專利名稱：具有凍干的疫苗組分的容器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有一種或多種凍干的疫苗組分的疫苗容器，以及用于制備這種容器的方法。
眾所周知，在溶液中的生物材料對(duì)諸如熱，氧化劑，鹽等之類的變化的影響等敏感。
已開發(fā)若干方法來減少一般情況下(尤其在貯存期間)的這些有害影響。
例如，低于0℃在冰箱中的貯存是眾所周知的方法。也經(jīng)常在-70℃下貯存。在更低的溫度，例如在液態(tài)氮中，許多生物材料，例如活細(xì)胞甚至能成功地貯存許多年。
另一個(gè)眾所周知的方法是冷凍-干燥。在冷凍-干燥期間，包含生物材料的溶液首先冷凍，其次水在高的真空和(通常的)零下溫度下蒸發(fā)。
凍干的生物材料能貯存和保持在一個(gè)不變的條件中許多年。
重要的優(yōu)點(diǎn)是凍干的生物材料的貯存溫度可以高于零度，而不損害材料。
可以按照眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)的冷凍-干燥方法完成生物材料的冷凍-干燥。
對(duì)于診斷性試驗(yàn)，在一個(gè)單一容器中結(jié)合緩沖液和酶是可能的，并且冷凍-干燥該容器的內(nèi)含物。然而這一方法在大多數(shù)情況下失敗，由于在試驗(yàn)材料添加之前不應(yīng)該使各種試劑相互反應(yīng)。這一問題最初由Price解決(美國(guó)專利NR.3,655,838)，Price描述了用于分別冷凍-干燥包含診斷性試驗(yàn)的各種生物材料的各種溶液的方法。這一方法簡(jiǎn)單地說是使小滴的各種溶液直接與液態(tài)氮接觸。這導(dǎo)致瞬間冷凍。所冷凍的小滴可以容易地轉(zhuǎn)移到冷凍-干燥器，接著被干燥。形成的干燥的球體稱為凍干球體(lyosphere)。首先的凍干球體的形式與名稱是由于這樣一種事實(shí)，即它們作為球形小滴被冷凍并且后來被凍干。很明顯任何可能的形式的小量液體也都可以通過將它們與冷表面接觸來冷凍，例如，通過將某些液體添加到在冷熱-傳導(dǎo)表面中的小孔中，其后進(jìn)行凍干。
這一方法產(chǎn)生的變體全都稱作凍干球體。
以上提到的Price的方法使得可以將各種組分(它們各自在其凍干球體中，這樣避免過早的反應(yīng))放入一個(gè)容器中。然而，這一方法有相當(dāng)?shù)膭趧?dòng)強(qiáng)度，它需要例如單獨(dú)產(chǎn)生各種不同類型的凍干球體以及添加若干凍干球體至單一容器的添加步驟。
因此，已公開了對(duì)Price的發(fā)明的更有效的替換性方法。例如已開發(fā)了下列方法單一容器中不相容材料冷預(yù)混和瞬間冷凍(美國(guó)專利NR.4,295,280)，在一個(gè)容器中不同位置的不相容材料的冷凍接著冷凍-干燥(美國(guó)專利NR.4,351,158)或從不同噴口共同噴射不相容材料成單一的小滴，其后在單一容器中瞬間冷凍-干燥(美國(guó)專利NR.4,712,310)。
在目前從許多專利(例如美國(guó)專利NR.3,932,943，EPA 448146和WO94/25005)已知在凍干球體中的生物活性材料，如酶，多烯抗菌素或激素。
在疫苗產(chǎn)生領(lǐng)域中，冷凍-干燥是一種經(jīng)常使用的保護(hù)性方法。原則上，冷凍-干燥也用于包含超過一個(gè)致免疫組分的疫苗。在EPA 290197中是這種情況，其中公開了凍干的四價(jià)疫苗。其中使用的方法簡(jiǎn)單四個(gè)疫苗組分，活病毒首先混合然后凍干。
