專利名稱：一種人參多糖制備方法
技術領域：
本發明涉及一種人參多糖制備方法，屬于中藥制劑領域。
背景技術：
人參多糖為中藥人參的活性成份，為高分子葡聚糖。人參多糖能增強機體免疫調節功能及增強化療藥物抗腫瘤作用，對腫瘤有明顯的抑制作用。實驗表明，人參多糖能誘生腫瘤壞死因子和干擾素-γ，對腫瘤細胞有殺傷和抑制作用。腫瘤壞死因子是由激活的巨噬細胞/單核細胞系統產生的多功能蛋白分子，在機體內起著重要的生理作用。在體內腫瘤壞死因子可以通過3種途徑發揮抗腫瘤作用直接殺傷腫瘤細胞；作用于腫瘤血循環，導致腫瘤組織血供減少，從而影響腫瘤的生長；激活機體免疫系統的抗腫瘤作用。同時，腫瘤壞死因子還可介導炎性過程，減少網膜組織間皮細胞溶纖維蛋白活性，進而使網膜表面纖維蛋白增多，減少組織外滲。干擾素是細胞在受到刺激物作用后合成并釋放出的蛋白性淋巴因子，其作用為直接抗病毒作用；增強主要組織相容性抗原和腫瘤相關抗原的表達；增強自然殺傷細胞(NK)的細胞毒作用；增強抗體依賴性細胞的細胞毒作用；直接的抗細胞增殖作用和抗血管生成作用。同時人參多糖能增強T淋巴細胞及NK細胞活性，提高了機體的免疫調節功能，而有利于抗腫瘤作用的發揮。
人參多糖注射液的臨床上作為注射劑使用時，現有給藥途徑均為肌肉注射，肌肉注射存在的主要問題為患者注射部位疼痛及長期注射可能出現局部紅腫、淤血、腫塊、甚至肌肉壞死等不良反應，而且生產所用原料由于制備工藝問題存在純度不高問題，存在一定安全隱患。

發明內容
本發明的目的在于提供一種人參多糖的制備方法。
本發明所述制備方法包括將人參或人參醇提后的藥渣水煎提取，提取液過濾濃縮后醇沉，經離心得沉淀，沉淀經低溫干燥得到人參多糖粗品；人參多糖粗品經多次水煮醇沉、過濾離心除雜，再經凍融離心、多次除雜蛋白，離心得上清液，上清液經減壓濃縮、低溫干燥得到人參多糖精品。
得到的人參多糖精品通過藥劑學上的方法，可制成各種劑型，如注射液、片劑等；優選為注射液。
本發明所述的制備方法具體過程如下A)取人參，加入8～15倍重量水，煎煮2～3次，每次煎煮時間為30～90分鐘，合并煎液，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的0.1～0.4倍；加入95％的乙醇使濃縮液含醇量為65～85％，0-8℃冷藏靜置12～48小時，將冷藏后的藥液用離心機低溫離心20～40分鐘(離心轉速為3000～4000轉/分)，收集沉淀，沉淀低溫干燥得人參多糖粗品；B)人參多糖粗品加10～15倍重量水加熱煮沸10～30分鐘，降溫，過濾，向濾液中加入95％的乙醇使含醇量為65～85％，0-8℃冷藏靜置12～48小時，將冷藏后的藥液用離心機在0-8℃下離心20～40分鐘(離心轉速為3000～4000轉/分)，收集沉淀；重復水煮醇沉、冷藏離心過程2～3次，得到人參多糖沉淀；人參多糖沉淀加10～20倍重量水溶解，藥液用冷凍離心機在-10~-30℃凍實后，在0-8℃下融解離心20～30分鐘(離心轉速為3000～4000轉/分)，取上清液，上清液重復凍融離心1～2次后，將上清減壓，減壓濃縮，在0-8℃下干燥得到人參多糖精品。
上述制備方法也可以通過使用人參醇提后的藥渣作為起始原料，通過上述過程實現。使用人參醇提后的藥渣作為起始原料時，優選使用60-80％的醇溶液提取。
上述制備方法優選為A)取人參，第一次加12倍重量水煎煮1小時，第二次加10倍重量水煎煮50分鐘，第三次加10倍重量水煎煮30分鐘，合并煎液，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的0.2倍；加入95％的乙醇使濃縮液含醇量為75％，0-8℃冷藏靜置24小時，將冷藏后的藥液用離心機在0-8℃下離心20分鐘(離心轉速為4000轉/分)，收集沉淀，沉淀在4℃下干燥得到人參多糖粗品；
