專利名稱：作為激酶抑制劑的1，8-萘啶物質(zhì)的制作方法
作為激酶抑制劑的1，8-萘啶物質(zhì)本發(fā)明涉及化合物和化合物的用途，其中通過消耗ATP的蛋白質(zhì)如激酶進行的信號轉(zhuǎn)導的抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)控起作用，特別是涉及TGF-β受體激酶的抑制劑。本發(fā)明的目的還在于包含這些化合物的藥物組合物和這些化合物在治療激酶誘導的疾病中的用途。結(jié)合ATP并利用其能量來改變構(gòu)象、使底物磷酸化和啟動信號級聯(lián)放大的蛋白質(zhì)已知來自許多類型，如激酶、磷酸酶、侶伴蛋白或異構(gòu)酶。使用特定的工具和技術(shù)可以富集ATP-結(jié)合蛋白。來自分為酪氨酸激酶和絲氨酸蘇氨酸激酶亞家族的蛋白激酶大家族的部分清單包括 cAbl、Akt> ALK> ALKl 及其家族成員如 ALKl 和 ALK5、Axl> Aurora A 和 B、Btk、Dyrk2>EGFR、Erk、肝配蛋白受體如EphA2、FAK、FGF受體如FGFR3、胰島素受體IR和胰島素樣生長因子受體 IGFlR、IKK2、Jak2、JNK3、cKit、LimK、VEGF 受體 1、2 和 3、Mekl、Met、P70s6K、PDGFR、PDKl、PI3K、Plkl、PKDl、bRaf、RSKl、Src 及其家族成員、TAKl、TrkA、B、C、Zap70。不同的激酶可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的并且在查找具有可選名稱、分類、基因注解、序列和基因結(jié)構(gòu)的基因和蛋白質(zhì)報道的數(shù)據(jù)庫如Kinweb以及pdb3D結(jié)構(gòu)信息的鏈接中可獲得的數(shù)種同義詞進行描述。類似地，蛋白質(zhì)組學服務器將提供有關(guān)基因和蛋白質(zhì)、包括激酶的大量信息和分析和預測工具。作為癌癥標志物的機理部分，Ser/Thr激酶和受體酪氨酸激酶(RTK)是細胞信號傳導中必需的磷酸化酶。細胞周期、存活、增殖和細胞死亡是由細胞信號傳導所調(diào)節(jié)的細胞過程，以允許組織生長、再生和處于內(nèi)穩(wěn)態(tài)或退化。因此，一些激酶是哺乳動物治療的靈敏靶標。在不同的作為人激酶組的組成部分的激酶家族中，受體酪氨酸激酶KDR(也稱作VEGF受體2)可以刺激內(nèi)皮細胞存活和增殖，條件是被VEGF胞外連接。然后，配體結(jié)合可以導致胞內(nèi)磷酸化事件、即信號級聯(lián)放大，最終導致增殖。嘗試了通過各種治療抑制這種KDR信號傳導。其它對內(nèi)皮細胞功能重要的激酶和配體是TIE2激酶和血管生成素(angiopoietins)、TOGF受體和TOGF以及P1GF、肝配蛋白受體激酶和肝配蛋白、尤其是EphB4和肝配蛋白-B2。此外，配體TGF β及其受體TGF β R、即Alkl/Alk5在維持血管完整性方面起重要作用。通過結(jié)合TGF β II型受體，TGF β可以活化內(nèi)皮細胞中的2種不同的I型受體，即，對EC行為具有相反作用的EC-限制性的ALKl和廣泛表達的ALK5。ALKl通過SmadI/5轉(zhuǎn)錄因子刺激EC增殖和遷移，ALK5通過Smad2/3轉(zhuǎn)錄因子抑制那些功能。有利于EC增殖和片層形成的Alk5激酶抑制劑的一個實例是SB-431542。配體結(jié)合抑制可能是調(diào)節(jié)也在血管生成中的TGFii受體信號傳導的另一種手段。這使用了 2種肽進行了證明，并且還對可溶性TGF β受體T PR-Fc進行了討論。抗-TGF β抗體、甚至是TGF β捕獲的應用可以是抑制TGFii信號傳導的另一種策略。TGF^蛋白包含分子量為 25kDa的保守二聚蛋白家族，它們以無活性形式被遍在表達和分泌。