專利名稱：一種治療前列腺炎的組合藥物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種組合藥物及其制備方法，尤其涉及一種治療前列腺炎的組合藥物 及其制備方法。
背景技術：
前列腺炎是青壯年男性最常見的疾病之一，發病年齡一般為15 55歲。一般統 計約占泌尿科門診疾病的25% 30%，它可全無癥狀，也可以癥狀明顯，遷延不愈，甚至可 以引起持續或反復發作的泌尿生殖系感染。根據患者的發病過程和臨床表現，可將前列腺 炎分為急性前列腺炎與慢性前列腺炎；根據尿4杯試驗結果，將前列腺炎分為急性細菌性 前列腺炎、慢性細菌性前列腺炎、慢性非細菌性前列腺炎和前列腺痛4類。臨床上治療前列 腺炎的常用方法是抗生素治療。但是，抗生素只對急性細菌性前列腺炎和慢性細菌性前列 腺炎有效。另外，濫用抗生素有很多危害，主要表現為三個方面(1)大量使用抗生素會帶 來較強毒副作用，直接傷害身體，尤其是對兒童聽力；(2)抗生素用多了會使細菌產生耐藥 性，使抗生素藥物效果變差，甚至無效；(3)抗生素用得過多過濫，會大量殺滅體內正常細 菌，讓致病細菌乘虛而入。前列腺炎的病因及發病機理十分復雜，治療也較為棘手，目前還 沒有一個很好的治療手段，故世界衛生組織將該病稱為“21世紀病”。

發明內容
本發明所要解決的技術問題在于克服現有技術中抗生素只對急性細菌性前列腺 炎和慢性細菌性前列腺炎有效和濫用抗生素有很多危害的缺陷，提供一種治療前列腺炎的 組合藥物及其制備方法。本發明的技術方案本發明首先提供一種治療前列腺炎的組合藥物，所述組合藥物的有效活性成分為 人生長激素和人粒細胞_巨噬細胞集落刺激因子。本發明提供的治療前列腺炎的組合藥物還可以通過以下優選的技術方案進一步 實現所述人生長激素由包含下述步驟的方法制得(1)保藏號CGMCC No. 2031的重組桿狀病毒(該重組桿狀病毒為重組桿狀病毒 BmBachGH由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址為北京市海淀區中 關村北一條13號，保藏日期為2007年4月28日，保藏編號為CGMCC No. 2031，生物材料的 分類命名家蠶核型多角體病毒Bombyx mori nucleopolyhedrovirus)感染家蠶幼蟲或蠶 蛹；(2)收集感染的家蠶幼蟲或蠶蛹，粉碎，去除病毒粒子。所述人粒細胞_巨噬細胞集落刺激因子由包含下述步驟的方法制得(1)重組桿狀病毒BmBachGM-CSF感染家蠶幼蟲或蠶蛹；(2)收集感染的家蠶幼蟲或蠶蛹，粉碎，去除病毒粒子。
上述重組桿狀病毒BmBachGM-CSF的制備方法還可以進一步參考發明專 利 ZL97124614. 1 與非專利文獻"Can 29 kDa rhGM-CSF expressed by Silkworm pupae bioreactorbring into effect as active cytokine through oralIy administration，，[european journal ofpharmaceutical sciences 28 (2006)212-223] 及"Expression,purification and characterizationof human GM-CSF using silkworm pupae(B ombyx mori)as a bioreactor，，[Journal ofBiotechnology 123 (2006)236-247] 所公開的技術內容。所述家蠶幼蟲或蠶蛹在感染前，進行表面消毒。本發明還提供了制備上述組合藥物的方法人生長激素和人粒細胞_巨噬細胞集 落刺激因子混合均勻。