專利名稱：含生長激素納米藥物微球及其制備方法
技術領域：
本發明涉及納米藥物微球，具體地說，是含生長激素納米藥物微球及其制備方法，屬于制藥技術領域。
背景技術：
生長激素(Growth Hormone)是動物腺垂體細胞分泌的蛋白質,是一種肽類激素， 具有細胞黏附作用和促進生長或延緩衰老作用。由于生長激素經口服后在胃腸道中活性會被破壞，不能發揮作用，所以只能采用注射或埋植方式。目前生長激素制劑有緩沖劑和緩釋劑兩種形式，緩沖劑是用碳酸氫鹽緩沖液溶解生長激素凍干粉，現配現用，需每天注射；緩釋劑是采用包埋、吸附、融合等措施將大量生長激素固定在一定的載體空間內，使其具有長效緩釋作用。中國專利文獻CN200910019437. 9，
公開日2010年4月7日，公開了一種載生長
激素海藻酸鈣殼聚糖緩釋微球及其應用，采用包埋的方法將生長激素束縛于海藻酸鈣微球內，再利用殼聚糖溶液在微球表面形成均勻半透性薄膜，得到復合凝膠微球，生長激素包封率在70% - 96%,微球粒徑在130 μ m — 260 μ m,微球表面的殼聚糖具有生理活性，能被降解吸收。采用生物可降解的乳酸-羥基乙酸共聚物包被生長激素，具有緩慢釋放活性物質、延長藥物的生物半衰期、增加生物利用度等優勢。陸麗芳等采用復乳-溶媒蒸發法用乳酸-羥基乙酸共聚物將生長激素制成長效注射微球，所得微球平均粒徑約為30 μ m,生長激素包封率高達95%以上，釋藥時間長達30天(詳見陸麗芳，可生物降解生長激素緩釋微球的研究，復旦大學2004年碩士論文)。用常規的S/0、S/0/W和S/0/0方法制備的藥物微球，由于表面疏水，容易導致體內組織微囊化及炎癥等副作用，且藥物突釋易造成藥物本身的毒副作用。關于納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)微球及其制備方法，目前還未見報道。

發明內容
本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)微球，以解決現有技術中生長激素制劑包封率不高，不完全釋放和突釋情況，疏水性表面會引起局部微囊化及炎癥的缺點。本發明的再一的目的是，提供一種納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)微球的制備方法。為實現上述目的，本發明采取的技術方案是
一種含生長激素納米藥物微球，所述微球的表面自組裝有一層納米顆粒，微球中生長激素的重量百分比為O. 01% - 40%，納米顆粒的重量百分比為O. 01% - 96%，聚合物的重量百分比為3. 65% - 99. 98%，藥用輔料的重量百分比為0% — 30%,微球的粒徑為I 一 500 Mm。所述的納米顆粒為有機納米顆粒或無機納米顆粒，可選自聚苯乙烯納米顆粒、交聯葡聚糖納米顆粒、二氧化娃納米顆粒、二氧化鈦納米顆粒、輕基磷灰石納米顆粒、四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵顆粒、金納米顆粒、三氧化二招納米顆粒、碳酸韓納米顆粒、磷酸鈣納米顆粒、碳酸鎂納米顆粒、氫氧化鎂納米顆粒或銀納米顆粒中的一種或幾種。所述的聚合物選自聚己內酯、聚乳酸、聚乳酸一羥基乙酸、聚乳酸一聚乙二醇、聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇或聚己內酯一聚乙二醇中的一種或幾種。所述的藥用輔料為注射用藥用輔料。所述微球的粒徑為10 - 100 Mm。一種含生長激素納米藥物微球的制備方法， 包括以下步驟
(1)將生長激素和藥用輔料制備成納米藥物，所述納米藥物中，生長激素的重量百分比為O. 1% - 90%，藥用輔料的重量百分比為0% - 20 % ；
(2)將步驟(I)制備的納米藥物按照1:1一 1:10的重量比分散在重量百分比濃度為O. 5% - 80%聚合物的有機溶劑混合溶液中，形成均勻的混懸液，即油包納米藥物混懸液；
(3)將步驟(2)形成的油包納米藥物混懸液加入到含重量百分比為1%— 80%納米顆粒的水混懸液或含重量百分比為1% - 80%納米顆粒和重量百分比為O. 5% - 5%表面活性劑的水混懸液中，進行乳化，形成納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物復乳；
(4)將所述納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物復乳轉移到含重量百分比為1%— 10%無機鹽的水溶液中固化I一 4小時；
(5)將步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并洗滌所得微球，之后凍干，得到表面自組裝有納米顆粒且內部含有生長激素納米藥物的微球。步驟(I)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟
將生長激素和藥用輔料溶解在水中，然后加入多孔納米顆粒，攪拌使得生長激素和藥用輔料充分吸附在多孔納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成納米藥物；或
將生長激素和藥用輔料溶解在水中形成藥物水溶液，然后將藥物水溶液轉移到聚乙二醇水溶液中，充分混勻后于冰箱中預凍，之后凍干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并離心除去聚乙二醇得到納米藥物。步驟(2)中所述的有機溶劑混合溶液中還添加有重量百分比為O. 1% - 20%的聚乙二醇或泊洛沙姆。步驟(2)中所述的聚合物重量百分比濃度為5% - 30%，所述的有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮中的一種或幾種。步驟(3)中所述的納米顆粒重量百分比濃度為20% — 70%，所述的表面活性劑選自聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚山梨醇、乙基纖維素或吐溫中的一種或幾種。本發明的有益效果在于
I、本發明選擇了合適的聚合物材料和制備微球的方法，制備的微球包封率高達80%以上，并且這種表面自組裝有一層納米顆粒的微球具有增強細胞黏附的作用，以及減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。2、采用本發明方法制備的微球，其粒徑大小可以根據不同需要從I μ m到500 μπι進行調控，且制備過程不污染環境。
3、本發明方法制備的微球，大大降低了藥物突釋，藥物幾乎完全釋放，可以達到零級釋放，釋放的納米藥物可以局部高效被病變細胞攝取，從而減少藥物本身的毒副作用，同時可以使藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性即不失活。4、采用本發明方法制成的微球制劑，其微粒表面光滑圓整，顆粒規整無粘連，其凍干粉劑為白色細膩、疏松的粉體，不會塌陷、不粘連，再分散性良好，可以運用到其它藥物緩釋或控釋微球的制備中。


附圖I是本發明實施例I制備所得微球的掃描電鏡(SEM)照片。附圖2是本發明實施例I制備所得微球的體外釋放曲線。附圖3是本發明實施例I制備所得微球的藥效作用曲線。 附圖4是本發明實施例I制備所得微球與用S/0/W方法制備微球的體內組織相容性情況。