B)人參多糖粗品加15倍重量水，加熱煮沸20分鐘，降溫至50℃，過濾，向濾液中加入95％的乙醇使含醇量為80％，醇沉液冷藏，靜置24小時，將冷藏后的藥液用離心機在0-8℃下離心20分鐘(離心轉速為4000轉/分)，收集沉淀；重復水煮醇沉、冷藏離心過程2次，得人參多糖沉淀；人參多糖沉淀加20倍重量水溶解，用冷凍離心機在-20℃凍實后，在0-8℃下融解離心30分鐘(離心轉速為4000轉/分)，上清液重復凍融離心2次，上清液減壓濃縮，在4℃下干燥得人參多糖精品。
經過上述方法制備的人參多糖，優選制成小容量注射劑；注射液為淡黃色清明液體，其規格可以為2ml、4ml、5ml、10ml，最優選規格為2ml、4ml，每ml含人參多糖量以半乳糖醛酸(C6H1007)計為3mg。
本發明所述人參多糖注射液臨床應用時除肌肉注射外(一次4ml，一日2次)，為避免肌肉注射時的疼痛和長期肌肉注射可能產生的不良反應，可通過靜脈滴注給藥，一次4ml～6ml(12mg～18mg)，用5％葡萄糖注射液或0.9％氯化鈉注射液稀釋后緩慢滴注，一日1次。
本發明所述人參多糖注射液臨床可與腫瘤化療藥(如環磷酰胺)配合使用，可有效減輕腫瘤放化療引起的副作用，也可作為腫瘤治療的輔助用藥，本藥物適合長期靜脈滴注給藥。
人參多糖能刺激機體的體液免疫和細胞免疫功能，對S-180、ESA、和u-14等動物移植腫瘤均有明顯的抑制作用，與化療藥物配合使用時，人參多糖可增強化療藥物的抗腫瘤作用，又能降低環磷酰胺對骨髓和免疫功能的抑制作用。對CCl4引起的動物實驗性肝損傷，人參多糖有治療和預防作用，使SGPT降低。動物實驗證明，人參多糖對應激性胃潰瘍，消炎痛型，醋酸型和結扎胃幽門型潰瘍均有一定的抑制作用。
通過本發明所述人參多糖的制備方法，能夠獲得高純度人參多糖，用于人參多糖注射液的生產，可以使人參多糖注射液的產品質量得到有效提高，使其在熱原、急性毒性試驗等安全性指標方面達到更高水平，適合于長期靜脈滴注。
急性毒性試驗證明給小白鼠尾靜脈注射本發明所述人參多糖注射液，劑量為3g/kg，為成人每日臨床劑量的10000～15000倍，小白鼠無死亡。熱原檢查試驗表明，給兔靜脈注射本發明所述人參多糖注射液，按中國藥典2000年版方法檢查熱原，劑量按家兔每1kg注射1ml，符合規定。
人參多糖注射液靜脈滴注給藥，解決了肌肉注射時使注射部位疼痛及長期注射可能出現的局部紅腫、淤血、腫塊、甚至肌肉壞死等不良反應，具有生物利用度高、臨床使用更方便、不良反應小、療效迅速等優點，可充分發揮人參多糖增強機體免疫調節功能及增強化療藥物抗腫瘤作用，臨床可與腫瘤化療藥(如環磷酰胺)配合使用，有效減輕腫瘤放化療引起的副作用，也可作為腫瘤治療的輔助用藥。
具體實施例方式
實施例1取生曬參10kg，切碎，用75％乙醇煎煮回流提取4小時，提取后的藥渣晾干，加水煎煮三次，第一次加12倍量水煎煮1小時，第二次加10倍量水煎煮50分鐘，第三次加10倍量水煎煮30分鐘，合并煎液，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的0.2倍；加入95％的乙醇使含醇量控制在75％，醇沉液冷藏，靜置24小時，將冷藏后的藥液用離心機低溫離心20分鐘(離心轉速為4000轉/分)，收集沉淀，沉淀低溫干燥得人參多糖粗品；人參多糖粗品加15倍量水加熱煮沸20分鐘，降溫至50℃后，過濾，向濾液中加入95％的乙醇使含醇量控制在80％，醇沉液冷藏，靜置24小時，將冷藏后的藥液用離心機低溫離心20分鐘(離心轉速為4000轉/分)，收集沉淀，重復水煮醇沉2次，冷藏離心得人參多糖沉淀；人參多糖沉淀加20倍量水溶解，-20℃凍實后融解，藥液用冷凍離心機低溫凍實后融解30分鐘(離心轉速為4000轉/分)，上清重復凍融離心2次，最后一次上清減壓濃縮低溫干燥得人參多糖精品50g(每克以半乳糖醛酸計含人參多糖250mg)。
