專利名稱：烏司他丁作為制備抗hiv-1病毒藥物的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及烏司他丁作為制備抗Hiv-I病毒藥物的應用。
背景技術：
AIDS自1970年以來就以驚人的速度在全球蔓延，近年來在防治艾滋病方面取得巨大的進展，但仍缺乏根治HIV感染的有效藥物。現階段的治療目標是最大限度和持久的降低病毒載量；獲得免疫功能重建和維持免疫功能；提高生活質量；降低HIV相關的發病率和死亡率。治療方法包括一般性治療、抗病毒治療、恢復和改善免疫功能的治療和機會性感染及惡性腫瘤的治療。其中抗病毒是治療的關鍵。隨著HIV蛋白酶抑制劑的出現，就出現了高效抗反轉錄病毒聯合療法(highly active anti-retroviral therapy, HAART)的應用，大大提高了抗HIV的療效，顯著改善了 AIDS患者的生活質量和預后，使AIDS的治療前進了一大步。當前主要的抗病毒藥物已獲批準進入市場的有16種，主要分三大類核苷類反轉錄酶抑制劑(NRTI)、非核苷類反轉錄酶抑制劑(NNRTIs)和蛋白酶抑制劑(PI)。其中蛋白酶抑制劑(protease inhibitor, PI) :HIV_1蛋白酶是一個對稱的二聚體，在該酶的催化下，HIV有兩種蛋白前體裂解為成熟蛋白，所以此酶對病毒的復制非常重要。蛋白酶抑制劑能通過抑制蛋白酶即阻斷HIV復制和成熟過程中所必需的蛋白質合成，從而抑制HIV的復制。此類制劑包括
A.沙奎那韋(saquinavir):高效高選擇性的HIV蛋白酶抑制劑。本品作用于HIV繁殖的后期，與HIV蛋白酶的激活點結合，使之失去結合和水解斷裂多肽的功能。本品抑制HIV蛋白酶與其它抗HIV病毒藥如疊氮胸苷，抑制HIV逆轉錄酶的作用靶酶系不同，無交叉耐藥病毒產生。600mg，2次/d或3次/d。副作用可有惡心、嘔吐、腹瀉等消化道癥狀，亦可見頭痛，轉氨酶升高等。B.茚地那韋(indinavir) : (HIV蛋白酶抑制劑，和其他抗逆轉錄病毒藥物聯合使用。800mg，3次/d。副作用有惡心、嘔吐、頭痛、乏力、眩暈、皮疹等，并可致非結合膽紅素升聞、血小板減少、腎結石、血糖升聞及脂肪重新分布等。C.奈非那韋(nelfinavir) :750mg,3次/d。副作用有腹灣、高血糖等。D.利托那韋(ritonavir) =HIV-I和HIV-2天冬氨酸蛋白酶的口服有效抑制劑，阻斷該酶促使產生形態學上成熟HIV顆粒所需的聚蛋白，使HIV顆粒因而保持在未成熟的狀態，從而減慢HIV在細胞中的蔓延，以防止新一輪感染的發生和延遲疾病的發展。本品對齊多夫定敏感的和齊多夫定與沙喹那韋耐藥的HIV株一般均有效。300 600mg，2次/d。副作用有惡心、嘔吐、腹瀉、乏力、感覺異常、肝功能不良、甘油三酯升高、尿酸增加、血糖升高
坐寸o上述三類藥物多數都有不良反應，單用很難有效抑制病毒的復制，且易產生耐藥。因此，強調聯合用藥。聯合用藥的方案很多，目前多以一種蛋白酶抑制劑加兩種NRTI制劑，或兩種蛋白酶抑制劑加一兩種NRTI制劑，常見的聯合方案有沙奎那韋ZDV 3TC ;或奈非那韋D4T ddi ;或茚地那韋ZDV ddi ;或利托那韋ZDV ddc ;或沙奎那韋利托那韋D4T 3TC。使用這些聯合方案治療，能同時抑制HIV復制過程的多個環節，可高效抑制HIV復制，最大限度降低耐藥性，提高患者生活質量和存活率，顯著降低母嬰垂直傳播的危險性等。關于抗病毒治療的時機HAART聯合方案應用所取得的療效，重新喚起人們戰勝獲得性免疫缺陷綜合征的信心。一度使許多醫師認為越早治療，效果越好。但是隨著應用時間的延長，人們發現盡管聯合治療能夠抑制血液中的病毒載量到測不到的水平，但是要清除淋巴細胞、巨噬細胞和神經組織內藏匿的病毒并不容易，可能要治療幾十年甚至終身服藥。然而，服藥期間，除了消化道反應和骨髓抑制等常見副作用以外，這些藥物引起的其他嚴重的毒副作用，患者的依從性、順應性比較差，加以HIV的抗藥性越來越大，抗藥性毒株的傳播越來越嚴重等等，迫使醫師慎重考慮治療時機。目前主張①已發展至AIDS者，無論⑶4及病毒載量的值高低如何，都應進行治療！②無癥狀者的，CD4〈200X106/L，雖然病毒載量測不出也應治療；@CD4細胞 >200X 106/L，但〈350X 106/L，病毒載量不高，患者無癥狀，此時的治療仍有爭論；④無癥狀者的⑶4>350X 106/L，病毒載量>55000拷貝數，目前大多主張治療；⑤無癥狀者的⑶4>350X 106/L，病毒載量〈55000拷貝數，現大多主張繼續監控⑶4量；⑥間斷治療。

發明內容
發明目的本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種既可以在感染HIV后的窗口期防止AIDS的發病，又可以對已患AIDS的患者有治療作用，防止復發，而且沒有明顯的毒副作用的抗HIV-I病毒的藥物。技術方案本發明所述的烏司他丁作為制備抗HIV-I病毒藥物的應用，烏司他丁的濃度為200 400ii g/ml o優選地，所述烏司他丁的濃度為400 ii g/ml，在該濃度下，可以對HIV-I病毒達到100%抑制率。優選地，所述烏司他丁的濃度為200 ii g/ml，在該濃度下，可以對HIV-I病毒達到99%抑制率，同時，對細胞的毒性作用更小，經濟成本更低。所述藥物中還包括可藥用輔料。所述藥物可以為凍干粉針劑，所述可藥用輔料為甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡糖糖中的任意一種或幾種。所述藥物也可以為注射液，所述可藥用輔料為注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的任意一種或幾種。有益效果1、本發明藥物可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已經發生的不同階段，與已上市的藥物相比毒副作用小；2、本發明藥物，在烏司他丁的濃度為400 ii g/ml時，可以對HIV-I病毒達到100%抑制率，而且在細胞毒試驗中，沒有明顯的細胞毒性作用；3、多年來，在使用本發明藥物活性成分烏司他丁治療急性胰腺炎的臨床觀察中未發現明顯的毒副作用，因此是相對安全的。