具體實施例方式下面結合具體實施例并參照附圖對本發明作詳細說明。應該理解，這些實施例僅用于說明本發明，而不用于限定本發明的保護范圍。在實際應用中本領域技術人員根據本發明做出的改進和調整，仍屬于本發明的保護范圍。需要說明的是，本發明技術方案中，所述的納米顆粒為有機納米顆粒或無機納米顆粒，具體指選自聚苯乙烯納米顆粒、交聯葡聚糖納米顆粒、二氧化娃納米顆粒、二氧化鈦納米顆粒、輕基磷灰石納米顆粒、四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵顆粒、金納米顆粒、三氧化二鋁納米顆粒、碳酸鈣納米顆粒、磷酸鈣納米顆粒、碳酸鎂納米顆粒、氫氧化鎂納米顆粒或銀納米顆粒等中的一種或多種。所述的聚合物選自聚己內酯(PCL)、聚乳酸(PLA)、聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)、聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)、聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA — PEG)或聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)中的一種或幾種。所述的藥用輔料為注射用藥用輔料，可以是小糖類(如蔗糖、海藻糖、葡萄糖、麥芽糖或乳糖等)、多羥基類化合物(如甘露醇、山梨醇、甘油、1，2 —丙二醇、赤鮮糖醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚環氧乙烷或聚吡咯烷酮等)、多糖類化合物(如葡聚糖、海藻酸鈉、殼聚糖、淀粉、纖維素或環糊精等)、氨基酸化合物(如甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、谷氨酸或組氨酸等)或無機鹽類物質(如鋅鹽、鈣鹽、銅鹽、鎂鹽或鑰鹽等)中的一種或任意組合。制備微球的步驟(2)中，所述的聚合物有機溶劑混合溶液中還添加有重量百分比為O. 1% - 20%的聚乙二醇(PEG)或泊洛沙姆(Poloxamer)。所述的有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮中的一種或幾種，其中以二氯甲烷、乙酸乙酯或乙腈中的一種或幾種有機溶劑為佳。制備微球的步驟(3)中，所述的表面活性劑選自聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、泊洛沙姆(Poloxamer)、聚山梨醇、乙基纖維素(EC)或吐溫中的一種或幾種。制備微球的步驟(2)中，所述的分散方式可選擇乳化、渦旋或超聲等，分散時間優選為I 一 5分鐘。制備微球的步驟(3)中，所述的加入方式可選擇滴加、一次性加入、噴霧方式加入或倒入等；所述的乳化方式可選擇乳化、渦旋或超聲等，乳化時間為O. I — 5分鐘。制備微球的步驟(4)中，所述的無機鹽可選自氯化鈉、氯化鉀、硝酸鉀或碳酸鈉等；所述的轉移方式可為滴加、一次性加入、噴霧方式加入或倒入等。制備微球的步驟(5)中，洗滌時可采用水、乙醇或乙醇一水混合液洗滌3 — 5次。實施例I
載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取10mg生長激素和10 mg葡聚糖溶解到O. 4 ml的水中形成藥物水溶液， 然后把上述溶液轉移到3. 2 ml濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預凍12小時，再用凍干機凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為30%(w/w)的PLGA的乙腈溶液按照重量比為1:8混合，并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到40ml濃度為20% (w/w)的輕基磷灰石納米顆粒水混懸液中并超聲O. I分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到濃度為10% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化4小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用乙醇洗滌5次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所制得微球中，藥物的重量百分比為O. 17%，納米顆粒的重量百分比為84. 45%，聚合物的重量百分比為15. 17%，藥用輔料的重量百分比為O. 21%。對本實施例制備的載有生長激素的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA )微球進行形貌表征、釋放曲線測試、藥效測試及在體內組織相容性測試，并將其藥效及組織相容性與用s/0/w方法(詳見李志平，李云富，張振亞，劉燕，曲燕燕，梅興國，干擾素A-2b緩釋微球的制備及影響因素考察，軍事醫學科學院院刊，2007，31 (5) :451-455)制備的微球進行對比，其中藥效測試條件為一次給藥，總劑量與對照組水溶液組每天一次的共15天的總劑量相同。圖I是本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的掃描電鏡(SEM)照片，其中，A為微球的掃描電鏡圖，B為微球的表面放大圖，從圖中可以看出，所制備的微球形態好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在10 — 120 μπι。圖2是本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的體外釋放曲線，從圖中可以看出，所制備的微球幾乎達到100%的藥物釋放率，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放(各條曲線代表不同PLGA材料制備的微球，可以調控藥物的不同釋放時間，其中各個PLGA分別為2Α50/50:羥基乙酸-乳酸=1:1和分子量為20000_30000Da、2A65/35:羥基乙酸-乳酸=0. 65:0. 35和分子量為20000-30000Da、3A50/50:羥基乙酸-乳酸=1:1和分子量為30000-47000Da、3A65/35:羥基乙酸-乳酸=0. 65:0. 35和分子量為30000-47000Da)，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為92. 0% (計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。圖3是本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的藥效作用曲線，微球組為本實施例方法制備的微球，對照組為用S/0/W方法制備的微球，空白組為不含藥物的微球，可以看出，使用本實施例所制備的微球，體重增加比對照組的體重增加快，藥效更好。圖4是本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的組織相容性情況，從圖中可以看出，所制備的微球(Ν/0/Ν組)的相容性比對照組的好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。以本實施例方法制備的微球包封率高，最少可以達到80%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，同時由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使生物大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。而且這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。本實施例方法制備的生物大分子藥物微球可以用于需要頻繁注射給藥、長期治療 的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤、各種病因引起的貧血、侏儒等重大疾病的治療。實施例2
載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)微球的制備，包括如下步驟