響應于適當刺激的局 部蛋白水解產(chǎn)生了活性TGFβ配體。TGFβ信號傳導在大量病癥和疾病、包括癌癥、心血管障礙、骨障礙、CNS障礙、PNS障礙、炎性障礙和神經(jīng)變性障礙中有牽連。在上皮細胞中，TGF0抑制細胞增殖。正常上皮細胞向癌細胞的轉(zhuǎn)變伴隨有對TGF^的生長-抑制響應的減量調(diào)節(jié)，從而使得細胞脫離TGFii信號傳導的自分泌腫瘤抑制基因活性。癌細胞使TGFii的產(chǎn)生增加促成了癌細胞的侵害和轉(zhuǎn)移行為。TGFii可以誘導上皮-至-間充質(zhì)轉(zhuǎn)變(EMT)，它使得細胞變成是侵害性和遷移性的。此外，TGF β產(chǎn)生增加對基質(zhì)和免疫細胞產(chǎn)生了作用，以提供有利于癌癥發(fā)展的微環(huán)境。TGFii蛋白通過TPR-1/II受體激酶及其Smad底物進行信號傳導，但是也可以獨立于Smad如ERK MAP激酶、ΡΙ3激酶、Rho-樣GTP酶、蛋白磷酸酶2Α和Par6進行信號傳導。活化的I型Τβ R激酶增加了細胞存活并且可以加速病理性細胞進展。I和II型TGF3受體(Τβ R 1、Ti3R II)是單次跨膜胞內(nèi)絲氨酸/蘇氨酸激酶呈遞胞外配體(TGFP)結(jié)合受體。胞內(nèi)信號傳導通過自磷酸化、轉(zhuǎn)磷酸化和底物磷酸化進行，導致靶基因表達的調(diào)節(jié)。Τβ R蛋白的克隆和基因組組織化是熟知的。Ti3R序列在uniprot.0rg作為TGFR1_人以登錄號P36897和作為TGFP R2_人以登記號P37173保存。在蛋白質(zhì)水平上，I型Τβ R被描述為在受體激酶結(jié)構(gòu)域之前含有富含Gly和Ser的區(qū)(GS結(jié)構(gòu)域)。T^R II處于其自/磷酸化狀態(tài)，即組成型活性激酶，其結(jié)合I型受體并使其在GS結(jié)構(gòu)域中磷酸化。Τβ受體，即2TPR I和2TPR II單元的配體TGF β -結(jié)合(活化)四聚化復合物，能夠使Smads (Smad2和Smad3)在其C-末端SSXS基元中作為底物被磷酸化，轉(zhuǎn)而與/被Smad4結(jié)合以易位至細胞核，在那里它們調(diào)節(jié)TGFP響應基因。在I型和II型T β Rs中調(diào)節(jié)同數(shù)和異數(shù)復合物形成的不同結(jié)構(gòu)域是已知的。TPR I的GS結(jié)構(gòu)域中的突變可以是組成型活化的。對于I型T β R使用K232R和對于II型T β R使用K277R發(fā)現(xiàn)了激酶失活突變。在各種癌癥中發(fā)現(xiàn)了對于I型和II型Τβ R基因而言的基因中的失活或衰減突變。此外，Τβ R的信號傳導受磷酸化和去磷酸化機制、遍在蛋白化和蘇素化以及受胞吞作用和受I型、但非II型受體TACE(aka ADAM-17，其介導細胞因子、GF受體和黏著蛋白的脫落并且在癌癥中高度表達)的TACE -介導的胞外結(jié)構(gòu)域脫落所調(diào)節(jié)。已經(jīng)描述了 Ti3R I和FKBP12的X-射線共結(jié)晶結(jié)構(gòu)，并且討論了激酶活化過程。同時，可以在PDB數(shù)據(jù)庫中找到數(shù)種晶體結(jié)構(gòu):1B6C、I IAS、1PY5、1RW8、1VJY、2PJY和模型ITBI。就Ti3R II而言，僅胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的X-射線研究是公眾已知的:1KTZ、1M9Z和IPLO (NMR)，而激酶結(jié)構(gòu)域無一是公眾已知的。TGF0信號轉(zhuǎn)導涉及Smads，它是Ti3R I型受體激酶的唯一底物。人基因組編碼來自3個亞家族R-、Co-、1-Smads)的8個Smads，它們在整個發(fā)育過程中和在成人組織中遍在表達。