取600ml的注射用水于濃配罐中，加入上述人參多糖精品24g(以半乳糖醛酸計含人參多糖6g)和氯化鈉18g，攪拌使完全溶解，加入2g活性炭，加熱煮沸15分鐘，降溫至50℃左右后脫炭過濾至稀配罐中，先定容到1800ml，加入1g亞硫酸氫鈉和0.1g依地酸二鈉，攪均，調節Ph值到5.3～5.5，檢測藥液含量，再定容至2000ml，中間體檢驗合格后，藥液經終端過濾后灌裝于2ml安瓿中，裝量2ml，滅菌，即得2ml:4mg(以半乳糖醛酸計)規格人參多糖注射液。
實施例2取生曬參10kg，切碎，用75％乙醇回流提取4小時，提取后的藥渣晾干，加水煎煮2次，第一次加15倍量水煎煮90分鐘，第二次加10倍量水煎煮60分鐘，合并煎液，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的0.3倍；加入95％的乙醇使含醇量控制在85％，醇沉液冷藏，靜置30小時，將冷藏后的藥液用離心機低溫離心30分鐘(離心轉速為3000轉/分)，收集沉淀，沉淀低溫干燥得人參多糖粗品；人參多糖粗品加15倍量水加熱煮沸30分鐘，降溫至40℃后，過濾，向濾液中加入95％的乙醇使含醇量控制在80％，醇沉液冷藏，靜置36小時，將冷藏后的藥液用離心機低溫離心30分鐘(離心轉速為3000轉/分)，收集沉淀，重復水煮醇沉3次，冷藏離心得人參多糖沉淀；人參多糖沉淀加15倍量水溶解，-20℃凍實后融解，藥液用冷凍離心機低溫凍實后融解30分鐘(離心轉速為3000轉/分)，上清重復凍融離心1次，最后一次上清減壓濃縮低溫干燥得人參多糖精品45g(每克以半乳糖醛酸計含人參多糖280mg)。。
取600ml的注射用水于濃配罐中，加入上述人參多糖精品21.4g(以半乳糖醛酸計含人參多糖6g)和氯化鈉18g，攪拌使完全溶解，加入2g活性炭，加熱煮沸15分鐘，降溫至50℃左右后脫炭過濾至稀配罐中，先定容到1800ml，加入1g亞硫酸氫鈉和0.1g依地酸二鈉，攪均，調節Ph值到5.3～5.5，檢測藥液含量，再定容至2000ml，中間體檢驗合格后，藥液經終端過濾后灌裝于5ml安瓿中，裝量4ml，滅菌，即得4ml:12mg(以半乳糖醛酸計)規格人參多糖注射液。
實施例3取生曬參10kg，切碎，加水煎煮3次，第一次加15倍量水煎煮90分鐘，第二次加12倍量水煎煮60分鐘，第三次加10倍量水煎煮60分鐘，合并煎液，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的0.3倍；加入95％的乙醇使含醇量控制在85％，醇沉液冷藏，靜置36小時，將冷藏后的藥液用離心機低溫離心30分鐘(離心轉速為4000轉/分)，收集沉淀，沉淀低溫干燥得人參多糖粗品；人參多糖粗品加10倍量水加熱煮沸20分鐘，降溫至35℃后，過濾，向濾液中加入95％的乙醇使含醇量控制在80％，醇沉液冷藏，靜置36小時，將冷藏后的藥液用離心機低溫離心30分鐘(離心轉速為4000轉/分)，收集沉淀，重復水煮醇沉3次，冷藏離心得人參多糖沉淀；人參多糖沉淀加20倍量水溶解，-20℃凍實后融解，藥液用冷凍離心機低溫凍實后融解30分鐘(離心轉速為4000轉/分)，上清重復凍融離心3次，最后一次上清減壓濃縮低溫干燥得人參多糖精品50g(每克以半乳糖醛酸計含人參多糖250mg)。。