(1)取20mg生長激素溶解到O. 5 ml的水中，然后和多孔二氧化鈦納米顆粒20 mg攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化鈦納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為O.5% (w/w)的PCL的乙酸乙酯溶液按照重量比1:10混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml含10% (w/w)銀納米顆粒和1% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性劑的水混懸液中，攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為1% (w/w)的氯化鉀水溶液中固化3小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)微球。本實施例所得的微球中，藥物的重量百分比為O. 47%，納米顆粒的重量百分比為83%，聚合物的重量百分比為16. 53%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)微球形態好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒,粒徑在10 - 100 μ m0微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為93. 5% (計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。
實施例3
載有生長激素納米藥物的聚乳酸(PLA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取20mg生長激素溶解到O. 5 ml的水中，然后和多孔二氧化硅納米顆粒20 mg攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為20%(w/w)的PLA的二氯甲烷溶液按照重量比1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml濃度為10% Cw/w)的銀納米顆粒水混懸液中，攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳； (4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚乳酸(PLA)微球。本實施例所制得的微球中，藥物的重量百分比為O. 35%，納米顆粒的重量百分比為96%，聚合物的重量百分比為3. 65%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸(PLA)微球形態好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒,粒徑在I 一 130 μ m。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為92. 9% (計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例4
載有生長激素納米藥物的聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)取10mg生長激素和10 mg纖維素溶解到O. 4 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉移到3. 2 ml濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預凍12小時，再用凍干機凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為5%(w/w)的PLA - PEG的二氯甲烷溶液按照重量比為1:5混合，并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到40ml含有20% (w/w)羥基磷灰石納米顆粒和O. 5% (w/w)聚乙二醇(PEG)表面活性劑的水混懸液中并超聲O. I分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化I小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用乙醇水溶液洗滌5次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)微球。本實施例中所制得微球中，藥物的重量百分比為O. 17%，納米顆粒的重量百分比為74. 15%，聚合物的重量百分比為25. 47%，藥用輔料的重量百分比為O. 21%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)微球形態好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在2 — 280 μπι。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為94. 7%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局 部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實施例5
載有生長激素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)將5mg生長激素和5 mg甘氨酸溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預凍12小時，再用凍干機凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為80%(w/w)的PLGA — PEG的乙腈溶液按照重量比為1:1混合并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到4ml濃度為20% (w/w)的二氧化鈦納米顆粒水混懸液中并超聲2分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為10% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化4小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌4次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 51%，納米顆粒的重量百分比為89. 89%，聚合物的重量百分比為9. 04%，藥用輔料的重量百分比為O. 56%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA -PEG)微球形態好，其表面自組裝有一層二氧化鈦納米顆粒，粒徑在I 一 300 μπι。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為96.0%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好,具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與二氧化鈦納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實施例6
載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球的制備，包括如下步
驟
