專利名稱：一種獸用疫苗的即用型佐劑、制備及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及獸用疫苗佐劑領域，具體涉及一種復方佐劑制備方法及其含該復方佐劑的疫苗制備方法。
背景技術：
油性佐劑疫苗是已公知的可有效強化免疫性的疫苗，是目前國內外疫苗市場上產品最多的類型之一，含油佐劑疫苗有三種劑型:油包水(W/0)型、水包油(0/W)型和水包油包水(W/0/W)型。油包水(W/0)型疫苗應用最普遍，該劑型的顯著優點是可獲得高水平持久的免疫增強效果；缺點是較粘稠，注射較困難，同時由于疫苗中白油含量相對較高，常常導致嚴重的接種副反應、形成無菌性化膿損害和接種部位周圍的肉芽腫，可產生外部可見的浮腫、腫脹、硬結和壞死。有研究報道，油包水 (W/0)劑型疫苗在接種部位有留存的可能，因而妨礙了疫苗的使用。豬、犬、貓等動物對該劑型疫苗尤其敏感，這也限制了其在生產實際中的應用。水包油包水(W/0/W)劑型疫苗同時具有W/0型和0/W型的優點，效果很好。常規的做法是先制備W/0型疫苗，再經第二次分散到水相中制備而成。目的是降低黏度，既便于注射又具有良好的免疫原性。但制備技術上難度較大，疫苗穩定性差。為減少乳劑中的油含量，降低粘度、易于注射，開發了新型佐劑，并建立了水包油(0/W)劑型疫苗。但是，該劑型的疫苗應用并不普遍，僅僅在人用疫苗應用方面有商業化，如MF59佐劑用于流感疫苗的制作，在動物疫苗上尚未推廣應用。原因在于水包油(0/W)劑型疫苗的免疫原性弱，僅誘導動物體內產生較弱的免疫應答，尚不能滿足養殖業疫病的防控需求。同時現有水包油(0/W)劑型疫苗無緩控緩釋的作用，一次免疫不能連續激發機體免疫反應，免疫持續期很短。

發明內容
本發明的目的是提供一種獸用疫苗的即用型佐劑，是水包油型佐劑，成分簡單、劑型穩定，使用方便；該佐劑與抗原配制成的疫苗，穩定性好，副反應小，免疫效果好，保護期長。本發明的另一目的是提供上述獸用疫苗的即用型佐劑的制備方法。本發明的再一目的是提供含有獸用疫苗的即用型佐劑的水包油型疫苗。本發明的目的采用如下技術方案實現。一種獸用疫苗的即用型佐劑，按照質量百分含量由下列物質組成:
油 5%-30%，
親水性表面活性劑0.1%-10%，
親油性表面活性劑0.1%-10%，
高分子膠束物質0.1%-10%，水 40%-90%。所述油為白油、角鯊烷和角鯊烯中的一種或者兩種的混合物。所述親水性表面活性劑為吐溫80、普魯尼克121或其混合物。所述親油性表面活性劑為司本80、司本85或其混合物。所述高分子膠束物質為殼聚糖、卡波姆971P、羥甲基纖維素和二甲基雙十八烷基溴化銨中的一種或者兩種的混合物。一種所述獸用疫苗的即用型佐劑的制備方法，該方法具體如下:分別稱取各組分，混合后乳化，除菌即得所述獸用疫苗的即用型佐劑。所述乳化方法為膠體磨擠壓法、微射流法或高壓均質法。一種含有所述獸用疫苗的即用型佐劑的水包油型疫苗。所述水包油型疫苗由質量比為1:0.5-2的即用型佐劑和滅活抗原水溶液組成。所述滅活抗原水溶液為豬口蹄疫滅活病毒液或豬圓環病毒滅活病毒液。有益效果:
本發明提供的獸用疫苗的即用型佐劑，是水包油型佐劑，成分簡單、劑型穩定，使用方便。由于油的用量由70%降至30%以下，顯著減小了對動物的毒副反應，有效解決了疫苗副反應的問題。高分子膠束物質通過離子吸附和微孔包裹的機制，顯著提高抗原的儲留和遞呈能力，有效解決了水包油(0/W)劑型疫苗免疫活性弱、持續期短的問題。即用型佐劑中油的使用量降低，易于注射。

本發明即用型佐劑的制備方法，工藝簡單，成本低，得到的劑型穩定。采用獸用疫苗的即用型佐劑制備的水包油型疫苗，穩定期長，易儲存，免疫效果好，保護期延長，易于注射，副反應很小。
具體實施例方式下面通過實施例進一步解釋本發明，但本發明并不受這些實施例的限制。普魯尼克121 (Pluronic L 121)購自上海生工生物有限公司。實施例1佐劑的制備 配方1:
白油10 g，
吐溫 800.5g，
司本 850.5g,
殼聚糖2.0g,
卡波姆971P0.1g,
水83.9g。配方2:
角鯊烷10 g，
普魯尼克1210.5g,
司本 800.5g,
卡波姆971P3.0g,
水83.0g。
配方3:
角鯊烷10 g，角鯊烯IOg
普魯尼克121 5g，吐溫800.3g,
司本805g,司本850.3g,
羥甲基纖維素1.0g，二甲基雙十八烷基溴化銨 l.0g，
水67.4g。配方4:·
角鯊烷15g，白油15g，
普魯尼克121 0.2g，吐溫808.8g,
司本 800.2g,司本 858.8g,
羥甲基纖維素 2.0g，卡波姆971P 3.0g,
