專利名稱：烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及烏骨雞黑色素提取物的醫(yī)藥用途，特別涉及烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
抑郁癥是一種情感障礙性精神疾病，主要表現(xiàn)為情緒低落、思維遲緩以及運(yùn)動(dòng)抑制，常伴有睡眠障礙、消化功能減弱、軀體不適、自責(zé)自罪，嚴(yán)重的甚至出現(xiàn)自殘、自殺觀念及行為。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、生活節(jié)奏加快以及生活壓力增加，抑郁癥已成為現(xiàn)代社會(huì)危害全人類身心健康的常見(jiàn)病，其發(fā)病率逐年攀升。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WTO)最新統(tǒng)計(jì)分析，抑郁癥是危害人類健康最嚴(yán)重的十大疾病之一，預(yù)計(jì)到2020年，可能成為僅次于心血管病的第二大疾病。抑郁癥的高發(fā)病率、致死率、致殘率和疾病負(fù)擔(dān)已引起社會(huì)的廣泛重視。目前對(duì)抑郁癥的確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，因此其臨床治療效果尚不令人滿意，用于防治抑郁癥的化學(xué)合成藥物目前主要有三環(huán)類抗抑郁劑、單胺氧化酶抑制劑和5-羥色胺重吸收抑制劑等，雖然它們具有一定療效，但存在藥物依賴、毒副作用大、易復(fù)發(fā)等缺陷， 從而限制其廣泛使用。因此，尋求高效、低毒副作用的防治抑郁癥的天然來(lái)源藥物成為該領(lǐng)域新的研究方向。烏骨雞黑色素是從烏骨雞提取的一種以吲哚環(huán)為主體的含硫異聚物，屬于動(dòng)物源性真黑色素。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，烏骨雞黑色素具有抗紫外線、螯合重金屬離子、抗腫瘤以及提高機(jī)體免疫力等功能。迄今為止，烏骨雞黑色素或其提取物在制備防治抑郁癥的藥物方面的用途尚無(wú)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物作為所述藥物的活性成分。根據(jù)本發(fā)明所述的烏骨雞黑色素提取物的用途，其中，所述藥物還包含藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)本發(fā)明所述的烏骨雞黑色素提取物的用途，其中，所述藥物的劑型包括膠囊齊U、片劑、顆粒劑、膏劑、散劑、口服液以及注射劑。本發(fā)明中烏骨雞黑色素提取物可采用如下的提取方法獲得，該方法包括如下步驟1).制備烏骨雞肉泥；2).雙酶水解采用木瓜蛋白酶和風(fēng)味酶消化步驟1)制得的烏骨雞肉泥；3).采用堿液除蛋白。作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，上述提取方法中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1至1 3的蒸餾水，加熱至 90°C至100°C并保溫10分鐘至20分鐘，然后冷卻至60°C至70°C，調(diào)節(jié)pH為5. 0至6. 0，然后向其中加入終濃度為3. 0%至4. 0%的木瓜蛋白酶，在60°C至70°C條件下消化2小時(shí)至 4小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至50°C至60°C，調(diào)節(jié)pH為5. 5至6. 5，向所述混合物中加入終濃度為0. 4%至0. 7%的風(fēng)味酶，在50°C至60°C條件下消化5小時(shí)至7小時(shí)；C.將步驟B所得的混合物加熱至90°C至100°C并保溫20分鐘至40分鐘；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在3500Xg至4500Xg條件下離心10分鐘至20分鐘。作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，上述提取方法中，步驟3)的操作方法如下以1 8至1 15(按體積計(jì))的比例向所述步驟2)所得的物質(zhì)中添加pH為8 至10的NaOH溶液，加熱至55°C至75°C并保溫1小時(shí)至2小時(shí)，然后，在3500 X g至4500 X g 條件下離心5分鐘至10分鐘，收集沉淀。作為本發(fā)明的更加優(yōu)選的實(shí)施方式，上述提取方法中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1的蒸餾水，加熱至100°C并保溫15分鐘，然后冷卻至65°C，調(diào)節(jié)pH至5. 5，然后向其中加入終濃度為3. 8%的木瓜蛋白酶，在65°C下消化2小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至55°C，調(diào)節(jié)pH至6. 0，加入終濃度為0. 6%的風(fēng)味酶，在55°C下消化6小時(shí)；C.將步驟B所得的混合物加熱至100°C并保溫30分鐘；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在4000Xg條件下離心15分鐘。作為本發(fā)明的更加優(yōu)選的實(shí)施方式，上述提取方法中，步驟3)的操作方法如下以1 10 (按體積計(jì))的比例向所述步驟2)所得的物質(zhì)中添加pH為10的NaOH 溶液，加熱至60°C并保溫1. 5小時(shí)，然后，在4000Xg條件下離心5分鐘，收集沉淀。根據(jù)本發(fā)明所述的烏骨雞黑色素提取物的用途，其中，可將所述烏骨雞黑色素提取物懸浮于生理鹽水中使用。本發(fā)明經(jīng)過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了烏骨雞黑色素提取物具有防治抑郁癥的作用，可用于制備防治抑郁癥的藥物。


