專利名稱：蚯蚓干燥粉末的制造方法
技術領域：
本發明涉及蚯蚓干燥粉末的制造方法，具體來說，本發明涉及能夠抑制蚯蚓中含 有的酶活性的失活，并且無害化的蚯蚓干燥粉末的制造方法。
背景技術：
主要在亞洲各國，自古以來就將蚯蚓用作各種疾病的預防劑、治療劑，到目前為止 已經知道其可以用于膀胱內結石縮小劑以及排出促進劑、黃疸治療劑、分娩促進劑、補藥、 育毛劑、強精劑、解熱劑、痙攣治療劑、血液循環促進劑、半身不遂治療劑、間接鎮痛劑、排尿 劑、支氣管哮喘劑、高血壓治療劑用途。在將蚯蚓活體作為原料，制備用于口服給藥的藥劑時，必須除去蚯蚓消化道內殘 留的消化物、以及附著在表皮的污染物等，到目前為止，已經提出了多種去除上述消化物和 污染物的方法。例如，下述制造用作糖尿病治療劑、抗高血脂劑或者血壓調節劑的蚯蚓干燥粉末 的方法(參考專利文獻1 4)將蚯蚓活體浸泡在鈉鹽或者鉀鹽這樣的堿金屬鹽的水溶液 中，使之排泄出消化道內的糞土后，進行濕式粉碎，并將得到的懸濁液進行真空冷凍干燥， 到目前為止，還公開了下述制造血栓病患者治療藥物的方法(參考專利文獻幻等將蚯蚓 活體在維持于6 的酸水溶液中放置0. 1 5小時，將消化道內的糞便除去，而后將其 粉碎，并對該粉碎物進行脫氣，然后使其邊階段性地升溫邊進行真空干燥從而制造血栓病 患者治療藥物。另外，本發明的發明人還提出了下述方法(參考專利文獻6)通過將蚯蚓放置在 由有機酸形成的不適生存條件的環境下，從而使蚯蚓消化道內的內容物排泄出來。現有技術文獻專利文獻專利文獻1 日本特開平1-47718號公報專利文獻2 日本特開平1-47719號公報專利文獻3 日本特開平1-47720號公報專利文獻4 日本特開平H68639號公報專利文獻5 日本特開平3-72427號公報專利文獻6 日本特開2008-081476號公報

發明內容
發明要解決的問題但是，通過現有的制造方法制造的蚯蚓粉末，存在下述問題由于通過真空冷凍等 干燥步驟，因此對于蚯蚓中含有的菌的殺菌較不充分。對于該問題，雖然可以通過進行乙醇 殺菌等處理來解決，但仍存在勞力和時間以及成本方面的問題，希望能夠得到解決。在此本發明的目的在于提供既簡便又能抑制蚯蚓所含的酶活性的失活、同時使其無害化的蚯蚓干燥粉末的制造方法。本發明人為了解決上述問題進行了專心的研究，結果發現通過將冷凍干燥后的蚯 蚓粉末在特定的溫度下加熱，可以解決上述的問題，從而完成了本發明。除了一部分耐熱菌之外，一般來說酶的耐熱性較差是公知常識，雖然實施過加熱 到80°C左右，但是對于進一步的加熱沒有進行研究。但是，本發明人在研究蚯蚓粉末的殺菌 方法的過程中，著眼于安全且簡單的熱處理方法，并對最適的加熱溫度進行了探索。結果發 現，即使將蚯蚓粉末加熱到比目前方法的溫度大幅提高的高溫，蚯蚓粉末中所含的酶的活 性也得以保持。S卩，本發明的蚯蚓干燥粉末的制造方法包括將活蚯蚓粉碎成粉碎物，并將該粉碎 物冷凍干燥，在110°c以上且低于130°c的溫度下對得到的干燥物進行加熱處理。在本發明的蚯蚓干燥粉末制造方法中，就上述活蚯蚓而言，可以優選使用經過下 述處理步驟的活蚯蚓將活蚯蚓放置于明亮場所10 50小時，然后，將附著在表皮上的污 染物剝離，接下來使其與有機酸接觸，并盡可能快速地用水稀釋，將PH調整到2 5，在該條 件下保持3 180分鐘，而后進行水洗。