專利名稱：內皮素配體和基因調節序列介導的特異性基因轉移技術的制作方法
技術領域：
本發明屬生物高技術。
基因轉移技術是生物治療和工程的關鍵方法。目前國內外應用轉基因方法主要有物理、化學、融合和重組病毒轉染四類方法。這些方法有的轉染效率低，有的安全性差，均缺乏細胞和組織的特異性等缺欠，從而限制了生物工程和治療的應用。因此，尋求一種高效、安全、具有細胞和組織靶向性的新的轉基因技術，已經成為生物工程和治療的一個關鍵問題。近年來，有人用細胞和組織上的特異抗體，作為生物治療的導向或歸巢裝置，但這種方法是非生理性，反復應用易產生免疫反應。
本發明的目的在于尋找一種效率高、特異性好、用途廣泛的轉基因方法。
本發明的內容是應用內皮素配體(包括激動劑和阻斷劑)和/或內皮素基因5′端調控序列重建的內皮素-多聚賴氨酸-基因復合物和構建的具有內皮素5′端調控序列的攜帶有目的基因的逆轉錄病毒載體、腺病毒載體等，特異性向血管內皮細胞、平滑肌細胞離體和在體的轉基因技術。
其原理是內皮素是內皮細胞產生的一種生物活性多肽，其內皮素5′端含有組織特異性調節序列，可以調控基因選擇性地在內皮細胞中表達。
內皮素具有A、B兩種受體，A型受體主要分布在平滑肌細胞上，B型受體主要分布于內皮細胞。當受體與配體結合后，可以通過胞飲機制將配體轉輸到細胞內，而達到基因治療的目的。
應用基因重組的方法，將內皮素5′端調節序列(包括啟動子、增強子)與目的基因重組，構建成病毒載體(逆轉錄病毒載體、腺病毒載體等)，通過包裝細胞，形成含有內皮素調控序列和目的基因修飾的假病毒轉染的體細胞，可以使目的基因特異性地在內皮細胞中表達。
應用雙相偶合劑，將不同內皮素受體配體與多聚賴氨酸或絲氨酸聯結，再通過氫建結合，與目的基因聯結，組建成內皮素受體配體-多聚賴(絲)氨酸-目的基因的復合體。這種復合體再通過物理、化學、脂質體介導的或直接轉基因的方法，轉染體細胞。由于所用受體配體類型不同，因此可將外源性的目的基因特異性地導入內皮細胞或平滑肌細胞中。
所攜帶的目的基因可依據治療目的的不同，可選用治療腫瘤的IL-2、TNF、GM-CSF、γ-INF等，亦可選用治療心血管疾病的LDL-R、tPA、ProUK、EPO等，亦可選用治療其他疾病的有關基因及其反義DNA。
內皮細胞覆蓋全身所有組織、器官的血管內膜，平滑肌細胞遍布全身血管組織，其分布廣，面積大，其分泌產物不僅可以在局部起到自分泌和旁分泌作用，亦可通過體循環作用于遠隔器官，因此，內皮細胞和平滑肌細胞是進行生物治療的理想中介細胞。
本方法可以選擇性地將各種外源性基因特異性地轉染至內皮細胞或平滑肌細胞，具有廣泛的應用價值。它可應用于腫瘤、心血管病、呼吸系統疾病、血液病、腎疾病、遺傳病的基因導向和生物治療。
權利要求
1.本發明涉及一種轉基因的方法，其特征在于是應用內皮素配基和阻斷劑組建的各種基因復合物所進行的內皮細胞、平滑肌等細胞的轉基因方法。
2.如權利要求"1"所述之轉基因方法，其特征在于是應用內皮素5′端調控序列所構建的各種重組的逆轉錄病毒載體、腺病毒載體等。
3.如權利要求"1"所述之轉基因方法，其特征在于是應用脂質體包裹的含有內皮素受體配基作為歸巢裝置的基因導向技術。
全文摘要
一種應用內皮素配體(包括激動劑和阻斷劑)和/或內皮素基因5′端調控序列重建的內皮素-多聚賴氨酸-基因復合物和構建的具有內皮素5′端調控療列的攜帶有目的基因的逆轉錄病毒載體、腺病毒載體等，特異性向血管內皮細胞、平滑肌等細胞的離體和在體的轉基因方法。
文檔編號A61K38/22GK1111159SQ9410340
公開日1995年11月8日 申請日期1994年4月5日 優先權日1994年4月5日
發明者湯健, 顧鍵人, 趙明清, 朱小君, 李岱宗, 曹宇清 申請人:北京醫科大學, 上海市腫瘤研究所