當(dāng)前在疫苗制備的領(lǐng)域中使用冷凍-干燥技術(shù)的一種嚴(yán)重的缺點(diǎn)是已知冷凍-干燥是具有許多變量的十分復(fù)雜的方法，因此以可重現(xiàn)的方式進(jìn)行非常困難。這導(dǎo)致出現(xiàn)下列問題尤其是(但不僅是)在獸醫(yī)疫苗的領(lǐng)域中，通常大量劑量在一安瓿中凍干。疫苗安瓿典型地包括1000或2500劑量，并且在注冊(cè)當(dāng)局以前的登記也是如此。冷凍-干燥前，大體估價(jià)材料的滴度，但是最后的滴度僅能在冷凍-干燥之后測(cè)定，因?yàn)椋缢峒暗睦鋬?干燥期間，滴度總是減少而不是可預(yù)測(cè)的。結(jié)果，在實(shí)踐中原包含超過2500劑量的容器后變得僅包含2400劑量。在那種情況下，安瓿僅能以1000劑量安瓿投放市場(chǎng)，由于那是唯一的官方登記的其它劑量。
結(jié)果，以這疫苗接種的動(dòng)物事實(shí)上是過份免疫的(一種不期望的情形)。產(chǎn)生成本也明顯增加。
在冷凍-干燥之前仔細(xì)考慮劑量數(shù)量的增加不是選擇性的如果某疫苗批更有效地被干燥，從開始用太高劑量人們可能死亡。
最近解決這一問題日益困難，因?yàn)楫?dāng)前歐洲注冊(cè)當(dāng)局遵循僅允許其中劑量的數(shù)量在完全限定的上限和下限之間的疫苗的登記系統(tǒng)。由于在產(chǎn)生和冷凍-干燥系統(tǒng)兩者中有許多可變因素，一個(gè)大規(guī)模的產(chǎn)生中保持在這些限度內(nèi)是十分困難的。
尤其當(dāng)組合疫苗是所需的時(shí)，問題更突出。因?yàn)樵诶鋬?干燥后估價(jià)單一組分疫苗留下的劑量滴度已經(jīng)困難，在多元疫苗中保證各疫苗組分完全限定的量更加困難。
另外，組合疫苗存在下列問題在目前疫苗制造者使用的經(jīng)典的冷凍-干燥方法中，在冷凍-干燥前混合各組分。這樣，對(duì)于制備全范圍的針對(duì)例如兩種疾病的單/多組分疫苗而言，3種不同的產(chǎn)物必須保持貯存包含抗A疫苗的產(chǎn)物，包含抗B疫苗的產(chǎn)物，抗A和抗B疫苗的產(chǎn)物。
在針對(duì)三種疾病的疫苗的情況下，七種不同的疫苗/組合必須制造和貯存。例如，用于貓的Progard-3(由Intervet B.V.Boxmeer，荷蘭獲得)是一種包含3種不同的活的減活的病毒的凍干的疫苗。對(duì)于四種疾病，涉及到十五種不同的疫苗/組合。例如，用于狗的Progard-5(由Intervet B.V.Boxmeer，荷蘭獲得)是一種包含4種不同的活的減活的病毒的凍干的疫苗。這意味著一個(gè)大的貯存量。明顯地需要解決這一問題的方法。
在疫苗產(chǎn)生領(lǐng)域中所遇到另一個(gè)嚴(yán)重的問題是實(shí)際冷凍-干燥方法的空間-占用特點(diǎn)。在十分小的體積中濃縮疫苗材料達(dá)十分高的劑量是不可能的。因此，用于經(jīng)典的冷凍干燥的包含若干疫苗劑量藥水瓶總是包含比較大的體積的液體。冷凍-干燥必需的是與真空接觸的這一液體的大尺寸的表面。因此，因僅被冷凍的沉淀的頂端與真空接觸，所以總是在具有寬底的比較大的瓶子中干燥疫苗。這些瓶子有典型地5厘米高，同時(shí)，需要附加的2厘米高，用于在冷凍-干燥期間松散地放置在頂端上的橡皮塞。
當(dāng)然，這意味著在冷凍-干燥裝置中冷凍的材料對(duì)空的空間的比率是極端低效能的。這依次導(dǎo)致高成本-低效的產(chǎn)生方法。解決這一問題是非常合乎需要的。
此外，因?yàn)樗鋬龅某恋砜偸遣坏?0％(在大多數(shù)情況下僅25％)與真空直接接觸，所以冷凍-干燥是十分耗時(shí)的。在冷凍-干燥期間疫苗組分被保持僅恰好在冷凍-點(diǎn)之下，因?yàn)橐云渌绞秸舭l(fā)液體需要更多時(shí)間。然而，就在低于零度的溫度下的干燥期幾乎不可避免地導(dǎo)致滴度的降低。