Smads不僅被I型TGFii受體激酶磷酸化，而且它們還受低聚化、遍在蛋白化和降解以及核質(zhì)穿梭(nucleoplasmatic shuttling)的調(diào)節(jié)。已經(jīng)證實:ALK1和ALK5調(diào)節(jié)VEGF釋放，而TGF β增加VEGF表達，ΒΜΡ-9抑制VEGF表達。通過激活蛋白信號傳導的顯性負調(diào)控抑制，用截短的ALK4同工型進行的研究表明這種I型激酶在垂體瘤的生長和發(fā)展中有牽連。ALK4在胚胎發(fā)育、中胚層誘導的調(diào)節(jié)、胚線形成、原腸胚形成、主軸形成和左右軸確定中的時空窗作用的研究仍然無法闡明ALK4在成人中的作用。在大規(guī)模的人候選者篩選中已經(jīng)發(fā)現(xiàn):顯性負調(diào)控的ALK2等位基因與先天性心臟病如不適當?shù)姆渴腋舭l(fā)育相關(guān)。ALKl結(jié)合T β R-1I和內(nèi)皮糖蛋白/CD105/T β R-1II并且使SMAD-1和-5磷酸化。已經(jīng)證實了內(nèi)皮糖蛋白的作用和尤其是通過兩種變體L-和S-內(nèi)皮糖蛋白進行的TGF3信號傳導的差異調(diào)節(jié)。ALKl在血管重塑中發(fā)揮作用，并且在平衡發(fā)炎組織、傷口和腫瘤中的內(nèi)皮的活化狀態(tài)中發(fā)現(xiàn)了 ALKl和ALK5。ALKl在肺、胎盤和其它高度血管化的組織中表達，并且選擇性地在ECs上發(fā)現(xiàn)。此外，在神經(jīng)元上檢測到了 ALK1。II型T β R表達缺失與人乳癌中的高腫瘤等級相關(guān)，顯示它促進乳癌發(fā)展。腫瘤生長可以表征為歸因于RTK信號傳導由于突變或其它遺傳學改變而受干擾的失控、即自發(fā)細胞生長。在32000個參與信號轉(zhuǎn)導的人編碼基因中，超過520種蛋白激酶和130種蛋白磷酸酶對蛋白磷酸化發(fā)揮緊密和可逆的控制。發(fā)現(xiàn)對酪氨酸和對絲氨酸/蘇氨酸磷酸化的選擇性。在人基因組中存在90種以上已知的PTK基因，超過50種編碼分布在20個亞家族中的跨膜RPTKs，且32種編碼10個亞家族中的胞質(zhì)·非受體PTKs。例如，Trk A在甲狀腺癌和成神經(jīng)細胞瘤中具有重要作用，EphB2和B4在癌癥中過表達，Axl和Lck在白血病中過表達。對用于治療癌癥的TGF0抑制劑進行了綜述。存在另外的適應癥和病理學情況，通過抗血管生成、血管形成、穩(wěn)定、維持和退化而間接靶向癌癥、創(chuàng)傷愈合和炎癥。血管生成，即由預先存在的血管發(fā)育為新血管，在胚胎發(fā)育、器官發(fā)生和創(chuàng)傷愈合中的血管發(fā)育中是關(guān)鍵的。除了那些生理學過程外，血管生成對腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和炎癥而言是重要的，導致疾病如乳房、子宮頸、子宮體(子宮內(nèi)膜)、卵巢、肺、支氣管、肝、腎、皮膚、口腔和咽、前列腺、胰腺、膀胱、血細胞、結(jié)腸、直腸、骨、腦、中樞和外周神經(jīng)纖維的腫瘤，例如乳癌、結(jié)腸直腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋巴瘤等，和炎性疾病如類風濕性關(guān)節(jié)炎和銀屑病，或眼病如黃斑變性和糖尿病性視網(wǎng)膜病。近期討論了血管形成的分子機制和腫瘤發(fā)生中的血管生成開關(guān)。Eph受體酪氨酸激酶調(diào)節(jié)血管模式，Eph B4和Eph BI調(diào)節(jié)肝配蛋白配體如肝配蛋白-B2信號傳導。EphB4控制出生后血管生成過程中的血管形態(tài)發(fā)生。