取600ml的注射用水于濃配罐中，加入上述人參多糖精品24g(以半乳糖醛酸計含人參多糖6g)和氯化鈉18g，攪拌使完全溶解，加入2g活性炭，加熱煮沸15分鐘，降溫至50℃左右后脫炭過濾至稀配罐中，先定容到1800ml，加入1g亞硫酸氫鈉和0.1g依地酸二鈉，攪均，調節Ph值到5.3～5.5，檢測藥液含量，再定容至2000ml，中間體檢驗合格后，藥液經終端過濾后灌裝于10ml安瓿中，裝量4ml，滅菌，即得10ml:30mg(以半乳糖醛酸計)規格人參多糖注射液。
實驗例1本實驗例為本發明所述人參多糖注射液最優選規格2ml:4mg(以半乳糖醛酸計)的外觀性狀、pH值、蛋白質、異常毒性及其它規定的注射劑檢查項目的檢測。
√性狀 本品為淡黃色清明液體。
√pH值 應為4.0～6.0(中國藥典2000年版二部附錄VI H)。
√蛋白質 取本品1ml，加30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，不得發生渾濁或沉淀。
√熱原 取本品，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XI D)，劑量按家兔每1kg注射1ml，應符合規定。
√異常毒性 取本品，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄VI C)，按靜脈注射法給藥，應符合規定。
√其他 應符合注射劑項下有關各項規定(中國藥典2000版二部附錄IB)。
實驗例2本實驗例為本發明所述人參多糖注射液最優選規格2ml:4mg(以半乳糖醛酸計)的人參多糖定性測定。
取本品，加水制成每1ml含0.5mg的溶液，吸取0.2ml加0.25mol/L硼砂硫酸溶液3ml，混勻，水浴加熱15分鐘，取出，置冰水中5分鐘，加入0.125Q％咔唑無水乙醇溶液2滴，混勻，室溫放置1～2分鐘，溶液呈紫紅色。
實驗例3本實驗例為本發明所述人參多糖注射液最優選規格2ml:4mg(以半乳糖醛酸計)的人參多糖定量測定。含人參多糖以半乳糖醛酸(C6H10O7)計算，應為標示量的90.0％～110.0％含量測定精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，另精密稱取60℃減壓干燥至恒重的半乳糖醛酸15mg置200ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取上述兩種溶液各1ml，分別精密加入0.025mol/L硼砂硫酸液6ml，搖勻，水浴加熱30分鐘，放冷，各加0.125％咔唑無水乙醇液0.4ml，置水浴中加熱10分鐘，冷卻，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄VI A)，在525nm的波長處測定吸收度，計算，即得。
通過三批測定，每ml含量結果見下表

實驗例4本例為本發明人參多糖注射液注射液與化療藥物配合使用治療失去手術時機的原發非小細胞肺癌與單獨使用化療藥物治療的臨床對比，說明本發明人參多糖注射液與化療藥物配合使用對治療惡性腫瘤具有減毒增效作用。
臨床背景及治療方法原發非小細胞肺癌病例共72例，隨機分為治療組(用人參多糖注射液配合化療藥物治療)，對照組(單純用化療藥物治療)；其中治療組35例，男性20例，女性15例，對照組37例，男性25例，女性12例。
