專利名稱：一種含神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種腦保健營養(yǎng)品的生產(chǎn)方法，即從動物腦中提取含有神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的生產(chǎn)方法神經(jīng)節(jié)苷脂是一類含有N-乙酰神經(jīng)氨酸的膜糖脂，能有益于人腦功能的發(fā)育和增強記憶，六十年代已被溶液提取法制得(Folchpi，J.等，J.Biol，Chem，226∶497，1957)，主要制成化學(xué)試劑供生理、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的科學(xué)實驗，其來源除在各實驗室自行少量試制外，由美國西格瑪(SIGMA)公司生產(chǎn)供應(yīng)，該方法是以牛腦為主要原料，用氯仿-甲醇為主要提取劑，然后加水和鹽溶液分層提取，再經(jīng)層析純化獲得。由于采用對人體有害的大量氯仿和甲醇作溶劑，無論從生產(chǎn)操作、廢液排放、廢氣外逸均不利于生產(chǎn)操作人員的身體健康，如用作保健營養(yǎng)品是極不合適，而且產(chǎn)品中還會留存微量的甲醇，對服用者是極不安全的，曾報導(dǎo)用氯仿一乙醇溶液提取神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的方法(CN93112578.2)由于仍然采用大量的氯仿，不僅對工業(yè)生產(chǎn)環(huán)境帶來不少有害因素，而且一旦產(chǎn)品中殘留微量氯仿將對人體是不利的，作為保健品的制備，需嚴(yán)禁使用任何有毒有害物質(zhì)參與工藝生產(chǎn)中。因此，采用無毒無害的溶劑提取生產(chǎn)含有神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的方法仍是人們研究的課題。
本發(fā)明的目的是提供一種采用無毒無害的溶劑從動物腦中提取含有神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的方法采用動物腦為原料，經(jīng)粉碎、溶劑提取、過濾，濃縮，即可制得含有神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的粗制品。含量≥70％，將濃縮前的含有溶劑的粗制品經(jīng)第二次溶劑提取，提取液經(jīng)濃縮后可獲得精制品，精制品可以用食用水稀釋，還可加入少量防腐劑或/和食糖、葡萄糖或甘露糖，充分?jǐn)嚢韬笾瞥杀＝】诜I養(yǎng)液。精制品也可以與食用淀粉混合后，包裝成膠囊或壓制成片劑，成為保健口服營養(yǎng)品。
本發(fā)明的方法中，將動物腦粉碎，加入40～100％含量的酒精和石油醚提取，動物腦與酒精和石油醚的重量比是1∶1～20∶0.5～8，推薦重量比為1∶2～10∶1～5，經(jīng)過濾、清液、濃縮，除雜質(zhì)和溶劑后獲得粗制品，也可以在動物腦中加入40～100％含量的酒精后先粉碎，再加入石油醚提取，過濾獲清液，濃縮獲粗制品。
本發(fā)明方法中可以將上述濃縮前的含有溶劑的粗制品清液中，加入石油醚進(jìn)行第二次提取，動物腦與第二次溶劑的重量比為1∶3～20，推薦重量比為1∶5～15，然后進(jìn)行濃縮，除溶劑，或冷凍干燥，獲得精制品。
本發(fā)明方法中所述的溶劑提取比例，采用更大量酒精或石油醚也是可以的，但實際效果仍然一樣，反而浪費能源和人力。
本發(fā)明的方法還可以將濃縮后的粗制品或精制品用1～2000倍重量食用水稀釋配制成保健營養(yǎng)口服液，該口服液還可含有少量防腐劑或/和食糖、葡萄糖或甘露糖。
本發(fā)明的方法還可以將冷凍干燥后的粉末與1～100倍重量的食用淀粉混合，壓片或裝入膠囊。
本發(fā)明的方法中所用的動物腦最好是哺乳動物的腦，采用新鮮或冷凍的動物腦，通常需去除碎骨、雜物、漂去血污、瀝干。
本發(fā)明的方法中所述的酒精最好是食用酒精，含量以≥85％的酒精為好。所述的石油醚推薦60～90℃的石油醚。提取時間一般為0.1～5小時，推薦為0.5～3小時。
本發(fā)明的方法中，提取和濃縮溫度控制在60℃以下，以10～30℃為宜。
采用本發(fā)明的方法制得的含有神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的保健營養(yǎng)品，均具有增強學(xué)習(xí)和記憶的功能，能促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的生長發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的恢復(fù)，不但生產(chǎn)方法簡便，使用溶劑對環(huán)境和人體均無害，產(chǎn)率≥90％，適宜于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
通過下述實施例將有助于理解本發(fā)明，但并不限制本發(fā)明的內(nèi)容實施例1粗制品的制備將新鮮或冷凍的豬腦1Kg，除去雜物、漂去血污后瀝干。加入70～95％的食用酒精1～5Kg，在轉(zhuǎn)速1000～3000轉(zhuǎn)/分和室溫下，搗碎機(jī)搗碎0.5～5分鐘，再加入1～4Kg石油醚，攪拌0.5～3小時，過濾，濾液經(jīng)濃縮。獲粗產(chǎn)物。產(chǎn)物含有神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)≥90％。