本發明提供的治療前列腺炎的組合藥物也可以通過以下優選的技術方案實現，所 述組合藥物還加有輔料，有效活性成分在所述組合藥物中的含量為26μ g/100mg以上；所 述輔料由下述方法制得家蠶幼蟲或蠶蛹經70%的食用酒精浸泡3min后，于-20 0°C下 粉碎勻漿，過100目網，600rpm離心30 60min后過濾，取上清液于_50°C下冷凍干燥成 粉。本發明還進一步提供了制備上述組合藥物的方法人生長激素、人粒細胞-巨噬細胞集 落刺激因子和輔料混合均勻，填裝膠囊、包裝。本發明達到的技術效果本發明克服了現有技術的缺陷，提供了一種治療前列腺炎的組合藥物及其制備方 法，為前列腺炎的治療提供了一種新的藥物及其制備方法。動物實驗證明本發明提供的組 合藥物安全有效，可治療前列腺炎。本發明提供的所述組合藥物的制備方法具有簡單、容易 掌握的特點。生物保藏說明生物材料的分類命名家蠶核型多角體病毒；拉丁文學名Bombyx mori nucleopolyhedro virus ；保藏單位全稱中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心； 保藏編號CGMCCNo. 2031 ；
保藏日期2007年4月28日；
保藏單位地址北京市海淀區中關村北一條13號，中國科學院微生物研究所。
具體實施例方式以下通過具體實施例進一步說明本發明的技術方案，本發明包括但不限于以下實 施方式。下面所列具體實施例僅用于理解本發明的實質，根據現有技術或公知常識對本發 明所進行的不脫離本發明實質內容的改變，如組合藥物中兩種有效活性成分比例的改變或 者其含量的改變，仍屬于本發明的保護范圍。本發明所采用的技術手段，本領域技術人員均可依據《分子克隆》或其他技術手冊 而獲知。實施例1基因的擴增1.人生長激素hGH基因的擴增設計一對引物，以從重組質粒PWR-hGH(上海生化所吳祥甫老師惠贈)為模板，PCR 擴增人生長激素hGH基因。
上游引物5，GGGAATTCAGATGGCTACAGGCTCCC3，(含 EcoR I 酶切位點)下游引物5，TTGAGCTCCTAGAAGCCACAGCTGCC3，(含 Sac I 酶切位點)。PCR 反應條件94 "C，5min, (94 "C，Imin ；57 °C, Imin ；72 °C, lmin) X 30cycles ； 72°C, IOmin0擴增得到目的hGH基因片段。2.人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子hGM-CSF基因的擴增。從人胚肺細胞中抽提總RNA作為模板，應用RT-PCR技術擴增得到hGM_CSF的 cDNA，引物設計如下上游引物為GTAGAATTCATGGGACCAGGACAGGCCGT (含 EcoRI 位點)下游引物為TCAGAGCTCTCAACACACCTCCCCAGGCT(含 Sac I 位點)PCR 反應條件94 "C，5min, (94 "C，Imin ；65 "C，Imin ；72 °C, lmin) X 30cycles ； 720C，IOmin0擴增得到目的hGM-CSF基因片段。實施例2構建載體(1) · pAcHLT-hGH 載體構建經EcoR I與Sac I雙酶切的hGH基因片段通過T4DNA酶(MBI)連接克隆至經EcoR I與Sac I雙酶切的pAcHLT-B桿狀病毒轉移載體(購自BD Biosciences Pharmingen)中， 使hGH基因置于多角體蛋白(p0lyhedrin，ph)基因啟動子控制之下，構建pAcHLT-hGH載體 經酶切分析以及測序鑒定基因序列正確。在家蠶表達體系中重組蛋白hGH以融合蛋白的形 式表達。