本發(fā)明通過提供包含一種或多種凍干的疫苗組分的疫苗容器給出一種直接解決上述問題的方法，其特征在于在其中所說的疫苗組分在兩個(gè)或更多個(gè)凍干體中存在，至少一個(gè)所說的凍干體是凍干球體。
凍干體被理解為凍干材料，通常在具有凍干材料的藥水瓶中發(fā)現(xiàn)的經(jīng)典的餅狀物為一種這樣的凍干體。凍干球體也被理解為一種這樣的凍干體。在一可能的實(shí)施方案中，按照本發(fā)明的疫苗容器包含作為一個(gè)凍干體的一種經(jīng)典的餅狀物和作為另一個(gè)凍干體的凍干球體。
按照本發(fā)明的疫苗容器具有這樣一種優(yōu)點(diǎn)，它提供了解決冷凍-干燥后無法預(yù)言滴度損失的問題。這可以容易地舉例說明如下對(duì)于包含例如1000劑量的疫苗組分的疫苗容器的制備，用900劑量的估計(jì)的滴度制造一種經(jīng)典的餅狀物疫苗組分。為了最后獲得1000劑量的疫苗容器，首先在冷凍-干燥之后測(cè)定滴度。接著，用例如冷凍-干燥后估計(jì)的10劑量的產(chǎn)生凍干球體。其中，也測(cè)定冷凍-干燥之后的準(zhǔn)確的滴度。如果餅狀物的滴度變成850劑量，凍干球體的是10劑量，則向具有凍干的餅狀物的藥水瓶中提添加15個(gè)凍干球體足夠得到所要求的精確的滴度。
其也能由下列實(shí)施例說明對(duì)于包含例如1000劑量的疫苗組分的疫苗容器的制備，用100劑量的凍干后的估計(jì)的滴度制造凍干球體。容器不包含任何餅狀物。如果每一凍干球體在冷凍-干燥之后變成保持僅91劑量的滴度，則簡(jiǎn)單添加十一個(gè)凍干球體(而不是估計(jì)的十個(gè)凍干球體)至容器就足夠了。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，制造包含不同劑量的凍干球體。對(duì)于包含1000劑量的疫苗容器的制備，將各包含冷凍-干燥后90劑量的11個(gè)凍干球體和包含10劑量的1個(gè)凍干球體添加至所說容器中，獲得所需的1000劑量。
疫苗組分是那些特異性地激發(fā)針對(duì)疫苗組分所源于的病原體之免疫應(yīng)答的組分。這樣的組分可以源于一種病原體，例如抗原脂多糖和抗原蛋白質(zhì)，或例如，兩種不同的抗原蛋白質(zhì)。它們也可以包括蛋白質(zhì)或多糖的抗原部分。這些組分一般稱作亞單位組分。在許多情況之下，疫苗組分包括整個(gè)病原體。疫苗組分可以是例如菌苗，或活的減毒的細(xì)菌或病毒。
優(yōu)選地，疫苗組分是活的(改造的)細(xì)菌或病毒。其例子是沙門氏菌屬的細(xì)菌，紐卡斯?fàn)柤膊〔《荆瑐魅拘灾夤苎撞《竞图倏袢〔《尽?br> 組合疫苗是包含各種疫苗組分的疫苗。組合疫苗也可以包括源于兩種或多種病原體的抗原組分。更多復(fù)合組合也是可能的。這樣，以上所述的一種類型的疫苗，以及其混合物稱作組合疫苗。
容器被理解為凍干球體的任何有用的包裝用品。所說的容器可以是例如一般用于疫苗的包裝和貯存的玻璃藥水瓶。向玻璃藥水瓶添加稀釋劑均勻溶解凍干球體足以使疫苗易于使用。
另一可能的形式的容器的是預(yù)先填充過的注射器，包含若干凍干球體。這一注射器能例如恰好在使用前充入稀釋劑。在凍干球體均勻溶解后，疫苗就可直接使用。
包裝凍干球體的還一種形式是把它們包裝在水泡(blister)中。水泡通常是塑料薄片，具有包含凍干球體的坑的行，并且以明礬箔覆蓋。
這使得直接在位置(例如雞舍)從水泡添加足夠的凍干球體至飲水槽中保證成功地接種成為可能。另一種可能性在于利用無菌塑料管來貯存適當(dāng)?shù)牧康膬龈汕蝮w。這將避免使用昂貴的占用空間玻璃藥水瓶。很明顯能用來包含凍干球體的任何裝置都能用于本發(fā)明。
稀釋劑是一種溶解凍干球體的液體。這種稀釋劑可以僅僅是水，或另一方面它可以是緩沖液和佐劑的復(fù)合混合物。這將主要取決于凍干前哪一種添加劑已添加至凍干球體中。
