專利名稱：：一種用于治療骨性關節炎的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及治療骨性關節鹽的藥物組合物，具體涉及由鹽酸氨基葡萄糖、硫酸軟骨素、透明質酸鈉組成的用于治療骨性關節炎的組合物。
背景技術：
：骨關節炎(osteoarthritis，OA)是一種危害中老年人健康的慢性退行性骨關節病。臨床上以膝骨關節炎最常見。隨著世界老齡化人口的增加，OA發病率呈逐年上升的趨勢，嚴重影響中老年人的生活質量，其臨床表現為關節疼痛、腫脹和功能障礙，主要病理改變為關節軟骨退變、軟骨下骨病變以及滑膜的改變，最終導致軟骨基質降解、軟骨細胞死亡和關節結構完整性破壞。OA的病因是多方面的，包括增齡、磨損、肥胖以及生化、遺傳等因素，這些因素抑制軟骨基質蛋白多糖合成，促進蛋白多糖、透明質酸和膠原的降解。OA發病機制十分復雜，關節內HA減少和理化性質的改變可能是其中的一個重要環節，受累關節軟骨表面粗糙和退化，無定形結構層消失，使其屏障作用不存在。在OA退化軟骨中，軟骨基質中的蛋白多糖降解增加，使軟骨結構破壞，粘彈性降低，進而使軟骨股下邊緣骨質增生，滑膜炎性腫脹，同時，由于滑液中HA濃度和分子量降低，使潤滑和抵抗機械力作用的功能產生障礙。透明質酸(hyaluronicadd，HA)，又名玻璃酸，是一種獨特的線性大分子酸性粘多糖，由(l-P-4)D-葡萄糖醛酸(l-p-3)N-乙酰基-D-氨基葡萄糖的雙糖單位重復連接組成。對不同組織來源的HA進行的結構測定表明，其結構均一致，沒有種屬差異，只存在相對分子量的不同，范圍為105107，雙糖單位數為3001100對。HA廣泛存在于動物和人體結締組織細胞間質中，在眼玻璃體、皮膚、臍帶、軟骨和關節滑液中含量較高。透明質酸己廣泛用于骨科、眼科和皮膚燒傷科。HA在關節中以下列幾種形式存在并發揮作用①與蛋白質結合成HA的蛋白復合物游離于關節液中，形成高度的粘彈性，對關節軟骨起著減震和潤滑等機械保護作用；②充填于滑膜細胞基質和滲入軟骨表層的HA對滑膜細胞和膠原纖維起著支持和穩定作用；③軟骨基質內的蛋白多糖以聚合體的形式存在，被包繞在膠原纖維間基質內，維持膠質網狀結構充盈且具有高度彈性，而HA賦予軟骨特殊的多孔性和彈性，因此HA與蛋白多糖的相互作用在維持軟骨組織的完整性上起重要作用。氨基葡萄糖是軟骨基質的重要組成物質。氨基葡萄糖是一種氨基單糖，來源于甲殼動物中的加殼素。隨著年齡的增長，人體中的軟骨合成減少降解增加，軟骨會逐漸流失，造成人體骨密度的下降，從而引起多種老年性疾病，骨質疏松、骨關節炎等?？茖W研究表明，氨基葡萄糖廣泛存在于人和動物的軟骨、肌腱和韌帶等組織中，是關節軟骨生物合成和刺激合成聚氨基葡萄糖及透明質酸骨架的基本物質，可促進人體軟骨的合成，增加關節韌帶及彈性，改善關節活動。適量補充氨基葡萄糖，可減少軟骨的流失?，F代醫學證實，骨關節炎等退行性關節疾病會影響膝、手、脊柱和股骨的功能，而氨基葡萄糖具有軟骨保護和修復作用，且補充這類物質巳在國外應用多年，幾乎沒有不良反應。硫酸軟骨素來源于動物組織，是一類硫酸糖胺聚糖，由糖醛酸和葡萄糖胺以糖苷鍵鏈接起來的重復二糖單位組成的多糖鏈的混合物，由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖組成的二糖單位多糖，其中由于硫酸基團位置不同，構成硫酸軟骨素A、C、D、E、F、和N等多種異構體，由艾杜糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖硫酸酯組成的二糖單位的多糖稱為硫酸軟骨素B，又稱為硫酸皮膚素。