具體實施例方式下面對本發明技術方案進行詳細說明，但是本發明的保護范圍不局限于所述實施例。 實施例本發明烏司他丁作為制備抗HIV-I病毒藥物的應用，烏司他丁的濃度為200 400 u g/ml，濃度為400 u g/ml時可達到100%的抑制率。利用烏司他丁制備的抗HIV-I病毒藥物，可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已經發生的不同階段。窗口期給藥量為烏司他丁 10萬U，用5%葡萄糖注射液500ml溶解1-2次/日，靜脈點滴。當進入AIDS病時期則與各種逆轉錄酶抑制劑聯合應用。藥物通常以靜脈途徑給藥，主要劑型為凍干針劑或注射液劑。藥物為凍干粉針劑時，可藥用輔料為甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡糖糖中的任意一種或幾種，在使用時可以溶解于滅水菌或各種其它注射用滅菌介質中。藥物為注射液時，可藥用輔料為注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的任意一種或幾種。下面提供本發明抗艾滋病病毒的藥效學研究試驗
I、材料與藥物
I. I藥物烏司他丁用水充分溶解后，用透析袋透析后，用1640培育基稀釋成不同濃度(烏司他丁藥品由大連北方生物制品廠生產);
I.2試劑P24試劑盒購自美國Organon Teknika公司，MTT (Thiazoll blue)購自Sigma公司；
1.3細胞MT4細胞系采培養獲得，培養基為RPMI-1640加10%胎牛血清，1%谷氨酰
胺，1%青鏈霉素；
1.4病毒HIV-I病毒德國株，中國預防醫學科學院病毒所保存傳代。2、實驗方法
2.I對HIV-I急性感染的抑制試驗
將HIV-I融化后稀釋至I萬TCID 50/ml,取Iml稀釋后的病毒液加入離心后并棄上清的500萬MT4細胞(1800轉/分鐘離心5分鐘)，置37°C溫箱中作用2小時。取出后離心，棄上清，用1640洗一次，用20%胎牛血清的培養基至50萬細胞/ml，將配好的感染細胞和對應的不同濃度的烏司他丁加入培養板。置37°C，5% CO2孵箱中。48小時后換液，繼續孵育48小時。取基上清用美國Organon Teknika公司P24抗原試驗盒測定P24抗原。根據計算出各孔中病毒濃度，計算藥物對病毒復制的抑制率。2.2 MTT細胞毒試驗
將MT4細胞用含20%胎牛血清的培養基配至50萬/ml，加100 ill配好的細胞和100 ill的烏司他丁入96孔培養板，37°C，5% CO2孵箱中培養6天，取出后每孔吸除150 上清，力口入新配的MTT (0. 25%)25iil，37°C下作用4小時，向每孔中加入100 ylDMSO充分溶解所形成的結晶，用BIO-RAD公司550型酶標儀讀數(570nm)，計算細胞存活率。基計算方法為細胞抑制率=(細胞對照孔OD值一加藥細胞孔OD值)+細胞對照孔OD值X 100%。3、結果
3.1抗HIV-I實驗結果
權利要求
1.烏司他丁作為制備抗HIV-I病毒藥物的應用，烏司他丁的濃度為200 400u g/ml。
2.根據權利要求I所述的應用，其特征在于所述烏司他丁的濃度為400y g/ml。
3.根據權利要求I所述的應用，其特征在于所述烏司他丁的濃度為200y g/ml。
4.根據權利要求I所述的應用，其特征在于所述藥物中還包括可藥用輔料。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于所述藥物為凍干粉針劑，所述可藥用輔料為甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡糖糖中的任意一種或幾種。
6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于所述藥物為注射液，所述可藥用輔料為注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的任意一種或幾種。
全文摘要
本發明公開了一種烏司他丁作為制備抗HIV-1病毒藥物的應用，烏司他丁的濃度為200～400μg/ml。本發明藥物可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已經發生的不同階段；本發明藥物，在烏司他丁的濃度為400μg/ml時，可以對HIV-1病毒達到100%抑制率，而且在細胞毒試驗中，沒有明顯的細胞毒性作用。
文檔編號A61P31/18GK102614502SQ201210123158
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月25日 優先權日2012年4月25日
發明者徐宗昆 申請人:徐宗昆