(2). pAcHLT-hGM-CSF 載體構建經EcoR I與Sac I雙酶切的hGM-CSF基因通過T4DNA酶(MBI)連接克隆至經EcoRI 與Sac I雙酶切的pUC18中，獲得pUC-hGM-CSF載體。同理，再將hGM-CSF連接到pAcHLT-B 桿狀病毒轉移載體中，獲得pAcHLT-hGM-CSF載體。實施例3重組桿狀病毒BmBachGH (即保藏號CGMCC No. 2031的重組桿狀病毒)與含 hGM-CSF基因的家蠶重組桿狀病毒BmBachGM-CSF的獲得取5 μ 1重組轉移質粒pAcHLT-hGH DNA和6 μ 1經線性化病毒BmBacPAK6DNA (購自 上海生化細胞所)，加入100 μ 1無血清的TC-100培養基(GIBC0BRL公司)混均。取6 μ 1 Dosper (寶靈曼公司)加入100 μ 1無血清的TC-100培養基混均。將事先培養在35mm平 皿中的BmN細胞(購自上海生化細胞所)用無血清的TC-100培養基洗滌兩次，并逐滴加入 pAcHLT-hGH轉移質粒和Dosper混合物，27°C培養4_5天，收取上清進行第一輪噬斑篩選。 取5 μ 1上清感染35mm平皿中的Bm N細胞，1小時后棄去上清加入等量混合的TC-100培養 基和低熔點瓊脂糖。4-5天后挑取噬斑，感染BmN細胞3-4天，保存上清，細胞用NaOH裂解 用于Southern blot斑點雜交，以hGH基因作模板用隨機引物探針標記試劑盒(寶靈曼公 司)標記探針，雜交方法按照《分子克隆》(科學出版社，1995)。取陽性克隆的上清進行第 二輪噬斑篩選。取陽性克隆的上清感染家蠶細胞擴增。即可得到大量的含hGH基因的重組 桿狀病毒BmBachGH(該重組桿狀病毒已提交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物 中心保藏，保藏日期為2007年4月28日，保藏編號為CGMCC No. 2031)。該病毒能感染家蠶 細胞，在顯微鏡下細胞呈發病狀。家蠶重組桿狀病毒BmBachGM-CSF的制備方法同上，也可以進一步參考發明專利 ZL97124614. 1 與非專利文獻“Can 29 kDa rhGM-CSF expressed by Silkworm pupae bioreactorbring into effect as active cytokine through oralIy administration，，[european journal ofpharmaceutical sciences 28 (2006)212-223] 及“Expression，purification and characterizationof human GM-CSF using silkworm pupae (B ombyx mori) as a bioreactor，，[Journal ofBiotechnology 123 (2006) 236-247] 所公開的技術內容。實施例4重組hGH與hGM-CSF融合蛋白分別在家蠶5齡幼蟲和蛹中表達約106PFU重組病毒通過接種針感染每條五齡蠶，接種后約120h幼蟲或蛹幾乎全 部發病，采取蠶體液和蛹體，經高速離心(12000rpm，30min)，取上清測血淋巴中hGH融合蛋 白的表達。蛋白樣品于15% SDS-PAGE上進行電泳分離。結果在感染重組病毒的血淋巴樣 品在約27KDa處有一明顯條帶，大小與hGH融合蛋白的理論值相當，而且在感染野生病毒的 蛋白樣品中并不存在這一條帶。為了驗證這一特異性蛋白是否可以與hGH抗血清發生特異 性免疫反應，我們進行了 Western blot印跡反應。結果證明該蛋白條帶可以與hGH抗血清 發生特異性反應，由此可以判斷該蛋白為重組hGH融合蛋白。同樣的方法，檢測到hGM-CSF的表達。