在藥水瓶中冷凍-干燥產(chǎn)生包含疫苗組分餅狀物的經(jīng)典的方法是耗地耗時(shí)的，如以上提及的。如果疫苗組分以凍干球體的形式凍干，它們可以在冷凍-干燥方法期間在冷凍-干燥機(jī)的冷平板的整個(gè)表面上擴(kuò)散。它們也能堆疊使得凍干球體的各層在冷平板上干燥。另外，因?yàn)榕c經(jīng)典的情形相反，這一方法不涉及任何高度-消耗藥水瓶，冷平板能被堆疊至一個(gè)十分高的密度。結(jié)果，冷凍-干燥機(jī)的容量實(shí)質(zhì)上增加，直到冷凝器容量成為限制因素。此外，可以使用非常小的冷凍-干燥器。因此在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，在容器中的所有凍干體是凍干球體。
如果組合疫苗是所需的，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)比所說的更多。簡(jiǎn)單添加足夠的各類型的凍干球體至容器中獲得具有完整劑量的各組分的組合疫苗就足夠了。
原則上，在容器中的餅狀物和/或一些凍干球體包括兩個(gè)疫苗組分也是可能的，它們可以用包含一定量的一種單一疫苗組分的凍干球體補(bǔ)充至所需的程度。
同時(shí)，本發(fā)明提供了解決大貯存量的問題，大貯存量是貯存例如三-或四-組分疫苗的各種可能的變體所需的。
各組分分別冷凍-干燥，而不是如目前冷凍-干燥組合疫苗所需的在冷凍干燥之前混合各組分。這樣各組成部分可以被單獨(dú)貯存。需要時(shí)，可以經(jīng)將合適量的各所需組分凍干球體放入一個(gè)容器中立即進(jìn)行各種組合。這樣使得例如4-組分組合疫苗僅僅貯存在4個(gè)盒子中，各盒子包含一種類型的凍干球體，需要時(shí)，組成任何單一的或組合的疫苗容器，而不需要貯存在15個(gè)不同的各自包含一種所預(yù)制的組分或混合物的容器中。
本發(fā)明另一個(gè)十分重要的優(yōu)點(diǎn)舉例說明如下當(dāng)前，包含一個(gè)病原體的兩個(gè)或多個(gè)血清型的組合疫苗通過預(yù)混合和冷凍-干燥病原體的各種血清型來制備。注冊(cè)當(dāng)局要求凍干的最后的產(chǎn)物的不同的血清型各自的滴度單獨(dú)測(cè)定。然而這在大多數(shù)情況之下幾乎是不可能的，因?yàn)橐环N血清型的抗血清幾乎總是與其它的血清型交叉反應(yīng)。此外，甚至當(dāng)疫苗組分不是血清學(xué)相關(guān)的時(shí)，實(shí)踐上針對(duì)一種組分的血清與非有關(guān)其它疫苗組分之間的非特異性相互作用經(jīng)常擾亂滴度正確的測(cè)定。
本發(fā)明明顯地解決這個(gè)問題為了測(cè)定凍干球體中各種疫苗組分的各種滴度，僅需從容器取出每一不同的血清型的凍干球體并且測(cè)定每一不同的凍干球體的滴度。
在一種優(yōu)選的形式中，疫苗容器包括凍干球體，其中至少一些包括單一疫苗組分。這些單一組分凍干球體可以用來調(diào)整在容器中的每一疫苗組分的總量。
在一種更加優(yōu)選的形式中，每一凍干球體包括一種單一疫苗組分。直到現(xiàn)在，全范圍的例如基于4種組分的15中不同的疫苗僅能這樣制備實(shí)際制備15種不同的單一/混合物，在不同的容器中冷凍-干燥各單一/混合物，并貯存15種容器的各種。因此，按照本發(fā)明的疫苗容器有下列額外的優(yōu)點(diǎn)例如如果必須獲得針對(duì)四不同的病原體的全范圍的單一/組合疫苗，貯存各自具有一個(gè)不同的疫苗組分的4種凍干球體就足夠了。通過添加四種不同的凍干球體中的一種或多種至容器中，可以容易地組成14種不同的疫苗和組合。