硫酸軟骨素分子量在2,000-50,000道爾頓之間，目前上市的產品為硫酸軟骨素鈉或硫酸軟骨素鈣的注射液、口服制劑和滴眼液。硫酸軟骨素主要通過以下兩個機制發揮對骨性關節炎的治療效果(1)能夠競爭性抑制降解酶的活性，減少軟骨基質和關節滑液成分的破壞；(2)減少纖維蛋白血栓的形成，改善滑膜和軟骨下骨的血液循環。生理情況下，血小板分泌硫酸軟骨素和肝素來平衡血栓形成的傾向，隨著年齡的增長，硫酸軟骨素的產量減少，被具較少活性的硫酸角質素取代，從而容易形成血栓堵塞血管，加重股關節炎病情。透明質酸、氨基葡萄糖、硫酸軟骨素作為軟骨基質的基本組成成分，目前都有用來治療股關節病，尤其是透明質酸應用最為廣泛，但透明質酸在治療骨性關節炎時，只能起到臨時減輕關節壓力，此時若加大運動，反倒會加重病情。因此也有發明者想到將透明質酸其它藥物合用用來治療骨性關節炎。中國專利CN1714799A公開了將鹽酸氨基葡萄糖和透明質酸鈉組合用來治療骨性關節炎，國際申請PCT/EP2002/012703公開了將透明質酸鈉和硫酸軟骨素組合來治療骨關節炎中的軟骨損傷癥狀，中國專利申請CN1817348A公開了將鹽酸氨基葡萄糖和硫酸軟骨素組合用來治療關節損傷性疾病，發現將任何兩種組合在一起使用，均較單一用透明質酸鈉、硫酸軟骨素或鹽酸氨基葡萄糖來治療骨性關節炎強。但還沒有將三者結合在一起來治療骨性關節炎的研究。
發明內容本發明人在骨關節病致病機理的理論基礎的指導下，將鹽酸氨基葡萄糖、透明質酸鈉、硫酸軟骨素組合在一起用于治療骨性關節炎，氨基葡萄糖為合成體內透明質酸、硫酸軟骨素的基本單元；透明質酸可以緩解骨關節炎患者的關節壓力；硫酸軟骨素能抑制蛋白水解酶和溶酶體酶，三者組合在一起，即可在外源上補充軟骨基質的基本成分，而由于鹽酸氨基葡萄糖的加入，又可剌激機體自身合成內源性軟骨基質，如透明質酸和硫酸軟骨素，且還能抑制一些水解酶破壞軟骨基質成分，三者合用，起到了令人鼓舞的效果，組合在一起后，可更好的起到預防和治療骨性關節炎的效果。本發明在實驗人員的努力下，通過大量的試驗篩選，從中找出三者的合理組方配比。本發明中，包括下述原料藥氨基葡萄糖或其可藥用鹽、硫酸軟骨素或其可藥用鹽、透明質酸或其可藥用鹽，三者的重量組分為氨基葡萄糖或其可藥用鹽5~10重量份，硫酸軟骨素或其可藥用鹽510重量份，透明質酸或其可藥用鹽14重量份。優選氨基葡萄糖或其可藥用鹽5重量份，硫酸軟骨素3重量份，透明質酸或其可藥用鹽2重量份。本發明中的氨基葡萄糖可以是N-乙酰氨基葡萄糖，其藥用鹽主要為鹽酸氨基葡萄糖和硫酸氨基葡萄糖。本發明中硫酸軟骨素的可藥用鹽主要是其金屬鹽，優選硫酸軟骨素鈉和硫酸軟骨素鈣。本發明中透明質酸的可藥用鹽為其金屬鹽，優選透明質酸鈉。本發明組方中，三種原料藥優選鹽酸氨基葡萄糖、硫酸軟骨素鈉和透明質酸鈉，三者重量配比優選為鹽酸氨基葡萄糖10份、硫酸軟骨素鈉6份、透明質酸鈉2.5份。本發明所用的劑型主要是口服制劑，優選片劑、膠囊劑。片劑可以是素片、糖衣片、腸衣片、泡騰片、咀嚼片、舌下含片。膠囊可以是硬膠囊劑、軟膠囊劑。本發明除主藥外，還有制藥可接受的輔料，這些輔料包括潤滑劑、稀釋劑、助流劑、填充劑、乳化劑、防腐劑、増溶劑等。本發明膠囊劑工藝鹽酸氨基葡萄糖50g硫酸軟骨素鈉30g透明質酸鈉12.5g淀粉312.5g將上述主藥和輔料淀粉混合均勻，裝入1000個硬膠囊中，每個膠囊裝0.4g，既得本發明硬膠囊劑。將上述鹽酸氨基葡萄糖換成硫酸氨基葡萄糖或N-乙酰氨基葡萄糖，硫酸軟骨素鈉換成硫酸軟骨素、透明質酸鈉換成透明質酸，即為本發明其它原料藥膠囊劑處方工藝。