另外，在本發明的蚯蚓干燥粉末制造方法中，就上述活蚯蚓而言，可以優選使用經 過下述處理步驟的活蚯蚓將活蚯蚓放置于明亮場所10 50小時，然后，將附著在表皮上 的污染物剝離，接下來將其浸漬在PH調整為2 5的有機酸中，在該條件下保持3 180 分鐘，而后進行水洗。另外，在本發明的蚯蚓干燥粉末的制造方法中，就上述活蚯蚓而言，可以優選使用 經過下述處理步驟的活蚯蚓將活蚯蚓放置于明亮場所10 50小時，然后，將附著在表皮 上的污染物剝離，接下來將晶體狀羥基羧酸粉末撒在蚯蚓上，隨后立即加水稀釋羥基羧酸， 將PH調整為2 5，在該條件下保持3 180分鐘，而后進行水洗。另外，在本發明的蚯蚓干燥粉末的制造方法中，優選使用含有微納米氣泡 (micronano bubble)的水進行上述水洗。再者，在本發明的蚯蚓干燥粉末的制造方法中，上述冷凍干燥優選 在-18°C -35°C冷凍20 240小時之后，在真空下進行。發明效果根據本發明可以提供既簡便又能抑制蚯蚓中所含的酶活性的失活、同時使其無害 化的蚯蚓干燥粉末的制造方法。


圖1為表示實施例1、2以及比較例1的結果的圖表。
具體實施例方式以下，針對本發明的蚯蚓干燥粉末的制造方法進行詳細地說明。在本發明中，使用活蚯蚓作為原料，該活蚯蚓可以使用例如下述的蚯蚓粉正 蟲引(7 力彡彡文，Lumbricus rubellus)、陸正蟲引(LT 彡彡文，Lumbricusterrestris)、 赤子愛勝蚓(* 7 S S文，Eisenia foetida)、背闇異唇蚓(力7 * 3夕7丨J S S文， Allolobophora caliginosa)、八毛枝蟲引(厶，寸3f 夕 1J 彡彡文，Dendrobaena octaedra)、Allolobophora japonica Michaelsen (寸夕，彡彡文)、Drawida hattamimizu Hatai ( 7、 夕夕 S S 文.)、背黑蚯蚓(七夕.’口 S S 文.，Pheretima divergens Michaelsen)、普通蚯 蟲引(7夕々笑笑文，Pheretimacommunissima) >田地蟲丘蟲引(八夕夂笑笑文，Pheretima agrestis) > Pheretimasieboldi Horst (〉——# ^卜笑笑文)、——紋蟲丘蟲引(h 卜夕 > 笑 彡文，Pheretimahilgendorfi)、湖濱蟲丘蟲引(彳乂 彡彡文，Pontodrilus matsushimensis Iizuka)、系蟲丘蟲引(彳卜彡彡文，Tubifex hattai Nomura)、Limnodrilus gotoi Hatai (L. 50。土&1土8乂印1^118011) ( - 卜々 4 卜 S S 文(二1J S S 文))等。就本發明中使用的活蚯蚓而言，對于將其粉碎之前的準備工作，沒有特別的限定， 但可以列舉如下作為優選的準備工作的實例。首先從養殖床上取出活蚯蚓，移動到如面包 箱一樣的托盤(平箱)中，放置10 50小時，優選放置過夜。此時的容納量為收納厚度為 30 60mm、優選40 50mm左右的量。在該托盤中，應避免存在泥、砂這樣的異物，另外由 于蚯蚓是夜行性動物，因此在較暗的地方其生活活動會較為活躍，可能會導致體力的消耗， 為此在夜晚應當通過照明培養等方法，以保持明亮的狀態。通過這樣處置的活蚯蚓，將發揮 其自己的防御本能，將消化道內殘留的消化物排泄出，該排泄物覆蓋其全身，從而防止水分 蒸發，以維持其生活環境，因此，如果通過適當的手段反復將覆蓋的污染物即排泄物剝離， 最終可以將消化道內的消化物以及在表皮上附著的污染物幾乎全部除去。