不能推廣。
本發明的目的是根據蛋黃抗體的特點，提出一種適于大量生產、操作簡便、成本低的蛋黃抽提抗體的制備方法，并取得滿意結果。
本發明所提供的抽提方法的實施過程是這樣的常規清潔消毒高免蛋殼表面后，去殼取蛋黃，盡可能除去粘附于蛋黃膜上的蛋白，反復用滅菌水漂洗蛋黃三次，瀝干后剌破蛋黃膜，收集蛋黃，按蛋黃∶稀釋液＝1∶5(體積比)的比例加入0.1M、PH為5.5的NaCl溶液，充分攪拌均勻后，邊攪拌，邊緩慢加入60％的聚乙二醇的貯備液，使終濃度為3.5％，充分混勻后，于室溫18-20℃下靜置過夜，用棉花和紗布過濾，除去游離脂肪及沉渣，收集濾液用濾膜孔徑分別為0.8μm和0.45μm組成的正壓雙聯過濾器過濾上述濾液以除去細小雜質和細菌，最后使用截留分子量為10000的超濾器除去殘留的聚乙二醇和其它鹽類，并適當濃縮，然后作常規抗體活性檢查，微生物檢查和安全性試驗，產品分裝后得到合格成品。本發明提供的抗體抽提方法與現有技術中沿用的抽提方法具有如下的優點和特點1、蛋黃抗體的有效提取率約為83.5％-95％抽提物的總蛋白濃度為3.70％-4.23克％，其中球蛋白約占總蛋白的43.9％-52.9％(采用雙縮脲法測定)，抗體活性符合要求。
2、產品不含活的病原微生物，安全性高，無任何毒、副作用。
3、該方法全過程都可在室溫下操作，設備要求不高，操作簡便，成本較低，易于組織大批量生產。
實施例取雞蛋去殼取黃，盡可能除去附粘于蛋黃膜上的蛋白，然后將蛋黃置于滅菌蒸餾水中，反復洗滌三次，以除去蛋黃膜上的蛋白，瀝干后刺破蛋黃膜，收集蛋黃，將蛋黃充分攪拌均勻后，加入蛋黃勻槳5倍體積的0.1M、PH為5.5的NaCl稀釋液，制成稀釋蛋黃液，然后緩慢加入60％聚乙二醇貯備液，使終濃度為3.5％，充分混勻后于室溫18-20℃下靜置過夜，然后用棉花和紗布過濾，除去沉渣，收集濾液，再用濾膜孔往分別0.8μm和0.45μm的正壓雙聯過濾器，過濾上述濾液，除去細小雜質和細菌，再用截留分子量為10000的超濾器除去殘留的聚乙二醇和其它鹽類，并適當濃縮，進行抗體活性檢查和分裝成為產品，經用雙縮脲法測定，產品中抗體有效提取率平均為90％以上，抽提物總蛋白濃度平均為3.97％，球蛋白占總蛋白平均48.46％，抗體活性符合要求。
權利要求
1.一種禽畜蛋黃免疫抗體的抽提方法，該方法由蛋黃制成稀釋液，其特征在于蛋黃勻漿中加入勻漿體積5倍的0.1MPH5.5氯化鈉稀釋液，然后加入60％濃度的聚乙二醇使終濃度為3.5％于室溫下靜置24小時，然后通過三次過濾除去沉渣和細菌，便得到抗體成品。
2.根據權利要求1中所述的抗體抽提方法，其特征在于過濾的步驟為先用棉花或紗布過濾沉渣，再用0.8μm和0.45μm組成的正壓雙聯過濾器，除去細小雜質和細菌，最后，使用截留分子量為10000的超濾器除去殘留的聚乙二醇和其鹽類，過濾全過程均于室溫下進行。
全文摘要
本發明屬于禽、畜免疫抗體制法。國內外抽提蛋黃抗體的方法大部分是以實驗室內的免疫學試驗為目的,而抽提其中的IgG,因而要求純度高,操作繁雜,且產量低,要求在低溫下操作,因而難以生產推廣。本發明提供的蛋黃抗體抽提方法,可在常溫下,使用常規稀釋液和置換液,操作簡便。因而易于組織規模生產。
文檔編號A61K39/395GK1196957SQ9710888
公開日1998年10月28日 申請日期1997年4月18日 優先權日1997年4月18日
發明者凌育燊, 郭予強, 楊連楷, 李健東, 羅映霞, 詹樂群, 余雙祥, 邱深本, 朱國鋒 申請人:廣東省家禽科學研究所