專利名稱：用固定化溶劑或固定化溶劑－去污劑滅活病毒的方法
技術領域：
本發明涉及一種用固定化有機溶劑(Solvant，以下簡稱S)和/或去污劑(Detergent，以下簡稱D)在水溶液中滅活病毒的方法。
然而，使用該方法對水溶液進行病毒滅活雖可有效滅活模式病毒，但某些目標產品的生物活性的損失也較為嚴重，需要使用大劑量的穩定劑，使得在滅病毒后往往必須設置一個超濾工序來控制穩定劑的量。因此，該方法不能設置在生產線終端(除白蛋白外)，不能解決二次污染的問題。在產品活性損失及專門設置一道去穩定劑工藝的情況下，工藝成本增加較大。2、SD滅病毒法SD(Solvant-Detergent)處理是目前世界上應用最廣泛的病毒滅活方法之一，該方法是將液態SD劑或SD劑的水溶液加入到水溶液中進行病毒滅活反應。該方法首先在凝血因子(FVIII、FIX等)的病毒滅活方面顯示了強大的效率。自二十世紀九十年代初開始，SD法已用于工業規模的滅病毒血漿的生產，而且該方法還可廣泛用于其它生物制品的病毒滅活。
然而，SD法的滅病毒譜受到限制，其只對脂包膜病毒的滅活有效，對非脂包膜病毒則無能為力。其次，該方法的應用須由一個SD劑去除工藝相隨，不能設置在生產線終端，因而不能解決二次污染問題。由于要增設一個或二個專門用于去除SD劑的工藝措施，也增加了工藝成本。3、低pH法利用病毒分子與待制備的制品分子在酸性介質中的穩定性差異，使可能存在的病毒大分子(酸穩定性較差的病毒大分子)失活。但該方法主要對脂包膜病毒有效，且由于是在酸性介質中進行，該方法對其他生物制劑的副作用較大，因而主要用于免疫球蛋白的病毒滅活。對pH敏感的產品，該方法不適用。4、膜過濾法利用病毒分子與待制備的制品分子在流體力學尺寸上的差異，使可能存在的病毒大分子從制品中分離出來。但該方法主要作為一種補充性的病毒滅活處理方法，用于加強分子尺寸較小的蛋白制劑的病毒安全性，而且生產成本非常高。5、光動力學法以單原子氧作為活性基礎的光動力學法，是目前滅病毒血漿生產中研究得最多的方法之一。由于該方法可以作為生產終端，有可能解決二次污染。在光動力學滅活病毒處理中，本發明的發明人之一在1998年申請的一項中國專利(專利公開號CN1224657A)中公開了一種病毒滅活的方法，其中用濃度為2-200mM的單一水溶性萘類過氧化物或它們的混合物在15～80℃下與待處理的生物制劑接觸5～200分鐘。該方法需要特別光源系統，使其廣泛應用受到限制。
在目前條件下，開發一種操作簡單、連續、成本低廉、安全可靠的病毒滅活方法，仍是科學技術追求的目標。
根據本發明所提供的病毒滅活方法是SD病毒滅活方法的改進，其特征在于SD劑固定在載體上。
所述載體的活性物質為活性炭或二氧化硅，其可為顆粒狀、纖維狀、氈狀或濾板狀。而溶劑或溶劑—去污劑是通過物理或化學作用固定于所述載體上的。
本發明的方法用于通過注射或口服而最終與人體接觸的水溶液。該水溶液包括但不限于血漿及血漿衍生物、生物制品、天然植物制品。
在我們申請的一項中國專利(題目為“作為新型解吸劑的表面活性劑及其活性炭解吸方法”，專利申請號為00120625.7)中，我們發現活性炭對去污劑有吸附作用。在我們已經申請的另一項中國專利(題目為“一種除去作為病毒滅活劑的有機溶劑和/或去污劑的方法”，專利申請號為01104343.1)中，我們發明了利用含活性炭的活性物質進行SD劑去除的方法。盡管因此使得除SD劑的工藝成本大為下降，但對滅病毒反應本身并未觸及。隨著我們研究的深入，我們發現，使用固定化SD進行滅病毒處理，可有效地降低滅病毒反應時間，提高生產過程的連續性，減少除SD劑的工藝投入。
雖然不想囿于任何理論的限制，但我們認為當可能含有脂胞膜病毒的流體介質由含有SD的固相載體的反應器中通過時，病毒分子與SD分子發生反應，使病毒分子結構受損，并由此使病毒分子失活。如果從反應介質流出的流體介質中的SD分子濃度超過標準，還可在反應器中加設一個吸附SD劑的固相載體，以除去足夠量的SD劑，滿足SD劑的殘留標準。
在本發明的方法中，用于滅活病毒的SD劑可物理或者化學性地固定在合適的載體上，優選通過物理方法進行固定。所述載體的活性物質包括但不限于活性炭和二氧化硅。其中活性炭例如是活性炭粉、活性炭濾板、活性炭纖維、或活性炭纖維氈的形式，而二氧化硅例如可以是Aerosil或含Aerosil的濾板的形式。
對于本發明中的有機溶劑S，本領域技術人員已知的任何溶劑都是合適的，其包括但不限于在水溶液病毒滅活中常用的TNbP(三正丁基磷酸酯)。
對于本發明中的去污劑D，本領域技術人員已知的任何去污劑都是合適的，其包括但不限于在水溶液病毒滅活中常用的吐溫類去污劑(例如Tween-80)和Triton類去污劑(例如Triton×100)。
可用本發明的方法滅活的病毒一般是指脂包膜病毒，其包括但不限于愛滋病病毒、乙肝病毒、丙肝病毒以及本領域技術人員已知的其它脂包膜肝炎病毒等。