通過血管生成或血管發(fā)生而形成的初生脈管系統(tǒng)的成熟需要壁細胞(mural cells)(周細胞、平滑肌細胞)、細胞外基質(zhì)生成和用于結(jié)構(gòu)支持的血管壁專門化和血管功能調(diào)節(jié)。那些過程以及內(nèi)皮細胞與其壁細胞之間的相互作用涉及數(shù)種配體激酶對，如VEGF/VEGFR1、VEGFR2、肝配蛋白B2/EphB4、PDGFR/PDGFRP、血管生成素 /TIE2、TGFβ /TGFβ R-ALK1/ALK5。血管組裝、毛細血管形成、萌發(fā)、穩(wěn)定和失穩(wěn)定、甚至退化受到那些激酶和配體的功能平衡的調(diào)節(jié)。淋巴管生成(Iymphangiogenesis)通過VEGF受體3及其配體VEGF C和D以及ΤΙΕ2及其配體血管生成素1、2進行調(diào)節(jié)。抑制VEGFR3和/或ΤΙΕ2信號傳導和由此抑制淋巴管形成可以是終止腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的手段。有關(guān)病理性血管形成的整體信息產(chǎn)生了有關(guān)血管生成抑制的假設，它對于治療癌癥和其它障礙而言是有希望的策略。通過Alkl、內(nèi)皮糖蛋白、Alk5和TPRII KO小鼠證明了 TGFP受體在血管生成過程中的重要性，所述小鼠均顯示出因血管缺陷導致的胎胚致死表型。此外，在ECs中，TGFii配體能夠刺激兩條途徑，Alkl的Smadl/5/8磷酸化下游和Alk5的Smad2/3磷酸化下游。兩條途徑彼此相互串話。具有L45袢突變的Alk5敲入小鼠顯示出有缺陷的Smad活化。TGF3/Alk5信號傳導在ECs中被ALKl拮抗。TGF^以至少5種與TGFa無關(guān)的同工型(TGFP 1-5)存在，其中TGFP I是普遍的BSt5TGFP是細胞和生理過程、包括增殖、分化、遷移、細胞存活、血管生成和免疫監(jiān)視的遍在和重要調(diào)節(jié)劑。由于癌細胞表達腫瘤特異性抗原，所以它們通常將被免疫系統(tǒng)所識別并且將被破壞。在腫瘤發(fā)生過程中，癌細胞獲取通過多種機制逃避這種免疫監(jiān)視的能力。主要的機制是癌細胞介導的通過分泌TGFii (—種有效的免疫抑制細胞因子)產(chǎn)生的免疫抑制。TGFβ具有將腫瘤抑制基因轉(zhuǎn)換成腫瘤啟動子和促轉(zhuǎn)移因子(premetastatic factor)的潛能。TGF^功能被四聚受體復合物傳遞，所述四聚受體復合物由兩組跨膜絲氨酸-蘇氨酸激酶受體(稱為I型和II型受體)組成，它們在銜接配體的TGF β超家族成員后被活化，所述的TGFP超家族成員被分成2組，即TGFP /激活蛋白和BMP/⑶F分支。TGFP 1、2和3屬于配體的TGFii /激活蛋白分支。這些結(jié)合事件說明了在不同細胞類型中被差異調(diào)節(jié)的下游響應。在皮膚成纖維細胞中在TGFβ RII的可誘導出生后缺失中描述了成纖維細胞在創(chuàng)傷修復期間在皮膚的間充質(zhì)-上皮相互作用中的重要性。在創(chuàng)傷修復期間，配體TGF3及其受體RI和RII型的表達在時間上和空間上是受調(diào)節(jié)的。由CD34+急性髓樣白血病細胞系、ECs、活化血小板和T-細胞表達的CD109(GPI連接的細胞表面抗原)是人角質(zhì)形成細胞中T β R系統(tǒng)的組成部分。毛囊凸起區(qū)域中的濾泡干細胞(Follicle Stem Cells, FSCs)在毛發(fā)周期和創(chuàng)傷愈合過程中可以產(chǎn)生多個譜系。Smad4(TGFi3信號傳導的常見介體)是FSCs維持的組成部分。在小鼠皮膚中進行的Smad4K0研究顯示了毛囊缺陷和鱗狀細胞癌形成。TGFii的潛在抑制延緩了毛囊中的退化期進程。TGFii在退化期期間的角質(zhì)形成細胞細胞凋亡中的充分描述的作用可能涉及生長期特異性的毛囊組分，其還涉及相互局限化的Τβ RI 和 Τβ RIL.