實施例2粗制品的制備將新鮮干凈的牛腦1Kg，在0～30℃時，加入2～5Kg 85％的酒精和1～3Kg的60～90℃石油醚，在搗碎機(jī)中搗碎0.1～2小時，過濾，濾出清液經(jīng)濃縮，獲粗產(chǎn)物。
實施例3精制品的制備將實驗例1或2中未經(jīng)濃縮的清液，用5～10Kg石油醚提取，有機(jī)相經(jīng)減壓濃縮和/或冷凍干燥分別得到以神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的保健口服營養(yǎng)液或粉未的精制品。
實施例4制劑的制備將實施例3濃縮后的精制品，用1～2000倍重量的食用水稀釋，成保健口服營養(yǎng)液。還可少量加入防腐劑、食糖。
將實施3冷凍干燥后獲的粉末，用1～100倍重量的食用淀粉混合，壓制成片劑或分裝成膠囊。
實施例5提取物對小鼠條件性主動回避行為的影響實驗動物昆明種小鼠40只，雌雄兼有，服用前的體重為12～17g。
每5只飼養(yǎng)在一籠內(nèi)。實驗方法40只小鼠隨機(jī)分為兩組，一組為對照組，另一組為實驗組。
實驗前禁飲水一天，實驗時，每只動物每天飲水量為5ml水左右(實施例1或3的保健口服營養(yǎng)液溶于5ml水中)。
次日開始服用營養(yǎng)液。自然口服進(jìn)藥，共服二周，然后在小鼠穿梭箱內(nèi)進(jìn)行主動回避條件反射訓(xùn)練。10次測試中有9次出現(xiàn)條件性反應(yīng)定為學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)。達(dá)到學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)后，停止訓(xùn)練1個月后再進(jìn)行記憶保持的檢查。學(xué)習(xí)實驗結(jié)束后，從對照組和實驗組分別隨機(jī)各選出2只小鼠送上海醫(yī)科大學(xué)病理教研室作病理切片檢查，心、肝、肺、腎、腦等主要臟器均無異常。給藥劑量實驗組的動物每籠給含神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)5mg/25ml，每天每只動物平均服用含神經(jīng)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)1mg/5ml左右水溶液。對照組服用等量的自來水。實驗結(jié)果學(xué)習(xí)的情況對照組小鼠達(dá)到學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)所需的訓(xùn)練次數(shù)為31.4±3.2，而實驗組所需的次數(shù)為26.9±2.4。經(jīng)統(tǒng)計處理P＜0.001，兩組間的差異非常顯著，服用含神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的實驗組明顯快于對照組(請看表1)。
這一實驗結(jié)果表明保健口服營養(yǎng)液有增強小鼠學(xué)習(xí)能力的作用。記憶保持情況停止訓(xùn)練1個月后，對照組小鼠正確反應(yīng)的百分?jǐn)?shù)為32.8±9.0，而實驗組正確反應(yīng)的百分?jǐn)?shù)為50.8±10.6，經(jīng)統(tǒng)計處理P＜0.001，兩組間的差異非常顯著(請看表2)。這說明實驗組的記憶保持明顯優(yōu)于對照組，該口服營養(yǎng)液有增強記憶的作用。體重變化服用2周后對照組體重平均增加10.85g。實驗組動物的體重平均增加18.1g。這說明本發(fā)明的保健口服營養(yǎng)液可能有較高的營養(yǎng)價值。毒性病理試驗將對照組和實驗組的小鼠隨機(jī)各取二只，各取心、肝、肺、腎、腦、脾等組織切片，經(jīng)光鏡檢查均未見異常病理改變，二者間完全相同，均顯示正常小鼠組織學(xué)所見范圍。
根據(jù)以上實驗可以認(rèn)為含神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)確能增強小鼠的學(xué)習(xí)、記憶功能。
實施例6提取物對老年人記憶功能的影響本實驗從94年11月至95年1月進(jìn)行，測試對象為徐匯區(qū)肇嘉浜路第一居委會所屬范圍內(nèi)老年居民。測試對象的最大年齡為82周歲，最小為61周歲，男女皆有，共34人。在服用實施例所述的保健口服營養(yǎng)液或安慰劑前，先對測試對象進(jìn)行了一次記憶商的測試，并按中國科學(xué)院心理研究所編制的臨床記憶量表計算，求得記憶商(MQ)，并根據(jù)這三十四人得分情況進(jìn)行分組，(年齡段相對均等、記憶商值兩組也相對均等)，隨機(jī)把其中的一組定為對照組(共16人)服用不含提取物的安慰劑；另一組為實驗組(共18人)服用腦組織提取物，劑量為5mg/10ml/日。口服一個月后，對受試者再進(jìn)行一次記憶商(MQ)的測試，并按記憶量表算出記憶商(MQ)。
測試結(jié)果表明(見表3)，對照組服用安慰劑前后的記憶商分別為97.9±12.6和98.6±13.5。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理(P＞0.05)，無顯著性差別。實驗組服用提取物前后的記憶商分別為101.9±8.9和112.3±10.6。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理(P＜0.001)，表明服用提取物前后的記憶商有顯著性差異。18位服用提取物的老人中有15位的記憶商有不同程度的改善，占服用人數(shù)的83％。