此膠囊劑即可作為藥品使用，也可作為保健食品使用。本發明藥物組合物可以用于制備具有治療和預防骨性關節炎疾病的藥物，也可以用于制備具有預防骨性關節炎的保健食品。具體實施例以下實施例均從表1的配方中比較，固定鹽酸氨基葡萄糖與透明質酸鈉比例為4:1。表l本發明原料藥重量配方<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例l本發明對硝普納所致軟骨細胞調亡的影響試劑及藥品II型膠原酶、胰蛋白酶、二甲基亞砜、四氮唑藍(MTT)、甲苯胺染色劑、DMEM培養基、胎牛血清、硝普納(SNP)動物23日齡清潔級新西蘭兔用于細胞培養體外兔軟骨細胞的制備、培養和鑒定取初生新西蘭兔，處死后酒精消毒，無菌條件下在超凈工作臺切取幼兔四肢，分離肩、肘、膝關節周圍肌肉、關節囊等組織，切取未骨化的軟骨組織，放入培養皿，加少許10。/。FBSDMEM培養液，用眼科剪剪碎成lmmxlmm，室溫下離心(1500r/min)5min。除上清后將軟骨組織移入燒瓶，加入消化液(0.1%11型膠原酶，0.25%胰酶)，37"C連續消化3h，消化后將細胞懸液用200目不銹鋼篩網過濾，離心(1600/min)5min。棄上清液，分別接種于培養瓶和6孔培養板中，置于37t:、5%<302培養箱培養，用于實驗的為第23代的傳代細胞。用甲苯胺藍染色鑒定軟骨細胞的存在。硝普納誘導兔軟骨細胞凋亡實驗將10mg硝普納加入lml培養液中，配成C存液，使用前再加培養液配制成所需的終濃度。藥液配制將上述第2~7組組合物10mg各自加入到lml培養液中，分別用培養液稀釋成100ug/ml，在培養體系中分別加入2mmol/LSNP，24小時后將培養的軟骨細胞接種于96孔培養板，細胞數為1.0xl0V孔。設7組，每組五個復孔，第一組加"培養液+50ng/ml的SNP"，第二至7組加"各自組合物50pg/ml+50ng/ml的SNP"，孵育48小時后，收集細胞，流式細胞儀檢測。結果見表2表2本發明組合物對硝普納誘導的軟骨細胞凋亡的影響__細胞凋亡率(三士s)(%)培養液+SNP72.7±5.68第二組合物藥液+SNP39.6±2.98*第三組合物藥液+SNP35.7±3.14*第四組合物藥液+SNP37.5±3.01*第五組合物藥液十SNP32.6±2.54*第六組合物藥液+SNP28.6±2.15*第七組合物藥液+SNP_33.7±2.87*_與陰性對照組(培養液+SNP組)相比*P<0.01從上表結果可知，六組實驗用藥組均對硝普納所誘導的兔軟骨細胞凋亡有一定的抑制作用，與陰性對照組相比，均具有顯著意義(PO.Ol)，但鹽酸氨基葡萄糖、硫酸軟骨素鈉、透明質酸鈉三種原料藥合用時要比其它任何以兩種形式組合的原料藥效果強，且以鹽酸氨基葡萄糖-硫酸軟骨素鈉-透明質酸鈉10:6:2.5時，對硝普納所誘導的兔軟骨細胞凋亡抑制作用最為明顯。實施例2本發明組合物對大鼠白陶土誘導關節炎實驗動物體重130150g的雌性大鼠70只，隨機分成7組，分別為對照組，第二至第七原料藥配比實驗組。對照組灌胃生理鹽水，實驗組給予劑量為0.2g/kgBW實驗方法灌胃給予受試物，1小時后，常規消毒右后肢踝趾關節并注射入10%滅菌白陶土生理鹽水懸浮液0.21111，注射后l、3、5天，以容積測量法測定左右后肢足跖的體積(ml)。每天給予受試物，5天后，按lml/kgBW的量注射1%伊文思蘭注入尾靜脈，于注射后2h，乙醚麻醉后處死動物，剪下右足跖，稱重，然后浸入3ml鹽酸中，與37'C消化18h。