在有關(guān)更加優(yōu)選的形式中，疫苗容器包括源于兩個(gè)或多個(gè)病原體的疫苗組分。基于多個(gè)病原體組分的疫苗有這樣一種優(yōu)點(diǎn)，即單獨(dú)施用這樣一種疫苗足以誘導(dǎo)針對(duì)多種疾病的保護(hù)作用。很清楚，其可以包含各病原體的幾種不同的疫苗組分。
各種凍干球體的大小并不關(guān)鍵。然而如果選擇凍干球體容易操作的大小會(huì)是有利的。例如，充分限定量的一種特定組分的疫苗材料包含在充分限定的和使其易于操作的足夠大小的凍干球體中，僅添加合適量的這些凍干球體到容器中就足以保證這一特定組分在容器中的正確劑量。
這簡(jiǎn)化了疫苗的產(chǎn)生，由于在產(chǎn)生期間它避免困難的定量步驟，如稱量。基于比較大的凍干球體的疫苗可以通過每一組分凍干球體的數(shù)量簡(jiǎn)單的計(jì)數(shù)容易地組成。
因此，在本發(fā)明的一個(gè)更為優(yōu)選的實(shí)施方案中，凍干球體具有在1和10毫米之間變化的直徑。
在另一個(gè)更為優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗容器包含彩色凍干球體，這樣的每一種凍干的球體都有指示所說的凍干球體的內(nèi)含物的顏色。通常，疫苗制造廠以多種有色的蓋子蓋在容器上標(biāo)志其各種疫苗。使各種凍干球體有顏色的優(yōu)點(diǎn)是它可以初步檢查和明確哪一種疫苗組分存在于容器中，以及它們以何種劑量存在。這提供了迅速，簡(jiǎn)單和安全的對(duì)容器內(nèi)含物的雙檢。
通常，疫苗容器將包含在1和10.000劑量之間的疫苗。用于人用和獸用(如貓或狗用)單獨(dú)接種的單一劑量容器更普通。
人類脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗，人類活的凍干的傷寒疫苗或犬牙細(xì)小病毒疫苗通常作為單一劑量疫苗出售。很明顯，對(duì)單一劑量疫苗的制備(fine-tuning)而言，有關(guān)多劑劑量疫苗的描述中的相同原則完全適用。
另一方面，對(duì)大雞舍新孵化小雞的接種，采用10.000劑量疫苗容器用于針對(duì)傳染性支氣管炎病毒的大量接種是平常的事情。
對(duì)于大量農(nóng)場(chǎng)養(yǎng)殖的動(dòng)物如牛的針對(duì)傳染性的牛Rhinotracheitis或副流感病毒的接種，具有10劑量的疫苗容器在使用中十分普遍。
在不包含經(jīng)典的餅狀物的疫苗容器中，疫苗容器中的凍干球體的數(shù)量通常在從2至40的范圍內(nèi)。為獲得本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)，兩種凍干球體是最小限度的量。從實(shí)際考慮，數(shù)量通常不超過40個(gè)凍干球體，除非使用具有十分小的體積的凍干球體。如果使用具有100微升體積的凍干球體，大約40個(gè)凍干球體將裝滿一般的容器。典型地，在一個(gè)容器中的凍干球體的數(shù)量將在5和10之間變化。
類似經(jīng)典的餅狀物，凍干球體通常包含一些穩(wěn)定劑，例如糖，蛋白質(zhì)，填料如纖維素，以及例如形成在冷凍-干燥期間避免皺縮的基質(zhì)的瓊脂。在干燥之后，這種基質(zhì)也阻止凍干球體破碎。基質(zhì)被認(rèn)為是使凍干球體的形狀在冷凍-干燥期間或其后大多數(shù)保持不變的材料。由于采用通氣(airy)的基質(zhì)材料例如甘露醇，或稀釋明膠，瓊脂或瓊脂糖溶液，具有不變的三維形式的非常通氣的凍干球體在干燥之后被保持下來。這樣的通氣結(jié)構(gòu)的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是它容易在水中再溶解。這加速施用過程。結(jié)果，通常被運(yùn)用于經(jīng)典的餅狀物和凍干球體的基質(zhì)材料非常易碎。