治療組人參多糖注射液每日一次，一次4ml～6ml(12mg～18mg)，用5％葡萄糖注射液或0.9％氯化鈉注射液稀釋后緩慢滴注，30天為一療程，化療采用EP方案，連用2-3個周期；對照組采用EP單純化療。
治療結果1.對瘤體病灶療效評定結果瘤體不同程度縮小，主要表現對瘤體的穩定作用，治療組緩解率71.4％，對照組緩解率67.6％，兩組無明顯差異性。
2.對生存質量和主要癥狀作用治療組病人生存質量普遍提高，karnofky評分平均提高10-20分；對照組karnofky評分提高10分5例，不變22例。治療組與對照組karnofky評分差異有顯著性。治療前后治療組神疲乏力、心悸氣短、自汗盜汗癥狀的緩解率均較對照組高。
3.對骨髓造血功能的影響，觀察白細胞功能，治療組對造血系統有較好保護作用，治療前后白細胞未見明顯減少，對照組出現抑制、白細胞明顯減少等毒副作用，治療組明顯優于對照組。
結論本發明所述人參多糖注射液能刺激機體的體液免疫和細胞免疫功能，與化療藥物配合使用時，人參多糖可增強化療藥物的抗腫瘤作用，又能降低化療藥物對骨髓和免疫功能的抑制作用，有保護骨髓造血功能、升高白細胞作用，從而提高病人生存質量，本藥物適合長期靜脈滴注給藥。
權利要求
1.一種人參多糖制備方法，所述的制備方法具體過程如下A)取人參，加入8～15倍重量水，煎煮2～3次，每次煎煮時間為30～90分鐘，合并煎液，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的0.1～0.4倍；加入95％的乙醇使濃縮液含醇量為65～85％，0-8℃冷藏靜置12～48小時，將冷藏后的藥液用離心機低溫離心20～40分鐘(離心轉速為3000～4000轉/分)，收集沉淀，沉淀低溫干燥得人參多糖粗品；B)人參多糖粗品加10～15倍重量水加熱煮沸10～30分鐘，降溫，過濾，向濾液中加入95％的乙醇使含醇量為65～85％，0-8℃冷藏靜置12～48小時，將冷藏后的藥液用離心機在0-8℃下離心20～40分鐘(離心轉速為3000～4000轉/分)，收集沉淀；重復水煮醇沉、冷藏離心過程2～3次，得到人參多糖沉淀；人參多糖沉淀加10～20倍重量水溶解，藥液用冷凍離心機在-10~-30℃凍實后，在0-8℃下融解離心20～30分鐘(離心轉速為3000～4000轉/分)，取上清液，上清液重復凍融離心1～2次后，將上清減壓，減壓濃縮，在0-8℃下干燥得到人參多糖精品。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟A)中，使用人參醇提后的藥渣作為起始原料，替代人參。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于使用60-80％的醇溶液提取，得到人參醇提后的藥渣作為起始原料。
全文摘要
本發明涉及一種人參多糖的制備方法。該方法將人參或人參醇提后的藥渣水煎提取，提取液過濾濃縮后醇沉，經離心得沉淀，沉淀經低溫干燥得到人參多糖粗品；人參多糖粗品經多次水煮醇沉、過濾離心除雜，再經凍融離心、多次除雜蛋白，離心得上清液，上清液經減壓濃縮、低溫干燥得到人參多糖精品。得到的人參多糖精品通過藥劑學上的方法，可制成各種劑型。使人參多糖注射液的產品質量得到有效提高，可充分發揮人參多糖增強機體免疫調節功能及增強化療藥物抗腫瘤作用，臨床用于減輕腫瘤放化療引起的副作用和作為腫瘤治療的輔助用藥。
文檔編號A61K31/715GK1580078SQ200410000209
公開日2005年2月16日 申請日期2004年1月5日 優先權日2004年1月5日
發明者郭智華 申請人:吉林威威藥業股份有限公司