(1)將5mg生長激素和5 mg甘油溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預凍12小時，再用凍干機凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為10%(w/w)的PCL - PEG的庚烷溶液按照重量 比為1:8混合并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液，庚烷溶液中還含有O. 1% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到4ml含50% (w/w) 二氧化鈦納米顆粒和5% (w/w)聚乙烯吡咯烷酮表面活性劑的水混懸液中并超聲2分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳； (4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為8% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化4小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用乙醇洗滌4次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 51%，納米顆粒的重量百分比為
49.89%，聚合物的重量百分比為49.04 %，藥用輔料的重量百分比為O. 56%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球形態好，其表面自組裝有一層二氧化鈦納米顆粒，粒徑在I 一 370 μπι。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為95. 8%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與二氧化鈦納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實施例7
載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)和聚乳酸(PLA)微球的制備，包括如下步驟
(1)將5mg生長激素和5 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預凍12小時，再用凍干機凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為10%(w/w)的PCL和10% (w/w) PLA的氯仿溶液按照重量比為1:9混合并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到5ml濃度為20% (w/w)的羥基磷灰石納米顆粒水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為1% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化I小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)和聚乳酸(PLA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 30%，納米顆粒的重量百分比為71. 79%，聚合物的重量百分比為27. 55%，藥用輔料的重量百分比為O. 36%。
本實施例中載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)和聚乳酸(PLA)微球形態好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在I 一 500 μπι。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為93. 2%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實施例8
載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)和聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA —PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)將5mg生長激素和5 mg山梨醇溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預凍12小時，再用凍干機凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為20%(w/w)的PCL和60% (w/w)的PLGA — PEG的丙酮溶液按照重量比為1:2混合并超聲2分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到5ml含有40% (w/w)羥基磷灰石納米顆粒和5% (w/w)泊洛沙姆表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為1% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)和聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 36%，納米顆粒的重量百分比為41. 79%，聚合物的重量百分比為57. 49%，藥用輔料的重量百分比為O. 36%。
本實施例中載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)和聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球形態好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在10 —100 μπι。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為89. 8%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實施例9
載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)微球的制備，包括如下步驟 (1)將5mg生長激素和5 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預凍12小時，再用凍干機凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為20%(w/w)的PCL的乙腈溶液按照重量比為1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液，乙腈溶液中還含有20% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到Iml濃度為70% Cw/w)的羥基磷灰石納米顆粒水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用乙醇洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 70%，納米顆粒的重量百分比為44. 03%，聚合物的重量百分比為54. 72%，藥用輔料的重量百分比為O. 55%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚己內酯(PCL)微球形態好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在I 一 450 μ m。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為91. 8%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實施例10載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)將5mg生長激素和5 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預凍12小時，再用凍干機凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為20%(w/w)的PLGA的二氯甲烷-乙酸乙酯(1:1，v/v)溶液按照重量比為1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷-乙酸乙酯溶液中還含有O. 1% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到Iml含有20% (w/w)羥基磷灰石納米顆粒和2% (w/w)聚山梨醇表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳； (4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為I. 70%，納米顆粒的重量百分比為
