專利名稱：高純度紫丹參甲素的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種從天然產物中分離制備高純度的紫丹參甲素(Przewaquinone A，Przewatanshinquinone A)的方法。
背景技術：
目前報道含有紫丹參甲素的天然產物主要是丹參或紫丹參。藥理研究表明，紫丹參甲素具有明顯的抗腫瘤活性對小鼠Lewis肺癌、黑色素瘤1316和肉瘤180有不同程度的抑制作用。
紫丹參甲素的制備工藝在文獻中報道的非常少，且很不成熟。高速逆流色譜(High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC)是近年發展起來的一種連續的無需固體支撐物的高效、快速的液液分配色譜分離技術，具有分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環境緩和、節約溶劑等特點，已廣泛應用于生物、醫藥、環保等領域化學物質的制備分離和純化。
發明目的本發明的目的是提出一種采用高速逆流色譜法可克量級制備紫丹參甲素的工藝，制備的紫丹參甲素純度可達98％以上。
技術內容本發明的基本工藝路線是(1)用有機溶劑浸提含有紫丹參甲素的天然產物，得到其提取物；(2)將所得提取物用柱色譜層析法進行提純，收集含紫丹參甲素的組分，蒸干溶劑；(3)將(2)所得樣品用高速逆流色譜法分離制得純度高于98％的紫丹參甲素產品。
柱色譜層析采用的固定相為硅膠(顆粒度為10-500目)；流動相可選不同比例的二元混合液A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴；B組分可選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯類，優選氯仿-乙酸乙酯體系。A與B的體積比為1-10∶1。
高速逆流色譜法對紫丹參甲素精制溶劑體系主要有三個。均以上相為固定相，下相為流動相。一號溶劑體系由三個組分構成，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C組分為水，優選氯仿-甲醇-水體系，A、B、C的體積比為2-6∶2-6∶1-4。二號溶劑體系由四個組分構成，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C組分可選自正己烷、石油醚、環己烷等烷烴或醚類，D組分為水，優選氯仿-甲醇-正己烷-水體系，A、B、C、D的體積比為2-5∶2-5∶1-4∶1-4。三號溶劑體系由五個組分構成，A、C組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，D組分可選自正己烷、石油醚、環己烷等烷烴或醚類，E組分為水，優選四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水體系，A、B、C、D、E的體積比為0.5-3∶2-5∶0.5-3∶1-4∶1-4。
實驗適合于在室溫為15℃-30℃下進行。
優點及效果用本法制備的紫丹參甲素純度可達到98％以上。本法適用于以各種含紫丹參甲素的天然產物、天然產物的提取物為原料制備高純度的紫丹參甲素。適用于采用各種型號的逆流色譜儀分離制備紫丹參甲素。本發明率先提出了一種可克量級制備紫丹參甲素的工藝，本工藝具有分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環境緩和、節約溶劑等特點。
實施例1采用氯仿-甲醇-正己烷-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用石油醚浸提丹參，減壓蒸干溶劑，用硅膠柱對3g丹參提取物進行分離，洗脫劑比例為9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產物。使用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa3057便攜式記錄儀。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分。溶劑體系的制備將體積比為2.8∶3∶1.2∶2的氯仿-甲醇-正己烷-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉蒸發至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經HPLC分析，其純度達到98％以上。
實施例2采用二氯甲烷-乙醇-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用硅膠柱對3g丹參提取物進行分離，洗脫劑比例為7∶1的二氯甲烷-乙酸丙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產物。使用分析型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，2ml進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為40ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為1800rpm，以1.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分。溶劑體系的制備將體積比為5∶3∶2的二氯甲烷-乙醇-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動相。用1∶1的上相和下相混合液2ml溶解初步純化樣品進行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉蒸發至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經HPLC分析，其純度達到98％以上。
實施例3采用氯仿-甲醇-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用硅膠柱對3g丹參提取物進行分離，洗脫劑比例為4∶1的四氯化碳-乙酸異丙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產物。使用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分。溶劑體系的制備將體積比為3∶2∶2的氯仿-甲醇-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉蒸發至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經HPLC分析，其純度達到98％以上。