已知TGFP在數(shù)種器官如皮膚、腎、心臟和肝的纖維化中的異常活性，在纖維化疾病中使用T β R抑制劑是合理的。系統(tǒng)性硬化病(硬皮病)被證明是TGF β /受體RI依賴性的，所述系統(tǒng)性硬化病(硬皮病)是一種導致皮膚和內(nèi)部器官纖維化的復雜的結(jié)締組織障礙。肺動脈高壓(PAH)是一種潛在地可以用ALK5抑制劑治療的病癥，因為周圍動脈平滑肌細胞的異常增殖受活化的TGFii受體所驅(qū)動。在大鼠中用SB525334進行的治療獲得了成功。使用ΙΝ-1233還顯示了在大鼠中的益處。腎纖維化可以導致糖尿病。TPR激酶抑制劑衍生物的有益副作用以及TGFP信號傳導與丙型肝炎病毒(HCV)復制之間的相關(guān)性是已知的。TGFii信號傳導作為轉(zhuǎn)移型乳癌中新出現(xiàn)的干細胞靶標進行了討論。TGFP 1、2、3及其受體在神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞中表達。可以預計使用TGFii信號傳導調(diào)節(jié)劑可改善病理結(jié)果。心血管疾病如動脈粥樣硬化、心肌缺血和心臟重塑中的TGFP超家族是心血管研究問題的焦點。在WO 2009/004753中公開了有關(guān)TGF β的生物化學的進一步細節(jié)，該文獻完整引入本發(fā)明的公開內(nèi)容作為參考。從非臨床研究中對公眾描述了數(shù)種TGF- β受體激酶抑制劑(Τ β R抑制劑)和化合物系列，通過代碼在公眾域中獲知了數(shù)種抑制劑。特別地，從專利文獻中獲知了數(shù)種新的化學實體，在這些專利文獻中它們請求保護為TGFβ受體激酶抑制劑。WO 2009/133070描述了咪唑并吡啶化合物，W02009/124653教導了噻吩并嘧啶化合物，W02009/087225涉及吡咯并吡啶/嘧啶化合物， WO 2009/049743涉及噻吩并吡啶化合物。這些參考文獻無一涉及如下所述的式(I)化合物的合成和用途。本發(fā)明的目的是發(fā)現(xiàn)具有有價值的性質(zhì)的新化合物，特別是可用于制備藥劑的那
it匕
~..ο已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物及其鹽具有極有價值的藥理學性質(zhì)，同時被良好耐受。特別地，它們顯示出TGF-β受體I激酶-抑制性質(zhì)。本發(fā)明涉及式(I)化合物，
權(quán)利要求
1.⑴化合物，
2.權(quán)利要求1的化合物，其中 W1表示N或CH，優(yōu)選N， W2表示CR6， W3表示N或CR5，優(yōu)選CR5， W5表示N或CH，優(yōu)選CH，且 W6表示CH。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中R5 表示 H、A、0A、CN、-Alk-OY, COOY, -CO-NYY, NYY、-OAlk-OY, -OAlk-NYY, -OAlk-Het3,-NH-CO-Alk-NYY, Hal,-CO-NYY-NYY 或-CO-NH-Alk-Het3 ；優(yōu)選 H、0A、CN、-Alk-OH, COOA, -CO-NHA, NH2, -OAlk-OY, -OAlk-NAA, -OAlk-Het3, -NH-CO-Alk-NAA, Cl、-CO-NHA-NAA 或-CO-NH-Alk-Het3 ； 或者Rl 連同 R5 —起還表示-CH = CH-、-CO-NH-、-SO2-NH-、-N = C (Y) -、-CH = C (NO2)-或-CH=C(Hal)-；優(yōu)選-CH = CH-、-N = C (H)-或-CH = C (Br) _。