43.03%，聚合物的重量百分比為54. 12%，藥用輔料的重量百分比為I. 15%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球形態好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在5 — 410 μ m。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為89. 9% (計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實施例11
載有生長激素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)取20mg生長激素溶解到O. 5 ml的水中，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為20%(w/w)的PLGA — PEG的二氯甲烷溶液按照重量比1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml濃度為10% (w/w)的銀納米顆粒水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 35%，納米顆粒的重量百分比為96%，聚合物的重量百分比為3. 65%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA -PEG)微球形態好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在I 一 500 μπι。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為92. 9% (計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大 分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例12
載有生長激素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)取45mg生長激素溶解到O. 5 ml的水中形成藥物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為20%的PLGA- PEG的二氯甲烷溶液按照重量比1:10混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有20% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml含濃度為10%(w/w)銀納米顆粒和5% (w/w)乙基纖維素表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為14.5%，納米顆粒的重量百分比為
60.18%，聚合物的重量百分比為25. 32%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA -PEG)微球形態好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在I 一 450 μπι。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為92. 6% (計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。
實施例13
載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球的制備，包括如下步
驟
(1)取20mg生長激素溶解到O. 5 ml的水中，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為30%(w/w)的PCL - PEG的二氯甲烷溶液按照重量比為1:9混合并超聲I. 5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液； (3)把步驟(2)的油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到Iml濃度為60% (w/w)輕基磷灰石納米顆粒和1% (w/w)吐溫表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鉀水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌5次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為I. 29%，納米顆粒的重量百分比為51. 72%，聚合物的重量百分比為46. 99%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球形態好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在10 - 290 μ m。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為94. 1%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用生。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實施例14
載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球的制備，包括如下步
驟
(1)將5mg生長激素和10 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把多孔三氧化鋁納米顆粒20 mg加入上述溶液中攪拌24小時，使得生長激素及葡聚糖充分吸附在多孔的三氧化鋁納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和含有濃度為15%(w/w)的PCL - PEG的二氯甲烷溶液按照重量比為I: I混合并超聲I. 5分鐘形成均勻混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有10% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步驟(2)的油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到Iml含有濃度為80% (w/W)交聯葡聚糖納米顆粒和O. 5% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用乙醇洗滌5次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為6. 15%，納米顆粒的重量百分比為