圖Ia是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間基礎(chǔ)測(cè)試值的統(tǒng)計(jì)分析圖。圖Ib是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間正式測(cè)試值的統(tǒng)計(jì)分析圖。圖2是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例2小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間測(cè)試值的統(tǒng)計(jì)分析圖。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合附圖和實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明。在本發(fā)明的實(shí)施例中，分別利用小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)烏骨雞黑色素提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物抑郁癥模型的保護(hù)作用。實(shí)施例中的試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用GraphPad Prism 5. 0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并繪制分析圖，組間數(shù)據(jù)差異用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并繼之以Tukey氏事后檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)。1、實(shí)驗(yàn)材料烏骨雞黑色素提取物
烏骨雞黑色素的提取可以采用本領(lǐng)域已知的方法，本發(fā)明采用了雙酶水解法并結(jié)合堿液除蛋白來(lái)提取烏骨雞黑色素，其中，分別使用木瓜蛋白酶和風(fēng)味酶(也可使用復(fù)合蛋白酶)進(jìn)行第一步和第二步的酶解。具體操作步驟如下1).制備烏骨雞肉泥將市售的烏骨雞屠宰，去毛，去內(nèi)臟，去骨，保留骨膜，絞成肉泥，取肉泥IOOOg ；2).雙酶水解A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加蒸餾水，蒸餾水與雞肉泥的重量比為 1 1，攪拌均勻，加熱至100°C并保溫15分鐘，然后冷卻至65°C，調(diào)節(jié)pH至5.5，加入終濃度為3.8%的木瓜蛋白酶(購(gòu)自廣西南寧龐博生物工程有限公司)，攪拌均勻，在65°C下消化2小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至55°C，調(diào)節(jié)pH至6. 0，然后，向所述混合物中加入終濃度為0. 6%的風(fēng)味酶(購(gòu)自廣西南寧龐博生物工程有限公司)，在55°C下消化6小時(shí)；C.通過(guò)將步驟B所得的混合物加熱至100°C并保溫30分鐘，對(duì)酶進(jìn)行滅活；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在4000Xg條件下離心15分鐘，收集沉淀，得到烏骨雞黑色素粗提品；3).采用堿液除蛋白。以1 10 (按體積計(jì))的比例向步驟3)所得的粗提品中添加pH為10的NaOH溶液，攪拌均勻，加熱至60°C并保溫1. 5小時(shí)，然后，在4000 X g條件下離心5分鐘，收集沉淀；
重復(fù)該過(guò)程，共4次。使用蒸餾水洗滌上述方法所得的沉淀3次，真空干燥洗滌后的沉淀物，得到烏骨雞黑色素精提品。由上述步驟1)的IOOOg烏骨雞肉泥獲得了 Ig烏骨雞黑色素精提品。取上述烏骨雞黑色素提取方法制備的烏骨雞黑色素精提品，以0. 2g/ml的濃度將其懸浮于生理鹽水中備用。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周齡C57/B6小鼠(購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司)，雌雄各半。使小鼠自由飲食飲水，12小時(shí)黑暗白晝節(jié)律，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境3天。實(shí)施例1 烏骨雞黑餼素提取物對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)抑郁癥模型的保護(hù)作用1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和篩選在給藥前，測(cè)試小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)測(cè)試值，如下進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)用粘性膠帶粘住小鼠尾部末端約2厘米的部位，將小鼠倒懸，固定于水平橫桿上，頭部距桌面約10厘米。