就該表皮上附著 的污染物的剝離而言，可以通過下述方法進行例如用無紡布覆蓋活蚯蚓，使污染物吸附于 無紡布上。接下來，對于如上除去了污染物的活蚯蚓，優選一下子形成令活蚯蚓不適的生活 環境。通過實施了這樣的處置之后，活蚯蚓由于自己生存的本能，將放出體液以改善生活環 境，因此不僅是消化道內殘留的消化物，還可以排泄出成為惡臭原因的氨以及對人體有毒 害的含有砷的體液。作為形成上述不適生活環境的方法，例如可以列舉出使活蚯蚓與有機酸相接觸的 方法。通過與有機酸相接觸，可以一下子形成令活蚯蚓不適的生活環境。就與有機酸的接 觸而言，可以在活蚯蚓上直接撒上有機酸粉末，也可以是撒上較濃的有機酸水溶液。作為此 時使用的有機酸，例如有乙酸、蘋果酸、檸檬酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸等。可以單獨使用這些 酸，也可以混合2種以上使用。特別優選的有機酸為檸檬酸。在形成這樣的不適生活環境 時，如果將活蚯蚓長時間與有機酸粉末或較濃的有機酸水溶液相接觸，將導致其死亡，生活 機能喪失，從而無法將消化道內的消化物排出，因此必須盡可能快速地、通常在30秒以內， 優選在20秒以內用水稀釋有機酸，將pH調整到2 5的范圍。作為稀釋該有機酸的水，如 果使用下述含有微納米氣泡的水，則因為能夠增加蚯蚓體液的排出，故優選。另外，下述方 法可以代替上述的與有機酸粉末或較濃的有機酸水溶液相接觸之后，盡可能快速地稀釋的 方法，即預先將有機酸水溶液的PH調整到2 5，并將蚯蚓浸漬于其中，也可以使用含有微 納米氣泡的有機酸水溶液。由于活蚯蚓的組織的65%為水分，因此，通過水分保護身體機能 作用的時間，在一定程度上是充足的，但如果活蚯蚓死亡，則上述操作將沒有任何意義，因 此必須慎重地控制在不適生活環境下放置的時間。該時間受到條件的左右，通常優選3 180分鐘的范圍。需要說明的是，調整pH除了用水進行稀釋之外，還可以通過使用堿中和、 緩沖液等來進行。如上所述由于使用了有機酸，并且有機酸具有殺菌性，因此可以發揮如上 所述的使消化器官內殘留的消化物排泄出來的效果，同時還可以得到如下效果殺死無法通過水洗除去的雜菌。另外，作為形成上述不適生活環境的方法，也可以列舉出使活蚯蚓與羥基羧酸相 接觸的方法。在該方法中，可以通過任意方法使蚯蚓與羥基羧酸相接觸，但優選下述方法 在蚯蚓上撒上晶體狀羥基羧酸粉末，隨后立即加水稀釋羥基羧酸，將PH調整到2 5，并在 該條件下保持3 180分鐘。如果活蚯蚓長時間與羥基羧酸粉末相接觸，將導致其死亡，生 活機能喪失，從而無法將消化道內的消化物排出，因此必須盡可能快速地、通常在30秒以 內，優選在20秒以內用水稀釋羥基羧酸，將pH調整到2 5的范圍。需要說明的是，調整 PH除了用水進行稀釋之外，還可以通過使用堿中和、緩沖溶液等來進行。另外，作為水，如果 使用下述含有微納米氣泡的水，則因為能夠增加蚯蚓體液的排出，故優選。如果使用這樣的 羥基羧酸，那么，由于該羥基羧酸是強酸，因此會破壞表皮，并且具有殺菌作用，因此通過一 下子形成令活蚯蚓不適的生活環境，活蚯蚓由于自身生存的本能將放出體液以改善生活環 境。另外，通過這樣的接觸處理，可以減少蚯蚓活體內包含的病原性微生物。由于羥基羧酸 具有與重金屬形成絡合物的能力，因此具有下述的優點其可以與蚯蚓活體內的汞、鎘、鉛 等有毒金屬結合，從而將其分泌到體外。