以上結(jié)果表明，腦組織提取物有改善老年人記憶能力的功效。表1.達(dá)到學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)所需 表2.正確反映的百分?jǐn)?shù)的訓(xùn)練次數(shù) (記憶保存的結(jié)果)次數(shù) 對照組實驗組次數(shù)對照組實驗組1. 34291. 20352. 31312. 35653. 29243. 30654. 28264. 45355. 25315. 25406. 33306. 50557. 36267. 20458. 35278. 35459. 33299. 307010. 322810. 355011. 322811. 354512. 342812. 504013. 302513. 305014. 332214. 255515. 262615. 306516. 332716. 304517. 362617. 405518. 322618. 255519. 322420. 2725 平均數(shù) 32.7778 50.8333標(biāo)準(zhǔn)差 8.9479 10.6066平均數(shù) 31.4 26.9標(biāo)準(zhǔn)差 3.15232.3819 P＜0.001P＜0.001
表3老年人記憶商測試結(jié)果服用安慰劑前后的比較 服用提取物口服液前后的比較序號 服用前 服用后一個月序號 服用前 服用后一個月1. 81 74 1. 111 1152. 94100 2. 106 1033. 80 93 3. 99964.118132 4. 97 1045.113112 5. 97 1146.117113 6. 106 1297.104 95 7. 89 1098.100100 8. 119 1349.103104 9. 112 12410. 104 93 10. 109 12311.93100 11. 101 11812.83 80 12. 104 10213. 107104 13. 94 11314.98 94 14. 899715.81 93 15. 88 10816.91 90 16. 110 11317. 96 105平均數(shù) 97.937598.652518. 108 115標(biāo)準(zhǔn)差 12.609413.4659平均數(shù) 101.9444 112.3333P＞0.05 標(biāo)準(zhǔn)差8.907810.5607P＜0.00權(quán)利要求
1.一種從動物腦中提取含有神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的生產(chǎn)方法，包括粉碎、溶劑提取、過濾和濃縮，其特征是將干凈的動物腦經(jīng)粉碎，加入40～100％含量的酒精和石油醚提取，或者在干凈的動物腦中加入40～100％含量的酒精后粉碎，加入石油醚提取，上述提取物過濾，清液濃縮，所述的動物腦、酒精和石油醚的重量比是1∶1～20∶0.5～8。
2.一種如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征是動物腦、酒精和石油醚的重量比是1∶2～10∶1～5。
3.一種如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征是將所述的提取液用石油醚進(jìn)行第二次提取，將提取液濃縮，動物腦和二次提取用的石油醚重量比為1∶3～20。
4.一種如權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法，其特征是所述的動物腦與二次提取用的石油醚重量比為1∶5～15。
5.一種如權(quán)利要求1、2、3或4所述的生產(chǎn)方法，其特征是所述的酒精是含量≥85％的食用酒精。
6.一種如權(quán)利要求1、2、3或4所述的生產(chǎn)方法，其特征是所述的石油醚是60～90℃的石油醚。
7.一種如權(quán)利要求1、2、3或4所述的生產(chǎn)方法，其特征是所述的提取時間為0.1～5小時。
8.一種如權(quán)利要求1、2、3或4所述的生產(chǎn)方法，其特征是所述提取和濃縮溫度是低于60℃以下，
9.一種如權(quán)利要求1、2、3或4所述的生產(chǎn)方法，其特征還可用1～2000倍重量的食用水稀釋濃縮物。
10.一種如權(quán)利要求1、2、3或4所述的生產(chǎn)方法，其特征是還可用1～100倍重量的食用淀粉與濃縮物混合，壓片或裝膠囊。
全文摘要
本發(fā)明是一種從動物腦中提取含有神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的生產(chǎn)方法，包括粉碎、溶劑提取、過濾和濃縮。濃縮物是一種腦保健食用品，還可用食用水稀釋或與食用淀粉混合。本發(fā)明的方法采用無毒無害的溶劑，提取率高，方法簡便，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61K31/70GK1119190SQ95111569
公開日1996年3月27日 申請日期1995年3月24日 優(yōu)先權(quán)日1995年3月24日
發(fā)明者梅鎮(zhèn)彤, 韓永根, 孫立群 申請人:中國科學(xué)院上海生理研究所