因此，以其初期形式(即以其基質(zhì)形式)的經(jīng)典的凍干球體的腸胃外應(yīng)用是不可能的。被嵌入在剛性基質(zhì)中的(所謂的(微)膠囊化)疫苗的腸胃外施用變得越來越重要。理由之一是被包裹的材料能被直接輸注進(jìn)皮膚或其之下，而不使用稀釋劑勻化材料。輸注已由Wose等(Adv.Drug Deliv.Vev.119-39(1987))描述。使用包裹材料的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是這種包裹材料十分適合于口頭免疫。例如由Mestecky等(控制釋放雜志，28131-141(1994))，和Eldridge等(實(shí)驗(yàn)分子生物學(xué)進(jìn)展251192-202(1989))所示的。
因此，在一個(gè)更為優(yōu)選的實(shí)施方案中，在疫苗容器中的凍干球體包括基質(zhì)材料，它有足夠的強(qiáng)度使得凍干球體直接轉(zhuǎn)移進(jìn)接受者，而不需要首先稀釋。 剛性基質(zhì)是阻止操作時(shí)或與流體接觸時(shí)凍干球體瞬間崩潰的基質(zhì)。
具有剛性基質(zhì)的凍干球體可以通過使凍干體從空氣吸潮(導(dǎo)致皺縮)接著進(jìn)行另一輪冷凍-干燥(其間凍干球體以其剛性狀態(tài)固定)容易地獲得。這樣一種凍干球體對(duì)在宿主中被輸注具有足夠的強(qiáng)度。
另一個(gè)獲得剛性凍干球體的方法是添加聚合物至制造凍干球體的起始材料中。還一種方法是首先產(chǎn)生凍干球體，然后用剛性外殼包裹。
所說基質(zhì)必須有足夠的強(qiáng)度存在于所需的施用方法中，例如，注射或口頭施用中。在施用于動(dòng)物之后，所說基質(zhì)可以也可以不必仍然是剛性的可以置入一種惰性，非可降解的材料，其對(duì)宿主慢慢地釋放疫苗組分，并且可以(如果需要)在一段時(shí)間之后從宿主除去。另一方面，可以輸注或口頭施用凍干體，其在幾小時(shí)到幾周被宿主降解。
下列文獻(xiàn)中描述了各種惰性和生物可降解的聚合物Monis等(疫苗124-11(1994))，Langer，R.和Moses，M.(細(xì)胞生物化學(xué)雜志45340-345(1991))，Langer，R.(酶學(xué)方法735774(1981))以及Langer，R.(科學(xué)2491527-1533(1990))。由Eldridge等綜述了對(duì)這些聚合物的利用(血液學(xué)研討416-25(1993))。用于藥物的控制性釋放的大多數(shù)研究的聚合物是由乳酸和乙醇酸(哺乳動(dòng)物的能量代謝的正常中間產(chǎn)物)制造的。
如果與嵌入的疫苗組分比較，聚合物的孔徑足夠小，疫苗組分可以僅從凍干體內(nèi)部慢慢擴(kuò)散至環(huán)境中。這樣，它們僅僅慢慢地釋放。由此，包含這樣一種聚合物的凍干球體允許疫苗組分的所謂的緩慢釋放。它有優(yōu)點(diǎn)，接收者的免疫的系統(tǒng)在幾天到幾周期限內(nèi)連續(xù)受疫苗組分刺激。這種持續(xù)釋放具有給出更好和更長(zhǎng)的免疫性的優(yōu)點(diǎn)。緩慢釋放(也稱持續(xù)釋放)已由例如Langer，R和Folkman，J.(自然263797-800(1976))和Preis，I.和Langer，R.S.(酶學(xué)方法7357-75(1981))綜述。
因此，在疫苗容器更加更優(yōu)選的實(shí)施方案中，在容器中的一些凍干體包含基質(zhì)，它使得疫苗組分的緩慢釋放。
本發(fā)明也提供了制備按照本發(fā)明的疫苗容器的方法發(fā)明，所說的方法的特征在于它包括將包含至少一個(gè)疫苗組分的一種或多種凍干球體添加至容器中，所說容器包含含有至少一個(gè)疫苗組分的另一個(gè)凍干體。在一種容易的形式中，所說的方法包括將具有疫苗組分的凍干球體添加至容器中，所說容器包含以餅狀物形式的凍干體。