4.權(quán)利要求1-3任一項的化合物，其中R6 表示 H、A、0A、NH2^-NH-COA, -CO-NHA,Hal、NAA、-NH-CO-Alk-NYY, -NH-Alk-Het3,-NH-CO-NH2, -NH-CO-Het3、-CO-NH-Het3, -NH-CO-Alk-OH 或-NH-CO-Alk-NH-COOA。
5.權(quán)利要求1-4任一項的化合物，其中 R2表示苯基、吡啶基、吡唑基或吡嗪基，它們各自可以被至少一個選自F、Cl、Br、CH3>CF3> CN、OCH3> OCF3的取代基單、二或三取代。
6.權(quán)利要求1的化合物，具有亞式(II)結(jié)構(gòu)
7.權(quán)利要求1-6任一項的化合物，所述化合物選自:
8.備式(I)化合物的方法，該方法包括下列步驟:(a)使式(IV)化合物
9.(IV)的中間體化合物，
10.權(quán)利要求9的化合物，所述化合物選自:
11.備式(IV)中間體化合物的方法，該方法包括下列步驟: (a)使選自各自被具有權(quán)利要求9的含義的R2取代的硼酸、硼酸酯、有機錫化合物和三氟甲磺酸硼的化合物與式(X1-A)化合物反應，
12.權(quán)利要求1-7任一項的化合物和/或其生理學可接受的鹽在抑制消耗ATP的蛋白質(zhì)、優(yōu)選TGF-β受體激酶中的用途，其中化合物的IC5tl總計小于I μ Μ，優(yōu)選小于0.1 μ Μ。
13.劑，包含至少一種權(quán)利要求1-7任一項的化合物和/或生理學可接受的鹽。
14.物組合物，包含任選地與至少一種其它活性成分組合的作為活性成分的有效量的至少一種權(quán)利要求1-7任一項的化合物和/或其生理學可接受的鹽連同藥學上可耐受的佐劑，所述的至少一種其它活性成分選自(I)雌激素受體調(diào)節(jié)劑、(2)雄激素受體調(diào)節(jié)劑、(3)類視色素受體調(diào)節(jié)劑、(4)細胞毒性劑、(5)抗增殖劑、(6)異戊二烯蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、(7)HMG-CoA還原酶抑制劑、(8)HIV蛋白酶抑制劑、(9)逆錄酶抑制劑和(10)另外的血管生成抑制劑。
15.權(quán)利要求1-7任一項的化合物和/或其生理學可接受的鹽，用于預防性或治療性處置和/或監(jiān)測選自癌癥、腫瘤生長、轉(zhuǎn)移灶生長、纖維化、再狹窄、HIV感染、神經(jīng)變性障礙、動脈粥樣硬化、炎癥以及創(chuàng)傷愈合、血管生成、心血管系統(tǒng)、骨、CNS和/或PNS的障礙的疾病。
全文摘要
新的式(I)的雜芳基氨基萘啶衍生物是消耗ATP的蛋白質(zhì)的抑制劑，特別可以用于治療腫瘤，其中X、R1、R2、R3、R4、W1、W2、W3、W5和W6具有權(quán)利要求1的含義。
文檔編號A61P31/18GK103097381SQ201180010489
公開日2013年5月8日 申請日期2011年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月22日
發(fā)明者A·約恩齊克, D·多施, F·岑克, C·阿門特 申請人:默克專利有限公司