在這種情況下使用的晶體狀羥基羧酸只要是在使 用條件下呈現晶體狀態的物質即可，與其羥基數或者羧基數無關。即，可以為以下任意羥基 羧酸單羥基單羧酸、單羥基多羧酸、多羥基單羧酸、多羥基多羧酸。作為這樣的羥基羧酸， 可以為例如，羥基乙酸、乳酸、β-羥基丙酸、α-羥基正丁酸、β-羥基正丁酸、α-羥基正 戊酸、羥基正戊酸、蘋果酸、α-甲基蘋果酸、α-羥基戊二酸、羥基戊二酸、檸檬酸 等，但從獲取方便的角度考慮，優選乳酸、蘋果酸、檸檬酸。這些羥基羧酸，可以單獨使用，也 可以混合2種以上使用。如上所述實質上完全除去了污染物的蚯蚓活體通過純水進行清洗，然后，通過粉 碎形成液態或糊狀粉碎物。該粉碎可以使用均化器、混合機、均質混合器、混砂機(擂潰 機)、加壓型細胞破壞裝置，通常在1 25°C，優選在2 15°C的溫度下進行。接下來，將該 粉碎物供給至冷凍干燥過程。此時，蚯蚓活體內含有的酶雖然對活細胞沒有作用但對死細 胞會發生瞬時作用而導致發熱、腐敗，產生強烈的腐敗性氣體，因此優選下述步驟為了防 止上述情況將該粉碎物瞬間驟冷到_18°C _35°C以抑制酶的作用，隨后將其冷凍進行冷 凍真空干燥。如上所述，為了在不損害蚯蚓本身的藥理作用的情況下將其粉末化，必須迅速地 進行冷凍，但另一方面，如果在短時間內使其凍結，與作為蚯蚓糊狀物的主要成分的蛋白質 一起存在的雜質將形成點狀的未冷凍部分，從而導致無法將其分離，因此不優選過于急速 的冷凍。因此，優選的冷凍為在_18°C _35°C的低溫下，需要進行20 240小時，更優選 為需要進行50 170小時。接下來，在冷凍真空干燥時，優選所選擇的條件可以將水分和雜質無殘留地除去。 為此，優選在下述條件下進行在壓力50 以下，-60°C +90°C的溫度范圍、階段性的升高 溫度同時控制時間范圍為10 60小時。例如，將上述粉碎物在_18°C -35°C的溫度下，用20 MO小時進行冷凍之后， 在下述條件下進行冷凍真空干燥10 60小時，從而可以得到無菌狀態的淡黃色的蚯蚓干 燥粉末，上述條件為在-60°C +90°C的溫度范圍，分成數個階段進行升溫，在壓力為25 40Pa的范圍，分成數個階段進行減壓。
在本發明中使用的活蚯蚓，在實施了例如上述的處理之后，優選在粉碎之前進行 水洗，但作為在這種情況下的水，可以優選使用含有微納米氣泡的水。使用這樣的水的優點 在于可以提高清洗效率。在此所謂的微納米氣泡是指直徑為0. 01 100 μ m的氣泡，氣 泡可以為空氣也可以為氧氣。含有微納米氣泡的水，可以通過下述方法來制造例如，將微 小氣泡壓壞而生成微納米氣泡的方法，使用SPG (Siirasu Porous Grass)膜生成微納米氣 泡的方法。作為能夠制造含有微米氣泡的水的裝置，例如可以舉出安裝有SPGTECHN0L0GY. Co.，Ltd.制造的縫隙式起泡裝置的微細氣泡產生氣體溶解系統。本發明的蚯蚓干燥粉末的制造方法的特征在于，將活蚯蚓洗凈處理并粉碎，然后， 進行干燥，將得到的蚯蚓干燥物在110°c以上且低于130°c的溫度，優選為115 125°C的條 件下進行加熱處理。如果加熱溫度低于110°C時，有時對干燥物的殺菌是不充分的，如果溫 度在130°C以上，蚯蚓干燥物中含有的酶將失活從而導致活性的降低，因此不優選使用。對 于加熱方法沒有特別的限定，可以列舉出利用熱風的方法、使用加熱套管的方法、利用安 裝在塔盤中的加熱器進行加熱的方法、以及使用定溫恒溫器的方法。