在小鼠兩側(cè)用隔板隔開(kāi)動(dòng)物視線，防止相互影響。使小鼠前后左右均無(wú)攀抓的地方，一段時(shí)間后小鼠因失望而活動(dòng)減少。記錄6分鐘內(nèi)后4分鐘的不動(dòng)時(shí)間。淘汰基礎(chǔ)值超出65到130 秒范圍的小鼠，選出20只小鼠作為合格動(dòng)物供實(shí)驗(yàn)用，隨機(jī)分為兩組，每組10只(其基礎(chǔ)測(cè)試值具體數(shù)據(jù)參見(jiàn)下表1)。其中，一組為空白對(duì)照組，每天1次給予200ul生理鹽水腹腔注射；一組為烏雞黑色素提取物組，每天1次給予30mg/Kg烏雞黑色素提取物腹腔注射，兩組均連續(xù)注射7天。表1 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間基礎(chǔ)測(cè)試值(單位秒)
權(quán)利要求
1.烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物作為所述藥物的活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中，所述藥物還包含藥學(xué)上可接受的載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中，所述藥物的劑型包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、膏齊U、散劑、口服液以及注射劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物的提取方法包括如下步驟1).制備烏骨雞肉泥；2).雙酶水解采用木瓜蛋白酶和風(fēng)味酶消化步驟1)制得的烏骨雞肉泥；3).采用堿液除蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1至1 3的蒸餾水，加熱至90°C 至100°C并保溫10分鐘至20分鐘，然后冷卻至60°C至70°C，調(diào)節(jié)pH為5. 0至6. 0，然后向其中加入終濃度為3. 0%至4. 0%的木瓜蛋白酶，在60°C至70°C條件下消化2小時(shí)至4小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至50°C至60°C，調(diào)節(jié)pH為5.5至6. 5，向所述混合物中加入終濃度為0. 4%至0. 7%的風(fēng)味酶，在50°C至60°C條件下消化5小時(shí)至7小時(shí)；C.將步驟B所得的混合物加熱至90°C至10(TC并保溫20分鐘至40分鐘；靜置分層， 收集上層黑色素懸浮層；在3500Xg至4500Xg條件下離心10分鐘至20分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中，步驟3)的操作方法如下以1 8至1 15(按體積計(jì))的比例向所述步驟2)所得的物質(zhì)中添加pH為8至10 的NaOH溶液，加熱至55°C至75°C并保溫1小時(shí)至2小時(shí)，然后，在3500 X g至4500 X g條件下離心5分鐘至10分鐘，收集沉淀。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1的蒸餾水，加熱至100°C并保溫 15分鐘，然后冷卻至65°C，調(diào)節(jié)pH至5. 5，然后向其中加入終濃度為3. 8%的木瓜蛋白酶， 在65°C下消化2小時(shí)；B.將步驟A所得的混合物冷卻至55°C，調(diào)節(jié)pH至6.0，加入終濃度為0. 6%的風(fēng)味酶， 在55°C下消化6小時(shí)；C.將步驟B所得的混合物加熱至100°C并保溫30分鐘；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在4000 Xg條件下離心15分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中，步驟3)的操作方法如下以1 10(按體積計(jì))的比例向所述步驟2)所得的物質(zhì)中添加pH為10的NaOH溶液， 加熱至60°C并保溫1. 5小時(shí)，然后，在4000 Xg條件下離心5分鐘，收集沉淀。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的用途，其中，將所述烏骨雞黑色素提取物懸浮于生理鹽水中使用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物作為所述藥物的活性成分。本發(fā)明中烏骨雞黑色素提取物可通過(guò)雙酶水解法并結(jié)合堿液除蛋白來(lái)制備。根據(jù)本發(fā)明可知，烏骨雞黑色素提取物具有良好的抗抑郁作用，可用于制備防治抑郁癥的藥物。
文檔編號(hào)A61P25/24GK102462696SQ201010535778
公開(kāi)日2012年5月23日 申請(qǐng)日期2010年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月3日
發(fā)明者李博, 賀毅 申請(qǐng)人:李博, 賀毅