61.54%，聚合物的重量百分比為7. 69%，藥用輔料的重量百分比為24. 62%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球形態好，其表面自組裝有一層交聯葡聚糖納米顆粒，粒徑在15 — 360 μ m。微球的藥物體外釋放 率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為91. 8%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例15
載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)和聚乳酸(PLA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取20mg生長激素溶解到O. 5 ml的水中，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為12.5% (w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比為1:4混合并攪拌2. 5分鐘，形成均勻的混懸液，再把I. 6 ml濃度為12. 5% (w/w)的PLA的乙酸乙酯溶液加到上述混懸液中，再攪拌2分鐘形成均勻混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)的油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到2ml含濃度為10% (w/w)羥基磷灰石納米顆粒和2% (w/w)聚乙二醇表面活性劑的水混懸液中并超聲O. 5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鉀水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)和聚乳酸(PLA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為I. 58%，納米顆粒的重量百分比為60. 20%，聚合物的重量百分比為38. 22%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚己內酯一聚乙二醇(PCL - PEG)和聚乳酸(PLA)微球形態好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在I 一 350 μ m。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為93. 8% (計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好,具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發生反應，從而中和酸，以保證微球的內環境相對穩定，可以使大分子藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實施例16
載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取O.5 mg生長激素溶解到O. 5 ml的水中形成藥物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為20%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有10% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml含有10% (w/w)銀納米顆粒和2% (w/w)聚乙烯吡咯烷酮表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為4. 17%，納米顆粒的重量百分比為35. 71%，聚合物的重量百分比為60. 12%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球形態好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在12 - 280 μ m。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為90. 9%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例17
載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取O.01 mg生長激素溶解到O. I ml的水中形成藥物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為10%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比1:10混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有1% (w/w)的聚乙二醇；(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到O.I ml濃度為1% (w/w)銀納米顆粒和2% (w/w)乙基纖維素表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用乙醇洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 01%，納米顆粒的重量百分比為O. 01%，聚合物的重量百分比為99. 98%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球形態好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在10 - 100 μ m。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生 長激素相對于其原始投加量的包封率為92. 7%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例18
載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取4mg生長激素溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為1%(w/w)的PLGA的乙腈溶液按照重量比1:1混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液，乙腈溶液中還含有1% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到O.Iml濃度為4% (w/w)銀納米顆粒和1% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性劑和1% (w/w)聚山梨醇表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為40%，納米顆粒的重量百分比為40%，聚合物的重量百分比為20%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球形態好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在12 - 495 μ m。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為94. 1%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例19