本發(fā)明也提供了其中將包含至少一個(gè)疫苗組分的兩個(gè)或更多凍干球體添加至容器中的方法。這些凍干球體可以包含相同的疫苗組分，而各種凍干球體之間的量可以不同或相同。
一種更優(yōu)選的形式中，添加其疫苗組分源于兩種或多種病原體的凍干球體。
在一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，添加大小為1-10毫米的凍干球體。這具有用可以計(jì)數(shù)(而不需例如稱量)這些凍干球體的簡(jiǎn)單裝置易于添加(添加凍干球體直至達(dá)到正確的數(shù)量)的優(yōu)點(diǎn)。這樣的凍干球體可以通過使小滴(例如100微升)冷凍容易地制造。冷凍-干燥之后，這些小滴直徑為5和6毫米。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，將染料添加至各凍干球體，以便具有特定疫苗組分的各凍干球體染上特定的顏色。對(duì)這一目的而言，可以使用任何藥學(xué)上可接受的染料。
在另一個(gè)實(shí)施方案，添加至少一種包含剛性基質(zhì)的凍干球體。
在一種更加優(yōu)選的形式中，至少一種所說的添加的凍干球體的基質(zhì)有使疫苗組分緩慢釋放的足夠的密度。
最后，本發(fā)明提供了包含以上所述的疫苗容器的疫苗包(pack)。疫苗包被認(rèn)為是疫苗的任何可能的形式。在一個(gè)簡(jiǎn)單的形式中，所說的疫苗容器包含含有疫苗組分的疫苗容器，其與說明一起在盒子中包裝。在更為復(fù)雜的形式中，所說的疫苗容器可以例如額外地包含稀釋劑和注射器。
實(shí)施例1包含活紐卡斯?fàn)柤膊lone 30的凍干球體的制備用紐卡斯?fàn)柤膊〔《局昕寺lone 30感染雞蛋，并按照在雞蛋上培養(yǎng)病毒的標(biāo)準(zhǔn)方法培養(yǎng)。收獲Allantoic液。
向1000毫升Allantoic液中添加下列物質(zhì)66.7克低脂奶粉16％穩(wěn)定劑所形成的液體稱為疫苗-液體。
穩(wěn)定劑由下列物質(zhì)組成Tryptose 210克Aqua-dest 1200ml將包含100微升以上提到的疫苗液體的小滴迅速冷卻至-196℃。向各標(biāo)準(zhǔn)藥水瓶(10毫升體積)中裝入8個(gè)冷凍的小滴，并將藥水瓶放置在冷凍-干燥器中。在所有操作期間特別注意保持凍干球體冷凍。完全按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行冷凍-干燥。凍干球體-滴度和餅狀物-滴度的比較在這一試驗(yàn)中，使用兩組藥水瓶如以上所述，向各標(biāo)準(zhǔn)藥水瓶(10毫升體積)中裝入8個(gè)冷凍的小滴，裝入2毫升以上提到的疫苗液體的比較藥水瓶被凍干。將這兩組藥水瓶具有凍干球體的藥水瓶以及具有經(jīng)典的凍干的餅狀物的藥水瓶用于滴度-比較實(shí)驗(yàn)。
完成兩個(gè)實(shí)驗(yàn)一個(gè)是用活的減毒的的傳染性的支氣管炎病毒IB H120(05098A批)，一個(gè)用活的減毒的紐卡斯?fàn)柤膊〔《綥aSota(05088B批)。
對(duì)下面的事實(shí)進(jìn)行校正，用于具有餅狀物的藥水瓶制備的體積是2ml，而具有凍干球體的藥水瓶?jī)H包含0.8ml的等同物。
表 1AIBH120(05098A批)的滴度冷凍-干燥后的滴度藥水瓶 8.4凍干球體 18.3表 IBND LaSota(05088B批)的滴度冷凍-干燥后的滴度藥水瓶10.1凍干球體 10.2表1A和1B清楚地說明，餅狀物和凍干球體兩者的滴度是完全可比的。