加熱時間優選為30秒 130分鐘，更優選為30分鐘 90分鐘，進一步優選為60 分鐘 90分鐘。如果加熱時間過短，則有時會出現殺菌不充分的情況，如果加熱時間過長 會導致酶活性損失，因此不優選。實施例以下，通過實施例對本發明進行更為具體的說明，但本發明并不僅限于下述實施 例。(蚯蚓干燥物的制備)將放置在明亮場所10 50小時后剝離表皮上附著的污染物的活紅蚯蚓30kg，平 鋪在平皿上并使厚度為約5cm，在其上均勻地撒上250g檸檬酸，然后，用15秒鐘加入30L純 水進行稀釋。此時在加水之后即刻的PH為2. 25，完全稀釋之后pH為2. 74。這樣用水稀釋 的過程必須迅速地進行，所需時間較長將導致蚯蚓的死亡。撒上檸檬酸粉末后，由于環境變化急劇，蚯蚓一下子釋放出黃色的體液，從而除去 了作為惡臭的原因的氨以及對人體有害的重金屬、砷、纖維蛋白活性抑制物質。接下來，從污濁的檸檬酸水溶液中取出活蚯蚓，經水洗后，用均化器在10°C的條件 下進行粉碎，從而制備蚯蚓糊狀物。接下來，抽濾脫氣該粉碎物，在除去了其中含有的氣體 之后，將其轉移到不銹鋼制的塔盤上，并瞬間驟冷到_35°C，并在該溫度下維持50小時進行 緩慢冷凍。將通過上述方法冷凍的蚯蚓糊狀物，在_35°C、壓力OPa的條件下保持2個小時， 之后升溫到25°C，并在401 下干燥10小時，之后在40°C、壓力351 下干燥14小時，以及 隨后在65°C、壓力351 下干燥12小時，最后在溫度80°C、壓力251 的條件下保持6小時， 并由此完成了真空冷凍干燥步驟。通過該處理得到了含水量8質量％的淡黃色蚯蚓干燥粉末。(干燥物的加熱處理)使用RM-50D型加熱裝置(株式會社大河原制作所制造)，對通過上述步驟得到的 干燥粉末進行加熱處理。加熱條件如下110°C、120°C或者130°C，在達到特定溫度之后，每 經過15分鐘，取出一部分干燥粉末。對于取出的干燥粉末，通過纖維蛋白平板法進行試驗，以評價干燥粉末的殘留酶活性。首先，向Ig干燥粉末中加入20ml生理鹽水，在室溫、150rpm 的條件下振蕩1個小時，并在lOOOOrpm，4°C下離心15分鐘，將上清作為樣品。纖維蛋白平板 法為用IOmlBSB (硼-生理食鹽水緩沖液(生食緩衝液)，pH7. 8)溶解纖維蛋白原(Sigma 公司制造)并使得終濃度為0. 6%，并混合入濃度為5. OU/ml的凝血酶制作纖維蛋白平板， 將30μ 1上述樣品加入到纖維蛋白平板上，在37°C，保溫培育4個小時后，對生成的纖維蛋 白的溶解窗的面積進行測定。得到的結果如下表1所示。需要說明的是，利用纖維蛋白平 板法的試驗進行了 3次，并計算出平均面積。另外，得到的結果如圖1所示。(加熱條件)(實施例1)欄編號溫度加熱累積時間特定溫度下保持積累時間110-60-0IlO0C60分鐘0分鐘110-75-15IlO0C75分鐘15分鐘110-90-30IlO0C90分鐘30分鐘110-105-45IlO0C105分鐘45分鐘110-120-60IlO0C120分鐘60分鐘110-135-75IlO0C135分鐘75分鐘110-150-90IlO0C150分鐘90分鐘(實施例2)欄編號溫度加熱累積時間特定溫度下保持積累時間120-40-0120 0C40分鐘0分鐘120-55-15120 0C55分鐘15分鐘120-70-30120 0C70分鐘 30分鐘120-85-45120 