可用本發明的方法進行處理的水溶液包括但不限于水、血漿及血漿衍生物、生物制品、藥物、保鍵用品等。
本發明的方法的實施條件沒有具體的限制，但一般情況下pH為2.0-12.0，溫度為-5至60℃，而流體動力學條件(流速、壓力)則可根據病毒滅活驗證實驗來確定。實施例1固定化SD的制備用以下預先制好的材料進行本實施例的實施1)活性炭濾板(例如AKS4或AKS5，德國Seitz Schenk公司)，2)活性炭氈(例如ZC-1200A，中國紫川炭纖維有限公司)和3)含Aerosil的除脂濾板(例如Delipid，美國CUNO公司)。這些材料首先被制成為直徑6cm、厚度4.2mm的濾器。將TNbP/Triton×100調配成1％(V/V)的水溶液。然后使此流動相在室溫以下以5ml/min的流速分別通過上述固定相，并在相同條件下反復循環40分鐘。S或SD在不同材料上的固定化量可通過調節加入該水溶液的用作脫吸劑的表面活性劑的劑量來控制(參考我們的另一份題目為“作為新型解吸劑的表面活性劑及其活性炭解吸方法”的發明，其專利申請號為00120625.7)。具體實驗條件及結果見以下表1所示。
表1SD劑在固定載體相上的吸附
實施例2固定化SD劑的制備在制備活性炭板、活性纖維氈及Delipid濾板的過程中，在成型烘干前即將SD劑加入到原材料混合物中進行混合。在此情況下，SD劑將定量地吸附在活性炭粉或Aerosil顆粒等物質上，再經濾板、纖維氈的正常制備工藝，即獲得固定化SD劑。其關鍵的實驗參數與實驗結果見以下表2所示表2SD固定相的制備條件及結果
注所有的計量均是以每立方米濾板所含或釋出的量為標準實施例3人丙種球蛋白的病毒滅活150ml含有模式病毒(HIV初始滴度為104.2，VSV初始滴度104.8，sindbis病毒初始滴度105.1)的人丙種球蛋白(蛋白含量8％，pH4.5)溶液，在流速為100-300Lm-2、壓力≤1bar的條件下分別通過A)含1.81％(V/V)TNbP的活性炭濾板(厚度4.2mm，直徑6cm)；B)含1.58％(V/V)TNbP和1.77％(V/V)Triton×100(V/V)的除脂濾板(厚度4.2mm，直徑6cm)；C)含1.79％(V/V)TNBP和1.66％(V/V)Triton×100的活性炭/硅藻土混合物(混合物重量比為50/50，反應器厚度為4.2mm，直徑6cm)。每一個固定化SD裝置后接一個活性炭濾器(厚度4.2mm，直徑6cm，AKS4，德Seitz Schenk公司)。所得的濾液收集后作進一步的分析，其結果見表3和4所示。
表3模式病毒的滅活
表4人丙種球蛋白的分析
*稀釋效應此外，三種反應器濾液中TNBP的含量均小于5ppm。實施例4全血漿的病毒滅活150ml含有以下表5所列的模式病毒的人全血漿(蛋白含5.7％，pH7.85)，在流速為100-300LM-2，壓力≤1bar的條件下先后通過經生理鹽水平衡的含1.79％(V/V)TNbP和1.66％(V/V)Triton×100的活性炭濾板(同實施例3)及另一不含SD劑的活性炭濾板(厚度4.2mm，直徑6cm，AKS4，德國Seitz Schenk公司)，所得濾液在收集后作進一步的分析，其結果見表5和6所示。
表5模式病毒的滅活
表6經過濾血漿的分析結果
實施例5基因工程蛋白質反應的病毒滅活含有以下表7所列的模式病毒的重組Alpha干擾素(干擾素濃度115萬IU/ml，pH7.0)在流速為1ml/min條件下重復實施例4的步驟，但僅使用固定有SD劑的活性炭濾板，上清液收集后作進一步的分析，其結果見以下表7所示。
表7重組干擾素中的病毒滅活
權利要求
1.用溶劑或溶劑—去污劑滅活病毒的方法，其特征在于所述溶劑和/或溶劑—去污劑固定在載體上。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述載體是由作為活性物質的活性炭或二氧化硅制成的。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述載體為顆粒狀、纖維狀、氈狀或濾板狀。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述溶劑或溶劑—去污劑是通過物理或化學作用固定于所述載體上的。
5.如權利要求1所述的方法，其是用于通過注射或口服而最終與人體接觸的水溶液。
6.如權利要求5所述的方法，其中所述水溶液包括血漿及血漿衍生物、生物制品、天然植物制品。
全文摘要
本發明涉及用溶劑或溶劑－去污劑滅活病毒的方法，其特征在于所述溶劑和/或溶劑－去污劑固定在載體上。所述載體是由作為活性物質的活性炭或二氧化硅制成的。本發明的方法可簡單并連續地操作，而且成本低廉、安全可靠。
文檔編號A61L2/16GK1402974SQ01123658
公開日2003年3月19日 申請日期2001年8月30日 優先權日2001年8月30日
發明者鄒方霖, 王健霞 申請人:成都夸常科技有限公司