消化后，向消化液中加入12%氯節烷銨4ml，混合并攪動30min，再向每份樣品中加入7ml氯仿，并用力振蕩，取氯仿層液體在620nm波長下比色，測定光密度。足跖伊文思蘭以pg/mg足跖表示；右跖腫脹度(％)呵右后肢足跖體積(ml)-左后肢足跖體積(ml)]/右后肢足跖體積(ml)xlOO%。結果見表3表3本發明組合物對大鼠白陶土誘導關節炎大鼠各時相足跖腫脹度H劑量(g/kgBW)5天與對照組相比，*P<0.05，**P<0.01由表3可知，注射白陶土后第5天，與對照組同時相足跖腫脹度比較，差別有統計學意義(P0.05),其中鹽酸氨基葡萄糖-硫酸軟骨素鈉-透明質酸鈉為10:6:2.5時，統計學意義更明顯(PO.Ol)，在注射后第三天時，鹽酸氨基葡萄糖-硫酸軟骨素鈉-透明質酸鈉三種原料藥組合，與對照組同時相足跖腫脹度比較，有統計學意義，而兩種原料藥組合在一起時，腫脹度要較三中原料藥高，統計學意義不明顯(P>0.05)，三種原料藥組合在一起與任何兩種原料藥的組合相比，各時相的大鼠足跖腫脹度均要相對小，說明三種原料藥聯合在一起使用治療關節炎，能起對照組060.21±6.1465.47±6.2340.32±3.710.258.36±3.5454.34±5.1926.38±3.67*0.258.98±4.4353.75±4.8727.21±3.14*0.258.42±3.7454.18±4.2125.14±3.45*0.257.17±4.2649.76±5.73*20.32±3.64*0.256.76±5.5747.07±5.17*17.89±3.27**0.257.06±3.4248.26±3.89*'19.54±3.83*合厶n合合厶d厶n自經經§經經3自自紹經s二三四五六七第第第第第第到更好的治療作用。權利要求1、一種用于治療骨性關節炎的藥物組合物，其特征在于由下列重量比的原料藥組成氨基葡萄糖或其可藥用鹽5～10重量份，硫酸軟骨素或其可藥用鹽5～10重量份，透明質酸或其可藥用鹽1～4重量份。2、如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于氨基葡萄糖或其可藥用鹽10重量份，硫酸軟骨素6重量份，透明質酸或其可藥用鹽2.5重量份。3、如權利要求1所述的藥物組合物，其中所述的氨基葡萄糖可藥用鹽主要是指鹽酸氨基葡萄糖或硫酸氨基葡萄糖。4、如權利要求1所述的藥物組合物，其中所述的硫酸軟骨素可藥用鹽主要是指硫酸軟骨素鈉和硫酸軟骨素鈣。5、如權利要求1所述的藥物組合物，其中所述的透明質酸可藥用鹽是指透明質酸的鈉鹽。6、由含有治療有效量的權利要求1所述的藥物組合物制成的口服制劑。7、如權利要求1或2所述的藥物組合物在制備具有治療骨性關節炎藥物中的應用。8、如權利要求1或2所述的藥物組合物在制備具有預防和調節骨性關節病保健食品中的應用。全文摘要本發明涉及一種用于治療骨性關節炎的藥物組合物，本發明組合物由鹽酸氨基葡萄糖5-10重量份、硫酸軟骨素鈉5-10重量份、透明質酸鈉1-4重量份組成，加于制藥上可接受的藥用輔料，采用常規的制劑技術可制成所需的口服劑型。本發明藥物組合物具有預防和治療骨關節炎的作用，可用于制備具有預防和治療骨關節炎作用的藥物，也可用于具有預防骨關節炎作用的保健食品。文檔編號A61K31/737GK101181294SQ20071011774公開日2008年5月21日申請日期2007年6月22日優先權日2007年6月22日發明者張樹祥,熊國裕申請人:北京星昊醫藥股份有限公司