實施例5重組hGH與hGM-CSF融合蛋白生物活性測定(l).hGH的活性測定。hGH標準品(購自浙江邵逸夫醫院)被配制成自2. 5 μ g/ml 至62ng/ml —系列濃度的溶液，參照《分子克隆》進行ELISA檢測。4°C過夜的條件下蛋白 樣品被包被到96孔上，PBST (PBS中加入Tween 20)洗滌后用含BSA(胎牛血清蛋 白)的PBS溶液封閉，37°C lh;hGH抗血清1 3000稀釋，與包被蛋白37°C孵育2h ;PBST 溶液洗滌3次，每次5-lOmin ；加入1 2000稀釋的二抗(兔抗hGH抗血清，購自sigma公 司)37°C孵育Ih ；OPD檸檬酸鈉緩沖液顯色后測0D492，并以此建立標準曲線表示蛋白濃 度與吸光度的關系。細胞表達蛋白樣品與蠶血淋巴在同樣的條件下進行ELISA，分別測得 0D492值，根據標準曲線可以計算樣品中hGH融合蛋白的含量和效價。在蠶蛹感染120h后， 每個蛹體hGH融合蛋白的平均含量可達到0.5mg，活性大于lX107IU/ml。而常規的原核表 達，其表達量是0. 05-0. 3mg/ml菌液。(2). hGM-CSF活性測定。TF-1細胞是hGM-CSF依賴性細胞株，hGM-CSF對TF-I細 胞增殖曲線的影響與劑量在一定范圍內呈正相關，噻唑藍MTT比色法是一種定量檢測活細 胞的方法，用TF-I細胞結合MTT比色法可檢測樣品中hGM-CSF的生物活性。先將實驗所用溶液預熱至37°C。制備細胞懸液取足量TF-I細胞培養物，2000rpm/min離心5分鐘，收集細胞。 用基礎培養液(1640培養液添加10%小牛血清FBS (ν/ν)，每升補加2ml巰基乙醇溶液、 IOml丙酮酸鈉溶液、IOml谷氨酰胺溶液)洗滌細胞三次，每次均以2000rpm/min離心5分 鐘，收集細胞。最后用基礎培養液懸浮細胞，置37°C條件下5分鐘，再用基礎培養液配成 4.0X105/ml的細胞懸液，置37°C備用。制備標準樣品溶液取1支標準品(購自Schering Plough公司)配成1000IU/ ml的標準品溶液。用基礎培養液將標準品溶液在96孔細胞培養板上稀釋至40IU/ml，稱該
6溶液為標準樣品溶液。每100倍稀釋應分解為5X5X4的步驟，100倍以內的稀釋應逐步進 行2倍或4倍稀釋。稀釋過程使用96孔細胞培養板，單倍體積為50 μ 1。制備樣本溶液精密稱取IOmg重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子凍干粉，加 無菌水20ml混勻，4°C冰箱放置lhr，4000rpm/min離心。取上清用0. 22 μ m的濾膜過濾，收 集濾液。根據估計生物活性，取濾液在96孔細胞培養板上稀釋至約40IU/ml，稀釋原則同標 準樣品溶液。該稀釋液稱為樣本溶液。制備樣本梯度在96孔細胞培養板中，B-G行除第一列各孔外，每孔中加入50μ 1 基礎培養液；A行每孔加入50 μ 1基礎培養液；H行每孔加入50 μ 1完全培養液。在Dl、El 各孔中每孔加入100 μ 1標準樣品溶液，在Bi、Cl ；FUHl各孔中每孔加入100 μ 1各待檢樣 本溶液，每個待檢樣品做2個復孔。自第一列至第12列作對倍稀釋，每孔留50 μ 1余液。加入細胞懸液并培養將細胞懸液轉移至一無菌的貯液槽中，在96孔細胞培養板 的每個孔加入50 μ 1細胞懸液。注意經常混勻貯液槽中細胞懸液，防止因細胞下沉引起分 布不勻。37°C、5% C02條件下培養40-48小時。加入MTT溶液并培養每孔加入20 μ 1 MTT溶液，37°C，5% C02條件下培養5小 時。加入裂解液并測定結果每孔加入100 μ 1裂解液，用8通道200 μ 1微量移液器吹 打混勻，使生色物質充分溶解，注意盡量避免產生氣泡。在酶標儀上比色，測定波長570nm， 參比波長630nm，記錄測定結果。實驗結果用計算機程序或直線回歸計算法進行處理。分別計算各實驗樣品的半效 稀釋倍數，即從樣本溶液至相當于標準品50%最大效應點的稀釋倍數，并按下式計算實驗 結果