載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取3mg生長激素和3 mg聚乙二醇溶解到0.2 ml的水中形成藥物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時，使得生長激素充分吸附在多孔的二氧化 硅納米顆粒里，離心去上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成生長激素納米藥物；
(2)把上述生長激素納米藥物和濃度為5%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比1:3混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有5% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步驟(2)所得油包生長激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到O.I ml含20% (w/w)銀納米顆粒和2% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長激素納米藥物(Ν/0/Ν)復乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時；
(5)把步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為30%，納米顆粒的重量百分比為20%，聚合物的重量百分比為20%，藥用輔料的重量百分比為30%。本實施例中載有生長激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球形態好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在5 — 475 μ m。微球的藥物體外釋放率幾乎達到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中生長激素相對于其原始投加量的包封率為92. 9%(計算方法為實際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員，在不脫離本發明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應視為本發明的保護范圍。
權利要求
1.一種含生長激素納米藥物微球，其特征在于，所述微球的表面自組裝有一層納米顆粒,微球中生長激素的重量百分比為O. 01% - 40%，納米顆粒的重量百分比為O. 01% - 96%,聚合物的重量百分比為3. 65% - 99. 98%，藥用輔料的重量百分比為0% — 30%，微球的粒徑為 I — 500 Mm。
2.根據權利要求I所述的含生長激素納米藥物微球，其特征在于，所述的納米顆粒為有機納米顆粒或無機納米顆粒，可選自聚苯乙烯納米顆粒、交聯葡聚糖納米顆粒、二氧化娃納米顆粒、二氧化鈦納米顆粒、輕基磷灰石納米顆粒、四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵顆粒、金納米顆粒、三氧化二招納米顆粒、碳酸韓納米顆粒、磷酸韓納米顆粒、碳酸鎂納米顆粒、氫氧化鎂納米顆粒或銀納米顆粒中的一種或幾種。
3.根據權利要求I所述的含生長激素納米藥物微球，其特征在于，所述的聚合物選自聚己內酯、聚乳酸、聚乳酸一羥基乙酸、聚乳酸一聚乙二醇、聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇或聚己內酯一聚乙二醇中的一種或幾種。
4.根據權利要求I所述的含生長激素納米藥物微球，其特征在于，所述的藥用輔料為 注射用藥用輔料。
5.根據權利要求I所述的含生長激素納米藥物微球，其特征在于，所述微球的粒徑為10 — 100 μιη。
6.—種權利要求I所述的含生長激素納米藥物微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)將生長激素和藥用輔料制備成納米藥物，所述納米藥物中，生長激素的重量百分比為O. 1% - 90%，藥用輔料的重量百分比為0% - 20 % ； (2)將步驟(I)制備的納米藥物按照1:1一 1:10的重量比分散在重量百分比濃度為.O.5% - 80%聚合物的有機溶劑混合溶液中，形成均勻的混懸液，即油包納米藥物混懸液； (3)將步驟(2)形成的油包納米藥物混懸液加入到含重量百分比為1%- 80%納米顆粒的水混懸液或含重量百分比為1% - 80%納米顆粒和重量百分比為O. 5% - 5%表面活性劑的水混懸液中，進行乳化，形成納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物復乳； (4)將所述納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物復乳轉移到含重量百分比為1%— 10%無機鹽的水溶液中固化I 一 4小時； (5)將步驟(4)所得樣品進行離心，收集微球，并洗滌所得微球，之后凍干，得到表面自組裝有納米顆粒且內部含有生長激素納米藥物的微球。
7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟(I)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟 將生長激素和藥用輔料溶解在水中，然后加入多孔納米顆粒，攪拌使得生長激素和藥用輔料充分吸附在多孔納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成納米藥物；或 將生長激素和藥用輔料溶解在水中形成藥物水溶液，然后將藥物水溶液轉移到聚乙二醇水溶液中，充分混勻后于冰箱中預凍，之后凍干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并離心除去聚乙二醇得到納米藥物。
8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的有機溶劑混合溶液中還添加有重量百分比為O. 1% - 20%的聚乙二醇或泊洛沙姆。
9.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的聚合物重量百分比濃度為5% - 30%，所述的有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮中的一種或幾種。
10.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的納米顆粒重量百分比濃度為20% - 70%，所述的表面活性劑選自聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚山梨醇、乙基纖維素或吐溫中的一種或幾種。
全文摘要
本發明公開了一種含生長激素納米藥物微球，它包含生長激素、納米顆粒、聚合物和藥用輔料。本發明還提供了微球的制備方法，該方法將生長激素和藥用輔料制備成納米藥物，將所述納米藥物加到含有聚合物的有機溶劑混合溶液中進行乳化，然后將油包納米藥物混懸液加到含納米顆粒或含納米顆粒和表面活性劑的水混懸液中進行乳化得到納米顆粒混懸液包油－油包納米藥物復乳，最后將所得復乳固化，離心收集微球。本發明選擇了合適的聚合物材料和微球制備方法，制備的微球包封率高，其表面自組裝的一層納米顆粒具有增強細胞黏附作用，以及減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用，本發明方法可以運用到其它藥物緩釋或控釋微球的制備中。
文檔編號A61K47/34GK102885782SQ20121036156
公開日2013年1月23日 申請日期2012年9月26日 優先權日2012年9月26日
發明者陳英輝, 袁偉恩, 施曉紅 申請人:復旦大學附屬金山醫院