實施例4采用四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用正己烷浸提丹參，減壓蒸干溶劑，用硅膠柱對3g丹參提取物進行分離，洗脫劑比例為8∶1的氯仿-乙酸正丁酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產物。使用分析型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分。溶劑體系的制備將體積比為2∶3∶1∶1∶2的四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉蒸發至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經HPLC分析，其純度達到98％以上。
實施例5采用氯仿-乙醇-二氯甲烷-石油醚-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用乙醇浸提紫丹參，減壓蒸干溶劑，用硅膠柱對3g紫丹參提取物進行分離，洗脫劑比例為9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產物。使用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分。溶劑體系的制備將體積比為0.5∶3∶2∶1∶2的氯仿-乙醇-二氯甲烷-石油迷-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉蒸發至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經HPLC分析，其純度達到98％以上。
實施例6采用四氯化碳-甲醇-正己烷-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用硅膠柱對3g紫丹參提取物進行分離，洗脫劑比例為9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產物。使用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分。溶劑體系的制備將體積比為3∶3∶1∶2的二氯甲烷-丙酮-環己烷-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉蒸發至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經HPLC分析，其純度達到98％以上。
權利要求
1.一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于他的基本工藝路線是(1)用有機溶劑浸提含有紫丹參甲素的天然產物，得到其提取物；(2)將所得提取物用柱色譜層析進行提純，收集含紫丹參甲素的組分，蒸干溶劑；(3)將(2)所得樣品用高速逆流色譜法分離制得純度高于98％的紫丹參甲素產品。
2.根據權利要求1所述的一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于柱色譜層析采用的固定相為硅膠(顆粒度為10-500目)，流動相可選不同比例的二元混合液，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴；B組分可選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯類，優選氯仿-乙酸乙酯體系。A與B的體積比為1-10∶1。
3.根據權利要求1所述的一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于高速逆流色譜法對紫丹參甲素精制溶劑體系由三個組分構成，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C組分為水，優選氯仿-甲醇-水體系，A、B、C的體積比為2-6∶2-6∶1-4。
4.根據權利要求1所述的一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于高速逆流色譜法對紫丹參甲素精制溶劑體系由四個組分構成，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C組分可選自正己烷、石油醚、環己烷等烷烴或醚類，D組分為水，優選氯仿-甲醇-正己烷-水體系，A、B、C、D的體積比為2-5∶2-5∶1-4∶1-4。
5.根據權利要求1所述的一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于高速逆流色譜法對紫丹參甲素精制溶劑體系由五個組分構成，A、C組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，D組分可選自正己烷、石油醚、環己烷等烷烴或醚類，E組分為水，優選四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水體系，A、B、C、D、E的體積比為0.5-3∶2-5∶0.5-3∶1-4∶1-4。
全文摘要
本發明涉及一種從天然產物中分離制備高純度的紫丹參甲素的方法,他的基本工藝路線是:(1)用有機溶劑浸提含有紫丹參甲素的天然產物,得到其提取物;(2)將所得提取物用柱色譜層析進行提純,收集含紫丹參甲素的組分,蒸干溶劑;(3)將(2)所得樣品用高速逆流色譜法分離制得純度高于98%的紫丹參甲素產品;本法適用于以各種含紫丹參甲素的天然產物、天然產物的提取物為原料制備高純度的紫丹參甲素,適用于采用各種型號的逆流色譜儀分離制備紫丹參甲素,本發明率先提出了一種可克量級制備紫丹參甲素的工藝,本工藝具有分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環境緩和、節約溶劑等特點。
文檔編號A61P35/00GK1380295SQ02104328
公開日2002年11月20日 申請日期2002年2月27日 優先權日2002年2月27日
發明者韓笑, 張天佑 申請人:北京天純維通生物技術有限公司