脅烊口六“八疒》口六“八待檢樣品半效稀釋倍數待檢樣品預稀釋倍數 待檢樣品效價=標準品效價X H □x H 口 ^^.^Ll^rm,
標準品半效稀釋倍數 標準品預稀釋倍數實施例6高效表達人生長激素的蠶蛹研制成口服藥物并進行動物實驗蠶蛹在接種BmBachGH前經70%食用酒精浸泡3min，進行表面消毒。感染5_7 天，收集蠶蛹，-20°C凍存。取適量凍存蠶蛹樣品，用二級膠體磨粉碎并通過100目網離心 (600rpm, IOmin)過濾。取過濾后的勻漿液，12000rpm離心20_60min，取上清，再30000rpm離 心30-90min，去除病毒粒子，離心結束后，取上清，真空冷凍干燥機中冷凍干燥(_50 V )， 制成凍干粉。輔料制造正常9日齡蠶蛹，用70%食用酒精浸泡3分鐘進行表面消毒。經低溫 (O -20°C )粉碎勻漿，過100目網篩(600rpmX30min)，取上清液冷凍干燥(凍干條件與 hGH相同)。凍干粉留樣檢定，其余冷藏于4°C，檢定合格后作為輔料。根據hGH含量，按比例加入輔料使hGH含量在13 μ g/100mg以上。充分混勻后填 裝膠囊，包裝后為成品。以下動物實驗，劑量均是hGH的實際含量計算的。實驗動物獼猴(Macaca mulatta)由福建省計劃生育科學技術研究所非人靈長 類實驗中心提供，實驗動物質量合格證(生產獼猴)閩實動質準第12號。獼猴16只，體 重3. 6 5. 8kg，雌雄各半，隨機分為4組，重組人的生長激素(hGH)低、中、高三個劑量組分別100-300 μ g、400-800 μ g、1100-1300 μ g/kg/d，另設蒸餾水作溶劑對照組，采用鼻飼灌
胃給藥，連續給藥52天，剖殺一半動物(雌雄各半)，其余動物停藥30天作恢復期觀察，分 別對給藥期和恢復期各劑量組獼猴體重、進食量、呼吸、血壓、心電圖、血液學、尿液、血液生 化學、臟器系數等各項指標進行檢測，結果表明，各用藥組上述檢測指標與用藥前比較均未 見明顯異常。對各組獼猴主要臟器進行病理組織學檢查，未發現有毒理意義的組織學改變。 獼猴灌胃給予重組人的生長激素(hGH)高劑量組，連續52天，未發現明顯毒性反應，多項檢 測均屬正常。長毒實驗結果顯示，SD大鼠灌胃給藥重組人的生長激素膠囊1250 μ g/kg/d，連續 60天，毒性反應為血糖含量明顯增高，停藥30天恢復正常水平，毒性反應系可逆性。大鼠灌 胃給藥重組人的生長激素膠囊無毒副反應的安全劑量為250 μ g/kg/d以下。急毒結果顯示 重組hGH對NIH小鼠和SD大鼠經灌胃給藥的最大耐受量均大于3300 μ g/kg。實施例7高效表達人粒細胞_巨噬細胞集落刺激因子的蠶蛹研制成口服藥物并進行動物 實驗蠶蛹在接種BmBachGM-CSF前經70%食用酒精浸泡3min，進行表面消毒。感染5_7 天，收集蠶蛹，-20°C凍存。取適量凍存蠶蛹樣品，用二級膠體磨粉碎并通過100目網離心 (600rpm, IOmin)過濾。取過濾后的勻漿液，12000rpm離心20_60min，取上清，再30000rpm 離心30-90min，去除病毒粒子，離心結束后，取上清，真空冷凍干燥機中冷凍干燥(_50°C )， 制成凍干粉。輔料的制備方法同實施例6中輔料的制備方法。根據hGM-CSF含量，按比例加入輔料使hGM_CSF含量在13 μ g/IOOmg以上。充分 混勻后填裝膠囊，包裝后為成品。以下動物實驗，劑量均是hGM-CSF的實際含量計算的。動物實驗選取獼猴16只，體重3. 