這里必須指出，在藥水瓶中凍干球體與包含經(jīng)典的餅狀物的藥水瓶一道干燥。干燥時(shí)間與通常用于具有經(jīng)典的餅狀物的藥水瓶的相同。因此，這一實(shí)驗(yàn)不表現(xiàn)出凍干球體較短的干燥時(shí)間的任何穩(wěn)定化作用。與經(jīng)典藥水瓶比較的凍干球體的必要的冷凍-干燥體積的比較當(dāng)前的方法；具有餅狀物的藥水瓶藥水瓶的直徑是22毫米。在冷凍-干燥裝置表面每平方米可以放置2340個(gè)藥水瓶。就冷凍-干燥裝置的表面的總?cè)萘慷裕慌斜桓稍锏捏w積是20.2升，參見表2。
凍干球體方法100微升凍干球體的球體直徑是5.75毫米，50微升凍干球體的是4.57毫米。它們能堆疊至少在3個(gè)層中。在每平方米的凍干球體的數(shù)量每層分別是34600或54936。所有實(shí)驗(yàn)以三層進(jìn)行。就冷凍-干燥裝置表面的總?cè)萘慷裕慌斜桓稍锏捏w積是89.4升，參見表2。
冷凍-干燥裝置的冷凝器(100千克冰)的容量在這些實(shí)驗(yàn)中是限制因素。
表2直徑 疫苗最大升數(shù)當(dāng)前的1ml/藥水瓶22毫米 20.2升凍干球體100微升 5.75毫米 89.4升凍干球體50微升 4.57毫米 71.1升表2顯示，如果凍干球體以100微升的形式凍干，總體積為89.4升的疫苗液體可以在一批中干燥，而如果采用經(jīng)典的方法，一批中僅可以干燥20.2升。因此，干燥100微升凍干球體的效率超過經(jīng)典方法的大約4.4倍。
權(quán)利要求
1.包含一種或多種凍干的疫苗組分的疫苗容器，其特征在于所說的疫苗組分存在于兩個(gè)或多個(gè)凍干體中，至少一個(gè)所說的的凍干體是凍干球體。
2.按照權(quán)利要求1的疫苗容器，其特征在于所說的凍干體是凍干球體。
3.按照權(quán)利要求1或2的疫苗容器，其特征在于至少一個(gè)凍干體包含一個(gè)單一疫苗組分。
4.按照權(quán)利要求1-3的疫苗容器，其特征在于每一個(gè)凍干體包括一個(gè)單一疫苗組分。
5.按照權(quán)利要求1-4的疫苗容器，其特征在于疫苗組分源于兩種或多種病原體。
6.按照權(quán)利要求1-5的疫苗容器，其特征在于所說的凍干球體具有范圍在1和10毫米之間的直徑。
7.按照權(quán)利要求1-6的疫苗容器，其特征在于每一個(gè)凍干體都有指示所說凍干球體內(nèi)含物的顏色。
8.按照權(quán)利要求1-7的疫苗容器，其特征在于至少一種所述的凍干體包含剛性基質(zhì)。
9.按照權(quán)利要求8的疫苗容器，其特征在于所說的基質(zhì)允許疫苗組分緩慢釋放。
10.用于制備按照權(quán)利要求1的疫苗容器的方法，其特征在于其包括將一個(gè)或多個(gè)包含至少一種疫苗組分的凍干球體添加至容器中，該容器含有包含至少一種疫苗組分的另一個(gè)凍干體。
11.用于制備按照權(quán)利要求2的疫苗容器的方法，其特征在于其包括將兩個(gè)或多個(gè)包含至少一種疫苗組分的凍干球體添加至容器中。
12.疫苗包，其包含按照權(quán)利要求1-9的疫苗容器。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含一種或多種凍干的疫苗組分的疫苗容器。所說的疫苗組分存在于兩個(gè)或多個(gè)凍干體中，其中至少一個(gè)凍干體是凍干球體。此外，本發(fā)明涉及用于制備這種疫苗容器的方法。本發(fā)明也涉及包含疫苗容器的疫苗包。
文檔編號(hào)A61K39/00GK1163102SQ97102928
公開日1997年10月29日 申請(qǐng)日期1997年3月6日 優(yōu)先權(quán)日1996年3月7日
發(fā)明者A·T·M·維爾德比克, H·A·米德爾比克 申請(qǐng)人:阿克佐諾貝爾公司