專利名稱：一種痢必靈片的制備方法及應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及中藥制劑技術領域，具體涉及一種痢必靈片的制備方法及應用。
背景技術：
痢必靈片記載于衛生部標準WS3-B-0639-91，由苦參500g、白芍250g、木香150g作
為原料藥制成，能清熱利濕。用于濕熱痢疾，瀉熱，腹痛等癥。現有技術中，尚未有痢必靈片在提取制備方面采用超臨界和微波技術的報道，而 采用打粉和水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質多，導致患者用量過大，不方便服用，嚴重影響了本品在臨床上應用。

發明內容
發明目的為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種痢必靈片的制備方法。本發明的另一個目的在于提供一種痢必靈片在制備抑制人黑色素瘤細胞MV3細胞增殖藥物中的應用。技術方案本發明的目的是通過如下的方案實現的一種痢必靈片的制備方法，由苦參500g、白芍250g、木香150g作為原料藥制成，所述的方法由下列步驟組成取木香，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，C02流量l_3ml/g生藥·π η，萃取時間150-180min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率400600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1600片，每片重O. 5g。上述一種痢必靈片的制備方法，所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。上述一種痢必靈片的制備方法，所述微波萃取功率500W，每次萃取6分鐘。上述一種痢必靈片的制備方法，所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C, CO2 流量 2ml/g 生藥· min,萃取時間 160min。上述痢必靈片在制備抑制人黑色素瘤細胞MV3細胞增殖藥物中的應用。現有技術中，痢必靈片每片O. 5g，每次8片，一日3次，采用本發明制備成的痢必靈片每片O. 5g，每次僅需4片，一日服用2次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。此結論可以通過下述試驗證明。試驗一、不同方法制備的痢必靈片中苦參堿含量的比較1、儀器及試藥本發明痢必靈片按實施例3方法制備，使用800g原料藥，經提取制成1600片，每片重O. 5g。原痢必靈片，按部頒標準方法制備，使用800g原料藥，經提取制成1600片，每片重O. 5g。Agilent 1200高效液相色譜儀；METTLERAE240電子分析天平；苦參喊對照品(中國藥品生物制品檢定所)。2、方法色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸(40 60 :0. 2)為流動相；檢測波長為280nm。理論板數按苦參堿峰計算，應不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的苦參堿對照品適量，加甲醇制成每Iml含18 μ g的溶液，即得。供試品溶液的制備取本發明痢必靈片和原痢必靈片，研細，混勻，取lg，精密稱定，精密加入70%乙醇20ml，密塞，超聲處理10分鐘，離心，取上清液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
3、結果結果表明，本發明痢必靈片中苦參堿的含量為1.47mg/片；而原痢必靈片中苦參堿的含量為O. 35mg/片，在服用量減少的情況下，苦參堿含量有很大提高。上述研究表明，采用本發明制備的痢必靈片，有效成分含量高于部頒標準法制備的痢必靈片。
具體實施例方式以下通過實施例形式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。實施例1取苦參500g、白芍250g、木香150g，將木香，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力15MPa，溫度30°C，C02流量lml/g生藥·π η，萃取時間150min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次4分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1600片，每片重O. 5g。經檢測，成品中苦參堿的含量為1. 5Img/片。實施例2取苦參500g、白芍250g、木香150g，將木香，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力30MPa，溫度50°C，CO2流量3ml/g生藥·π η，萃取時間180min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒,干燥,壓片，制成1600片，每片重O. 5g。經檢測，成品中苦參堿的含量為1. 54mg/片。實施例3
取苦參500g、白芍250g、木香150g，將木香，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥·π η，萃取時間160min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒,干燥,壓片，制成1600片，每片重O. 5g。經檢測，成品中苦參堿的含量為1. 47mg/片。
實施例4 :痢必靈片抑制MV3細胞增殖的實驗研究資料I實驗材料1.1實驗用細胞株人黑色素瘤細胞MV3細胞，南京正寬醫藥科技有限公司實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規培養。1. 2實驗藥物研究藥物本發明痢必靈片按實施例3方法制備。藥液儲液稱取IOOmg痢必靈片，溶于5ml無水乙醇中，O. 2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲，同時O. 2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。1. 3實驗試劑DMEM (GIBC0 公司 Cat. No. 12100_061Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419)；NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat. No. 11810_033Lot.No. 1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號2010382);無水乙醇(南京化學試劑有限公司批號080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ;PBS (實驗室自配)；1. 4實驗器材萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號SPECTRAMAX 190) ；C02培養箱(FORMA型號3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號DHG9123A);冰箱(西門子公司型號KG18V21TI);液氮罐(CBS型號2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號SLGP033RB) ;10cm培養皿(NEST公司)、96孔培養板(NEST公司)；細胞計數板；離心管、移液管、Tips若干。2實驗方法I) MV3細胞用DMEM+10%FBS于37 °C、5%C02進行常規培養(IOcm培養皿)，當細胞生長至對數期時，收集細胞，棄去培養液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養基中和反應，吹打細胞后將其轉入離心管中，IOOOrpm離心5min，調整細胞懸液濃度3X 104個/ml。2)將細胞種入96孔培養板中，每孔加入細胞懸液180 μ I,培養板放入細胞培養箱中(37 °C，5%C02 )常規培養。3)根據細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入痢必靈片溶液，繼續培養24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 O. 5%MTT)，繼續培養 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設置本底(不加細胞，只加培養液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞砜)，每組設定6個復孔。7)結果以藥物對細胞的抑制率表示細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復3次?！?統計處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關分析和Student t檢驗，數據以mean+ S. D.表不。4實驗結果MTT法實驗后統計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對MV3細胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0. 01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。表I痢必靈片對MV3細胞增殖抑制影響研究(3Γ土 SD)
權利要求
1.一種痢必靈片的制備方法，由苦參500g、白芍250g、木香150g作為原料藥制成，其特征在于所述的方法由下列步驟組成取木香，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l-3ml/g生藥·π η，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4_8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1600片，每片重O. 5g。
2.根據權利要求1所述一種痢必靈片的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據權利要求1所述一種痢必靈片的制備方法，其特征在于所述微波萃取功率500W,每次萃取6分鐘。
4.根據權利要求1所述一種痢必靈片的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥· min,萃取時間160min。
5.根據權利要求1所述一種痢必靈片在制備抑制人黑色素瘤細胞MV3細胞增殖藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供一種痢必靈片的制備方法，由苦參500g、白芍250g、木香150g作為原料藥制成，采用超臨界萃取和微波萃取制備而成，使得苦參堿含量有很大提高，本發明還提供了痢必靈片在制備抑制人黑色素瘤細胞MV3細胞增殖藥物中的應用。
文檔編號A61K9/20GK102988501SQ20121037753
公開日2013年3月27日 申請日期2012年10月8日 優先權日2012年10月8日
發明者不公告發明人 申請人:卞毓平