6 5. 8kg，隨機分為4組，每組雌雄各半， 設重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子膠囊低、中、高三個劑量組分別600 μ g/kg/d、 1800 μ g/kg/d,3600 μ g/kg/d，另設蒸餾水作溶劑對照組，連續給藥60天，剖殺一半動物 (雌雄各半)，其余動物停藥30天作恢復期觀察，分別對給藥期和恢復期各劑量組獼猴體 重、進食量、呼吸、血壓、心電圖、血液學、尿液、血液生化學、臟器系數等各項指標進行檢測， 結果表明，各用藥組上述檢測指標與用藥前比較均未見明顯異常。對各組獼猴主要臟器進 行病理組織學檢查，未發現有毒理意義的組織學改變。獼猴灌胃給予重組人粒細胞-巨噬 細胞集落刺激因子膠囊高劑量3600 μ g/kg/d,連續60天，未發現明顯毒性反應，多項檢測 均屬正常，故可認為重組人粒細胞_巨噬細胞集落刺激因子膠囊3600 μ g/kg/d為獼猴的基 本安全劑量。以NIH小鼠和SD大鼠為受試動物觀察重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子膠 囊的急性毒性反應。測定兩種動物經灌胃給重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子膠囊的 最大劑量均為大于3300 μ g/mg，腹腔注射給重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子膠囊對 NIH 小鼠的 LD50 及 95%可信限=2. 02(1. 80 2. 25) X 1000 μ g/kg，對 SD 大鼠的 LD50 及 95%可信限=3. 66(3. 20X4. 14) X 1000 μ g/kg。在對SD大鼠長期毒性試驗中，各給藥組SD大鼠的白細胞總數，紅細胞計數，血紅 蛋白含量、紅細胞比積、血小板計數及凝血時間等的測定值均在正常范圍波動，系統尸檢、臟器學數檢查及組織病理學檢查未發現雌雄大鼠的異常變化，停藥恢復期的各項檢查亦在 正常范圍。在生殖毒性試驗中，一般生殖毒性試驗未見重組人粒細胞_巨噬細胞集落刺激因 子膠囊對母鼠受孕率和雄鼠授精功能的明顯影響，給藥組著床率、平均活胎數、呼吸胎率與 生理鹽水對照組相比無顯著差異。大鼠致畸敏感期毒性試驗表明，重組人粒細胞-巨噬細 胞集落刺激因子膠囊對孕鼠沒有毒性和致畸潛力，孕鼠給藥后精神狀況、食量、黃體數、胚 胎植入數、活胎數、活胎體重等與生理鹽水組相比均無明顯差異，胎仔外觀檢查未見畸形， 胚胎顱骨、軀干骨、四肢骨等的骨化與生理鹽水組比較亦無明顯差異。對小鼠圍產期毒性試 驗研究表明，重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子膠囊對母鼠和Fl代母鼠沒有圍產期毒 性，給藥組未見妊娠期母鼠的異常癥狀，仔鼠發育指標和感覺運動協調功能均屬正常，雄仔 鼠的交配能力、雌仔鼠的妊娠率等生殖相關指標亦正常。采用動物骨髓微核試驗、Ames實驗和CHL染色體畸變試驗研究了重組人粒細 胞-巨噬細胞集落刺激因子膠囊的遺傳毒性。動物骨髓微核試驗顯著性檢驗結果說明重組 人粒細胞_巨噬細胞集落刺激因子膠囊無致突變作用。Ames實驗采用平皿摻入法，使用四 種標準突變型菌株測定，結果為陰性。CHL染色體畸變試驗結果亦為陰性。實施例8 hGM-CSF和hGH組合藥物治療前列腺炎組合藥物hGM_CSF與hGH 1 1混勻后，按比例加入輔料，有效成分達 26μ g/100mg 以上。實驗動物前列腺炎模型大鼠24只，雄性，250 300g/只，按體重隨機均分成4 組，分別為模型對照組，hGM-CSF和hGH組合藥物高中低(5g/kg、3g/kg、0. 5g/kg)三個組。 每天定時給藥一次，連續給藥5天。末次給藥1小時后，稱重，并將大鼠置于密封的裝有干 冰的箱子中，幾分鐘后大鼠死亡，進行無菌解剖，取前列腺液10μ 1，放入Iml白細胞稀釋液 中，混勻后取1 μ 1鏡檢白細胞數，鏡下隨機觀察15個視野取平均數，結果發現，與模型對照 組相比，給藥組能在不同程度上減輕白細胞的浸潤，高劑量組作用最明顯(見表一)。表一組合藥物對大鼠前列腺液白細胞數的影響