0C85分鐘 45分鐘120-100-60120 0C100分鐘 60分鐘120-115-75120 0C115分鐘 75分鐘120-130-90120 0C130分鐘 90分鐘(比較例2)欄編號溫度加熱累積時間特定溫度下保持積累時間130-40-0130 0C40分鐘0分鐘130-55-15130 0C55分鐘15分鐘130-70-30130 0C70分鐘30分鐘130-85-45130 0C85分鐘45分鐘130-100-60130 0C100分鐘60分鐘130-115-75130 0C115分鐘75分鐘130-130-90130 0C130分鐘90分鐘表權利要求
1.一種制造蚯蚓干燥粉末的方法，該方法包括，將活蚯蚓進行粉碎，并對得到的粉碎物 進行冷凍干燥，將得到的干燥物在110°C以上且低于130°C的溫度下進行加熱處理。
2.權利要求1所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法，其中，所述活蚯蚓經過了下述處理步驟將活蚯蚓放置于明亮場所10 50個小時，然后，將附著在表皮上的污染物剝離，接下 來使其與有機酸接觸，并盡可能快速地用水稀釋，將PH調整到2 5，在該條件下保持3 180分鐘，而后進行水洗。
3.權利要求1所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法，其中，所述活蚯蚓經過了下述處理步驟將活蚯蚓放置于明亮場所10 50小時，然后，將附著在體表上的污染物剝離，接下來 將其浸漬在PH調整為2 5的有機酸中，在該條件下保持3 180分鐘，而后進行水洗。
4.權利要求1所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法，其中，所述活蚯蚓經過了下述處理步驟將活蚯蚓放置于明亮場所10 50小時，然后，將附著在表皮上的污染物剝離，接下來 將晶體狀羥基羧酸粉末撒在其上，隨后立即加水稀釋羥基羧酸，將PH調整為2 5，在該條 件下保持3 180分鐘，而后進行水洗。
5.權利要求2 4中任一項所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法，其中，通過含有微納米氣 泡的水來進行所述水洗。
6.權利要求1 5中任一項所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法，其中，所述冷凍干燥 在-18°C -35°C下冷凍20 240小時后于真空下進行。
全文摘要
本發明提供簡便地、能夠抑制蚯蚓中含有的酶活性的失活、并使其無害化的蚯蚓干燥粉末的制造方法。本發明的蚯蚓干燥粉末的制造方法為，將活蚯蚓粉碎成為粉碎物，并將其冷凍干燥，其特征在于在110℃以上，低于130℃的溫度下對得到的干燥物進行加熱處理。上述活蚯蚓優選使用下述的活蚯蚓在將活蚯蚓放置于明亮場所10～50小時后，將附著在表皮上的污染物剝離，接下來使其與有機酸接觸，并盡可能快速地用水稀釋并將pH調整到2～5，在該條件下保持3～180分鐘后，經水洗后的活蚯蚓。
文檔編號A61P7/02GK102038713SQ201010282979
公開日2011年5月4日 申請日期2010年9月15日 優先權日2009年10月13日
發明者吉田悅男, 石井一行, 石井紗也香, 石井陽一, 須見洋行 申請人:井石有限會社