水47.0g。配方5:
角鯊烷5 g，
普魯尼克121 0.1g,
司本 800.1g,
卡波姆971P1.0g，二甲基雙十八烷基溴化銨 9.0g，
水84.8g。配方6:
角鯊烷30 g，
普魯尼克121 IOg,
司本80IOg,
卡波姆971P 3.0g,
水47.0g。分別用配方1-6采用如下方法制備相應的即用型佐劑:按配方量分別稱取各組分，冰水浴過夜后混合均勻，用機械乳化法乳化，0.22um濾膜過濾除菌后，分別得到即用型佐劑1-6，4度保存備用。機械乳化法為膠體磨擠壓法、微射流法或高壓均質法。乳化結束后，在3000rmp離心IOmin,無水相析出為合格。實施例2 水包油型豬口蹄疫疫苗的制備及其性質 (I)即用型佐劑的制備
按實施例1方法制得即用型佐劑1-6。ISA206佐劑購自SEPPIC公司。( 2 )準備豬口蹄疫滅活病毒液
豬口蹄疫滅活病毒液(0型，II)由金宇保靈生物藥品有限公司提供，滅活前每0.2毫升病毒液中病毒含量為107_°LD5(l/0.2暈升。該豬口蹄疫滅活病毒液是按照《獸用生物質量質量標準匯編》(2006-2008)相關要求制備。豬口蹄疫滅活病毒液(0型，II)簡稱為豬口蹄疫滅活病毒液。(3)水包油型豬口蹄疫疫苗的制備
在無菌條件下，將即用型佐劑1-6分別與豬口蹄疫滅活病毒液混合，手搖均勻得水包油型豬口蹄疫疫苗1-6。其中水包油型豬口蹄疫疫苗I中即用型佐劑I與豬口蹄疫滅活病毒液的質量比為1:0.5。水包油型豬口蹄疫疫苗2中即用型佐劑2與豬口蹄疫滅活病毒液的質量比為1:2。水包油型豬口蹄疫疫苗3-6中即用型佐劑與豬口蹄疫滅活病毒液的質量比為1:1。用ISA206佐劑替代本發明即用型佐劑制備對照疫苗A，ISA206佐劑與豬口蹄疫滅活病毒液按質量比1:1在乳化缸內混合，3000rpm乳化30分鐘制備對照疫苗A。(4)疫苗物理性狀的比較
檢測水包油型豬口蹄疫疫苗1-6及對照疫苗A的物理性狀，比較各疫苗的穩定性。具體結果見表I。表I水包油型豬口蹄疫疫苗1-6與對照疫苗A的物理性狀比較
權利要求
1.一種獸用疫苗的即用型佐劑，按照質量百分含量由下列物質組成:油 5%-30%， 親水性表面活性劑0.1%-10%， 親油性表面活性劑0.1%-10%， 高分子膠束物質0.1%-10%，水 40%-90%。
2.根據權利要求1所述獸用疫苗的即用型佐劑，其特征在于:所述油為白油、角鯊烷和角鯊烯中的一種或者兩種的混合物。
3.根據權利要求2所述獸用疫苗的即用型佐劑，其特征在于:所述親水性表面活性劑為吐溫80、普魯尼克121或其混合物。
4.根據權利要求3所述獸用疫苗的即用型佐劑，其特征在于:所述親油性表面活性劑為司本80、司本85或其混合物。
5.根據權利要求4所述獸用疫苗的即用型佐劑，其特征在于:所述高分子膠束物質為殼聚糖、卡波姆971P、羥甲基纖維素和二甲基雙十八烷基溴化銨中的一種或者兩種的混合物。
6.一種權利要求1-5之一所述獸用疫苗的即用型佐劑的制備方法，其特征在于該方法具體如下:分別稱取各組分，混合后乳化，除菌即得所述獸用疫苗的即用型佐劑。
7.根據權利要求6所述獸用疫苗的即用型佐劑的制備方法，其特征在于所述乳化方法為膠體磨擠壓法、微射流 法或高壓均質法。
8.一種含有權利要求1-5之一所述獸用疫苗的即用型佐劑的水包油型疫苗。
9.根據權利要求8所述水包油型疫苗，其特征在于:所述水包油型疫苗由質量比為1:0.5-2的即用型佐劑和滅活抗原水溶液組成。
10.根據權利要求8所述應用，其特征在于所述滅活抗原水溶液為豬口蹄疫滅活病毒液或豬圓環病毒滅活病毒液。
全文摘要
本發明提供一種獸用疫苗的即用型佐劑、制備及其應用，涉及獸用疫苗佐劑領域。所述即用型佐劑，由下列物質組成油5%-30%，親水性表面活性劑0.1%-10%，親油性表面活性劑0.1%-10%，高分子膠束物質0.1%-10%，水40%-90%。本發明還提供即用型佐劑的制備方法，分別稱取各組分，混合后乳化，除菌即得所述獸用疫苗的即用型佐劑。本發明還提供含有即用型佐劑的水包油型疫苗。本發即用型佐劑，是水包油型佐劑，成分簡單、劑型穩定，使用方便，易于注射。本發明即用型佐劑的制備方法，工藝簡單，成本低，得到的劑型穩定；水包油型疫苗，穩定期長，易儲存，免疫效果好，保護期延長，易于注射，副反應很小。
文檔編號A61K9/107GK103071153SQ20131002101
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月21日 優先權日2013年1月21日
發明者張金秋, 盧宇, 鄧碧華, 呂芳, 侯繼波 申請人:江蘇省農業科學院