組別白細胞數(XIO9/L)模型對照組0. 41 士 0. 07低劑量組0. 35 士 0. 08中劑量組0. 32 士 0. 09高劑量組0. 30 士 0. 06無菌操作取下前列腺，稱重，計算前列腺指數[=(前列腺重/體重)Χ100% ]， 見表二。前列腺10%甲醛固定后進行病理學檢查，模型組切片腺體內結構明顯破壞，間 質水腫及增生，有大量炎細胞；給藥組切片腺體存在破壞，較模型組輕，有炎癥反應，以水 腫、增生為特征，各組破壞程度與劑量呈正相關。表二 組合藥物對大鼠前列腺炎體重及前列腺指數的影響
組別給藥前給藥后模型對照組273. 9 士 15. 6250. 6 士 41. 2
9
權利要求
一種治療前列腺炎的組合藥物，其特征在于所述組合藥物的有效活性成分為人生長激素和人粒細胞 巨噬細胞集落刺激因子。
2.根據權利要求1所述的治療前列腺炎的組合藥物，其特征在于所述人生長激素由 包含下述步驟的方法制得(1)保藏號CGMCCNo. 2031的重組桿狀病毒感染家蠶幼蟲或蠶蛹；(2)收集感染的家蠶幼蟲或蠶蛹，粉碎，去除病毒粒子。
3.根據權利要求2所述的治療前列腺炎的組合藥物，其特征在于所述家蠶幼蟲或蠶 蛹在感染前，進行表面消毒。
4.根據權利要求1所述的治療前列腺炎的組合藥物，其特征在于所述人粒細胞_巨 噬細胞集落刺激因子由包含下述步驟的方法制得(1)重組桿狀病毒BmBachGM-CSF感染家蠶幼蟲或蠶蛹；(2)收集感染的家蠶幼蟲或蠶蛹，粉碎，去除病毒粒子。
5.根據權利要求4所述的治療前列腺炎的組合藥物，其特征在于所述家蠶幼蟲或蠶 蛹在感染前，進行表面消毒。
6.制備權利要求1 5所述的治療前列腺炎的組合藥物的方法，其特征在于所述人 生長激素和人粒細胞_巨噬細胞集落刺激因子混合。
7.根據權利要求1所述的治療前列腺炎的組合藥物，其特征在于所述組合藥物還加 有輔料。
8.根據權利要求7所述的治療前列腺炎的組合藥物，其特征在于所述組合藥物的有 效活性成分在所述組合藥物中的含量為26μ g/100mg以上。
9.根據權利要求8所述的治療前列腺炎的組合藥物，其特征在于所述輔料由下述方 法制得家蠶幼蟲或蠶蛹經70%的食用酒精浸泡3min后，于-20 0°C下粉碎勻漿，過100 目網，600rpm離心30 60min后過濾，取上清液于_50°C下冷凍干燥成粉即可。
10.制備權利要求7 9所述的組合藥物的方法，其特征在于人生長激素、人粒細 胞_巨噬細胞集落刺激因子和輔料混合均勻，填裝膠囊、包裝。
全文摘要
本發明涉及基因工程技術領域，具體地說，為了解決現有技術中抗生素只對急性細菌性前列腺炎和慢性細菌性前列腺炎有效和濫用抗生素有很多危害的缺陷，本發明公開了一種治療前列腺炎的組合藥物及其制備方法。所述組合藥物的有效活性成分為人生長激素和人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子，還可以再加入輔料。本發明還提供了所述組合藥物的制備方法。所述組合藥物經動物試驗證明安全有效，可治療前列腺炎。
文檔編號A61P13/08GK101954068SQ20091011976
公開日2011年1月26日 申請日期2009年3月26日 優先權日2009年3月26日
發明者張耀洲 申請人:天津耀宇生物技術有限公司